大千生茎总生物碱的提取工艺的制作方法

本发明涉及大千生茎总生物碱提取技术领域，具体为大千生茎总生物碱的提取工艺。

背景技术

大千生为茄科植物假酸浆属的植物，原产于秘鲁，又名假酸浆、天珠等，生于田边、荒地、篱笆边、屋园周围，在我国南北均有作药用或观赏栽培，全草具有镇静、祛痰、清热、解毒、止咳功效、治精神病、狂犬病、感冒、风湿痛、疥癣等症，种子有清热退火、利尿、祛风、消炎等功效、治发烧、风湿性关节炎、疮痈肿痛等症，花具有祛风、消炎、治鼻渊，全国中草药汇编(卷二)记载着大千生具有细胞毒作用和抗白血病、抗癌的作用，它也是制作凉粉(又称冰粉)的原料，还有美容价值，但现有的大千生茎总生物碱其提取工艺复杂，且整个提取工艺容易受到其他因素的干扰，导致大千生茎总生物碱的提取率低，为此，我们提出大千生茎总生物碱的提取工艺。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供大千生茎总生物碱的提取工艺，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：大千生茎总生物碱的提取工艺，其提取工艺包括以下步骤：

a、标准品溶液制备：万分之一的天平精密称取硫酸阿托品标准品5.5mg，然后用乙醇定容至50ml的容量瓶中，制备成0.11mg.ml^-1的标准品溶液；

b、波长选择：量取1ml的标准品溶液，置于50ml比色管中，加入7ml溴麝香草酚蓝(btb)显色剂，加入9ml氯仿，摇匀静置30min，萃取氯仿层溶液，采用紫外分光光度法，标准品在417nm处有良好的吸收波长，无杂质干扰；

c、供试品溶液的制备：用分析天平精准称取粉末5g放入250ml锥形瓶中，加入ph＝3浓度80％的乙醇溶液100ml，60℃水浴，超声提取30min，补足减少的乙醇，抽滤得滤液加氨水调节ph＝11，浓缩至10ml，加乙醇溶液定容到50ml，氯仿萃取，得氯仿层；

d、显色剂的制备：分析天平称取溴麝香草酚蓝试剂0.025g，加入到准备的0.1mol/l磷酸二氢钾100ml，0.1mol/l氢氧化钠84.4ml并加水补充至200ml的缓冲液中，得溴麝香草酚蓝显色剂溶液；

e、单因素试验及数据分析；

f、正交试验。

优选的，所述步骤e中包括单因素之温度、单因素之功率和单因素之物料比，且单因素之温度包括温度提取方法、第一数据分析、时间提取方法、第二数据分析、浓度提取方法和第三数据分析；单因素之功率包括功率提取方法和第四数据分析；单因素之物料比包括物料比提取方法和第五数据分析。

优选的，所述温度提取方法：称取5.0g大千生茎粉末于250ml锥形瓶中，加入浓度为50％乙醇100ml，调节超声波功率为100w，时间设定为30min，分别设定温度为30℃、40℃、50℃、60℃、70℃，提取液冷却，补足减少的乙醇，抽滤得滤液加氨水调节ph＝11，浓缩至10ml，加乙醇溶液定容至50ml，氯仿萃取，得氯仿层，加入7ml溴麝香草酚蓝显色剂，加入9ml氯仿溶液，静置30min，萃取，取氯仿层溶液，以氯仿为空白对照，在417nm波长处进行测定；第一数据分析为：当提取温度从30℃升高至40℃时，提取率处于平缓状态；温度由40℃升至当温度达到50℃时，提取率呈现上升的趋势，此时生物碱提取率到了最大值，温度的由50℃继续升高，溶液中又会溶出许多物质，生物碱的提取率就会下降，所以选择50℃为最佳工艺的提取温度；时间提取方法：称取5.0g大千生茎粉末于250ml锥形瓶中，加入浓度为50％乙醇100ml，调节超声波功率为100w，温度设定为选取的最优温度，分别设定时间为10min、20min、30min、40min、50min，提取、冷却、补足减少的乙醇，抽滤所得滤液加氨水调节ph＝11，浓缩至10ml，加乙醇溶液定容至50ml，氯仿萃取，得氯仿层，加入7ml溴麝香草酚蓝显色剂，加入9ml氯仿，静置30min，萃取氯仿层溶液，将波长调到417nm处，以氯仿为空白对照，在417nm波长进行测定；第二数据分析为：当提取时间由10提升到30min时，提取率无明显变化，当提取时间升高到40min时，生物碱的提取率也在大幅度的升高，当提取时间为40min时，此时生物碱的提取率最大；当提取时间升高到50min时，此时许多其他杂质，也溶解在了乙醇溶液中，生物碱的提取率也呈现了下降的趋势，所以选择40min为最佳工艺的提取时间；浓度提取方法：称取5.0g大千生茎粉末于250ml锥形瓶中，分别设定乙醇浓度为50％、60％、70％、80％、90％乙醇125ml，调节超声波功率为100w，温度设定为选取的最优温度，时间设定为选取的最优时间，提取液冷却，补足减少的乙醇，抽滤得滤液加氨水调节ph＝11，浓缩至10ml，加乙醇溶液定容至50ml，氯仿萃取，得氯仿层，加入7ml溴麝香草酚蓝显色剂，加入9ml氯仿，静置30min，萃取氯仿层溶液，将波长调到417nm处，以氯仿为空白对照，在417nm波长进行测定；第三数据分析为：乙醇浓度由50％上升至70％时，生物碱的提取率都在升高，当乙醇浓度达到70％时，此时生物碱的提取率也达到了最大值；但当乙醇浓度继续升高时，生物碱的提取率开始呈下降的趋势，表明了许多物质溶解于高浓度乙醇中，影响了生物碱的提取率，所以选择70％的乙醇为最佳乙醇提取浓度。

优选的，所述功率提取方法：称取5.0g大千生茎粉末于250ml锥形瓶中，加入浓度为选取的最优浓度的乙醇125ml，分别调节功率为50、100、150、200、250、300w，温度设定为选取的最优温度，时间设定为选取的最优时间，提取液冷却，补足减少的乙醇，抽滤得滤液加氨水调节ph＝11，浓缩至10ml，加乙醇溶液定容至50ml，氯仿萃取，得氯仿层，加入7ml溴麝香草酚蓝显色剂，加入9ml氯仿，静置30min，萃取氯仿层溶液，将波长调到417nm处，以氯仿为空白对照，在417nm波长进行测定；第四数据分析为：当超声功率有200w提升到400w时，生物碱的提取率在不断的攀高，当提取功率达到400w时生物碱的提取率达到顶峰；当功率由400w一直升高到1000w时，提取率一直呈现下降的趋势，甚至当达到1000w时，生物碱提取率趋近于0，说明了过高的超声功率会对生物碱有着破坏的作用，所以选择400w为最佳工艺的提取功率。

优选的，所述物料比提取方法：称取5.0g大千生茎粉末于250ml锥形瓶中，分别按料液比为1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35加入浓度为选取的最优浓度的乙醇，选取功率为选取的最优功率，温度设定为选取的最优温度，时间设定为选取的最优时间，提取液冷却，补足减少的乙醇，抽滤得滤液加氨水调节ph＝11，浓缩至10ml，加乙醇溶液定容至50ml，氯仿萃取，得氯仿层，加入7ml溴麝香草酚蓝显色剂，加入9ml氯仿，静置30min，萃取氯仿层溶液，将波长调到417nm处，以氯仿为空白对照，在417nm波长进行测定；第五数据分析为：当物料比由1∶15改变为1∶20时，此时提取率仍在上升，当料液比为1∶20时，此时达到了最大值，当物料中溶剂继续增多，此时提取率没有明显变化，是因为溶液中此时的生物碱已经全部析出。

优选的，所述正交试验包括正交试验设计和正交试验结果，且正交试验设计为：用乙醇为提取剂，采用了超声波提取法提取假酸浆总生物碱含量，通过正交试验可以显著的计算提取率，因此以温度、时间、功率、浓度、料液比为主要的研究因素，通过试验测定的吸光度，确定最佳的工艺提取条件；正交试验结果为：因素b极差最大，所以是影响提取率的最主要因素，其顺序依次为b＞a＞d＞e＞c，即时间＞物料比＞浓度＞功率＞温度，超声波提取大千生茎总生物碱的最佳工艺条件：超声50min；料液比为1∶25；乙醇浓度为60％；超声功率为400w；温度为50℃，此时提取率为2.58％。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

本发明首先进行了单因素试验，从而确定了最佳的提取条件，其次根据单因素试验获得的最佳提取条件设计了正交试验，通过计算生物碱的得出率，超声波提取大千生茎总生物碱的最佳工艺条件：超声50min；料液比为1∶25；乙醇浓度为60％；超声功率为400w；温度为50℃，此时提取率为2.58％，根据方差分析可分析出因素a、因素b、因素c、因素d、因素e的影响力，排序大小为b＞a＞d＞e＞c，即时间＞物料比＞浓度＞功率＞温度。

附图说明

图1为本发明工艺流程示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1，大千生茎总生物碱的提取工艺，其提取工艺包括以下步骤：

a、标准品溶液制备：万分之一的天平精密称取硫酸阿托品标准品5.5mg，然后用乙醇定容至50ml的容量瓶中，制备成0.11mg.ml^-1的标准品溶液；

b、波长选择：量取1ml的标准品溶液，置于50ml比色管中，加入7ml溴麝香草酚蓝(btb)显色剂，加入9ml氯仿，摇匀静置30min，萃取氯仿层溶液，采用紫外分光光度法，标准品在417nm处有良好的吸收波长，无杂质干扰；

c、供试品溶液的制备：用分析天平精准称取粉末5g放入250ml锥形瓶中，加入ph＝3浓度80％的乙醇溶液100ml，60℃水浴，超声提取30min，补足减少的乙醇，抽滤得滤液加氨水调节ph＝11，浓缩至10ml，加乙醇溶液定容到50ml，氯仿萃取，得氯仿层；

d、显色剂的制备：分析天平称取溴麝香草酚蓝试剂0.025g，加入到准备的0.1mol/l磷酸二氢钾100ml，0.1mol/l氢氧化钠84.4ml并加水补充至200ml的缓冲液中，得溴麝香草酚蓝显色剂溶液；

e、单因素试验及数据分析；

f、正交试验。

步骤e中包括单因素之温度、单因素之功率和单因素之物料比，且单因素之温度包括温度提取方法、第一数据分析、时间提取方法、第二数据分析、浓度提取方法和第三数据分析；单因素之功率包括功率提取方法和第四数据分析；单因素之物料比包括物料比提取方法和第五数据分析。

温度提取方法：称取5.0g大千生茎粉末于250ml锥形瓶中，加入浓度为50％乙醇100ml，调节超声波功率为100w，时间设定为30min，分别设定温度为30℃、40℃、50℃、60℃、70℃，提取液冷却，补足减少的乙醇，抽滤得滤液加氨水调节ph＝11，浓缩至10ml，加乙醇溶液定容至50ml，氯仿萃取，得氯仿层，加入7ml溴麝香草酚蓝显色剂，加入9ml氯仿溶液，静置30min，萃取，取氯仿层溶液，以氯仿为空白对照，在417nm波长处进行测定；第一数据分析为：当提取温度从30℃升高至40℃时，提取率处于平缓状态；温度由40℃升至当温度达到50℃时，提取率呈现上升的趋势，此时生物碱提取率到了最大值，温度的由50℃继续升高，溶液中又会溶出许多物质，生物碱的提取率就会下降，所以选择50℃为最佳工艺的提取温度；时间提取方法：称取5.0g大千生茎粉末于250ml锥形瓶中，加入浓度为50％乙醇100ml，调节超声波功率为100w，温度设定为选取的最优温度，分别设定时间为10min、20min、30min、40min、50min，提取、冷却、补足减少的乙醇，抽滤所得滤液加氨水调节ph＝11，浓缩至10ml，加乙醇溶液定容至50ml，氯仿萃取，得氯仿层，加入7ml溴麝香草酚蓝显色剂，加入9ml氯仿，静置30min，萃取氯仿层溶液，将波长调到417nm处，以氯仿为空白对照，在417nm波长进行测定；第二数据分析为：当提取时间由10提升到30min时，提取率无明显变化，当提取时间升高到40min时，生物碱的提取率也在大幅度的升高，当提取时间为40min时，此时生物碱的提取率最大；当提取时间升高到50min时，此时许多其他杂质，也溶解在了乙醇溶液中，生物碱的提取率也呈现了下降的趋势，所以选择40min为最佳工艺的提取时间；浓度提取方法：称取5.0g大千生茎粉末于250ml锥形瓶中，分别设定乙醇浓度为50％、60％、70％、80％、90％乙醇125ml，调节超声波功率为100w，温度设定为选取的最优温度，时间设定为选取的最优时间，提取液冷却，补足减少的乙醇，抽滤得滤液加氨水调节ph＝11，浓缩至10ml，加乙醇溶液定容至50ml，氯仿萃取，得氯仿层，加入7ml溴麝香草酚蓝显色剂，加入9ml氯仿，静置30min，萃取氯仿层溶液，将波长调到417nm处，以氯仿为空白对照，在417nm波长进行测定；第三数据分析为：乙醇浓度由50％上升至70％时，生物碱的提取率都在升高，当乙醇浓度达到70％时，此时生物碱的提取率也达到了最大值；但当乙醇浓度继续升高时，生物碱的提取率开始呈下降的趋势，表明了许多物质溶解于高浓度乙醇中，影响了生物碱的提取率，所以选择70％的乙醇为最佳乙醇提取浓度。

功率提取方法：称取5.0g大千生茎粉末于250ml锥形瓶中，加入浓度为选取的最优浓度的乙醇125ml，分别调节功率为50、100、150、200、250、300w，温度设定为选取的最优温度，时间设定为选取的最优时间，提取液冷却，补足减少的乙醇，抽滤得滤液加氨水调节ph＝11，浓缩至10ml，加乙醇溶液定容至50ml，氯仿萃取，得氯仿层，加入7ml溴麝香草酚蓝显色剂，加入9ml氯仿，静置30min，萃取氯仿层溶液，将波长调到417nm处，以氯仿为空白对照，在417nm波长进行测定；第四数据分析为：当超声功率有200w提升到400w时，生物碱的提取率在不断的攀高，当提取功率达到400w时生物碱的提取率达到顶峰；当功率由400w一直升高到1000w时，提取率一直呈现下降的趋势，甚至当达到1000w时，生物碱提取率趋近于0，说明了过高的超声功率会对生物碱有着破坏的作用，所以选择400w为最佳工艺的提取功率。

物料比提取方法：称取5.0g大千生茎粉末于250ml锥形瓶中，分别按料液比为1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35加入浓度为选取的最优浓度的乙醇，选取功率为选取的最优功率，温度设定为选取的最优温度，时间设定为选取的最优时间，提取液冷却，补足减少的乙醇，抽滤得滤液加氨水调节ph＝11，浓缩至10ml，加乙醇溶液定容至50ml，氯仿萃取，得氯仿层，加入7ml溴麝香草酚蓝显色剂，加入9ml氯仿，静置30min，萃取氯仿层溶液，将波长调到417nm处，以氯仿为空白对照，在417nm波长进行测定；第五数据分析为：当物料比由1∶15改变为1∶20时，此时提取率仍在上升，当料液比为1∶20时，此时达到了最大值，当物料中溶剂继续增多，此时提取率没有明显变化，是因为溶液中此时的生物碱已经全部析出。

正交试验包括正交试验设计和正交试验结果，且正交试验设计为：用乙醇为提取剂，采用了超声波提取法提取假酸浆总生物碱含量，通过正交试验可以显著的计算提取率，因此以温度、时间、功率、浓度、料液比为主要的研究因素，通过试验测定的吸光度，确定最佳的工艺提取条件；正交试验结果为：因素b极差最大，所以是影响提取率的最主要因素，其顺序依次为b＞a＞d＞e＞c，即时间＞物料比＞浓度＞功率＞温度，超声波提取大千生茎总生物碱的最佳工艺条件：超声50min；料液比为1∶25；乙醇浓度为60％；超声功率为400w；温度为50℃，此时提取率为2.58％。

使用时，采用超声波提取法，提取大千生茎中总生物碱，首先进行了单因素试验，从而确定了最佳的提取条件，其次根据单因素试验获得的最佳提取条件设计了正交试验，通过计算生物碱的得出率，超声波提取大千生茎总生物碱的最佳工艺条件：超声50min；料液比为1∶25；乙醇浓度为60％；超声功率为400w；温度为50℃，此时提取率为2.58％，根据方差分析可分析出因素a、因素b、因素c、因素d、因素e的影响力，排序大小为b＞a＞d＞e＞c，即时间＞物料比＞浓度＞功率＞温度，所以对生物碱提取率影响最大的因素为时间。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。