本发明属于生物制剂领域，涉及一种用于降低家畜运输过程中产生应激反应的生物制剂及其制备方法。
背景技术：
应激反应是指机体在受到体内外各种强烈因素(即应激原)刺激时，所出现的交感神经兴奋和垂体——肾上腺皮质分泌增多为主的一系列神经内分泌反应，以及由此而引起的各种机能和代谢的改变。任何对动物机体或情绪的刺激，只要达到一定的强度，都可以成为应激原。当这种应激反应真正威胁到动物的健康时，动物就会觉得不适。根据动物是否感到不适这一标准可将应激反应分为良性应激和不良性应两类。良性应激：是指使动物感到愉快的应激，是对动物的有益应激。如猪有玩耍时的奔跑行为和交配行为。恶性应激：是指那些危及动物福利和健康的应激，常使动物感到无聊、压抑和紧张。恶性应激是引发一种或多种疾病发生的原因。例如，母猪采食量下降，临产期、围产期死亡及仔猪死亡，母猪发情率降低，返情率提高20％～30％，窝产仔数、仔猪初生重、成活率也受到不同程度的影响，经济损失达到20％以上。在现代畜牧产业中，家畜的繁育和育肥养殖往往不是在同一个地区完成的，家畜在转运的过程中很可能发生运输应激反应，在装卸和运输过程中，许多超强刺激同时作用于动物，会降低动物的防御机制导致发烧，如果动物的呼吸频率超过80次/分，体温超过39.70c，动物体重减轻，长期不进食、目光呆滞的反应，就表明出现了严重的运输应激。长距离运输时容易造成脱水、失重、甚至死亡，当路况较差、密度过大、拥挤、通风不良、温度过高时，应激更严重。这些严重的应激反应不仅使牲畜遭受了身体上的痛苦，还给畜牧业带来了严重的经济损失。技术实现要素：本发明的目的在于克服现有技术中的不足而发明的一种用于降低家畜运输过程中产生应激反应的生物制剂及其制备方法。本发明是这样实现的：一种用于运输家畜抗应激的生物制剂,其特征在于，其原料是按照以下组份组成：褪黑素环糊精包合物3.8-6.0g、吐温805-10ml、酒精474-674ml、黄芪多糖40.5-60.5g、银黄可溶性粉40.5-60.5g、茶多酚25-50g、绿原酸12.5-20.5g、注射用水、稀盐酸。上述的用于运输家畜抗应激的生物制剂，其最佳的配比是按照以下组份组成：褪黑素环糊精包合物5g、吐温807ml、酒精550ml、黄芪多糖50g，黄芪多糖中黄芪多糖含量≥65％、银黄可溶性粉50g，银黄可溶性粉中黄芩苷≥0.1％，绿原酸≥0.1％、茶多酚50g，其中茶多酚中多酚≥81.6％，儿茶素≥76.1％、绿原酸16g，绿原酸中绿原酸≥65.0％、注射用水、稀盐酸。其中黄芪多糖中黄芪多糖的检测方法为苯酚-硫酸法，银黄可溶性粉中黄芩苷和绿原酸的检测方法：hplc，茶多酚中多酚的检测方法为uv、茶多酚中儿茶素的检测方法为hplc，绿原酸中绿原酸的检测方法为hplc。一种制备用于运输家畜抗应激的生物制剂的制备方法，包括以下步骤：步骤(1)、用容器量取酒精，在酒精中加入吐温80搅拌使两者混合均匀。步骤(2)、在步骤(1)所得的溶液中依次加入褪黑素环糊精包合物、黄芪多糖、银黄可溶性粉、茶多酚和绿原酸，搅拌使其完全溶解。步骤(3)、在步骤(2)所得溶液中加入注射用水，使得溶液的总体积为1000ml，用稀盐酸调节溶液的ph至4.0，然后将溶液混合均匀，0-4℃条件下冷藏24h，滤过，灌封，110℃灭菌消毒20分钟，既得用于运输家畜抗应激的生物制剂。注射用水的添加量根据步骤(2)所得溶液的体积而定，在步骤(3)中会添加注射用水，直至溶液得体积达到1000ml；稀盐酸作为酸度调节剂使用，在溶液中加入稀盐酸的体积根据溶液的酸度而定。上述用于运输家畜抗应激的生物制剂的制备方法，其特征在于：所述褪黑素环糊精包合物包括以下制备步骤：步骤1)称取褪黑素和2-羟丙基-β-环糊精，两者的物质的量比例为1:1，将两种反应物放置于同一个微波反应管中，再加入等比例的乙醇和水；步骤2)把微波反应管放入微波反应器中，设置的反应条件为：一分钟内升温至40℃，保持此温度一分钟；然后一分钟内升温至60℃，保持此温度三分钟，微波管内的压力不大于20个大气压；步骤3)降温到40℃后，从微波反应器中取出微波管，在常压下将微波反应管内的物质进行过滤，保留滤液，滤液在旋蒸仪中旋蒸除去溶剂，得到白色粉末状产物，即为褪黑素环糊精包合物。本发明具有以下优点：本发明中含有褪黑素环糊精包合物、黄芪多糖、银黄可溶性粉、茶多酚和绿原酸，它们具有镇痛、催眠、免疫调节、抗氧化、抗炎、抗病毒的作用，从而发挥对运输家畜抗应激的功效。灌服本制剂后,血液中褪黑素迅速提高,褪黑素环糊精包合物且有较好的缓释性能,可以从体液和细胞免疫方面提高家畜机体免疫力,还具有催眠和抗氧化等作用；黄芪多糖具有免疫调节作用、抗应激和抗肿瘤作用；银黄可溶性粉具有清热疏风、利咽解毒，对呼吸道等疾病有很好的抑制作用；茶多酚具有较强的抗氧化能力和清除自由基的能力，具有抗菌、抗衰老和抗癌等生物活性；绿原酸具有抗炎活性、抗氧化活性、抗病毒活性、抗肿瘤活性和神经保护效应。褪黑素环糊精包合物、黄芪多糖、银黄可溶性粉、茶多酚和绿原酸配伍使用，起到先后协同和功能协同的功效。5种配合使用具有叠加效应。在降低了牲畜对外界刺激的敏感程度的同时，增强了牲畜免疫系统的抵抗力，从而大大降低了牲畜在运输过程中的应激反应，大大降低了牲畜运输过程中的发病率、死亡率和发病经济损失。其中褪黑素环糊精包合物:褪黑素的水溶度0.66％-0.88％，褪黑素环糊精包合物的水溶度达6.6％-8.8％，增强了水溶性，具备了缓释性和稳定性；褪黑素环糊精包合物具有催眠、免疫调节作用、调节繁殖周期和生殖活动、抗氧化作用、抗肿瘤作用和抗衰老作用等。黄芪多糖：具有免疫调节作用、抗应激和抗肿瘤作用。银黄可溶性粉：清热疏风、利咽解毒，对呼吸道等疾病有很好的抑制作用。茶多酚：具有较强的抗氧化能力和清除自由基的能力，具有抗菌、抗衰老和抗癌等生物活性。绿原酸：具有抗炎活性、抗氧化活性、抗病毒活性、抗肿瘤活性和神经保护效应。吐温80：作为溶液的分散剂使用。具体实施方式实施例1：一种用于运输家畜抗应激的生物制剂,其原料是按照以下组份组成：褪黑素环糊精包合物3.8g、吐温805ml、酒精474ml、黄芪多糖40.5g、银黄可溶性粉40.5g、茶多酚25g、绿原酸12.5g、注射用水、稀盐酸上述生物制剂的制备方法，包括以下步骤：步骤(1)、用容器量取酒精474ml,该处的酒精为溶剂，在酒精中加入吐温805ml，然后搅拌使两者混合均匀。步骤(2)、在步骤(1)所得的溶液中依次加入褪黑素环糊精包合物3.8g、黄芪多糖40.5g、银黄可溶性粉40.5g、茶多酚25g和绿原酸12.5g，充分搅拌使上述物质完全溶解。步骤(3)、在步骤(2)所得溶液中加入注射用水定容至1000ml，再用稀盐酸调节溶液的ph至4.0，然后将溶液混合均匀，0-4℃条件下冷藏24h，用干燥垂溶玻璃漏斗过滤溶液，将过滤后的溶液灌入干燥安培瓶中,熔封，用110℃灭菌消毒20分钟，既得最终产品。该液体即为本发明所得溶剂。其中上述生物制剂的制备方法，所述褪黑素环糊精包合物包括以下制备步骤：步骤1)称取褪黑素93mg和2-羟丙基-β-环糊精0.617g，两者的物质的量比例为1:1，将两种反应物放置于一个30ml微波反应管中，再加入等比例的乙醇和水，各5ml。步骤2)把微波反应管放入微波反应器中，设置的反应条件为：一分钟内升温至40℃，保持此温度一分钟；然后一分钟内升温至60℃，保持此温度三分钟，微波管内的压力为20个大气压。步骤3)降温到40℃后，从微波反应器中取出微波管，在常压下将微波反应管内的物质进行过滤，保留滤液，滤液在旋蒸仪中旋蒸除去溶剂，得到白色粉末状产物0.5g，即为褪黑素环糊精包合物。褪黑素环糊精包合物在作为本发明中的配料时，按照比例添加即可。实施例2：一种用于运输家畜抗应激的生物制剂,其原料是按照以下组份组成：褪黑素环糊精包合物6.0g、吐温8010ml、酒精674ml、黄芪多糖60.5g、银黄可溶性粉60.5g、茶多酚50g、绿原酸20.5g、注射用水、稀盐酸。实施例3：一种用于运输家畜抗应激的生物制剂，其原料是按照以下组份组成：褪黑素环糊精包合物4g、吐温807ml、酒精520ml、黄芪多糖50.5g、银黄可溶性粉50.5g、茶多酚35g、绿原酸18.5g、注射用水、稀盐酸。实施例4：一种用于运输家畜抗应激的生物制剂，其原料是按照以下组份组成：褪黑素环糊精包合物5g、吐温807ml、酒精550ml、黄芪多糖50g、银黄可溶性粉50g、茶多酚50g、绿原酸16g、注射用水、稀盐酸。实施例5：一种用于运输家畜抗应激的生物制剂，其原料是按照以下组份组成：褪黑素环糊精包合物5.5g、吐温808ml、酒精600ml、黄芪多糖55g、银黄可溶性粉58g、茶多酚47g、绿原酸19g、注射用水、稀盐酸。实施例5：运输家畜抗应激生物活性制剂试验研究1.1试验动物与运输方式在吉林省长春市某牲畜交易市场挑选36头牛分两批运至河南省濮阳市某肉牛养殖场。试验牛为从市场上挑选的体重250kg左右、年龄2岁左右的西门达尔和当地品种的杂交健康公牛，在当地暂养3天，观察无明显异常后购买，运输前分组作抗应激处理。运输车辆为单层货车，长9.5m，宽2.8m，采用防寒专用帆布遮挡，运输时间为30h。两批牛在运输途中均不提供饲料，但在服务区提供3次饮水，水中补充电解多维，饮水量约为12kg/头。1.2抗应激处理方法启运前1h试验组皮下注射本发明的生物活性制剂4ml，启运前1h对照组皮下注射生理盐水4ml。1.3体温体重测定体温：试验牛从起运前3天到起运后4天连续测量体温，1次/天，上午9点开始测量体温；体重：电子地磅称重，试验牛起运前1天及运达后1天称重。1.4发病与治疗情况观察发病症状主要表现为体温升高(39.5～41.5℃)，咳嗽、流鼻汁,继发拉稀,少数出现流泪、有眼分泌物和跛行，运达后对发病牛进行了及时治疗,均未再出现死亡。疾病损失计算如下：基础药物治疗费用(元/天)、发病牛数量(头)、死亡牛原价(元)、死淘牛数量(头)、死淘牛损失(元)、聘请兽医工资均摊(元)、总治疗费用(元)，总损失费用等于各部分之和。2结果与分析2.1试验牛体温体重测定结果运输前后牛体温平均值比较，对照组体温(运输前38.68±0.53℃，运输后39.17±0.75℃)和抗应激处理组体温(运输前38.74±0.87℃，运输后39.41±0.42℃)均有轻度升高但差异不显著(p>0.05)。牛运输前后的体重测量结果见下表1，表1牛运输前后的体重测量结果组别运输前1天运达后1天对照组239.50±15.21aa225.00±11.21bc抗应激处理组240.19±13.89aa230.32±10.09bb注：肩标不同小写字母表示差异显著(p<0.05)，肩标不同大写字母表示差异极显著(p<0.01)，肩标相同字母表示差异不显著。从表1可以看出，运输前后抗应激处理组和对照组体重极显著下降(p＜0.01)，运输前两组体重差异不显著(p>0.05)，运输后对照组体重损失比试验组大，差异显著(p＜0.05)。2.2试验牛发病率与死亡率的比较抗应激处理组和对照组运输肉牛的总发病率分别为16.67％(3/18)和61.11％(11/18)，抗应激处理组死亡率为0，对照组死亡率为5.56％(1/18),表明皮下注射本发明的生物活性制剂抗应激效果好。2.3试验牛的发病损失费用比较运输后牛只发病经济损失比较见下表2表2运输后牛只发病经济损失比较从表2看见，对照组的总经济损失折合人民币为13231元，抗应激处理组总经济损失折合人民币为954元，对照组经济损失是抗应激处理组的13.9倍。36头试验牛分抗应激处理组和对照组，抗应激处理组在运输前1h皮下注射本发明的生物活性制剂4ml，对照组在运输前1h皮下注射生理盐水4ml。分别对试验牛起运前及运达后体温、体重变化、发病率、死亡率和发病经济损失进行比较。结果显示，起运前及运达后试验牛体温未见明显差异；抗应激处理组牛发病率、死亡率显著低于对照组(p<0.01)；对照组试验牛治疗成本为抗应激处理组治疗成本的13.9倍。结果表明，运输前进行抗应激处理有利于降低肉牛运输应激。当前第1页12