本发明具体涉及一种枇杷叶药渣总三萜酸提取物的制备方法。
背景技术：
：枇杷叶是蔷薇科枇杷属植物枇杷Eriobotryajaponica(Thunb.)Lindl.的干燥叶，是一味常用传统中药，收载于历版中国药典供中医临床使用。枇杷叶是止咳化痰单方或者复方的常用中药，众多的药厂从事枇杷叶相关药品的生产，常年产生大量枇杷叶药材提取残渣，这些药渣的处理是一个不可忽视的环境问题。据调查，目前各大制药厂生产的枇杷叶单方或者复方制剂大多是采用水对枇杷叶进行提取，提取后的药渣作为废物弃置，既浪费了资源又会产生环境污染。前期研究发现，工厂水提取后的枇杷叶药渣中含有丰富的三萜酸类成分，如果能将枇杷叶药渣中三萜酸类成分进行制备纯化得到含量较高的三萜酸提取既可以解决环境污染的问题，又可以将枇杷叶药渣变废为宝，具有良好的实用前景。目前对枇杷叶药渣中总三萜酸类成分的利用有申请号为CN201410432161.8的专利，该专利公开了一种枇杷叶药渣三萜酸类成分的提取方法，该方法采用溶剂提取，提取稠膏水溶解后离心，以石油醚为溶剂进行纯化，工艺较复杂，而且使用的石油醚为易燃易爆危险溶剂，对人体有刺激性伤害，安全性也较差，不适合工厂化生产。技术实现要素：本发明的目的是克服现有工艺中的缺陷，提供一种工艺简单，成本低，得到含量较高的枇杷叶药渣中总三萜酸成分的制备方法。为了达到上述目的，本发明提供了一种枇杷叶药渣总三萜酸提取物的制备方法，该方法包括以下步骤：（1）将枇杷叶药渣干燥粉碎；（2）用乙醇或甲醇为溶剂提取步骤（1）中得到的枇杷叶药渣粉末，将提取液减压浓缩成低醇浓度浓缩液；（3）取聚酰胺装柱，将步骤（2）得到的枇杷叶药渣提取浓缩液上样，用乙醇或甲醇进行梯度洗脱，收集洗脱液；所述聚酰胺与步骤（1）中所述枇杷叶药渣的重量比为：0.2-10:1；（4）将步骤（3）收集的洗脱液浓缩干燥，得枇杷叶药渣总三萜酸提取物。其中，步骤（2）中提取方法为：每千克枇杷叶药渣加入4-10L浓度为80-95%的乙醇或甲醇，热回流或浸渍或渗漉提取2-4次，热回流提取每次1-3小时，浸渍或渗漉提取每次15天，合并提取液，提取液减压浓缩浓缩至醇浓度为0-50%。最佳提取方法为：每千克枇杷叶药渣加入8L浓度为90%的乙醇提取2小时，过滤，滤渣加入6L浓度为90%的乙醇提取1小时，过滤，合并两次提取液，提取液减压浓缩至醇浓度为50%。步骤（4）中聚酰胺与枇杷叶药渣的重量比为1:5；洗脱采用重量为聚酰胺重量8-15倍的80-90%乙醇。本发明具有以下优点：（1）本发明采用醇提取结合聚酰胺柱层析法制备枇杷叶药渣中三萜酸类成分，工艺简单，得到的三萜酸类成分含量较高。（2）枇杷叶在药厂水提取加工后大极性成分被提取，而留下大量的低极性总三萜酸类成分。但是药渣中还含有叶绿素、叶黄素等低极性杂质，这些杂质在药渣醇提取过程中会连同三萜酸类成分一起被提取出来。聚酰胺为一种高分子聚合物，其分子内有很多酰胺键，可与酚类、酸类、醌类、硝基化合物等形成氢键，从而对叶绿素、叶黄素等低极性杂质产生吸附作用。我们在研究中发现聚酰胺对药渣中的叶绿素类、叶黄素类等低极性杂质的吸附能力强于三萜酸类成分，80-90%高浓度乙醇可以将三萜酸类成分洗脱下来，而叶绿素类、叶黄素类化合物则依旧保留在聚酰胺柱上。所以采用聚酰胺吸附的方法可以对枇杷叶药渣中三萜酸类成分进行精制，提高提取物中三萜酸类成分含量。该工艺不需要进行梯度洗脱，工艺相对简单。具体实施方式工艺优选实施例本试验采用以下4种方法制备枇杷叶药渣总三萜酸提取物，根据紫外分光光度法测量总三萜酸含量，并进行比较：A、醇提取法：100g枇杷叶药渣粗粉，分别加药材重量8倍量和6倍量85%乙醇回流提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，过滤，合并提取液并浓缩干燥。B、醇提石油醚精制法：100g枇杷叶药渣粗粉，分别加药材重量8倍量和6倍量85%乙醇回流提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，过滤，合并提取液并浓缩成浸膏，浸膏加水溶解后放入离心机离心，离心得到的沉淀物用石油醚100mL溶解除去脂溶性物质，过滤，沉淀干燥。C、醇提大孔树脂柱层析法：100g枇杷叶药渣粗粉，分别加药材重量8倍量和6倍量85%乙醇回流提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，过滤，合并提取液，提取液上100gD101大孔树脂，300g90%乙醇进行洗脱，收集洗脱液浓缩干燥。D、醇提聚酰胺柱层析法：100g枇杷叶药渣粗粉，分别加药材重量8倍量和6倍量85%乙醇回流提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，过滤，合并提取液至醇浓度为50%的浓缩液，浓缩液上样500g聚酰胺柱，300g90%乙醇进行洗脱，收集洗脱液浓缩干燥。紫外分光光度法：对照品溶液的制备：精密称取熊果酸5.0mg于25ml容量瓶中，加无水乙醇溶解并定容至25ml，摇匀即得。样品溶液的制备：精确称取枇杷叶药渣总三萜酸提取物6.0mg于25ml容量瓶中，加无水乙醇超声溶解，定容至25ml，摇匀即得。样品测定：精密移取0.2~0.4ml样品溶液于试管中，水浴蒸干溶剂，加入新配5%香草醛-冰醋酸溶液0.3ml，再加入高氯酸1.0ml，60℃水浴反应15min，立即置于冰水浴中冷却，再加冰醋酸5ml混合均匀后于紫外-可见分光光度计下测量545nm处的吸收值，根据熊果酸标准曲线计算样品总三萜酸含量。结果见表1，方法D醇提聚酰胺柱层析法得到的提取物总三萜酸含量明显高于其它三种方法。表1不同制备方法所得提取物的提取率及总三萜含量制备方法提取物得率（%）总三萜酸（%）A7.829.67B2.760.12C1.080.38D1.893.17产品实施例1：取干燥枇杷叶药渣1.0kg粉碎成粗粉，依次用80%甲醇8L、6L冷浸两次，每次15天，合并浸渍液，减压浓缩至醇浓度为10%的浓缩液。取聚酰胺0.5kg装柱，将上述备用的浓缩液上样，用7.5kg的95%乙醇进行洗脱，收集90%乙醇洗脱液。减压浓缩干燥，得枇杷叶药渣总三萜酸提取物，得率为2.0%。经紫外分光光度法测得提取物总三萜酸含量以熊果酸计为89.35%。产品实施例2：取干燥枇杷叶药渣1.0kg粉碎成粗粉，20kg的90%乙醇浸渍48小时后，渗漉提取，渗漉至流出液色浅，三萜反应不明显为止，减压浓缩至醇浓度为40%的浓缩液。取聚酰胺10kg装柱，将上述备用的浓缩液上样，用80kg的80%乙醇进行洗脱，收集80%乙醇洗脱液。减压浓缩干燥，得枇杷叶药渣总三萜酸提取物，得率为1.7%。经紫外分光光度法测得提取物总三萜酸含量以熊果酸计为91.61%。产品实施例3：取干燥枇杷叶药渣1.0kg粉碎成粗粉，依次用90%乙醇6L、4L加热回流提取2次，每次分别为2小时、1小时，合并提取液，减压浓缩至醇浓度为50%的浓缩液。取聚酰胺5kg装柱，将上述备用的浓缩液上样，用40kg的90%乙醇进行洗脱，收集90%乙醇洗脱液。减压浓缩干燥，得枇杷叶药渣总三萜酸提取物，得率为1.8%。经紫外分光光度法测得提取物总三萜酸含量以熊果酸计为93.84%。以上实施例为本发明实施方式进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。当前第1页1 2 3