一种显著提高解酒护肝活性的组合物，其制备方法及应用与流程

本发明涉及一种显著提高解酒护肝活性的组合物。尤其涉及一种由蜂王浆提取物、葛根、枳椇子复配，采用80％乙醇热回流对葛根、枳椇子进行混合提取，提取物与蜂王浆提取物采用固体分散技术制备的组合物。
背景技术：
：少量饮酒能活血、通络、散寒，过量饮酒则会产生“酒精中毒”(俗称醉酒)。医学上将酒精中毒分为急性酒精中毒和慢性酒精中毒两种。其中，急性酒精中毒是指过量饮酒后，在较短时间给患者带来恶心、呕吐、头晕、谵语、躁动、昏迷、大小便失禁、呼吸抑制甚至死亡的临床症状；慢性酒精中毒指由于长期过量饮酒，进入人体的乙醇不能被消化吸收，随血液进入大脑，破坏神经元细胞膜，削弱中枢神经系统，并通过激活抑制性神经原和抑制激活性神经原造成大脑活动迟缓、神经细胞坏死、严重者造成酒精性肝硬化和某些癌症(如口腔癌、舌癌、肝癌)。近年以来，我国酒精消费群体与日俱增，已成为社会不安定因素而备受关注。目前，市场出现的解酒产品多以化学药品、中成药制剂为主，在解酒的同时，会不同程度加重肝脏、肾脏代谢负担而产生不同程度的伤害。葛根、枳椇子作为传统药食同源药材，其解酒功能研究始载于我国《千金方》、《本草纲目》等医学巨著。现代药学、药理学、药效学、临床医学对葛根、枳椇子解酒作用的研究文献较多，作为解酒原料开发上市的产品也屡见不鲜。另外，“葛根解酒颗粒茶及其制备方法(专利公布号：CN105767355A)”公开了一种葛根解酒颗粒茶，由葛根56～71份、小麦仁10～15份、枳椇子4～9份、桑葚叶5～8份、葛花1～3份、茯苓5～7份组成；“一种护肝、缓解酒后不适的固体饮料及其制备方法(专利公布号：CN106261447A)”公开了一种护肝、缓解酒后不适的固体饮料，由枳椇子20～40份、葛根20～40份、沙棘15～35份、甘草10～30份、乌梅30～90份、干姜1～6份组成；“一种对酒精性肝损伤具有保护作用的咀嚼片及其制备方法(专利公布号：CN106038733A)”公开了一种对酒精性肝损伤具有保护作用的咀嚼片，由大黄15～30份、枳椇子9～30份、牛樟芝3～6份、黄芪15～30份、葛根9～15份组成。蜂王浆是蜜蜂巢中培育幼虫的青年工蜂咽头腺的分泌物，是供给将要变成蜂王的幼虫的食物，也是蜂王终身的食物。作为传统药食两用药材，现代研究确证的药理作用为改善营养、提高免疫、辅助预防心脑血管疾病、抗菌消炎防癌、抗衰老等。本发明旨在以传统药食两用的蜂王浆提取物、葛根、枳椇子为组合原料，通过本发明特定组成比例、抽提工艺、功能成分控制、固体分散等技术方案实施，制备高效解酒护肝组合物，为研究开发解酒护肝药品、保健食品、功能性普通食品、特殊医学用食品、特殊膳食食品提供组合原料或制剂。技术实现要素：：本发明的第一目的在于提供一种显著提高解酒护肝活性的组合物及其制备方法；第二目的在于提供该组合物的应用。本发明的第一目的是采用下述技术方案实现的：首先，本发明提供一种显著提高解酒护肝活性的组合物，所述组合物由重量份数10～19份的蜂王浆提取物、重量份数291～763份的葛根、重量份数171～763份的枳椇子组成；优选地，所述组合物由重量份数12～18份的蜂王浆提取物、重量份数350～650份的葛根、重量份数200～500份的枳椇子组成；进一步优选，所述组合物由重量份数13～17份的蜂王浆提取物、重量份数40～600份的葛根、重量份数250～450份的枳椇子组成；最优选，所述组合物由重量份数14～16份的蜂王浆提取物、重量份数450～550份的葛根、重量份数300～400份的枳椇子组成。其次，本发明所述蜂王浆提取物系采用蜂王浆为原料，采用现有技术抽提制得。其中，王浆酸含量为10％～50％；优选为20％～40％；更优选为30％～40％。再其次，本发明所述葛根、枳椇子系采用80％乙醇热回流混合提取。具体为：将葛根、枳椇子混合粉碎成20-40目粗粉，添加80％乙醇润湿浸泡12小时，添加料液比为1:10、浓度为80％乙醇回流提取三次，每次提取1.5小时，提取温控在75～80℃之间，收集提取液经减压浓缩、干燥得混合提取物。其中，总黄酮含量≥30％。最后，将本发明所述蜂王浆提取物、葛根枳椇子混合提取物混合，加入无水乙醇、乙醇、丙酮、氯仿中的一种或几种有机溶剂溶解。添加聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚维酮K30、泊洛沙姆-188、木糖醇、山梨醇、枸橼酸中的一种或几种作为载体，融化或采用无水乙醇、乙醇、丙酮、氯仿中的一种或几种有机溶剂溶解后加至蜂王浆提取物与葛根枳椇子混合提取物溶液中，充分混合均匀，蒸去溶剂得提取物在载体中混合而成的共沉淀固体分散体，经干燥即得本发明所述组合物。优选地，溶解蜂王浆提取物与葛根枳椇子混合提取物的有机溶剂料液比为1:1～10，优选为2～8，进一步优选为3～6，最优选为4～5。优选地，载体溶解采用加热融化或添加有机溶剂溶解两种方式。有机溶剂溶解方式料液比为1:1～10，优选为2～8，进一步优选为3～6，最优选为4～5。本发明的第二目的是采用下述技术方案实现的：首先，本发明所述组合物，具有解酒、保肝、护肝功能/功效，可应用于药品、保健食品、功能性普通食品、特殊医学食品、特殊膳食食品研究开发。其次，本发明所述组合物，根据需要可添加或不添加药品、保健食品、功能性普通食品、特殊医学食品、特殊膳食食品可接受的辅料，进一步制成颗粒剂、片剂、硬胶囊剂、滴丸等固体口服制剂。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的描述，本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，但本发明的实施方式不限于此。实施例1：葛根、枳椇子提取物制备本发明所述葛根、枳椇子系采用80％乙醇热回流混合提取。具体方法如下：取葛根、枳椇子原药材各100g，混合粉碎过40目筛，添加80％乙醇适量润湿浸泡12小时，添加料液比为1:10、浓度为80％乙醇回流提取三次，每次提取1.5小时，提取温控在75～80℃之间，收集提取液经减压浓缩、干燥得混合提取物19.92g。采用高效液相色谱法测定总黄酮含量，测得提取物中总黄酮含量为54.23％。本发明乙醇热回流混合提取工艺条件的筛选：取葛根、枳椇子原药材各50g，混合粉碎过40目筛，添加80％乙醇适量润湿浸泡12小时，添加料液比为1:10、浓度为80％乙醇回流提取三次，每次提取1.5小时，提取温控在75～80℃之间，收集提取液经减压浓缩、干燥得混合提取物。采用高效液相色谱法测定总黄酮含量。以下考察实验均采用同一批次药物按上述流程实施，用量均以原药材各50g。A.乙醇浓度的影响考虑到乙醇浓度对总黄酮得率的影响，故采用20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％乙醇9个水平开展乙醇浓度工艺优化考察，在其他条件不变的情况下(温度78℃，提取时间1.5h,料液比1:10),以总黄酮含量(提取物浸膏中总黄酮含量)为考察指标，结果见表1。表1不同乙醇浓度对总黄酮得率影响试验结果将表1中的结果，乙醇浓度对总黄酮得率制作曲线图，具体如图1所示。从图1可以看出：在其他条件不变的情况下，在乙醇浓度小于50％时，总黄酮得率并无明显变化；当乙醇浓度≥50％时,随浓度的增大，总黄酮的得率也随之上升；当乙醇浓度大于90％时，可以看出得率开始下降。因此，最佳提取乙醇浓度为80％。B.温度的影响考虑到提取温度对总黄酮得率的影响，结合工业化生产安全性，采用20、30、40、50、60、70、80、90℃8个水平开展提取温度工艺优化考察，在其他条件不变的情况下(乙醇浓度80％，提取时间1.5h,料液比1:10),以总黄酮含量(提取物浸膏中总黄酮含量)为考察指标，结果见表2。表2提取温度对总黄酮得率影响研究结果将表2中温度对总黄酮得率制作曲线图，具体如图2所示。从图2可以看出：在其他条件不变的情况下，在温度小于30℃时，总黄酮并没有提取出来；温度高于30℃时,随温度的增大，总黄酮的得率也随之上升；当温度大于80℃时，可以看出得率开始呈下降趋势。因此，最佳提取温度为75～80℃。C.提取时间的影响考虑到提取时间对总黄酮得率的影响，故采用30、40、50、60、70、80、90、100、110、120min10个水平开展提取时间工艺优化考察，在其他条件不变的情况下(乙醇浓度80％，温度78℃,料液比1:10),以总黄酮含量(提取物浸膏中总黄酮含量)为考察指标，结果见表3。表3提取时间对总黄酮得率影响研究结果将表3中的提取时间对总黄酮得率制作曲线图，具体如图3所示。从图3可以看出：在其他条件不变的情况下，在提取时间小于90min时，总黄酮得率随提取时间的增大而增大；在提取时间大于90min时，总黄酮得率随提取时间的增大而出现明显的下降趋势。因此，最佳提取时间为90min。D.料液比的影响考虑到料液比对总黄酮得率的影响和成本问题，故采用料液比为1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13共计9个水平开展料液比工艺优化考察，在其他条件不变的情况下(乙醇浓度80％，提取时间1.5h,温度78℃),以总黄酮含量(提取物浸膏中总黄酮含量)为考察指标，结果见表4。表4料液比对总黄酮得率影响研究结果将表4中料液比对总黄酮得率影响制作柱形图，具体如图4所示。从图4可以看出：在其他条件不变的情况下，当料液比小于1:10时，总黄酮的得率随溶剂量的增大而增大；当料液比大于1:10时，总黄酮的得率并没有明显的变化，说明此时总黄酮已被转移完全，为节约成本，选择最佳料液比为1:10。附图说明图1本发明实施例1乙醇浓度对总黄酮得率影响曲线图图2本发明实施例1提取温度对总黄酮得率影响曲线图图3本发明实施例1提取时间对总黄酮得率影响曲线图图4本发明实施例1提取料液比对总黄酮得率影响柱形图实施例2：蜂王浆提取物准备直接购置王浆酸标示含量≥30％的蜂王浆提取物(备注：此蜂王浆提取物由王浆酸含量≥1.8％的蜂王浆提取制得)，采用高效液相色谱法自检王浆酸含量为33.48％，作为本发明组合物制备使用。实施例3：组合物制备1A.取葛根600g、枳椇子450g按实施例1乙醇热回流混合提取，得提取物105g；取实施例2准备的蜂王浆提取物18g，过80目筛备用。B.将蜂王浆提取物、葛根枳椇子混合提取物混合，加入10倍量的无水乙醇溶解，制成混合液。添加聚乙二醇4000、聚维酮K30、木糖醇作为载体，采用8倍量的丙酮溶解后加至上述混悬液中，充分混合均匀，蒸去溶剂得提取物在载体中混合而成的共沉淀固体分散体，经干燥得组合物120g。实施例4：组合物制备2A.取葛根550g、枳椇子400g按实施例1乙醇热回流混合提取，得提取物95g；取实施例2准备的蜂王浆提取物16g，过100目筛备用。B.将蜂王浆提取物、葛根枳椇子混合提取物混合，加入8倍量的乙醇溶解，制成混悬液。添加聚乙二醇4000、聚维酮K30、木糖醇作为载体，采用8倍量的无水乙醇溶解后加至上述混悬液中，充分混合均匀，蒸去溶剂得提取物在载体中混合而成的共沉淀固体分散体，经干燥得组合物109g。实施例5:组合物制备3A.取葛根450g、枳椇子300g按实施例1乙醇热回流混合提取，得提取物75g；取实施例2准备的蜂王浆提取物14g，过80目筛备用。B.将蜂王浆提取物、葛根枳椇子混合提取物混合，加入6倍量的丙酮溶解，制成混悬液。添加聚维酮K30、泊洛沙姆-188、山梨醇作为载体，采用5倍量的氯仿溶解后加至上述混悬液中，充分混合均匀，蒸去溶剂得提取物在载体中混合而成的共沉淀固体分散体，经干燥得组合物87g。实施例6：组合物制备4A.取葛根5000g、枳椇子3500g按照实施例1中所述的乙醇热回流混合提取，得提取物847g；取实施例2准备的蜂王浆提取物150g，过80目筛备用。B.将蜂王浆提取物、葛根枳椇子混合提取物混合，加入5倍量的氯仿溶解制成混悬液。添加聚乙二醇4000、泊洛沙姆-188、山梨醇、枸橼酸作为载体，采用4倍量的丙酮溶解后加至上述混悬液中，充分混合均匀，蒸去溶剂得提取物在载体中混合而成的共沉淀固体分散体，经干燥得组合物977g。实施例7：制剂制备1取实施例5制备的组合物200g，添加适量糖粉、糊精、乳糖、甘露醇，经制粒、干燥得具有解酒护肝活性的颗粒剂。实施例8：制剂制备2取实施例5制备的组合物200g，添加适量淀粉、糖粉、糊精、聚维酮、阿拉伯胶浆，经混合、制粒、压片制成具有解酒护肝活性的片剂。实施例9：制剂制备3取实施例5制备的组合物200g，添加适量蔗糖、乳糖、微晶纤维素、二氧化硅、滑石粉、硬脂酸镁，经混合、制粒、充填制备成具有解酒护肝活性的硬胶囊。实施例10：制剂制备4取实施例5制备的组合物200g，添加适量聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、硬脂酸钠、甘油明胶、聚氧乙烯单硬脂酸酯，经混合、溶解、制丸制备成具有解酒护肝活性的滴丸。为了更进一步对本发明组合物技术效果进行说明，本发明选取实施例2准备的蜂王浆提取物、总黄酮含量为54.0％的葛根提取物、总黄酮含量为54.0％枳椇子提取物、实施例1制备的葛根枳椇子混合提取物(总黄酮含量为54.23％)作对照样品，编号为①、②、③、④；选取实施例5制备的组合物作为试验样品，编号为⑤；选取重量比葛根：枳椇子：蜂王浆提取物＝2:2:3按实施例5制备的组合物(备注：所述组合物各组成物质与本发明组合物相同但组成比例在本发明组合物组成比例之外)作为参比样品，编号为⑥。同时开展乙醇对小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间的影响、大鼠血液中乙醇浓度变化的影响、小鼠肝脏保护作用试验，结果如下：1.乙醇对小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间的影响试验给药剂量：本发明所述组合物⑤60kg成年人给样剂量确定为2.4g/天，据此折算体重为20g小鼠给样剂量为252mg/kg。依据等剂量给样可比原则确定对照样品⑥、④小鼠给样剂量为252mg/kg。依据等剂量给样可比原则，结合国家规定的葛根、枳椇子、蜂王浆提取物日最高推荐剂量确定对照样品①给样量为62mg/kg；对照样品②给样量为252mg/kg；对照样品③给样量为252mg/kg。试验方案及数据：选取健康昆明种雄性小鼠70只，体重20±2g。正常喂养一周后随机分为7组，编号为①～⑥组及空白组。其中，①～⑥组给予对应编号的样品，空白组不做任何处理。30min后①～⑥组及空白组均给予60％乙醇(剂量为0.32ml/20g)。详细记录各组小鼠翻正反射消失及恢复时间，计算睡眠潜伏期及睡眠时间，结果见表5。表5乙醇对小鼠睡眠时间和睡眠潜伏期影响试验结果组别动物数睡眠潜伏期(min)睡眠时间(min)①10只11.3±2.3439±17.23②10只12.6±1.9423±18.32③10只11.9±2.4428±17.96④10只13.2±2.5418±18.41⑤10只17.5±2.8340±17.89⑥10只13.5±2.7416±17.86空白组10只9.8±0.1480±0.10表5看出：实验结束时，①～⑥组相较于空白组睡眠潜伏期、睡眠时间均由不同程度改善，而⑤组相较于①、②、③、④、⑥组及空白组睡眠潜伏期、睡眠时间p＜0.01，具有高度统计学差异。试验结论：蜂王浆提取物、葛根提取物、枳椇子提取物、葛根枳椇子混合提取物、非本发明比例制备组合物均有一定改善乙醇所致小鼠睡眠潜伏期和随眠时间功能，但差异不显著。本发明所述组合物⑤显著延长乙醇所致小鼠睡眠潜伏期、缩短睡眠时间的药理活性。2.对大鼠血液中乙醇浓度变化影响试验试验物品：①～⑥号样品、白酒(北京红星酿酒厂制造的52°红星二锅头白酒)、体重200±20g健康雄性大鼠。给样剂量：本发明所述组合物⑤60kg成年人给样剂量确定为2.4g/天，据此折算体重为200g大鼠给样剂量为216mg/kg。依据等剂量给样可比原则确定对照样品⑥、④给样剂量为216mg/kg。依据等剂量给样可比原则，结合国家规定的葛根、枳椇子、蜂王浆提取物日最高推荐剂量确定对照样品①给样量为54mg/kg；对照样品②给样量为216mg/kg；对照样品③给样量为216mg/kg。试验方案1：本发明所述组合物降低大鼠血液中乙醇浓度活性确认选取健康雄性大鼠30只,正常喂养一周后随机分空白对照组、先药后酒组、先酒后药组，每组各10只。试验前禁食12h,按要求灌胃给样(空白对照组给予白酒、先酒后药组灌酒后30min后给药、先药后酒组给药30min后给酒，三组给酒剂量均为0.015ml/g体重)。分别于给样前和给样后1h、2h、3h、4h从眼眶静脉丛取血，测定乙醇浓度(备注：乙醇浓度采用美国柯达公司VTTROS250干化学全自动生化分析仪测定)，结果见表6、表7。表6各组各时间段乙醇浓度(单位mol/L)表7两试验组乙醇浓度(单位mol/L)时间(h)先药后酒组先酒后药组P给样前2.0±02.0±0125.7±15.447.5±17.0＜0.01243.4±15.241.3±15.9342.0±16.044.4±16.2431.0±16.537.6±16.9＜0.05试验结论：相较于空白对照组而言，无论是先药后酒还是先酒后药，本发明所述组合物均具有显著降低大鼠血液中乙醇浓度作用。而先药后酒对降低大鼠血液中乙醇浓度活性更强。试验方案2：本发明组合物降低大鼠血液中乙醇浓度活性比较选取健康雄性大鼠70只，正常喂养一周后随机分为7组，编号为①～⑥组及空白组，每组各10只。禁食12h,①～⑥组分别灌胃给予所对应试验样品，30min后①～⑥组及空白组按0.015ml/g体重灌胃给予白酒。分别于给样前、给样结束后1h、2h、3h、4h同时从眼眶静脉丛取血，测定乙醇浓度，结果见表8。表8各组不同时间段乙醇浓度(单位mol/L)测定结果试验结论：相较于空白组而言，样品①～⑥组均由一定降低大鼠血液乙醇浓度作用，但①、②、③、④、⑥样品差异并不明显。而样品⑤(本发明所述组合物)相较于①、②、③、④、⑥而言具有极显著差异(P＜0.01)，表明样品⑤具有显著降低大鼠血液中乙醇浓度作用。3.对酒精性肝损伤的保护作用实验样品及器材：样品①～⑥、电子天平、UV752N紫外可见分光光度计、Alpha-D2冻干机。给药剂量：参照乙醇对小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间的影响试验。试验方案：健康昆明种雌性小鼠80只，体重(20±2)g,在同样的温度、湿度下自由进食、进水喂养一周后，随机分为空白对照、模型对照、①～⑥试验组共计8组。其中，空白对照组和模型组每日给予0.9％生理盐水喂养、①～⑥组每日灌胃给予对应样品，连续喂养四周，每周末称取小鼠体重。于四周末次给药后，一次性给予模型组和①～⑥组50％乙醇12ml/kgBW，空白对照组给0.9％生理盐水，禁食不禁水16h将小鼠处死，解刨取出完整肝脏，预冷生理盐水清洗至洗液无血色后，吸干肝脏表面水分。剪取0.1g肝脏组织置于小烧杯中，准备9倍于肝脏重量的生理盐水，转移总量2/3的生理盐水于烧杯中，尽快剪碎肝脏，倒入玻璃匀浆器，剩下的1/3冲洗后一起倒入进行匀浆，制成10％的组织匀浆，于离心机中以2000r/min离心15min,取上清液检测GSH、MDA和TG、ADH等指标，测定结果见表9、表10、表11、表12、表13。表9各组小鼠体重检测结果备注：试验结束时，各组体重变化无明显差异(P＞0.05)。表明各组小鼠生长正常，无因灌胃样品导致的不良事件和不良反应。表10各组小鼠肝组织GSH含量测定结果组别GSH(mgGSH/mg)空白组26.4±1.1模型组16.2±0.6①17.5±0.8②17.8±0.7③17.6±0.9④19.0±0.9⑤24.5±0.8⑥19.1±1.1表10看出：空白组相较于模型组GSH含量显著降低(P＜0.01)，说明酒精性肝损伤模型造模成功。⑤试验组相较于①、②、③、④、⑥组和模型对照组比较，GSH含量变化具有显著性差异(P＜0.01)，为阳性结果。表11各组小鼠肝组织中MDA含量测定结果组别MDA(nmol/mg)空白组5.3±0.5模型组11.5±0.6①10.8±0.5②10.5±0.7③10.7±0.6④9.5±0.6⑤7.4±0.5⑥9.6±0.4表11看出：空白组相较于模型组GSH含量显著降低(P＜0.01)，说明酒精性肝损伤模型造模成功。⑤试验组相较于①、②、③、④、⑥组和模型对照组比较，MDA含量变化具有显著性差异(P＜0.01)，说明实施例5中所述组合物能够减少乙醇引起的肝脏中脂质过氧化，发挥保护肝脏的作用。表12各组小鼠肝组织中TG含量检测结果组别TG(mmol/L)空白组0.6±0.03模型组1.3±0.12①1.3±0.02②1.2±0.03③1.3±0.02④1.1±0.03⑤0.8±0.01⑥1.1±0.02表12看出：⑤试验组相较于①、②、③、④、⑥组和模型对照组比较，TG含量变化具有显著性差异(P＜0.01)，说明实施例5所制备的组合物可降低醉酒小鼠肝脏组织中TG含量，减轻肝脏脂肪堆积，起到保护肝脏的作用。表13各组小鼠肝组织中ADH活性测定结果组别ADH(U/mg)空白组1.1±0.11模型组0.9±0.12①1.0±0.20②1.1±0.30③1.0±0.40④1.2±0.20⑤1.6±0.04⑥1.2±0.03表13看出：①～⑥组相对于模型组都表现出一定提高小鼠肝脏组织中ADH活性，⑤组中ADH活性较空白组和模型组提高近60％和77.8％，说明本发明实施例5中所得的组合物不仅能保持小鼠肝脏中ADH的活性，还能激发ADH的活性，加速乙醇在体内的代谢，降低乙醇对机体的负面影响。综上所述，本发明所述的显著提高解酒护肝组合物具有分解酒精、预防人体酒精中毒、醒酒的作用。其次还能有效的起到保肝护肝作用。以上内容仅是本发明的具体实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些方式。对于本发明所属
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思、原理的前提下，还可以做出若干简单推演或改进，都应当视为属于本发明的保护范围。当前第1页1 2 3