本发明涉及一种贯众多酚的制备方法，尤其是涉及从植物贯众提取分离贯众多酚的制备方法。
背景技术
贯众(cyrtomiumfortuneij.sm.)为鳞毛蕨科(dryopteridaceae)贯众属(cyrtomium)多年生草本植物，分布广泛，在陕西、山西、山东、甘肃、河南、四川、云南、浙江、安徽等19个省份均有分布，资源蕴藏量丰富。贯众羽片10-20对，镰刀状披针形，长6-10cm，基部宽2-3cm，适宜生长在温暖湿润，阳光充足，疏松排水性好的钙质土壤中，在海拔2400米以下的空旷地、石灰岩缝、林下、路边、墙缝或农耕地、溪边等处多有生长。贯众根状茎富含多种有效成分，药用价值很高。贯众根状茎含有多酚、挥发油、黄酮、生物碱、甾萜类、糖类、氨基酸、鞣质等多类化学成分。郑运霞应用核磁共振和液质联用(lcms)两种方法从贯众中分离出20种化合物，可归为6类：多酚类11种，萜类2种，生物碱4种，醌类化合物，香豆精，以及环烯醚萜苷类各1种。宋磊等通过贯众乙醇提取液与氢氧化钠、盐酸-镁粉等物质的显色反应判断贯众含有黄酮，异黄酮，黄酮醇。贯众具有抗氧化，清除自由基，抑菌，抗癌，降血压，降血脂，驱虫，清热解毒，凉血祛风，散瘀止痛等功效。
当今社会，由于生活压力增加和生活方式改变，糖尿病患者急速增加，发病率不断攀升，并且逐渐呈现出年轻化的发展趋势，其主要的临床表现和一系列并发症的出现，已经严重影响了人们的正常生活和生命健康。目前，对于糖尿病的防治主要以西药的药物治疗为主，但是西药对糖尿病的治疗往往作用途径单一，难以对其并发症等进行综合的改善，且随着西药治疗的相关毒副作用的出现，人们发现，天然化学成分中的黄酮类、多糖类、多酚类等都具有一定的改善糖尿病相关症状的功效，且不同种类成分之间的联合用药效果更加显著。因此，利用天然化学成分开发有效且毒副作用小的降糖类药物日益成为人们的需要。
研究表明植物贯众中存在对糖尿病治疗非常有益的成分-贯众多酚，但是截止目前并没有一项成熟的技术可以从贯众中有效、高纯度地分离和提取贯众多酚。
技术实现要素：
本发明针对现有技术中存在的问题，旨在提供一种高效、高纯度地从植物贯众中分离提取有效成分贯众多酚的方法。
本发明的贯众多酚的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
a.原材料的前处理：将贯众根状茎清洗，阴干，粉碎，过筛并脱脂处理得到干燥粉末，塑封袋密封保存备用；
b.取步骤a得到的物料，加入乙醇，以超声微波双辅助法提取，得到贯众多酚混合粗提液；
c.步骤b得到的贯众多酚粗提液，旋蒸挥去乙醇，再离心除杂，将贯众多酚提取液倒在培养皿中，冷冻45-50h，待物料完全冻实后，冷冻干燥得到贯众多酚粗提物；
d.加入大孔树脂，进行吸附纯化，得到贯众多酚纯化物。
优选地，所述步骤a中对贯众根状茎进行清洗后自然阴干，粉碎并过65目筛，石油醚脱脂后晾干，用塑封袋保存。
优选地，所述步骤b中提取参数为超声微波时间5min，料液比1:25，乙醇浓度60％。
优选地，所述步骤c中-20℃冷冻48h，待物料完全冻实后，冷冻干燥-4℃。
优选地，所述步骤d中所述大孔树脂是hpd600。
为了提高吸附纯化效率，进一步优选，所述步骤d中所述大孔树脂经过下述前处理：
(1)取大孔树脂，加入95％的乙醇清洗几次，使吸附不饱和的树脂清除掉，然后用95％的乙醇浸泡24h，在浸泡过程中，定时摇匀，弃乙醇和漂浮物，并更换乙醇，然后乙醇清洗至流出液加入蒸馏水无浊色后，用蒸馏水洗至无醇味；
(2)用5％的盐酸浸泡3h，2bv5％的盐酸清洗，蒸馏水洗至中性；
(3)用5％的氢氧化钠浸泡3h，2bv5％的氢氧化钠清洗，蒸馏水洗至中性；
(4)将洗净树脂抽滤，去除表面的水分，待用。
通过本发明的制备方法可以有效、高纯度地分离提取贯众多酚，分离、纯化效果好，可重复性高，稳定性好。同时，该方法操作简单易行，成本较低，洗脱剂为乙醇，无毒易回收。大孔吸附树脂具有成本低，选择性好，吸附承载量大，交换速度快，易再生等优势。
具体实施方式
本发明涉及一种高效、高纯度地从植物贯众中分离提取有效成分贯众多酚的方法。
本发明的贯众多酚的制备方法，包括如下步骤：
a.原材料的前处理：将荚果蕨新鲜材料清洗，阴干，粉碎，过筛并脱脂处理得到干燥粉末，塑封袋密封保存备用；
b.取步骤a得到的物料，加入乙醇，以超声微波双辅助法提取，得到贯众多酚混合粗提液；
c.步骤b得到的贯众多酚粗提液，旋蒸挥去乙醇，再离心除杂，将贯众多酚提取液倒在培养皿中，冷冻45-50h，待物料完全冻实后，冷冻干燥得到贯众多酚粗提物；
d.加入大孔树脂，进行吸附纯化，得到贯众多酚纯化物。
为了更好地分离提取贯众多酚，所述步骤b中提取参数可以进一步优化，具体为：超声微波时间5min，料液比1:25，乙醇浓度60％。
所述步骤c中可以采取特定的冷冻干燥技术，即-20℃冷冻48h，待物料完全冻实后，冷冻干燥-4℃。
所述步骤d中的大孔树脂可以是吸附纯化方面常用的大孔树脂，但优选为hpd600。
下面结合实施例对本发明进行详细的说明。
实施例1
本实施例的贯众多酚的制备方法，包括如下步骤：
a.原材料的前处理：将贯众根状茎清洗，阴干，粉碎并过65目筛，石油醚脱脂后处理得到干燥粉末，塑封袋密封保存备用；
b.取步骤a得到的物料，加入乙醇，以超声微波双辅助法提取，得到贯众多酚混合粗提液；该步骤中，超声微波时间5min，料液比1:25，乙醇浓度60％；
c.步骤b得到的贯众多酚粗提液，旋蒸挥去乙醇，再离心除杂，将贯众多酚提取液倒在培养皿中，-20℃冷冻48h，待物料完全冻实后，冷冻干燥-4℃得到贯众多酚粗提物；
d.加入大孔树脂hpd600，进行吸附纯化，得到贯众多酚纯化物。
所述步骤d中所述大孔树脂经过下述前处理：
(1)取大孔树脂，加入95％的乙醇清洗几次，使吸附不饱和的树脂清除掉，然后用95％的乙醇浸泡24h，在浸泡过程中，定时摇匀，弃乙醇和漂浮物，并更换乙醇，然后乙醇清洗至流出液加入蒸馏水无浊色后，用蒸馏水洗至无醇味；
(2)用5％的盐酸浸泡3h，2bv5％的盐酸清洗，蒸馏水洗至中性；
(3)用5％的氢氧化钠浸泡3h，2bv5％的氢氧化钠清洗，蒸馏水洗至中性；
(4)将洗净树脂抽滤，去除表面的水分，待用。
通过对得到的贯众多酚纯化物进行纯度测试和回收率分析，贯众多酚的纯度高达98.6％，回收率为82.7％。
实施例2
本实施例的贯众多酚的制备方法，包括如下步骤：
a.原材料的前处理：将贯众根状茎清洗，阴干，粉碎并过65目筛，石油醚脱脂后得到干燥粉末，塑封袋密封保存备用；
b.取步骤a得到的物料，加入乙醇，以超声微波双辅助法提取，得到贯众多酚混合粗提液；该步骤中，超声微波时间6min，料液比1:25，乙醇浓度55％；
c.步骤b得到的贯众多酚粗提液，旋蒸挥去乙醇，再离心除杂，将贯众多酚提取液倒在培养皿中，-25℃冷冻40h，待物料完全冻实后，冷冻干燥-4℃得到贯众多酚粗提物；
d.加入大孔树脂hpd600，进行吸附纯化，得到贯众多酚纯化物。
所述步骤d中所述大孔树脂经过下述前处理：
(1)取大孔树脂，加入95％的乙醇清洗几次，使吸附不饱和的树脂清除掉，然后用95％的乙醇浸泡24h，在浸泡过程中，定时摇匀，弃乙醇和漂浮物，并更换乙醇，然后乙醇清洗至流出液加入蒸馏水无浊色后，用蒸馏水洗至无醇味；
(2)用5％的盐酸浸泡3h，2bv5％的盐酸清洗，蒸馏水洗至中性；
(3)用5％的氢氧化钠浸泡3h，2bv5％的氢氧化钠清洗，蒸馏水洗至中性；
(4)将洗净树脂抽滤，去除表面的水分，待用。
通过对得到的贯众多酚纯化物进行纯度测试和回收率分析，贯众多酚的纯度高达97.8％，回收率为80.7％。
实施例3
本实施例的贯众多酚的制备方法，包括如下步骤：
a.原材料的前处理：将贯众根状茎清洗，阴干，粉碎并过65目筛，石油醚脱脂后得到干燥粉末，塑封袋密封保存备用；
b.取步骤a得到的物料，加入乙醇，以超声微波双辅助法提取，得到贯众多酚混合粗提液；该步骤中，超声微波时间5min，料液比1:25，乙醇浓度70％；
c.步骤b得到的贯众多酚粗提液，旋蒸挥去乙醇，再离心除杂，将贯众多酚提取液倒在培养皿中，-20℃冷冻38h，待物料完全冻实后，冷冻干燥-4℃得到贯众多酚粗提物；
d.加入大孔树脂hpd600，进行吸附纯化，得到贯众多酚纯化物。
所述步骤d中所述大孔树脂经过下述前处理：
(1)取大孔树脂，加入95％的乙醇清洗几次，使吸附不饱和的树脂清除掉，然后用95％的乙醇浸泡24h，在浸泡过程中，定时摇匀，弃乙醇和漂浮物，并更换乙醇，然后乙醇清洗至流出液加入蒸馏水无浊色后，用蒸馏水洗至无醇味；
(2)用5％的盐酸浸泡3h，2bv5％的盐酸清洗，蒸馏水洗至中性；
(3)用5％的氢氧化钠浸泡3h，2bv5％的氢氧化钠清洗，蒸馏水洗至中性；
(4)将洗净树脂抽滤，去除表面的水分，待用。
通过对得到的贯众多酚纯化物进行纯度测试和回收率分析，贯众多酚的纯度高达97.1％，回收率为81.2％。
综上所述，本发明的贯众多酚制备方法分离、纯化效果好，得到的贯众多酚含量均高达90％以上，回收率也达到80％以上，特别是实施例1的制备方法，分离和纯化效果最佳。
通过本发明的制备方法可以有效、高纯度地分离提取贯众多酚，分离、纯化效果好，可重复性高，稳定性好。同时，该方法操作简单易行，成本较低，洗脱剂为乙醇，无毒易回收。大孔吸附树脂具有成本低，选择性好，吸附承载量大，交换速度快，易再生等优势。