本发明涉及保健品制备技术领域，具体涉及一种具有免疫调节功能的多糖组合物及其制备方法。
背景技术：
免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物（病毒、细菌等），处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。
免疫力低下使得机体的防御能力减弱，从而不能正常发挥保护作用，在此情况下，极易导致细菌、病毒、真菌等感染，因此免疫力低下最直接的表现就是容易生病。近年来，随着人们生活节奏的加快，人们的生活、工作方式和环境发生了巨大的改变，生活压力逐渐增大，从而使得亚健康状态的人群所占的比例日趋增高。亚健康状态最主要的特征就是免疫功能的失调，例如免疫t细胞、b细胞的比例失衡，以及固有免疫功能减低或者失调等，从而导致人体抗病能力明显下降，通过研究表明，免疫功能失调与慢性炎症、肿瘤、自身免疫性疾病等疾病密切相关，严重增加了疾病的易感性，危害人类健康，同时给家庭和社会发展带来沉重的经济负担。
多个糖原单位组成的糖称为多糖，在自然界中储量丰富，广泛分布于自然界的多种生物体中，主要分为植物多糖、动物多糖以及微生物多糖3类。只有营养作用的多糖称为营养多糖，他们只有营养作用但没有药效作用，化学结构是直线型的，称为α型多糖；还有一种是具有药理活性，在人体内发挥药效作用的多糖，我们称为活性多糖，这种多糖呈现三维螺旋装立体结构，我们称为β型多糖。活性多糖最重要的作用就是免疫调节作用，而活性多糖不仅能提升过低的免疫系统功能，压低亢进的免疫功能，还能平衡紊乱的免疫系统功能；能促进细胞因子的生成，激活mφ、nk细胞和t、b淋巴细胞；激活补体系统；促进抗体产生等。多糖通过与淋巴细胞表面cr3受体结合而发挥作用，影响细胞内ca2+、camp、cgmp、no和pge2等第二信使的决定，并可促进细胞因子基因的表达。它药理活性强，来源广泛，细胞毒性低，安全性强，毒副作用较小，已引起医药界的广泛关注，并成为当今生命科学研究的热点之一。现已开发了多种以多糖为主体的保健中药或保健食品，这对人们的生活健康发挥了重要的作用。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种具有免疫调节功能的多糖组合物，综合多种多糖的作用发挥其协同功能，从而使之具有比单糖更全面的免疫调节作用。
技术方案：本发明公开一种具有免疫调节功能的多糖组合物，该多糖组合物包含：黄芪多糖、云芝多糖、银杏叶多糖、肉苁蓉多糖、丹参多糖、山药多糖、刺五加多糖。
本发明所述的具有免疫调节功能的多糖组合物中，所述的多糖组合物按质量份计包含：黄芪多糖15~30份、云芝多糖12~25份、银杏叶多糖15~22份、肉苁蓉多糖10~20份、丹参多糖8~16份、山药多糖10~18份、刺五加多糖16~32份。
本发明所述的具有免疫调节功能的多糖组合物中，所述的所述的多糖组合物按质量份计包含：黄芪多糖23份、云芝多糖18份、银杏叶多糖16份、肉苁蓉多糖15份、丹参多糖14份、山药多糖17份、刺五加多糖28份。
本发明所述的具有免疫调节功能的多糖组合物的制备方法，包括如下步骤：
（1）提取
将步骤（3）得到的醇沉物进行减压干燥，得到各组分多糖提取物。
向其中加入5~10倍的乙酸乙酯进行冷凝回流2~4次，每次1~2h，通过过滤去除有机溶剂，保留药渣；向药渣中加入10~20倍的蒸馏水进行煎煮1~4次，每次2~4h，通过过滤除去药渣，合并煎煮液。
（2）脱色
向蒸煮液中加入4~8g活性炭，在室温下搅拌5~8h，离心除去活性炭，得到脱色液，通过真空浓缩将脱色液进行浓缩，得到浓缩液。
（3）醇沉
向步骤（2）制备的浓缩液中加入5~10倍的乙醇进行沉淀，将溶液静置过夜，通过抽滤去除乙醇溶液，再用乙醇溶液洗涤2~3次，得到醇沉物。
（4）干燥
将步骤（3）得到的醇沉物进行减压干燥，得到多糖提取物。
本发明所述的具有免疫调节功能的多糖组合物中的制备方法中，所述的步骤（2）中醇沉所用的乙醇溶液的终浓度为60~85%。
本发明所述的具有免疫调节功能的多糖组合物在制备提高免疫力的药物和/或食品中的应用。
有益效果：本发明提供了一种具有免疫调节功能的多糖组合物及其制备方法，该多糖组合物包含：黄芪多糖、云芝多糖、银杏叶多糖、肉苁蓉多糖、丹参多糖、山药多糖、刺五加多糖，经过不同配比充分发挥其协同作用。经过动物实验得出，本发明制备的多糖组合物可以促进免疫细胞的增殖，增强巨噬细胞的吞噬功能，并且具有显著的抑制迟发型超敏反应的作用。多糖组合物制备工艺简单，所需设备常规，可以进行大规模的工业化生产，因此在制备提高免疫力的药物或食品方面将具有重大的应用前景。
具体实施方式
实施例1
一种具有免疫调节功能的多糖组合物，所述的具有免疫调节功能的多糖组合物的制备方法，包括如下步骤：
（1）提取
分别提取各组分多糖，按照质量份配比称取各原料，将各原料分别进行粉碎，向其中加入8倍的乙酸乙酯进行冷凝回流3次，每次1.5h，通过过滤去除有机溶剂，保留药渣；向药渣中加入15倍的蒸馏水进行煎煮2次，每次3h，通过过滤除去药渣，合并煎煮液。
（3）脱色
向蒸煮液中加入6g活性炭，在室温下搅拌6h，离心除去活性炭，得到脱色液，通过真空浓缩将脱色液进行浓缩，得到浓缩液。
（2）醇沉
向步骤（2）制备的浓缩液中加入8倍的乙醇进行沉淀，乙醇终浓度为75%，将溶液静置过夜，通过抽滤去除乙醇溶液，再用乙醇溶液洗涤3次，得到醇沉物。
（4）干燥
将步骤（3）得到的醇沉物进行减压干燥，得到各组分多糖提取物。
具有免疫调节功能的多糖组合物的颗粒剂制备：
按质量份称取如下组分：黄芪多糖23g、云芝多糖18g、银杏叶多糖16g、肉苁蓉多糖15g、丹参多糖14g、山药多糖17g、刺五加多糖28g、淀粉50g、羧甲淀粉钠10g，将其进行混匀，过50目筛后，再向其中加入95%乙醇溶液将固体混合物制备成软材，挤压过20~25目筛制粒，50℃干燥2~4h，过20目整粒，得到多糖组合物的颗粒剂。
实施例2
一种具有免疫调节功能的多糖组合物，所述的具有免疫调节功能的多糖组合物的制备方法，包括如下步骤：
（1）提取
分别提取各组分多糖，按照质量份配比称取各原料，将各原料分别进行粉碎，向其中加入5倍的乙酸乙酯进行冷凝回流2次，每次1h，通过过滤去除有机溶剂，保留药渣；向药渣中加入10倍的蒸馏水进行煎煮1次，每次2h，通过过滤除去药渣，合并煎煮液。
（3）脱色
向蒸煮液中加入4g活性炭，在室温下搅拌5h，离心除去活性炭，得到脱色液，通过真空浓缩将脱色液进行浓缩，得到浓缩液,。
（2）醇沉
向步骤（2）制备的浓缩液中加入5倍的乙醇进行沉淀，乙醇终浓度为70%，将溶液静置过夜，通过抽滤去除乙醇溶液，再用乙醇溶液洗涤2次，得到醇沉物。
（4）干燥
将步骤（3）得到的醇沉物进行减压干燥，得到各组分多糖提取物。
具有免疫调节功能的多糖组合物的口服液制备：
按质量份称取如下组分：黄芪多糖16g、云芝多糖13g、银杏叶多糖18g、肉苁蓉多糖15g、丹参多糖12g、山药多糖16g、刺五加多糖18，向其中加入8g苯甲酸钠，加入注射用水在搅拌的状态下加热溶解，冷却至室温后，用0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装封口，100℃灭菌30min，即得到糖组合物的口服液。
实施例3
一种具有免疫调节功能的多糖组合物，所述的具有免疫调节功能的多糖组合物的制备方法，包括如下步骤：
（1）提取
分别提取各组分多糖，按照质量份配比称取各原料，将各原料分别进行粉碎，向其中加入10倍的乙酸乙酯进行冷凝回流4次，每次2h，通过过滤去除有机溶剂，保留药渣；向药渣中加入16倍的蒸馏水进行煎煮4次，每次4h，通过过滤除去药渣，合并煎煮液。
（3）脱色
向蒸煮液中加入8g活性炭，在室温下搅拌8h，离心除去活性炭，得到脱色液，通过真空浓缩将脱色液进行浓缩，得到浓缩液。
（2）醇沉
向步骤（2）制备的浓缩液中加入10倍的乙醇进行沉淀，乙醇终浓度为80%，将溶液静置过夜，通过抽滤去除乙醇溶液，再用乙醇溶液洗涤3次，得到醇沉物。
（4）干燥
将步骤（3）得到的醇沉物进行减压干燥，得到各组分多糖提取物。
具有免疫调节功能的多糖组合物的冻干粉剂制备：
按质量份称取如下组分：黄芪多糖20g、云芝多糖17g、银杏叶多糖17g、肉苁蓉多糖13g、丹参多糖10g、山药多糖16g、刺五加多糖25g，向其中加入注射用水1l，搅拌均匀后，用0.22μm的微孔滤膜过滤，无菌分装，冻干即得。
实施例4
一种具有免疫调节功能的多糖组合物，所述的具有免疫调节功能的多糖组合物的制备方法，包括如下步骤：
（1）提取
分别提取各组分多糖，按照质量份配比称取各原料，将各原料分别进行粉碎，向其中加入7倍的乙酸乙酯进行冷凝回流4次，每次1h，通过过滤去除有机溶剂，保留药渣；向药渣中加入12倍的蒸馏水进行煎煮3次，每次2h，通过过滤除去药渣，合并煎煮液。
（3）脱色
向蒸煮液中加入5g活性炭，在室温下搅拌8h，离心除去活性炭，得到脱色液，通过真空浓缩将脱色液进行浓缩，得到浓缩液,。
（2）醇沉
向步骤（2）制备的浓缩液中加入6倍的乙醇进行沉淀，乙醇终浓度为85%，将溶液静置过夜，通过抽滤去除乙醇溶液，再用乙醇溶液洗涤2次，得到醇沉物。
（4）干燥
将步骤（3）得到的醇沉物进行减压干燥，得到各组分多糖提取物。
具有免疫调节功能的多糖组合物的注射液制备：
按质量份称取如下组分：黄芪多糖28g、云芝多糖20g、银杏叶多糖18g、肉苁蓉多糖20g、丹参多糖8g、山药多糖12g、刺五加多糖22g，向其中加入注射用水1l，搅拌均匀后，调节ph为6.5~7.0，用0.22μm的微孔滤膜过滤，100℃灭菌30min，无菌分装即得。
多糖组合物免疫调节功能的鉴定：
（1）诱导小鼠脾淋巴细胞增殖反应
在96孔细胞培养板中分别加入150μl细胞悬液，其中包括50μl完全培养基，对照孔中加入20μl蒸馏水，使得其终浓度为5mg/ml，实验组加入20μl终浓度为1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml、50mg/ml多糖组合物，将培养板放入培养箱中5%co2、37℃孵育48h后取出，每孔加入0.5mg/mlmtt溶液30μl，继续孵育4h，1000r/min离心10min，吸取培养液，加入150μldmso，5min内用酶标仪测定570nm处的吸收值，分析细胞增殖效果，所得结果如表1所示。从表中得出，与对照组相比，本发明所述的多糖组合物随着其浓度的增加，细胞增殖效果显著，说明本发明所述的多糖组合物达到一定的浓度可以对细胞增殖起到促进作用。
表1
注：与对照组比较，**p＜0.01。
（2）腹腔巨噬细胞吞噬功能评价
将小鼠巨噬细胞添加到细胞培养板中，每孔200μl，向对照组中加入50μl超纯水，实验组分别加入50μl浓度为20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、100μg/ml的激发波长为573nm的荧光微球，37℃孵育2h后，加2mlpbs进行洗涤，然后用500μlpbs将细胞进行重悬，然后用流式细胞仪进行检测，计算吞噬百分数。
吞噬百分率（%）=吞噬荧光微球的细胞数/计数的总细胞数×100%；
吞噬指数（%）=被吞噬荧光微球的总数/计数的总细胞数×100%。
分析结果如表2所示，从表中得出，本发明所制备的多糖组合物能够提高巨噬细胞的吞噬效果。
表2
注：与对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01。
（3）对dnfb诱发小鼠迟发超敏反应的影响
将小鼠分成空白对照组和实验组，实验组喂食本发明的多糖组合物，灌胃剂量为5mg、10mg、20mg、50mg、100mg，体积为50ml，空白组给予等量的整理水，灌胃7天后，将小鼠背右侧涂擦脱毛剂脱毛，在脱毛部位滴涂5%dnfb溶液20μl致敏，在第11天以1%dnfb溶液20μl滴涂小鼠左耳，右耳滴涂丙酮液作为对照，24h后称量小鼠体重，处死小鼠剪下左右耳，用打孔器取下直径8mm的耳片立即称重，以左右耳片重量之差作为耳廓肿胀度反映迟发型超敏反应的强度。分析结果如表3所示，从表中得出，多糖组合物对小鼠耳朵的肿胀程度具有明显的抑制作用，并且随着喂食剂量的增加，抑制效果越强。
表3
注：与对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01。
以上实施例仅是本命发明的最优实施例，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。