本发明涉及生物医学技术领域，具体为一种无副作用治疗退行性骨关节病的注射剂及其制备方法。
背景技术
退行性骨关节病又称骨关节炎、退行性关节炎、老年性关节炎、肥大性关节炎，它是一种退行性病变，系由于增龄、肥胖、劳损、创伤、关节先天性异常、关节畸形等诸多因素引起的关节软骨退化损伤、关节边缘和软骨下骨反应性增生。本病多见于中老年人群，好发于负重关节及活动量较多的关节(如，颈椎、腰椎、膝关节、髋关节等)。过度负重或使用这些关节，均可促进退行性变化的发生。临床表现为缓慢发展的关节疼痛、压痛、僵硬、关节肿胀、活动受限和关节畸形等，退行性骨关节病已经严重影响中老年人的身心健康，但是传统的治疗退行性骨关节病的注射剂普遍存在治疗效果差，使用者排斥反应较强，副作用大的缺陷；为此，提出一种无副作用治疗退行性骨关节病的注射剂及其制备方法很有必要。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种无副作用治疗退行性骨关节病的注射剂及其制备方法，以解决背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种无副作用治疗退行性骨关节病的注射剂，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液间充质干细胞22-28％、人血白蛋白6.8-7.6％、钙元素5.25-6.45％、聚丙烯酸3.6-4.3％、过氧化氢二异丙苯2.8-4.5％、聚酯聚合物2.1-2.9％、聚丙烯酰胺1.8-2.2％、壳聚糖2.33-2.87％、石油醚1.24-2.24％、精氨酸1.5-2.2％、赖氨酸1.1-1.7％、胶原蛋白0.8-1.3％、溶媒4.8-6.3％、去离子水为余量。
优选的，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液间充质干细胞22％、人血白蛋白6.8％、钙元素5.25％、聚丙烯酸3.6％、过氧化氢二异丙苯2.8％、聚酯聚合物2.1％、聚丙烯酰胺1.8％、壳聚糖2.33％、石油醚1.24％、精氨酸1.5％、赖氨酸1.1％、胶原蛋白0.8％、溶媒4.8％、去离子水为余量。
优选的，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液间充质干细胞24％、人血白蛋白7.2％、钙元素5.69％、聚丙烯酸3.8％、过氧化氢二异丙苯3％、聚酯聚合物2.4％、聚丙烯酰胺1.9％、壳聚糖2.55％、石油醚1.62％、精氨酸1.8％、赖氨酸1.4％、胶原蛋白0.9％、溶媒5.2％、去离子水为余量。
优选的，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液间充质干细胞26％、人血白蛋白7.4％、钙元素6.12％、聚丙烯酸4.1％、过氧化氢二异丙苯4.3％、聚酯聚合物2.65％、聚丙烯酰胺2.1％、壳聚糖2.74％、石油醚1.89％、精氨酸2.1％、赖氨酸1.6％、胶原蛋白1.1％、溶媒5.8％、去离子水为余量。
优选的，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液间充质干细胞28％、人血白蛋白7.6％、钙元素6.45％、聚丙烯酸4.3％、过氧化氢二异丙苯4.5％、聚酯聚合物2.9％、聚丙烯酰胺2.2％、壳聚糖2.87％、石油醚2.24％、精氨酸2.2％、赖氨酸1.7％、胶原蛋白1.3％、溶媒6.3％、去离子水为余量。
优选的，所述聚酯聚合物由聚乙醇酸、聚已内酯和聚己二酸乙二醇酯组成，且三者的比例为1:1:2；所述溶媒为复方电解质注射液或葡萄糖注射液的任意一种。
一种无副作用治疗退行性骨关节病的注射剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：制备悬浮液：将聚酯聚合物溶于1.5重量份的水中，并混合搅拌均匀，制得聚酯聚合物水溶液；将间充质干细胞悬浮于水溶液中，制得悬浮液；
步骤二：制备聚丙烯酸交联物：配置浓度为6.5-8.5g/ml的普鲁兰水溶液；将聚丙烯酸加入乙醇中形成油相，将普鲁兰水溶液加入到油相中，经剪切机乳化，然后加入过氧化氢二异丙苯，室温搅拌，发生交联反应70-130分钟，静置分层，然后进行干燥，即得聚丙烯酸交联物；
步骤三：制备壳聚糖微囊：取聚丙烯酰胺置于65-75摄氏度水浴中加热并搅拌20-30分钟，然后加入壳聚糖，提高转速为2000-3000转/min，得到混合物，向混合物中加入石油醚，继续搅拌，然后经过过滤器进行过滤，自然干燥后得到粒径为15-30μm的壳聚糖微囊；
步骤四：洗涤：取步骤一中得到的悬浮液使用pbs液洗涤2-5次，然后使用水平离心机在21-25摄氏度的条件下离心30-40分钟；
步骤五：制备混合液a：向洗涤后的悬浮液中依次加入聚丙烯酸交联物和壳聚糖微囊，然后加入溶媒，在25-45摄氏度的条件下搅拌均匀，然后经过离心设备离心10-20分钟，并分离上层液体，得到混合液a；
步骤六：制备混合液b：取人血白蛋白、钙元素、精氨酸、赖氨酸和胶原蛋白放入到高速搅拌设备中，并加入去离子水，控制转速为1200-1600转/min混合搅拌15-30分钟，搅拌时温度为35-45摄氏度，然后投入到离心设备中离心过滤5-10分钟，去除上清液并待其自然冷却，得到混合液b；
步骤七：制得注射剂：将混合液b和混合液a合并在常温条件下搅拌均匀，离心弃上清液，沉淀物用dmem/f12培养基重悬，再次离心弃上清液，最后冻存备用，即可得到注射剂。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明的配方更加的合理，本发明在制备得到大量的人关节液间充质干细胞，将其制备成注射液，注射剂中通过添加人血白蛋白、钙元素多种人体关节所需要元素，还配合添加壳聚糖微囊、精氨酸和赖氨酸，使得关节间充质干细胞得到较好的活性保护，提供细胞所需要的能量，其具有分化潜力大，增殖能力强，免疫原性低的优点，能够很好的抑制免疫排斥反应的发生，治疗效果好，无副作用；而且本发明的制备方法取材方便，设备要求低，具有很好的推广效果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一：
一种无副作用治疗退行性骨关节病的注射剂，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液间充质干细胞22％、人血白蛋白6.8％、钙元素5.25％、聚丙烯酸3.6％、过氧化氢二异丙苯2.8％、聚酯聚合物2.1％、聚丙烯酰胺1.8％、壳聚糖2.33％、石油醚1.24％、精氨酸1.5％、赖氨酸1.1％、胶原蛋白0.8％、溶媒4.8％、去离子水为余量。
进一步的，聚酯聚合物由聚乙醇酸、聚已内酯和聚己二酸乙二醇酯组成，且三者的比例为1:1:2；溶媒为复方电解质注射液。
一种无副作用治疗退行性骨关节病的注射剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：制备悬浮液：将聚酯聚合物溶于1.5重量份的水中，并混合搅拌均匀，制得聚酯聚合物水溶液；将间充质干细胞悬浮于水溶液中，制得悬浮液；
步骤二：制备聚丙烯酸交联物：配置浓度为6.5g/ml的普鲁兰水溶液；将聚丙烯酸加入乙醇中形成油相，将普鲁兰水溶液加入到油相中，经剪切机乳化，然后加入过氧化氢二异丙苯，室温搅拌，发生交联反应70分钟，静置分层，然后进行干燥，即得聚丙烯酸交联物；
步骤三：制备壳聚糖微囊：取聚丙烯酰胺置于65摄氏度水浴中加热并搅拌20分钟，然后加入壳聚糖，提高转速为2000转/min，得到混合物，向混合物中加入石油醚，继续搅拌，然后经过过滤器进行过滤，自然干燥后得到粒径为15μm的壳聚糖微囊；
步骤四：洗涤：取步骤一中得到的悬浮液使用pbs液洗涤2次，然后使用水平离心机在21摄氏度的条件下离心30分钟；
步骤五：制备混合液a：向洗涤后的悬浮液中依次加入聚丙烯酸交联物和壳聚糖微囊，然后加入溶媒，在25摄氏度的条件下搅拌均匀，然后经过离心设备离心10分钟，并分离上层液体，得到混合液a；
步骤六：制备混合液b：取人血白蛋白、钙元素、精氨酸、赖氨酸和胶原蛋白放入到高速搅拌设备中，并加入去离子水，控制转速为1200转/min混合搅拌15分钟，搅拌时温度为35摄氏度，然后投入到离心设备中离心过滤5分钟，去除上清液并待其自然冷却，得到混合液b；
步骤七：制得注射剂：将混合液b和混合液a合并在常温条件下搅拌均匀，离心弃上清液，沉淀物用dmem/f12培养基重悬，再次离心弃上清液，最后冻存备用，即可得到注射剂。
实施例二：
一种无副作用治疗退行性骨关节病的注射剂，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液间充质干细胞24％、人血白蛋白7.2％、钙元素5.69％、聚丙烯酸3.8％、过氧化氢二异丙苯3％、聚酯聚合物2.4％、聚丙烯酰胺1.9％、壳聚糖2.55％、石油醚1.62％、精氨酸1.8％、赖氨酸1.4％、胶原蛋白0.9％、溶媒5.2％、去离子水为余量。
进一步的，聚酯聚合物由聚乙醇酸、聚已内酯和聚己二酸乙二醇酯组成，且三者的比例为1:1:2；溶媒为葡萄糖注射液。
一种无副作用治疗退行性骨关节病的注射剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：制备悬浮液：将聚酯聚合物溶于1.5重量份的水中，并混合搅拌均匀，制得聚酯聚合物水溶液；将间充质干细胞悬浮于水溶液中，制得悬浮液；
步骤二：制备聚丙烯酸交联物：配置浓度为7.5g/ml的普鲁兰水溶液；将聚丙烯酸加入乙醇中形成油相，将普鲁兰水溶液加入到油相中，经剪切机乳化，然后加入过氧化氢二异丙苯，室温搅拌，发生交联反应90分钟，静置分层，然后进行干燥，即得聚丙烯酸交联物；
步骤三：制备壳聚糖微囊：取聚丙烯酰胺置于68摄氏度水浴中加热并搅拌24分钟，然后加入壳聚糖，提高转速为2300转/min，得到混合物，向混合物中加入石油醚，继续搅拌，然后经过过滤器进行过滤，自然干燥后得到粒径为23μm的壳聚糖微囊；
步骤四：洗涤：取步骤一中得到的悬浮液使用pbs液洗涤3次，然后使用水平离心机在22摄氏度的条件下离心34分钟；
步骤五：制备混合液a：向洗涤后的悬浮液中依次加入聚丙烯酸交联物和壳聚糖微囊，然后加入溶媒，在35摄氏度的条件下搅拌均匀，然后经过离心设备离心12分钟，并分离上层液体，得到混合液a；
步骤六：制备混合液b：取人血白蛋白、钙元素、精氨酸、赖氨酸和胶原蛋白放入到高速搅拌设备中，并加入去离子水，控制转速为1300转/min混合搅拌20分钟，搅拌时温度为37摄氏度，然后投入到离心设备中离心过滤7分钟，去除上清液并待其自然冷却，得到混合液b；
步骤七：制得注射剂：将混合液b和混合液a合并在常温条件下搅拌均匀，离心弃上清液，沉淀物用dmem/f12培养基重悬，再次离心弃上清液，最后冻存备用，即可得到注射剂。
实施例三：
一种无副作用治疗退行性骨关节病的注射剂，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液间充质干细胞26％、人血白蛋白7.4％、钙元素6.12％、聚丙烯酸4.1％、过氧化氢二异丙苯4.3％、聚酯聚合物2.65％、聚丙烯酰胺2.1％、壳聚糖2.74％、石油醚1.89％、精氨酸2.1％、赖氨酸1.6％、胶原蛋白1.1％、溶媒5.8％、去离子水为余量。
进一步的，聚酯聚合物由聚乙醇酸、聚已内酯和聚己二酸乙二醇酯组成，且三者的比例为1:1:2；溶媒为复方电解质注射液。
一种无副作用治疗退行性骨关节病的注射剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：制备悬浮液：将聚酯聚合物溶于1.5重量份的水中，并混合搅拌均匀，制得聚酯聚合物水溶液；将间充质干细胞悬浮于水溶液中，制得悬浮液；
步骤二：制备聚丙烯酸交联物：配置浓度为8g/ml的普鲁兰水溶液；将聚丙烯酸加入乙醇中形成油相，将普鲁兰水溶液加入到油相中，经剪切机乳化，然后加入过氧化氢二异丙苯，室温搅拌，发生交联反应110分钟，静置分层，然后进行干燥，即得聚丙烯酸交联物；
步骤三：制备壳聚糖微囊：取聚丙烯酰胺置于72摄氏度水浴中加热并搅拌27分钟，然后加入壳聚糖，提高转速为2700转/min，得到混合物，向混合物中加入石油醚，继续搅拌，然后经过过滤器进行过滤，自然干燥后得到粒径为25μm的壳聚糖微囊；
步骤四：洗涤：取步骤一中得到的悬浮液使用pbs液洗涤4次，然后使用水平离心机在24摄氏度的条件下离心37分钟；
步骤五：制备混合液a：向洗涤后的悬浮液中依次加入聚丙烯酸交联物和壳聚糖微囊，然后加入溶媒，在40摄氏度的条件下搅拌均匀，然后经过离心设备离心17分钟，并分离上层液体，得到混合液a；
步骤六：制备混合液b：取人血白蛋白、钙元素、精氨酸、赖氨酸和胶原蛋白放入到高速搅拌设备中，并加入去离子水，控制转速为1500转/min混合搅拌25分钟，搅拌时温度为42摄氏度，然后投入到离心设备中离心过滤8分钟，去除上清液并待其自然冷却，得到混合液b；
步骤七：制得注射剂：将混合液b和混合液a合并在常温条件下搅拌均匀，离心弃上清液，沉淀物用dmem/f12培养基重悬，再次离心弃上清液，最后冻存备用，即可得到注射剂。
实施例四：
一种无副作用治疗退行性骨关节病的注射剂，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液间充质干细胞28％、人血白蛋白7.6％、钙元素6.45％、聚丙烯酸4.3％、过氧化氢二异丙苯4.5％、聚酯聚合物2.9％、聚丙烯酰胺2.2％、壳聚糖2.87％、石油醚2.24％、精氨酸2.2％、赖氨酸1.7％、胶原蛋白1.3％、溶媒6.3％、去离子水为余量。
进一步的，聚酯聚合物由聚乙醇酸、聚已内酯和聚己二酸乙二醇酯组成，且三者的比例为1:1:2；溶媒为葡萄糖注射液。
一种无副作用治疗退行性骨关节病的注射剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：制备悬浮液：将聚酯聚合物溶于1.5重量份的水中，并混合搅拌均匀，制得聚酯聚合物水溶液；将间充质干细胞悬浮于水溶液中，制得悬浮液；
步骤二：制备聚丙烯酸交联物：配置浓度为8.5g/ml的普鲁兰水溶液；将聚丙烯酸加入乙醇中形成油相，将普鲁兰水溶液加入到油相中，经剪切机乳化，然后加入过氧化氢二异丙苯，室温搅拌，发生交联反应130分钟，静置分层，然后进行干燥，即得聚丙烯酸交联物；
步骤三：制备壳聚糖微囊：取聚丙烯酰胺置于75摄氏度水浴中加热并搅拌30分钟，然后加入壳聚糖，提高转速为3000转/min，得到混合物，向混合物中加入石油醚，继续搅拌，然后经过过滤器进行过滤，自然干燥后得到粒径为30μm的壳聚糖微囊；
步骤四：洗涤：取步骤一中得到的悬浮液使用pbs液洗涤5次，然后使用水平离心机在25摄氏度的条件下离心40分钟；
步骤五：制备混合液a：向洗涤后的悬浮液中依次加入聚丙烯酸交联物和壳聚糖微囊，然后加入溶媒，在45摄氏度的条件下搅拌均匀，然后经过离心设备离心20分钟，并分离上层液体，得到混合液a；
步骤六：制备混合液b：取人血白蛋白、钙元素、精氨酸、赖氨酸和胶原蛋白放入到高速搅拌设备中，并加入去离子水，控制转速为1600转/min混合搅拌30分钟，搅拌时温度为45摄氏度，然后投入到离心设备中离心过滤10分钟，去除上清液并待其自然冷却，得到混合液b；
步骤七：制得注射剂：将混合液b和混合液a合并在常温条件下搅拌均匀，离心弃上清液，沉淀物用dmem/f12培养基重悬，再次离心弃上清液，最后冻存备用，即可得到注射剂。
通过以上四组实施例均可制得注射剂，并且本发明的配方更加的合理，本发明在制备得到大量的人关节液间充质干细胞，将其制备成注射液，注射剂中通过添加人血白蛋白、钙元素多种人体关节所需要元素，还配合添加壳聚糖微囊、精氨酸和赖氨酸，使得关节间充质干细胞得到较好的活性保护，提供细胞所需要的能量，其具有分化潜力大，增殖能力强，免疫原性低的优点，能够很好的抑制免疫排斥反应的发生，治疗效果好，无副作用；而且本发明的制备方法取材方便，设备要求低，具有很好的推广效果。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。