本发明属于药物新用途技术领域，具体地说，涉及蛋白C在制备防治肺动脉高压病药物中的应用。
背景技术：
肺动脉高压(pulmonary hypertension，PH)是以肺动脉压和肺血管阻力升高为特征的临床血流动力学症候群。其发生发展的重要病理生理基础为肺血管收缩、内皮细胞与平滑肌细胞的增殖和原位血栓形成。这意味着存在血管扩张剂和血管收缩剂，生长抑制剂和促有丝分裂因子以及抗血栓形成和促血栓形成决定因子之间的正常关系中的扰动。这些稳态失衡可能是肺血管内皮细胞功能障碍或损伤的后果。PH可导致右心衰竭，甚至直接导致死亡。PH的发病机制非常复杂，涉及前列环素途径、NO途径、内皮素途径以及外界环境因素(缺氧、中枢神经系统的兴奋)，还有一些与PH相关的疾病，比如硬皮病、人类免疫缺陷病毒(HIV)感染，人类疱疹病毒(HHV)，门静脉高压症，血小板增多症，血红蛋白病和遗传性出血性毛细血管扩张症。近年来关于PH的机制研究有一定进展，但PH的发病机制仍尚不明确。可选择的治疗肺动脉高压的药物有限。
蛋白C(Prtotein C,PC)系统是维持机体内环境稳定的重要天然抗凝体系，其活性的发挥主要以活化的蛋白C(activated PC,aPC)为主。近年来大量动物及临床研究证实，aPC不仅调控机体的凝血及纤溶平衡，而且具有抗炎，抗凋亡，保护内皮细胞，改善微循环，减缓器官功能障碍的作用，参与多种疾病的病理生理过程。PC由肝脏合成，以酶原的形式分泌到血浆。在凝血酶-血栓调节素(IIa-TM)复合物作用下，PC发生酶解反应，形成aPC。aPC与内皮细胞蛋白C受体(EPCR)结合而发挥生物学功能，EPCR不仅增强IIa-TM复合物对PC的激活作用，还介导aPC的抗炎，抗凋亡及其他细胞活性。目前研究表明aPC的细胞保护作用是通过protease activated receptor1(PAR1)受体介导的，但是通过同样的受体，在生理状态下凝血酶却介导了至少部分完全相反的作用。另外研究表明，当EPCR被PC占据后，凝血酶对内皮细胞屏障破坏作用就变成了保护作用。aPC起初被用来治疗败血症的患者，但是由于其强烈的抗凝的副作用，导致患者出血风险急剧增加，最终导致其退市。目前PC已用于治疗先天性PC缺乏引起的静脉血栓及爆发性紫癜。
目前治疗肺动脉高压药物包括肺血管扩张剂，抗凝剂及并发症的相关处理。对预后的评估内容包括临床评估(WHO肺动脉高压功能分级和心电图)、运动耐量(6min步行试验距离或心肺运动试验)、B型脑钠肽(BNP)或N末端B型脑钠肽(NT-BNP)、超声心动图和右心导管检查。
目前尚无凝血蛋白PC在制备防治肺动脉高压病药物中的报道。
技术实现要素：
针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种凝血蛋白PC(其氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示)在制备防治肺动脉高压病药物中的新用途，特别是在野百合碱(MCT)诱发的肺动脉高压中具有明显的治疗作用。
为了实现上述目的，本发明采取了如下技术方案：
蛋白C在制备防治肺动脉高压病药物中的应用，所述的应用包括但不限于用于制备治疗和/或预防肺动脉高压的药物；
一种凝血蛋白PC在制备下述产品中的应用，包括：1)治疗和/或预防肺动脉高压的药物；2)促进野百合碱诱导肺动脉高压模型大鼠肺组织中14-3-3σ表达的产品；3)抑制肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的产品。
本发明中，所述凝血蛋白PC与其他抗肺动脉高压的药物联合作为活性成分在制备治疗或预防肺动脉高压的药物中的应用，也属于本发明的保护范围。
本发明中，所述的肺动脉高压为野百合碱诱发的肺动脉高压。
本发明中，所述药物的剂型为口服制剂或注射剂。
另外，本发明还要求保护一种预防和/或治疗肺动脉高压的药物，所述活性成分包括凝血蛋白PC。
本发明与现有技术相比，具有以下如下优点和效果：
在本发明中凝血蛋白PC能够通过促进野百合碱诱导肺动脉高压模型大鼠肺组织中14-3-3σ表达，从而抑制肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖。治疗性研究结果显示，凝血蛋白PC具有显著抑制肺动脉平滑肌细胞增殖、降低右室收缩压力、降低右室重量与左室加室间隔重量比值的疗效。
附图说明
图1为本发明实施例1中动物实验流程图；
图2为本发明实施例1肺动脉组织HE染色图；
图3为本发明实施例1右室收缩压力、右室重量与左室加室间隔重量比值结果图；
图4为本发明实施例1Western bloting检测对照组、模型组、凝血蛋白PC治疗组小鼠肺组织14-3-3σ蛋白的表达情况示意图。
具体实施方式
下面将结合具体的实施例对本发明的技术方案做进一步的详细说明。应理解，所举实施例的目的在于进一步阐述本发明的内容，而不能在任何意义上解释为对本发明保护范围的限制。本发明的凝血蛋白PC(Ceprotin)购自Baxalta公司。利用SEQ ID NO.1所示序列，利用本领域的常规方式表达或合成的蛋白也能行使相同的功能。在本发明中，如未特别说明，“凝血蛋白PC”或“PC”或“蛋白C”均指得是未活化的蛋白C。
实施例1：
凝血蛋白PC在制备防治肺动脉高压病药物中的应用：
1)14-3-3σ蛋白作为肺动脉高压病标志物的确定：通过生物信息学分析发现，14-3-3β在肺动脉高压病人中相关性升高，随后进行动物实验，对肺动脉高压模型大鼠肺组织进行western-blotting检测，同时检测14-3-3蛋白的7个亚型(β,ε,η,γ,σ,τ,ζ)，结果发现仅14-3-3σ的表达在肺动脉高压模型大鼠肺组织中降低明显，同时在PC治疗组，其表达得到升高。因此，可将14-3-3σ蛋白作为肺动脉高压病标志物，作为辅助检测指标。
2)将雄性SD大鼠(4周龄)随机分为3组：对照组、肺动脉高压组和PC治疗组。采用单次野百合碱(MCT，40mg/kg)给药法对肺动脉高压组和PC治疗组大鼠腹腔注射,对照组腹腔注射生理盐水(图1)，各处理组具体操作如下：
对照组：腹腔注射等量生理盐水。
肺动脉高压组：4周龄大鼠单次腹腔注射野百合碱(MCT，40mg/kg)，此后隔日腹腔注射等量生理盐水；
治疗组：4周龄大鼠单次腹腔注射野百合碱(MCT，40mg/kg)，同时注射PC(PC，1mg/kg)，此后隔日注射PC(PC，1mg/kg)
在注射MCT4周后运用右心导管法检测大鼠形成肺动脉高压后右室收缩压(rightventricularsystolicpressure,RVSP)。然后收获大鼠血浆及按照需要采取不同方法保存各个器官样本并记录体重及器官重量。并进行肺组织病理切片HE染色。Western Blot检测大鼠肺组织标本中14-3-3σ指标。
结果显示，HE染色表明凝血蛋白PC可以改善野百合碱导致的肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖(图2A)，肺动脉高压组肺动脉管壁明显增厚，PC治疗组较肺动脉高压组管壁厚度明显减小(图2B)。同时，凝血蛋白PC可以降低肺动脉高压大鼠的右室收缩压、降低右室重量与左室加室间隔重量比值及右室重量与体重比值(图3ABCD)。Western Blot检测表明凝血蛋白PC可促进野百合碱导致的肺动脉高压大鼠肺组织中14-3-3σ蛋白的表达(图4AB)。表明凝血蛋白PC明显改善了致病模型大鼠的肺动脉高压。
实验结论证实了本发明所涉及的凝血蛋白PC具有治疗肺动脉高压的作用。
应当指出，以上所述具体实施方式可以使本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。因此，本领域技术人员应当理解，仍然可以对本发明进行修改或者等同替换；而一切不脱离本发明的精神和技术实质的技术方案及其改进，其均应涵盖在本发明专利的保护范围当中。
序列表
<110> 华中科技大学同济医学院附属同济医院
<120> 蛋白C在制备防治肺动脉高压病药物中的应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 461
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Met Trp Gln Leu Thr Ser Leu Leu Leu Phe Val Ala Thr Trp Gly Ile
1 5 10 15
Ser Gly Thr Pro Ala Pro Leu Asp Ser Val Phe Ser Ser Ser Glu Arg
20 25 30
Ala His Gln Val Leu Arg Ile Arg Lys Arg Ala Asn Ser Phe Leu Glu
35 40 45
Glu Leu Arg His Ser Ser Leu Glu Arg Glu Cys Ile Glu Glu Ile Cys
50 55 60
Asp Phe Glu Glu Ala Lys Glu Ile Phe Gln Asn Val Asp Asp Thr Leu
65 70 75 80
Ala Phe Trp Ser Lys His Val Asp Gly Asp Gln Cys Leu Val Leu Pro
85 90 95
Leu Glu His Pro Cys Ala Ser Leu Cys Cys Gly His Gly Thr Cys Ile
100 105 110
Asp Gly Ile Gly Ser Phe Ser Cys Asp Cys Arg Ser Gly Trp Glu Gly
115 120 125
Arg Phe Cys Gln Arg Glu Val Ser Phe Leu Asn Cys Ser Leu Asp Asn
130 135 140
Gly Gly Cys Thr His Tyr Cys Leu Glu Glu Val Gly Trp Arg Arg Cys
145 150 155 160
Ser Cys Ala Pro Gly Tyr Lys Leu Gly Asp Asp Leu Leu Gln Cys His
165 170 175
Pro Ala Val Lys Phe Pro Cys Gly Arg Pro Trp Lys Arg Met Glu Lys
180 185 190
Lys Arg Ser His Leu Lys Arg Asp Thr Glu Asp Gln Glu Asp Gln Val
195 200 205
Phe Pro Arg Leu Ile Lys Gly Lys Met Thr Arg Arg Gly Asp Ser Pro
210 215 220
Trp Gln Val Val Leu Leu Asp Ser Lys Lys Lys Leu Ala Cys Gly Ala
225 230 235 240
Val Leu Ile His Pro Ser Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Met Asp
245 250 255
Glu Ser Lys Lys Leu Leu Val Arg Leu Gly Glu Tyr Asp Leu Arg Arg
260 265 270
Trp Glu Lys Trp Glu Leu Asp Leu Asp Ile Lys Glu Val Phe Val His
275 280 285
Pro Asn Tyr Ser Lys Ser Thr Thr Asp Asn Asp Ile Ala Leu Leu His
290 295 300
Leu Ala Gln Pro Ala Thr Leu Ser Gln Thr Ile Val Pro Ile Cys Leu
305 310 315 320
Pro Asp Ser Gly Leu Ala Glu Arg Glu Leu Asn Gln Ala Gly Gln Glu
325 330 335
Thr Leu Val Thr Gly Trp Gly Tyr His Ser Ser Arg Glu Lys Glu Ala
340 345 350
Lys Arg Asn Arg Thr Phe Val Leu Asn Phe Ile Lys Ile Pro Val Val
355 360 365
Pro His Asn Glu Cys Ser Glu Val Met Ser Asn Met Val Ser Glu Asn
370 375 380
Met Leu Cys Ala Gly Ile Leu Gly Asp Arg Gln Asp Ala Cys Glu Gly
385 390 395 400
Asp Ser Gly Gly Pro Met Val Ala Ser Phe His Gly Thr Trp Phe Leu
405 410 415
Val Gly Leu Val Ser Trp Gly Glu Gly Cys Gly Leu Leu His Asn Tyr
420 425 430
Gly Val Tyr Thr Lys Val Ser Arg Tyr Leu Asp Trp Ile His Gly His
435 440 445
Ile Arg Asp Lys Glu Ala Pro Gln Lys Ser Trp Ala Pro
450 455 460
<210> 2
<211> 236
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Gly Ala Met Gly Ser Met Glu Arg Ala Ser Leu Ile Gln Lys Ala Lys
1 5 10 15
Leu Ala Glu Gln Ala Glu Arg Tyr Glu Asp Met Ala Ala Phe Met Lys
20 25 30
Gly Ala Val Glu Lys Gly Glu Glu Leu Ser Cys Glu Glu Arg Asn Leu
35 40 45
Leu Ser Val Ala Tyr Lys Asn Val Val Gly Gly Gln Arg Ala Ala Trp
50 55 60
Arg Val Leu Ser Ser Ile Glu Gln Lys Ser Asn Glu Glu Gly Ser Glu
65 70 75 80
Glu Lys Gly Pro Glu Val Arg Glu Tyr Arg Glu Lys Val Glu Thr Glu
85 90 95
Leu Gln Gly Val Cys Asp Thr Val Leu Gly Leu Leu Asp Ser His Leu
100 105 110
Ile Lys Glu Ala Gly Asp Ala Glu Ser Arg Val Phe Tyr Leu Lys Met
115 120 125
Lys Gly Asp Tyr Tyr Arg Tyr Leu Ala Glu Val Ala Thr Gly Asp Asp
130 135 140
Lys Lys Arg Ile Ile Asp Ser Ala Arg Ser Ala Tyr Gln Glu Ala Met
145 150 155 160
Asp Ile Ser Lys Lys Glu Met Pro Pro Thr Asn Pro Ile Arg Leu Gly
165 170 175
Leu Ala Leu Asn Phe Ser Val Phe His Tyr Glu Ile Ala Asn Ser Pro
180 185 190
Glu Glu Ala Ile Ser Leu Ala Lys Thr Thr Phe Asp Glu Ala Met Ala
195 200 205
Asp Leu His Thr Leu Ser Glu Asp Ser Tyr Lys Asp Ser Thr Leu Ile
210 215 220
Met Gln Leu Leu Arg Asp Asn Leu Thr Leu Trp Thr
225 230 235