本发明属于药物配方领域，特别用于一种含有美洲大蠊和卡培他滨的药物及其应用。
背景技术：
：卡培他滨是一种新型的氟嘧啶氨基甲酸酯，口服后可迅速以原型的形式经胃肠黏膜吸收，经肝脏代谢后，选择性的作用于高表达胸腺嘧啶磷酸化酶(tp)的肿瘤细胞，发挥抗肿瘤活性，卡培他滨在体内三步激活的特性使之成为具有靶向作用的药物，而且放疗可以增加类肿瘤坏死因子a的表达水平，从而增加tp的活性，对正常组织无影响，因此与放疗联合应用可增强其靶向作用。国外临床研究表明，卡培他滨对上消化道肿瘤如食管癌、鼻咽癌、胃癌和胰腺癌等具有增敏作用。美洲大蠊(periplanetaamerican)属昆虫纲，蜚蠊科，俗称蟑螂。美洲大蠊作为药用最初见于《神农本草经》，用于治血痰症、寒热、破积聚、喉咽痹、内寒无子。目前研究中发现美洲大蠊乙醇提取物体外对慢性髓源性白血病(k562)、原髓细胞白血病(hl60)、小鼠白血病(p388d1)细胞株，鼻咽癌(cne)、肺癌(a549)、口腔上皮癌(kb)细胞株，卵巢癌(ho8910)、宫颈癌(hela)和前列腺癌(pc3)细胞株，食管癌(ecal09)、胃腺癌(bgc823)、结肠癌(ls174t)细胞株具有生长抑制作用。目前尚未见美洲大蠊及其提取物联合卡培他滨在提高肿瘤的放射敏感性中的报道。技术实现要素：本发明提供了一种含有美洲大蠊和卡培他滨的药物，所述的药物在提高肿瘤的放射敏感性中效果显著，其作用效果明显优于美洲大蠊和卡培他滨单独用药效果。本发明所述的药物的活性成分包括美洲大蠊和卡培他滨。其中，所述的美洲大蠊为美洲大蠊提取物或美洲大蠊药粉。进一步，所述的药物的活性成分按重量份计，包括：美洲大蠊提取物1000～2500份，卡培他滨200～300份；优选地，美洲大蠊提取物2500份，卡培他滨300份。美洲大蠊提取物制备方法如下：美洲大蠊粉碎置于乙醇中浸泡，回流提取2～3次，浓缩至无醇味，获得提取液，往提取液中加入水，混合均匀后，静置，冷却，过滤，减压浓缩、干燥即得；进一步的，本发明所述美洲大蠊提取物可以是康复新液，满足ws3-b-3674-2000(z)中对“康复新液”的限定标准即可，每1ml含总氨基酸不得低于0.72mg，如市售康复新液。还可以是，所述的药物的活性成分按重量份计，包括：美洲大蠊药粉500～800份，卡培他滨200～300份；优选地，美洲大蠊药粉800份，卡培他滨300份。美洲大蠊药粉制备方法为：a.将美洲大蠊成虫置于真空干燥器中，在20～55℃下干燥至含水量为2～5％，得干燥的美洲大蠊成虫；b.将步骤a中得到的干燥的美洲大蠊成虫置于温度设置为-200℃～-50℃的超低温粉碎机中粉碎至60～300目，即得美洲大蠊药粉。虽然本发明具体实施方式中选用经胃肠道吸收制剂来体现药物组合物的治疗效果，然而，这并不能用于限制本发明药物组合物的给药形式。结合现代分离纯化技术或/和制剂手段，本领域技术人员也可以将美洲大蠊或其提取物纯化后，制备成透皮吸收制剂、外用洗剂、体内植入制剂、注射剂等其他给药形式，从而增强药物靶向性、提高药效或避免不必要的毒副反应。本发明还提供了一种对癌症具有放疗增敏作用的复合制剂，它是由美洲大蠊提取物或美洲大蠊药粉和卡培他滨作为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助成分制备而成的制剂。所述的癌症包括：食管癌、鼻咽癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌、结直肠癌。本发明所述药学上可接受的辅料，是指除活性成分以外包含在剂型中的物质，包括但不仅限于填充剂(稀释剂)、润滑剂(助流剂或抗粘着剂)、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、崩解剂等。粘合剂包含糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物(如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素或羟丙甲基纤维素等)、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮等；填充剂包含乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐(如硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙等)、山梨醇或甘氨酸等；润滑剂包含微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇等；崩解剂包含淀粉及其衍生物(如羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉等)、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素等；湿润剂包含十二烷基硫酸钠、水或醇等；抗氧剂包含亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酸等；抑菌剂包含0.5％苯酚、0.3％甲酚、0.5％三氯叔丁醇等；调节剂包含盐酸、枸橼酸、氢氧化钾(钠)、枸橼酸钠及缓冲剂(包括磷酸二氢钠和磷酸氢二钠)等；乳化剂包含聚山梨酯-80、脂肪酸山梨坦、普流罗尼克f-68，卵磷酯、豆磷脂等；增溶剂包含吐温-80、胆汁、甘油等。所述药学上可接受的辅助性成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述保健品或药物组合物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式。上述复合制剂中，美洲大蠊提取物和卡培他滨的重量配比为(1000～2500)：(200～300)；优选的，美洲大蠊提取物和卡培他滨的重量配比为2500：300。上述制剂也可以是，美洲大蠊药粉和卡培他滨的重量配比为(500～800)：(200～300)；优选的，美洲大蠊药粉和卡培他滨的重量配比为800：300。进一步地，所述制剂中，每日用单位制剂中美洲大蠊提取物和卡培他滨的含量总计18.7g；每日用单位制剂中美洲大蠊药粉和卡培他滨的含量总计7.3g。所述“每日用单位剂量”是指每天服用的制剂总量。具体实施方式实施例1美洲大蠊提取物的制备美洲大蠊提取物：500g美洲大蠊粉碎置于90％乙醇中浸泡12h，85℃下回流提取2～3次，浓缩至无醇味，获得提取液，往提取液中加入1500g水，混合均匀后，静置，冷却，过滤，减压浓缩、干燥、粉碎即得。实施例2美洲大蠊药粉的制备美洲大蠊药粉：将美洲大蠊成虫置于真空干燥器中，在20～55℃下干燥至含水量为2％，得干燥的美洲大蠊成虫，将得到的干燥的美洲大蠊成虫置于温度设置为-100℃的超低温粉碎机中粉碎至60～300目，即得美洲大蠊药粉。实施例3所述药物为实施例1中的美洲大蠊提取物2500mg与卡培他滨300mg联合用药物。实施例4所述药物为实施例1中的美洲大蠊提取物1000mg与卡培他滨200mg联合用药物。实施例5所述药物为实施例1中的美洲大蠊提取物2500mg与卡培他滨200mg联合用药物。实施例6所述药物为实施例1中的美洲大蠊提取物1000mg与卡培他滨300mg联合用药物。实施例7所述药物为实施例2中的美洲大蠊药粉800mg与卡培他滨300mg联合用药物。实施例8所述药物为实施例2中的美洲大蠊药粉500mg与卡培他滨200mg联合用药物。实施例9所述药物为实施例2中的美洲大蠊药粉800mg与卡培他滨200mg联合用药物。实施例10所述药物为实施例2中的美洲大蠊药粉500mg与卡培他滨300mg联合用药物。以上实施例3～实施例10任意一项所述的美洲大蠊与卡培他滨的联合用药物可以加上药学上常用的辅料或辅助性成分，按照本领域常用的技术手段制成胶囊剂、片剂、缓释制剂、液体制剂等口服制剂。以下通过具体药效学实验证明本发明的有益效果。其中，试验例1和试验例2所用的美洲大蠊提取物+卡培他滨组合物为实施例3中所述的药物；试验例1和试验例2所用的美洲大蠊药粉+卡培他滨组合物为实施例7中所述的药物。试验例1一、本发明所述的药物对食管癌细胞系ec9706放射增敏作用的研究1.实验材料1.1实验细胞人食管癌细胞株ec9706(由成都中医药大学基础实验中心提供)。用含10％胎牛血清的rpmi1640培养液置于37℃，5％co2的恒温培箱中培养，用0.25％edta胰酶消化传代，取指数生长期细胞进行实验。1.2实验药品及配置卡培他滨(xeloda)(上海罗氏制药有限公司)：规格：500mg/片。1.3实验分组分为6个组：对照组、美洲大蠊药粉组、美洲大蠊提取物组、卡培他滨组、美洲大蠊提取物+卡培他滨组、美洲大蠊药粉+卡培他滨组。1.4放射增敏试验1.4.1照射方法使用6mevx线直线加速器照射，照射距离为100cm，照射野为10cm×10cm，室温下单次照射。照射剂量2gy，保证每个组细胞受到照射。1.4.2细胞抑制率的测定取对数生长期ec9706细胞，按1×104/ml、100μl/孔接种96孔板，分为1.3所述的6个组，每组设6个复孔。待细胞完全贴壁后，各组加入对应含药培养基，对照组为完全培养基，置于37℃、5％co2培养箱孵育培养24h后，采用mts在酶标仪上测定波长450nm的光密度值(od值)，计算肿瘤细胞抑制率(％)，计算公式如下。抑制率(％)＝(1－给药组od值/对照组od值)×100％1.4.3集落形成试验测定放射增敏性将按1.4.1所述照射方法照射后的ec9706在培养箱中放置4h，使亚致死性损伤得以修复，然后经0.25％胰蛋白酶消化液消化混匀成均一的细胞悬液，每孔2ml接种于6孔板中，保证每孔细胞数目为1000左右。分为1.3所述的6个组，每组设置3个复孔，各组加入对应含药培养基，对照组为完全培养基。于恒温培养箱中继续培养14d，每日镜下观察，当每个细胞周围长成超过50个细胞的集落时，加入甲醇固定，姬姆萨染色，镜下记数各用药浓度组的集落数。集落形成率以pe表示，细胞存活分数以sf表示。采用spss统计软件的多靶单击模型进行分析，得出各组参数(n、d0、dq、sf2、serdq)。集落形成率(pe)＝集落数/接种细胞数×100％细胞生存分数(sf)＝各照射剂量pe/未照射pe×100％放射增敏比(serdq)＝单纯照射的dq值/对照加药的dq值1.4.4流式细胞分析取对数生长期ec9706细胞，按1×104/ml、100μl/孔接种96孔板，分为1.3所述的6个组，每组设6个复孔，另设一组空白对照作为阴性对照组。各组加入对应含药培养基，空白组和对照组为完全培养基，置于37℃、5％co2培养箱孵育培养24h。弃药后，除空白组外，每组细胞按1.4.1所述照射方法照射，然后在培养中孵育24h，然后胰酶消化，1000r/min离心5min，弃上清，d-hanks清洗2遍，80％乙醇4℃固定过夜，离心弃去乙醇，d-hanks再洗2遍，用rnase(终质量浓度0.02mg/ml)、pi(终质量浓度为0.1mg/ml)避光染色30min，流式细胞仪分析细胞周期分布情况。1.5统计学方法采用spss17.0统计软件分析，数据资料以x±s表示，多组间比较选用单因素方差分析，组内两两比较采用独立样本t检验，以p<0.05为差异有统计学意义，p<0.01为差异具有显著的统计学意义。2结果2.1细胞抑制率的测定表1美洲大蠊药粉、美洲大蠊提取物及二者分别联合卡陪他滨对ec9706细胞抑制率的影响(n＝6，)组别剂量(μg/ml)od值抑制率(％)对照组-4.37±0.43△-卡培他滨组61.89±0.13*56.75美洲大蠊提取物组503.26±0.10*△25.40美洲大蠊药粉组162.99±0.09*△31.58美洲大蠊提取物+卡培他滨组50+61.46±0.07*△66.59美洲大蠊药粉+卡培他滨组16+61.31±0.07*△70.02注：与对照组比较，*p＜0.05；与卡培他滨组比较，△p＜0.05。由表1结果可以看出，卡培他滨与美洲大蠊提取物联合用药后，对人食管癌细胞株ec9706的细胞增殖的抑制作用明显高于单独使用卡培他滨和美洲大蠊提取物，具有统计学意义；卡培他滨与美洲大蠊药粉联合用药后，对人食管癌细胞株ec9706的细胞增殖的抑制作用明显高于单独使用卡培他滨和美洲大蠊提取物，具有统计学意义；2.2对ec9706细胞放射增敏作用与卡培他滨组比较，美洲大蠊提取物+卡培他滨组和美洲大蠊药粉+卡培他滨组对ec9706细胞放射增敏效果显著。表2美洲大蠊药粉、美洲大蠊提取物及二者分别联合卡陪他滨对ec9706细胞放射增敏比(ser)注：与卡培他滨组比较，△p＜0.05。由表2结果可以看出，卡培他滨与美洲大蠊提取物联合用药后，对人食管癌细胞株ec9706的放射增敏作用明显高于单独使用卡培他滨，具有统计学意义；卡培他滨与美洲大蠊药粉联合用药后，对人食管癌细胞株ec9706的放射增敏作用明显高于单独使用卡培他滨，具有统计学意义。2.3对细胞周期的影响表3美洲大蠊药粉、美洲大蠊提取物及二者分别联合卡陪他滨对细胞周期的影响(n＝6，)注：与对照组比较，*p＜0.05；与卡培他滨组比较，△p＜0.05。由表3中可以看出：卡培他滨组g0/g1期细胞比例明显升高，说明其抑制肿瘤细胞增殖的作用机制可能是g0/g1期阻滞；美洲大蠊提取物组的s期比例增高，说明其抑制肿瘤增殖的作用机制可能是s期阻滞。而卡培他滨和美洲大蠊提取物联合用药组作用于ec9706细胞株24h后，g0/g1期细胞数量增多，比例明显增高，但s期和g2/m期比例下降，说明两者联合用药后对细胞周期具有阻滞作用，使肿瘤细胞较多的停留在g0/g1期，两者联合使用后阻滞作用较单用药组高，产生了协同增效的作用；同理分析可得，美洲大蠊药粉与卡培他滨联用后对肿瘤细胞增殖的抑制作用明显高于单独用药组，两者联用具有协同增效的作用。试验例2二、本发明所述的药物联合放疗对荷瘤小鼠的研究1.实验材料1.1实验动物balb/c-nu/nu裸鼠，spf级，4～5周龄，体重15～17g、裸鼠于清洁级环境下饲养，恒温(24～26℃)，笼具、垫料、饮用水和饲料均经消毒处理，实验人员严格进行无菌操作。1.2实验细胞人食管癌细胞株ec9706(由成都中医药大学基础实验中心提供)。1.3实验药品及配置卡培他滨(xeloda)(上海罗氏制药有限公司)：规格：500mg/片。照射方法：采用北京大恒公司kb1800型医用电子直线加速器，6mv-x线进行照射，ssd为100cm，剂量为2gy/min。1.4实验方法1.4.1裸鼠移植瘤模型建立将人食管癌ec9706细胞株进行体外培养至对数生长期，用0.25％胰蛋白酶和0.04％edta消化细胞，反复吹打为单细胞悬液后收集到离心管中。1000rpm/min离心5min，弃去上清液，pbs洗涤2遍后用pbs重悬，在0.4％台盼兰染色后光镜下观察活瘤细胞数＞95％，计数，配制成1×107浓度，在无菌条件下固定裸鼠。将裸鼠右侧腋部皮肤常规消毒后持1ml无菌注射器于裸鼠右侧前肢腋部皮下注射0.2ml细胞悬液，形成局部性肿瘤模型。注射局部出现明显皮丘，5天后出现粟粒大小结节，移植瘤模型建立，成瘤率100％。1.4.2分组及给药实验用balb/c-nu/nuspf级裸鼠48只，接种人食管癌ec9706细胞悬液，11d后可见皮下有约0.5cm×0.5cm大小的肿瘤生成，将48只裸鼠随机分成6组，每组8只：(1)对照组不进行灌药；(2)卡培他滨组，按300mg/kg灌胃卡培他滨；(3)美洲大蠊药粉组，按800mg/kg灌胃美洲大蠊药粉；(4)美洲大蠊提取物组，按2500mg/kg灌胃美洲大蠊提取物；(5)美洲大蠊提取物+卡培他滨组，按2500mg/kg+300mg/kg灌胃美洲大蠊提取物和卡培他滨；(6)美洲大蠊药粉+卡培他滨组，按800mg/kg+300mg/kg灌胃美洲大蠊药粉和卡培他滨。除对照组外，每组小鼠每天灌胃1次，连续28天，同时，每组小鼠用x射线照射肿瘤局部4gy/次×4次，隔日进行1次。于末次治疗72h后，测量裸鼠瘤体大小，用脊髓脱臼法处死裸鼠，裸鼠仰卧位固定，对右上肢皮肤常规消毒，剥离腋窝处瘤体，用滤纸吸干后用电子天平称重瘤体肿瘤，计算肿瘤抑瘤率。抑瘤率(％)＝(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％1.5统计学方法采用spss17.0统计软件分析，数据资料以x±s表示，多组间比较选用单因素方差分析，组内两两比较采用独立样本t检验，以p<0.05为差异有统计学意义，p<0.01为差异具有显著的统计学意义。2.实验结果由表4中可以看出：与对照组比较，各实验组均能降低抑瘤率，抑瘤率为37.1％～72.17％，其中美洲大蠊提取物+卡培他滨组和美洲大蠊药粉+卡培他滨组抑瘤效果显著。卡培他滨和美洲大蠊提取物联合放疗后的抑瘤率明显高于美洲大蠊和卡培他滨单独用药并联合放疗后的抑瘤率；卡培他滨和美洲大蠊药粉联合放疗后的抑瘤率明显高于美洲大蠊和卡培他滨单独用药并联合放疗后的抑瘤率。由上表中的数据中可以看出卡培他滨与本发明所述的美洲大蠊联合使用治疗癌症，大大提高了对肿瘤的治疗作用。表4美洲大蠊药粉、美洲大蠊提取物及二者分别联合卡陪他滨对抑瘤率的影响(n＝8，)组别剂量(μg/ml)瘤重(g)抑瘤率(％)对照组-4.42±0.13△-卡培他滨组300mg/kg1.89±0.09*57.24美洲大蠊提取物组2500mg/kg2.78±0.10*△37.10美洲大蠊药粉组800mg/kg2.65±0.13*△40.05美洲大蠊提取物+卡培他滨组2500mg/kg+300mg/kg1.39±0.11*△68.55美洲大蠊药粉+卡培他滨组800mg/kg+300mg/kg1.23±0.10*△72.17注：与对照组比较，*p＜0.05；与卡培他滨组比较，△p＜0.05。综上，本发明所述的含有卡培他滨和美洲大蠊提取物的药物，对于癌症细胞放射性增敏作用、抑瘤率均比卡培他滨和美洲大蠊单独使用的效果强，说明美洲大蠊与卡培他滨联用后具有明显的协同增效作用。其联合用药比例为：美洲大蠊提取物和卡培他滨的重量配比为(1000～2500)：(200～300)；美洲大蠊药粉和卡培他滨的重量配比为(500～800)：(200～300)均有良好的效果。优选的，美洲大蠊提取物2500mg，卡培他滨300mg，若换算成人用剂量(假设人的体重为60kg)，本发明最佳配比的每日用剂量应是18.7g；另一个最优配比为美洲大蠊药粉800mg，卡培他滨60mg，若换算成人用剂量，本发明最佳配比的每日用剂量应是7.3g。当前第1页12