本发明涉及微生物制剂
技术领域：
，具体涉及一种具有提高免疫力、降血脂、促进新陈代谢功能的益生菌复合物。
背景技术：
：免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等)，处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。正常机体在免疫系统的作用下，突变的细胞会被抑制和分解。但对于免疫力低下的人群来说，由于免疫活性细胞不能识别突变细胞，致使突变细胞无序繁殖，最终导致疾病产生。因此，通过增强机体免疫力，提高人体对病原的抵抗能力已成为当今人群日益关注的一个话题。益生菌亦称肠益菌，是指能存活于肠道的非致病性微生物，益生菌能帮助肠道内壁免受伤害，能改善因服用抗生素而产生的相关副作用，如肠胃炎、急性腹泻，也能改善乳糖不耐症的症状。益生菌正在成为人们防治疾病维护健康的重要产品，它既有见效快的近期效果，如在预防和治疗急慢性腹泻、便秘，改善肠胃功能等方面有效果；还有显著的远期效果，如通过降低人体内毒素水平、改善营养状况、帮助肝细胞生长、提高人体免疫力等，进而起到保护肝脏、辅助改善肝病症状的作用；益生菌还可以改善对于用化学、放射、免疫抑制剂治疗中的副反应导致菌群失调的症状如食欲减低、乏力、白细胞计数下降等，提高抗病能力。肠道是外界的传感器，来自外界的所有东西最终都在肠道终结。人体肠道中的益生菌对健康非常有益，能帮助免疫系统抵挡危险的细菌，能将营养成分分解，甚至还能控制身体储存脂肪。因此，益生菌产品逐步获得大众的青睐。现有益生菌效果种类单一，且受其保质时间影响，益生菌制品中益生菌存活期短，食用安全性往往难以保证。而中草药益生菌的复合组合物由于含有中草药成分不可避免的会有毒副作用，中国专利文献cn105641209a公开的具有提高免疫力功能的益生菌组合物及其制备方法与应用，该现有技术的益生菌组合物包含如下质量百分比计的组分：益生菌干粉60～70％，黄芪提取物粉20～30％，枸杞提取物粉10～20％。该现有技术的益生菌组合物具有一定的提高免疫力的效果，但其在降血脂和促进新陈代谢方面效果不明显，并且其含有中草药成分不可避免的会有毒副作用。技术实现要素：因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的益生菌产品效果种类单一、稳定性差，以及现有技术的益生菌组合物在降血脂和促进新陈代谢方面效果不明显，以及由于含有中草药成分不可避免的会有毒副作用的缺陷，从而提供一种具有提高免疫力、降血脂、促进新陈代谢功能的益生菌复合物、其制备方法及应用。一种具有提高免疫力、降血脂、促进新陈代谢功能的益生菌复合物，由嗜酸乳杆菌、酿酒酵母菌、地衣芽胞菌母种菌丝单独扩繁发酵后，再在复合培养基里共同发酵而制成，所述复合培养基由如下原料组成：红糖，氨基酸，葡萄糖，水溶性大豆卵磷脂；所述嗜酸乳杆菌为(lactobacillusaccc19940)、所述酿酒酵母菌为(saccharomycesaccc20107)、所述地衣芽胞菌(bacillusaccc01094)。所述益生菌复合物的原材料的重量份配比为：嗜酸乳杆菌16份、酿酒酵母菌2-4份、地衣芽胞菌2份。所述益生菌复合物的原材料的重量份配比为：嗜酸乳杆菌8份、酿酒酵母菌2份、地衣芽胞菌1份。所述益生菌复合物采用水和复合培养基制备，所述益生菌复合物与水和复合培养基的重量份配比为：2:8:2-2.5。所述复合培养基的各组分的重量份配比为：红糖5-15份，氨基酸0.1-1份，葡萄糖0.1-1份，水溶性大豆卵磷脂0.1-0.4份。所述复合培养基的各组分的重量份配比为：红糖1份，氨基酸0.5份，葡萄糖0.5份，水溶性大豆卵磷脂0.25份。所述的益生菌复合物的制备方法，包括如下步骤：(1)将嗜酸乳杆菌、酿酒酵母菌、地衣芽胞菌母种菌丝单独扩繁发酵；(2)按重量份配比取复合培养基各组分，复合益生菌各原料，水，备用；(3)将复合培养基各组分放入容器内，先加入4/5的水加热搅拌使溶解，然后加入剩余的水配置好溶液，再测ph值3-4装入发酵罐内密封，灭菌，冷却至40℃备用；(4)用接种工具用5ml灭菌吸管吸取5ml培养基接入发酵罐内，于30-40℃培养5-10天待检。单独扩繁发酵嗜酸乳杆菌所采用的培养基的配比为：蛋白胨10重量份，乙酸钠5重量份，吐温801体积份，酵母膏3重量份，柠檬酸铵2重量份，水1000体积份；单独扩繁发酵酿酒酵母菌所采用的培养基的配比为：黄豆芽10重量份，葡萄糖5重量份，水1000体积份，ph值自然；单独扩繁发酵地衣芽胞菌母种所采用的培养基的配比为：大豆蛋白胨10重量份，牛肉羹5重量份，氯化钠5重量份，水1000体积份，ph7.0.将嗜酸乳杆菌、酿酒酵母菌、地衣芽胞菌母种菌丝单独扩繁发酵的步骤为：(1)将培养基放入烧杯内，先加入4/5的水加热搅拌溶解，然后补加水剩余水，再测ph值后，然后分装试管(20ml/管)温度121℃，灭菌30min后制成斜面培养基备用；(2)接种：将嗜酸乳杆菌、或酿酒酵母菌、或地衣芽胞菌母种加入灭菌生理盐水，用接种工具轻轻打下孢子形成菌液，吸取菌液移植到斜面培养基上，打匀，用棉塞子封好口置于培养箱内，30-40℃培养5天。所述的益生菌复合物在制备具有提高免疫力、降血脂、促进新陈代谢功能药物中的应用。本发明技术方案，具有如下优点：1.本发明提供的具有提高免疫力、降血脂、促进新陈代谢功能的益生菌复合物克服了只能将单个菌种单独发酵后再混合使用投资大、发酵工艺复杂的问题，解决了产品性能质量不稳定，保质期短的难题。经过实验证明该生产工艺成熟，产品质量可靠。2.本发明提供的具有提高免疫力、降血脂、促进新陈代谢功能的益生菌复合物中的益生菌组分与培养基组分协同作用相辅相成，从而使得其在提高免疫力、降血脂、促进新陈代谢方面效果显著。3.本发明提供的具有提高免疫力、降血脂、促进新陈代谢功能的益生菌复合物在微生物活性剂里每毫升发酵分解菌和再生合成菌达10亿以上，能以最快的速度把有机物转化为能溶于水的生物活性物质，如有机酸、单糖、多糖、氨基酸、小分子肽等，以提高人体免疫力，祛除自由基，提高抗氧化力，大大降低病害的发生。4.本发明提供的具有提高免疫力、降血脂、促进新陈代谢功能的益生菌复合物创新的提出益生菌共生发酵工程概念，及运用生物仿生学原理，模拟肠道微生态环境，筛选优化多株益生菌共生发酵，通过调节工艺条件，调节发酵过程中的微生态环境，使共生培养的益生菌由随机变为有序状，最大程度的发挥群体生态学优势效应。5.本发明提供的具有提高免疫力、降血脂、促进新陈代谢功能的益生菌复合物创新的提出复合培养新工艺，提高发酵水平及有益菌定植效益。6.本发明提供的具有提高免疫力、降血脂、促进新陈代谢功能的益生菌复合物饲喂鸡后，鸡的羽毛亮顺，肉质鲜美，产蛋量高，经检测肉和蛋的检测报告结果全部符合有关标准。7.本发明提供的具有提高免疫力、降血脂、促进新陈代谢功能的益生菌复合物给药给糖尿病综合症致皮肤感染大面积溃烂的危重患者，服用并喷涂本益生菌活性剂一周后，患者伤口开始愈合，面色红润，可下地走动。8.本发明提供的具有提高免疫力、降血脂、促进新陈代谢功能的益生菌复合物经人们口服后，在肠道内接触面大，效果明显。9.本发明提供的具有提高免疫力、降血脂、促进新陈代谢功能的益生菌复合物经过产品稳定性实验，又经中国疾病预防控制中心营养与食品安全处对样品的稳定性试验证明产品是稳定的；因此产品形态与剂型的选择是科学、合理的。10.本发明提供的具有提高免疫力、降血脂、促进新陈代谢功能的益生菌复合物制备方法生产工艺简单，易控制，成本低，用户容易接受。本发明益生菌复合物产品的主要功效成份的确定过程和依据：嗜酸乳杆菌是人体肠道中的重要微生物，与人体健康息息相关，当在体内达到一定数量时，可以起到保健效果。嗜酸乳杆菌可以通过其酸性代谢产物，降低环境中ph值，促进厌氧菌(如双歧杆菌)的生长，同时嗜酸乳杆菌能分泌一种蛋白类的黏附促进因子，黏附到人肠黏膜的细胞上，发挥“屏障”作用，阻止大肠杆菌等肠道致病细菌黏附、侵入到肠黏膜细胞上，并阻止其过度生长而产生大量毒素，进一步降低肝硬化肠源性内毒素血症的发生率。乳杆菌具有抗微生物作用主要是由于产生乳酸、h2o2和菌体合成的天然抗生物质。通过对肠道ph的控制就有可能减少酚、氨、类固醇代谢产物，细菌毒素以及血管收缩胺(如胺，酪胺，尸胺，鲱精胺)的产生，同时乳酸菌可以促进小肠的蠕动，有通便排毒的作用，增强机体免疫能力，降低血清胆固醇。但仅用嗜酸乳杆菌生产，在培养基中产酸低而发酵时间长，产品酸涩，口味差，活菌保存期短，因而限制了这种产品的发展。酿酒酵母菌富含维生素b、核酸类衍生物、辅酶a、细胞色素c、谷胱甘肽、蛋白质和多种酶，对于改善消化系统有积极作用。地衣芽胞菌可调整菌群失调，促使生物机体产生抗菌活性物质、杀灭致病菌，能产生抗活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，能抑制致病菌的生长繁殖，刺激水产动物免疫器官的发育，增强机体免疫力，同时可分解养混合液中的有毒有害物质，净化水质。<1>菌种的选择发明人以嗜酸乳杆菌、酿酒酵母菌和地衣芽胞菌生成微生物活性剂，对其菌种的选择遵循了：一是活菌总数高，产酸多；二是产香物质能力强；三是保质期要长。因此，我们选择了嗜酸乳杆菌、酿酒酵母菌和地衣芽胞菌3种优质的菌种。<2>菌种接种量的选择控制复合培养(混合发酵)中3种菌种接种的比例。复合培养中3种菌的接种比例直接影响到产品的质量，因此3种菌的比例是复合培养技术的一个关键因素，我们做了不同配比的实验，通过实验在16：2-4：2的比例下的活菌总数较高，而8：2∶1的比例下的活菌总数明显高于其他配比。选用原料的功效作用、用量及原料配伍关系和人体安全性的影响：一是嗜酸乳杆菌、酿酒酵母菌和地衣芽胞菌是人体肠道正常的菌群之一，在体内发酵产生短链脂肪酸、乙酸和乳酸抑制病源菌或条件致病菌，净化肠道环境，扶正肠道内残留的益生菌，有利于内源的再生，强化并活化细胞的自然能力，使细胞正常化。它可在肠道内起净化作用，防止有害物质进入血液，维持血液的洁净，同时可以促进人体对养分的吸收和利用。二是嗜酸乳杆菌、酿酒酵母菌和地衣芽胞菌可以竞争营养源及吸附定植位置，利用对营养及上皮细胞键位置的吸附，竞争生存能力，防止致病菌定植于肠道内壁。因此，乳酸菌大量的存在，形成生物屏障膜防止致病菌靠上上皮细胞，阻止病原病菌在体内栖息，在出现腹泻之前就可以将病原菌排出体外，保持肠道内有益菌的优势。三是嗜酸乳杆菌、酿酒酵母菌和地衣芽胞菌的菌体成份在发酵过程中通过一系列结构的修饰，其抗原决定族充分暴露，而免疫递呈细胞如巨噬细胞、树条状细胞和免疫活性细胞，即t.b淋巴细胞主要分布于小肠粘膜下淋巴组织，产品口服后全程与肠粘膜接触，因而在调节机体免疫功能方面更优越。四是嗜酸乳杆菌、酿酒酵母菌和地衣芽胞菌的培养液(spentculture)中含粘附素，分子量为25000左右，有利于益生菌的粘附和定植。五是嗜酸乳杆菌、酿酒酵母菌和地衣芽胞菌的细胞壁通过直接或间接的刺激免疫活性细胞产生多种内源性调节因子，如肿瘤坏死因子(tnf)、干扰素(ifns)、白细胞介素(il5)、集落刺激因子(csfs)等发挥细胞免疫效应：通过诱发肠粘膜产生分泌性iga而发挥体液免疫效应，同时依据“共同粘膜免疫系统学说”，一处粘膜受抗原刺激产生的免疫性细胞可游走到另一处粘膜，在那里分泌iga。因此口服后，菌体抗原也可使呼吸道、泌尿生殖道等肠道以外的粘膜抵抗力增强。六是嗜酸乳杆菌、酿酒酵母菌和地衣芽胞菌的培养液，能分离和减少肠道中的有害物质，如胺、吲哚、硫化氢、亚硝酸，这些物质是诱发大肠癌，引发人体衰老、患病的重要致病内因。世界微生态学会主席光冈知足教授提出：要保持健康、长寿，首先应保持肠道生态相对年轻。科学研究发现，通过给大肠癌模型动物添加复合乳酸菌液，能将这些动物的大肠癌发病率从77％降至40％，还能将肝癌动物模型的发病率从100％降至46％。其机理：分解和减少了致癌物质；活化n、k细胞，增强人体免疫功能；抑制了有害菌，减少了体内毒素的产生。七是由于红糖具有活血化瘀之功效，又可为乳酸菌提供碳源和生长因子。故在上述3种益生菌组成的复合乳杆菌液中加入定量的红糖作辅料，有利于乳酸菌的生长。乳酸菌能产生乳酸和短链脂肪酸，使产品ph值保持在3.0-3.6之间，保证产品的稳定。附图说明为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图；图1是本发明生产工艺流程图。具体实施方式提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。用于本发明的松茸菌母种和羊肚菌母种为购买自中国农业科学院农业微生物菌种保藏中心的试管母种(试管规格18×180)，嗜酸乳杆菌为(lactobacillus)，保藏号：accc19940；酿酒酵母菌为(saccharomyces)，保藏号：accc20107；地衣芽胞菌(bacillus)，保藏号：accc01094)。申请人实验室亦有保存，自申请日起二十年可向公众发放用于实验研究。实施例1本发明中嗜酸乳杆菌、酿酒酵母菌、地衣芽胞菌母种菌丝单独扩繁发酵的方法为：(1)将培养基放入烧杯内，先加入4/5的水加热搅拌溶解，然后补加水剩余水，再测ph值后，然后分装试管(20ml/管)温度121℃，灭菌30min后制成斜面培养基备用；(2)接种：将嗜酸乳杆菌、或酿酒酵母菌、或地衣芽胞菌母种加入灭菌生理盐水，用接种工具轻轻打下孢子形成菌液，吸取菌液移植到斜面培养基上，打匀，用棉塞子封好口置于培养箱内，30-40℃培养5天。单独扩繁发酵嗜酸乳杆菌所采用的培养基的配比为：蛋白胨10重量份，乙酸钠5重量份，吐温801体积份，酵母膏3重量份，柠檬酸铵2重量份，水1000体积份；单独扩繁发酵酿酒酵母菌所采用的培养基的配比为：黄豆芽10重量份，葡萄糖5重量份，水1000体积份，ph值自然；单独扩繁发酵地衣芽胞菌母种所采用的培养基的配比为：大豆蛋白胨10重量份，牛肉羹5重量份，氯化钠5重量份，水1000体积份，ph7.0.实施例2-7.(1)将复合培养基放入容器内，先加入4/5的水加热搅拌溶解，然后补加剩余水配置好液体，再测ph值为3.0-4.0后装入培养容器内密封，放入消毒锅内灭菌，温度121℃，灭菌30min，冷却至40℃备用。(2)、用接种工具用5ml灭菌吸管吸取5ml培养基接入复合培养基溶液中，用胶塞封好口置于发酵罐内，于35℃培养5天待检。(3)用显微镜血球计数法检测总菌落数：菌落总数2*108，ph3.0-4.0。(4)开启设备进行罐装液体，作为口服液，装量控制正偏差在5％，罐装经灯检合格后再进行贴标、包装、送检，检验合格后入库。表1各实施例原料重量份配比表2各实施例复合培养基原料重量份配比对比例1中国专利文献cn105641209a实施例3方法制备的具有提高免疫力功能的益生菌组合物记为x1，用水溶解服用，每人每次15g，一天三次服用。实验例1.1、实验目的研究本发明口服液的降血脂的效果。2、实验方法2.1实验仪器与材料日立7020全自动生化检测仪。2.2实验设计选择630例高血脂分成7组，每组90人，分别使用实施例2-7制备的口服液以及x1制品；排除以下患者：(1)患有恶性疾病，如肿瘤、严重心、肝、肾疾病；甲状腺疾病；(2)实验开始前1个月内曾服用降脂药物。实验期间，受试者尽量保持膳食和生活习惯不限，不能服用降脂药物。将上述630例受试者每天早、中、晚饭后半小时服用本发明受试产品(口服液)50ml，对比例的服用方式按照对比例记载的进行。连续服用3个月，其余时间不限制饮食，不改变生活方式。本实验采用患者自身对照法评价各组的效果。2.3检测指标在进行实验前和实验结束时，各组均检测以下身体指标：总胆固醇、甘油三酯、高密度胆固醇、低密度胆固醇。患者实验前后自身对照任一生化指标的变化大于1％记为有效，大于5％记为显效，小于1％记为无效。3、实验结果各组的具体实验结果如表1所示。表1降血脂实验结果实施例例数显效例数有效例数无效例数总有效率(％)29011681187.839011691088.9490126999059012681088.96901270891.179010701187.8x1904503660由表1可知：本发明口服液降血脂有明显的改善作用。90例病人中，x1的制品在降血脂方面的有效例为60，显效例为4，总有效率为60％。4、实验结论本发明的口服液具有显著的降血脂的作用。实验例2.1、实验目的研究本发明口服液提高免疫力的效果。2、实验方法2.1实验设计选择210例分成8组，每组30人，分别使用实施例2-7制备的口服液以及x1制品,210例患者进入高海拔地区出现的唇干、头痛、呼吸急促、心慌、食欲减退等症状的受试者，排除以下：患有恶性疾病，如肿瘤、严重心、肝、肾疾病；甲状腺疾病。实验期间，受试者尽量保持膳食和生活习惯不限。将上述210例受试者每天早、中、晚饭后半小时服用本发明受试产品(口服液)50ml，对比例的服用方式按照对比例记载的进行。连续服用1个月，其余时间不限制饮食，不改变生活方式。本实验采用患者自身对照法评价效果。2.2检测指标受试者主观评价提高免疫力的效果。受试实验前后自身对照身体变化，较以前有明显改善且连续超过3天(含3天)记为有效，大于5天记为显效，小于3天记为无效。3、实验结果各组的具体实验结果如表2所示。表2提高免疫力实验结果实施例例数显效例数有效例数无效例数总有效率(％)230419776.7330420680430421583.3530621680630520583.3730320776.7x13010101066.7由表2可知：本发明口服液有明显的提高免疫力的作用。30例病人中，x1的制品在提高免疫力方面的的效果并不十分显著。4、实验结论：本发明的口服液具有显著的提高免疫力作用。实验例3.本实施例中所使用的鸡饲料是购于珠海市维诺种养有限公司的蛋禽多维，经检测，含有如下抗生素：敌敌畏，四环素，金霉素，上霉素，氯霉素，铅，镉，汞，砷，铬，滴滴滴。将本发明益生菌复合物拌在饲料中饲喂鸡一个月，鸡的羽毛亮顺，肉质鲜美，产蛋量高，经检测肉和蛋的检测报告结果全部符合有关标准；检测结果如下：表3鸡肉检测结果表4鲜鸡蛋检测报告从表3和表4可以看出，鸡蛋和鸡肉中的抗生素都基本未检出或者含量极少，本发明益生菌复合物具有加速新陈代谢的作用，使得饲料中的抗生素加速代谢并分解，从而鸡肉和鸡蛋中基本不含抗生素。实验例4.糖尿病综合症患者：由于糖尿病导致皮肤感染大面积溃烂的危重患者将本发明益生菌复合物喷洒到伤口处，一天喷3次，同时服用本发明益生菌复合物50ml每次，一天三次，服用并喷涂本发明益生菌复合物一周后，患者伤口开始愈合，面色红润，可下地走动。本发明益生菌复合物具有加速新陈代谢的作用，从而使得新老细胞加速更替，促进生长，进而促进伤口的快速愈合。实验例5.实施例2-7制备的益生菌复合物的稳定性效果验证实施例2-7制备的益生菌复合物保存菌剂的条件为：1.厌氧，密封；2.常温(25-30度)阴凉处保存；3.防日晒；4.最高温度不能超过零上45度，可保存6个月。而现有技术普通的益生菌在常温下的保存时间为5-20天左右。显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。当前第1页12