同位素标记的胆汁酸衍生物的制作方法

背景技术：

同位素的选择性掺入(例如，氘代替氢)具有保留生理活性化合物的生物化学效力和选择性的独特效果，同时修饰代谢特征以改变生理活性化合物的整体治疗谱时。在一些情况下，这种修饰具有对安全性、功效和耐受性产生积极影响的潜力。同位素标记的(例如，氘化和/或放射性标记的)化合物在临床和非临床环境中已被广泛研究，并作为代谢或药代动力学探针用于人体。

胆汁酸(ba)由于其在溶解和消化脂溶性营养物方面的作用而众所周知。近来，ba已作为具有全身性内分泌功能的信号传导分子而出现。已显示ba及其衍生物调节若干核激素受体，特别是类法尼醇(farnesoid)x受体(fxr)，并且是g蛋白偶联受体tgr5的激动剂。通过fxr和tgr5进行的信号传导调节若干代谢路径，不仅调控ba合成和肝肠再循环，而且也调控甘油三酯、胆固醇、葡萄糖和能量体内平衡(thomas等人,natrevdrugdiscovery[自然评论药物发现],2008,7,678-693)。

在wo2002/75298中披露的一种半合成的胆汁酸类似物3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸(6-乙基-鹅去氧胆酸(6-ecdca)或奥贝胆酸(oca))是一种高效的fxr调节剂，目前作为销售，用于治疗原发性胆汁性胆管炎(pbc)。

另一种半合成的胆汁酸类似物3α,7α,11β-三羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸(化合物100)虽然是有效的fxr激动剂，但对g蛋白偶联受体tgr5(gp-bar1、m-bar、gpbar或gpr131)也显示出特异性。

因此，需要新的同位素标记的胆汁酸衍生物来进一步研究这类化合物的重要医学益处，并增强其临床安全性、耐受性和/或功效。

技术实现要素：

本披露涉及奥贝胆酸的同位素标记的(例如，氘化的和/或放射性标记的)衍生物，包括其氨基酸缀合物和葡糖苷酸。

在一些实施例中，本披露涉及具有式i的化合物。

或其药学上可接受的盐，其中r1、r2、r3、r4、r5、r6、r11、r16、r23、z1a、z1b、z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z5、z6、z7、z8、z9、z11a、z11b、z12、z14、z15a、z15b、z16a、z16b、z17、z18、z19、z20、z21、z22a、z22b、z23a、z23b、z24a、z24b和z25如本文所述。

在一些实施例中，本披露涉及具有式ii的化合物

本披露的一些实施例涉及具有式iii的化合物

在一些实施例中，本披露涉及具有式iv的化合物

在一些实施例中，本披露涉及具有式v的化合物

在一些实施例中，本披露涉及具有式vi的化合物

在一些实施例中，本披露涉及具有式vii的化合物

其中

r1、r2、r3、r4、r11、r16和r23如上所述。在一些实施例中，本披露涉及用于制备具有式i的化合物的方法。

本披露的一些实施例涉及药物组合物，其包含具有式i的化合物和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。

本披露的一些实施例涉及调节有需要的受试者中的fxr活性的方法，该方法包括施用治疗有效量的具有式i的化合物。

本披露的一些实施例涉及调节有需要的受试者中的tgr5活性的方法，该方法包括施用治疗有效量的具有式i的化合物。

除非另有定义，否则在此所使用的所有技术和科学术语均具有与本申请所属领域中普通技术人员通常理解的相同的含义。在说明书中，单数形式也包括复数形式，除非上下文另有明确规定。尽管与本文所述的那些类似或等同的方法和材料可用于本申请的实践或测试，但下文描述了合适的方法和材料。将本文提及的所有出版物、专利申请、专利以及其他参考文献均通过引用并入。不承认本文引用的参考文献是现有技术。在发生冲突的情况下，以包括定义的本说明书为准。另外，这些材料、方法和实例仅具有说明性并且不旨在具有限制性。

从以下详细描述和权利要求书中，本发明的其他特征和优点将显而易见。

附图说明

图1显示获得从d5-oca获得的¹hnmr谱。

图2显示从d7-oca获得的¹hnmr谱。

图3显示从d2-oca(c23(d2)-oca)获得的¹hnmr谱。

图4显示从d4-oca(c3(d)-c7(d)-c23(d2)-oca)获得的¹hnmr谱。

图5显示从d5-oca、d5-oca-o(d2)gly的氘化甘氨酸缀合物获得的¹hnmr谱。

图6显示从d5-oca、d5-oca-o(d4)tau的氘化牛磺酸缀合物获得的¹hnmr谱。

图7显示从oca-3-o-葡糖苷酸获得的¹hnmr谱。

图8显示从[³h]-oca-24-葡糖苷酸获得的¹hnmr谱。

图9显示oca-24-葡糖苷酸甲酯和[³h]oca-24-葡糖苷酸的¹hnmr谱的比较图(3.0–5.0ppm区域的扩展)。

图10显示从[¹⁴c]oca获得的¹hnmr谱。

图11显示从oca参考材料获得的¹hnmr谱。

图12是显示在iv100μg的[¹⁴c]oca的微量示踪剂剂量后0至72小时总放射活性的平均(sd)血浆浓度(对数和线性标度，第1部分-pk群体(n＝5))的图。

图13是显示在iv100μg的[¹⁴c]oca的微量示踪剂剂量后0至72和0至24小时平均(sd)血浆浓度(对数标度，第1部分-pk群体(n＝5))的图。

图14是显示在25mg的oca口服剂量后0至24和0至72小时平均(sd)血浆浓度(对数标度，第1部分-pk群体(n＝5))的图。

图15是显示在25mg的oca的口服剂量后0至72小时的总oca的平均(sd)血浆浓度(线性和对数标度，第1部分-pk群体(n＝5))的图。

图16是显示在25mg的[¹⁴c]-oca的口服剂量后0至72小时总oca和总放射活性的平均(sd)血浆浓度(线性和对数标度，第2部分、pk群体(n＝8))的图。

图17是显示在25mg的[¹⁴c]-oca的口服剂量后总oca和总放射活性的平均(sd)血浆浓度(4周取样期、第2部分、线性和对数标度、pk群体(n＝8))的图。

图18是显示平均(sd)累积排泄量、尿液质量平衡、粪便和总排泄及回收(第2研究部分，质量平衡群体(n＝8))的图。

具体实施方式

定义

如本披露和所附权利要求中所用，不定冠词“一个”和“一种”以及定冠词“所述”包括复数以及单个指示物，除非上下文另外明确指明。

如本文所用，短语“本发明的化合物”是指具有式i、ii、iii、iv、v、vi、vii或viii中任一个的化合物、或本文明确披露的任何化合物。

本披露涉及同位素标记的具有式i的化合物，其中一个或多个原子被原子质量或质量数与通常见于自然界中的原子质量或质量数不同的原子替代。可以掺入本披露的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、和氧的同位素。除非另有说明，否则当一个位置被特别指定为“h”或“氢”时，该位置被理解为具有以其天然丰度同位素组成的氢或其同位素，如氘(d、d、d或²h)或氚(³h)。

在一些实施例中，本披露的同位素标记的化合物(例如，用²h、³h和/或¹⁴c或¹³c标记的那些)在化合物和/或底物组织分布测定中是有用的。氚化的(即³h)和碳-14(即¹⁴c)同位素因其易于制备和可检测性而被使用。另外，使用较重同位素，如氘(即²h或d)的取代可以提供由较大代谢稳定性产生的某些治疗优点，(例如体内半衰期增加或剂量需求降低)，并且因此可以在一些情况中是优选的。在一些实施例中，在本披露的同位素标记的化合物中，任何碳可以是¹¹c、¹²c、¹³c、或¹⁴c，任何氮原子可以是¹³n、¹⁴n或¹⁵n，且任何氧原子可以是¹⁵o、¹⁶o、¹⁷o、或¹⁸o。

氘是一种安全、非放射性的氢相对物，可从海水中分离出来，并已被广泛用于人体代谢和临床研究中。由于氘在自然界中的普遍丰度，成年人体平均含约1-2克的氘。

如本文单独地或作为基团的部分使用的术语“氘化”意指经取代的氘原子。如本文单独地或作为基团的部分使用的术语“氘化类似物”或“氘化化合物”意指代替氢的经取代的氘原子。本披露的氘化类似物可以是完全或部分氘取代的衍生物。在一些实施例中，本披露的氘取代的衍生物具有完全或部分氘化的取代基，例如烷基。

氘化药物是其中药物分子中含有的一个或多个氢原子已被氘置换的药物产品(例如，具有式i的化合物)。含有上述一个或多个氘原子的本发明化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在本发明的范围内。此外，用较重的氘(即²h)取代可提供导致更大的代谢稳定性的某些治疗优点，例如，增大的体内半衰期或减小的剂量需求。本披露的同位素标记的化合物通常可以通过以下类似于本文所述的程序(包括本文所披露的方案和实例)，通过用同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂来制备。

由于动力学同位素效应，含氘药物可以具有显著更低的代谢率，和因此更长的半衰期。本发明还包括具有式i的氘标记的化合物，其中一个或多个氢原子被氘原子所取代，该氘原子在所取代的位置处具有的氘丰度实质上大于氘的天然丰度(0.015％)。

如本文所用，术语“氘富集因子”意指氘丰度和氘的天然丰度之间的比率。一方面，本发明的化合物对每个氘原子具有至少3500(在每个氘原子处52.5％的氘掺入)、至少4000(60％的氘掺入)、至少4500(67.5％的氘掺入)、至少5000(75％的氘)、至少5500(82.5％的氘掺入)，至少6000(90％的氘掺入)、至少6333.3(95％的氘掺入)、至少6466.7(97％的氘掺入)、至少6600(99％的氘掺入)或至少6633.3(99.5％的氘掺入)的氘富集因子。

如本文所用，“比活性”意指活性/放射性核素的量，并且是该放射性核素的物理特性。活性是与放射活性有关的量。活性的si单位是贝克勒尔(bq)，等于一倒数秒。贝克勒尔是放射性同位素中每秒发生多少次放射性转化。其相关且更常见的单位是居里(缩写为ci)，为3.7x1010次转化/秒。由于给定放射性核素的放射性衰变的概率是固定的物理量(具有一些微小的例外，参见变化的衰变率)，在特定数量的放射性核素原子的给定时间内发生的衰变次数也是固定的物理量(如果存在足够大数量的原子以忽略统计波动)。因此，比活性被定义为活性/特定放射性核素的原子量。它通常以bq/g为单位给出，但另一个常用的活性单位是居里(ci)，允许以ci/g定义比活性。

除非另外规定，术语“烷基”，其本身或作为另一个取代基的一部分，意指具有指定数目的碳原子(即，c1-6意指一至六个碳)的直链、或支链烃。代表性烷基基团包括具有1、2、3、4、5、6、7或8个碳原子的直链和支链烷基基团。烷基基团的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等。术语“氘代烷基”是指烷基基团的氘化类似物。

如贯穿本披露使用的“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情形可以发生或可以不发生，并且所描述的包括事件或情形发生的情况和其中其不发生的情况。例如，短语“烷基基团任选地被一个或两个取代基取代”意味着该取代基可以但不必存在，并且所描述的包括烷基基团被取代的情况和烷基基团未被取代的情况。

应当注意，本发明的一些化合物的结构包括不对称碳原子。因此，应当理解的是，除非另外说明，否则本披露范围内包括由这种不对称性产生的异构体(例如，所有的对映异构体和非对映异构体)。可以通过经典分离技术和通过立体化学控制合成获得基本上纯形式的此类异构体。根据r.s.cahn、c.ingold、和v.prelog开发的系统，命名对映异构体(r-和s-构型)。

如本文所用，“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的衍生物，其中母体化合物是通过形成其酸盐或碱盐来改性的。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基如胺的无机酸盐或有机酸盐；酸性残基如羧酸的碱(碱性)盐或有机盐；等。药学上可接受的盐包括例如由无毒的无机酸或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐或季铵盐。碱性盐中常见的形成盐的阳离子包括但不限于钠na⁺、钾k⁺、钙ca²⁺、镁mg²⁺、铵nh4⁺、季铵nr4⁺，其中r可以是烷基。

例如，此类常规的无毒酸盐包括但不限于，来源于无机酸和有机酸的那些，这些无机酸和有机酸选自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羟基乙磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氢酸、碳酸、柠檬酸、依地酸、乙二磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、乙二醇氨苯胂酸、己基间苯二酚酸、海巴酸(hydrabamic)、氢溴酸、盐酸、氢碘酸、羟基马来酸、羟萘甲酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、萘磺酸、硝酸、草酸、扑酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、聚半乳糖醛酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、碱式乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、对氨基苯磺酸、硫酸、鞣酸、酒石酸、以及甲苯磺酸。

如本文所用，“溶剂化物”是指含有化学计量或非化学计量的量的溶剂的本发明化合物的溶剂加成形式。一些化合物倾向于捕获固定摩尔比率的处于结晶固态的溶剂分子，从而形成溶剂化物。如果所述溶剂是水，则所形成的溶剂化物是水合物，并且当溶剂是醇时，所形成的溶剂化物是醇化物。通过将一个或多个水分子与其中水保持其作为h2o的分子状态的物质之一组合形成水合物，这样的组合能够形成一种或多种水合物。

如本文所用，术语“互变异构体”意指由其中分子的一个原子的质子转移到另一个原子的现象产生的化合物。参见jerrymarch,[高等有机化学：反应、机理和结构],第四版,约翰威利父子出版公司(johnwiley&sons),第69-74页(1992)。互变异构体也是指平衡地存在并且易于从一种异构形式转化成另一种形式的两个或更多个结构异构体之一。互变异构体的实例包括酮-烯醇互变异构体(例如丙酮/丙-2-醇、亚胺-烯胺互变异构体等)、环-链互变异构体(例如葡萄糖/2,3,4,5,6-五羟基-己醛等)、含有–n＝c(h)--nh--环原子排列的杂芳基基团的互变异构形式(例如吡唑、咪唑、苯并咪唑、三唑、和四唑)。其中化合物包含例如，酮或肟基团或芳香族部分，可以发生互变异构现象(tautomericisomerism)(互变异构(`tautomerism`))。本文所述的化合物可以具有一个或多个互变异构体，并因此包括不同异构体。本领域普通技术人员将认识到其他互变异构环原子排列是可能的。这些化合物的所有这些异构体形式明确地包括在本披露中。

术语“异构体”意指具有相同分子式但其原子的键合性质和顺序或其原子的空间排列不同的化合物。原子空间排列不同的异构体被称为“立体异构体”。立体异构体(“stereoisomer”和“stereoisomers”)是指以不同的立体异构形式存在的化合物(如果它们具有一个或多个非对称中心或具有非对称取代的双键)，因此可以作为单独立体异构体或作为混合物产生。立体异构体包括对映异构体和非对映异构体。彼此不为镜像的立体异构体被称为“非对映异构体”，且彼此为不重叠镜像的那些立体异构体被称为“对映异构体”。例如，当化合物具有非对称中心时，它与四个不同的基团键合，可能存在一对对映异构体。对映异构体可以由其非对称中心的绝对构型来表征，并由cahn和prelog的r-和s-顺序规则来描述，或由分子旋转偏振光平面的方式来描述，并指定为右旋或左旋(即，分别被指定为(+)或(-)-异构体)。手性化合物可以作为单独的对映异构体或作为其混合物存在。含有相同比例的对映异构体的混合物被称为“外消旋混合物”。除非另有说明，该描述旨在包括单个立体异构体以及混合物。用于立体化学测定和立体异构体分离的方法在本领域中是众所周知的(参见在advancedorganicchemistry[高等有机化学]第4章中的讨论,第6版,j.march,约翰威利父子出版公司(johnwileyandsons),纽约,2007)，区别在于一个或多个立体中心的手性不同。

如本文所用，术语“前药”意指当向受试者施用这样的前药时，在体内释放生物活性化合物或药物的任何化合物。通过修饰具有式i的化合物中存在的官能团(其方式使得这些修饰可以在体内被切割以释放活性化合物)制备具有式i的化合物的前药。通过修饰存在于该化合物上的官能团(其方式使得这些修饰被常规操作或在体内切割为活性化合物)来制备前药。前药包括具有式i的化合物，其中在具有式i的化合物中羟基、氨基、羧基或磺酰基基团与在体内可以被切割的任何基团键合，以分别再生出游离的羟基、氨基、或磺酰基基团。前药的实例包括但不限于具有式i的化合物中羟基官能团的酯(例如，乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物)、酰胺、胍、氨基甲酸酯(例如，n,n-二甲基氨基羰基)等。前药的制备、选择和用途在以下文献中讨论：t.higuchi和v.stella,“pro-drugsasnoveldeliverysystems,”[“作为新颖递送系统的前药”],a.c.s.学术讨论会论文集的第14卷；“designofprodrugs”[“前药的设计”],h.bundgaard编辑，爱思唯尔出版社(elsevier)，1985年；以及bioreversiblecarriersindrugdesign[药物设计中的生物可逆性载体],edwardb.roche编辑,美国制药协会和佩加蒙出版社(americanpharmaceuticalassociationandpergamonpress),1987年中，这些文献中的每一个通过引用以其全文特此并入。

如本文所定义，术语“代谢物”可以指本文所述化合物的氨基酸缀合物、葡糖醛酸化和硫酸化衍生物，其中一个或多个氨基酸、葡糖醛酸或硫酸酯部分连接至本发明化合物。化合物的硫酸化衍生物可以通过羟基基团(例如3-羟基、7-羟基、11-羟基和/或r7基团的羟基)的硫酸化而形成。此类代谢物的实例包括但不限于本文所述化合物的3-硫酸盐、7-硫酸盐、11-硫酸盐、3,7-二硫酸盐、3,11-二硫酸盐、7,11-二硫酸盐和3,7,11-三硫酸盐。

如本文所用，术语“氨基酸缀合物”是指本发明的化合物与任何合适的氨基酸的缀合物。牛磺酸(-nh(ch2)2so3h)、甘氨酸(-nhch2co2h)和肌氨酸(-n(ch3)ch2co2h)是氨基酸缀合物的实例。这些化合物的合适的氨基酸缀合物在胆汁或肠液中具有增强完整性的附加优点。合适的氨基酸不限于牛磺酸、甘氨酸和肌氨酸。

如本文所定义，术语“葡糖苷酸”是指本文所述化合物的葡糖醛酸化衍生物，其中一个或多个葡糖醛酸连接至本披露的化合物。葡糖醛酸部分可以通过与化合物的羟基基团(例如3-羟基、7-羟基、11-羟基、12-羟基和/或r¹基团的羟基)的糖苷键连接至化合物。具有式i的化合物的葡糖苷酸的实例包括但不限于3-o-葡糖苷酸、7-o-葡糖苷酸、12-o-葡糖苷酸、3-o-7-o-二葡糖苷酸、3-o-12-o-三葡糖苷酸、7-o-12-o-三葡糖苷酸和3-o-7-o-12-o-三葡糖苷酸。

如本文所定义，术语“硫酸化衍生物”和/或“硫酸盐”涉及本文所述的化合物，其中一个或多个硫酸盐部分连接至本披露的化合物。化合物的硫酸化衍生物可以通过羟基基团(例如，3-羟基、7-羟基、11-羟基、12-羟基和/或r¹基团的羟基)的硫酸化形成。具有式i的化合物的硫酸化衍生物的实例包括但不限于3-硫酸盐、7-硫酸盐、11-硫酸盐、12-硫酸盐、3,7-二硫酸盐、3,12-二硫酸盐、7,12-二硫酸盐和3,7,12-三硫酸盐及其其他组合。

“组合物”或“药物组合物”是含有本发明的化合物或其盐、溶剂化物或氨基酸缀合物的配制品。在一个实施例中，该药物组合物处于散装形式或单位剂型。单位剂型是多种形式中的任一种，包括例如胶囊、iv袋、片剂、气雾剂吸入器上的单个泵或小瓶。单位剂量的组合物中活性成分(例如本发明化合物或其盐的配制品)的量是有效量，并根据所涉及的特定治疗而变化。本领域的技术人员应理解，可能有必要依据患者的年龄和病症对剂量进行常规改变。该剂量也将取决于施用途径。考虑了各种途径，包括口服、眼部、眼部、肺部、直肠、肠胃外、透皮、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、鼻内等。用于局部或透皮施用本申请化合物的剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶剂、溶液、贴剂以及吸入剂。在另一个实施例中，将活性化合物在无菌条件下与药学上可接受的载体以及与所需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。

短语“药学上可接受的载体”是本领域公认的，并且包括例如在将任何主题组合物从身体的一个器官或部分携带或转运至身体的另一器官或部分中涉及的药学上可接受的材料、组合物或媒介物，如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包囊材料。各载体在可与主题组合物的其他成分相容并且对患者无害的意义上是“可接受的”。在某些实施例中，药学上可接受的载体是非热原性的。可用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：(1)糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)粉末状黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；(9)油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油、和大豆油；(10)二醇，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；以及(21)在药物配制品中采用的其他无毒相容物质。

如本文所用，术语“治疗”是指缓解、减轻、减少、消除、调节或改善疾病状态或病症，即引起该疾病状态或病症的消退。

如本文所用，术语“预防”是指完全或几乎完全阻止疾病状态或病状在患者或受试者中发生，尤其是当该患者或受试者易患这种疾病状态或病状或处于感染疾病状态或病状的风险时。预防还可以包括抑制疾病状态或病状(即阻止该疾病状态或病状的发展)，以及缓解或改善该疾病状态或病状(即引起该疾病状态或病状的消退)，例如当该疾病状态或病状可能已经存在时。

如本文所用，短语“降低......的风险”是指降低中枢神经系统疾病、炎性疾病和/或代谢疾病在患者中发生的可能性或概率，尤其是当受试者有此类发生的倾向时。

如本文所用，术语“调节”(“modulating”或“modulate”)等是指改变生物活性的效果，特别是与特定生物分子(例如，受体或酶)相关的生物活性。例如，特定生物分子的激动剂或拮抗剂通过增加(例如激动剂、活化剂)或降低(例如拮抗剂、抑制剂)生物分子的活性来调节该生物分子的活性。这种活性通常分别以抑制剂或激活剂的化合物的抑制浓度(ic50)或有效浓度(ec50)来表示，例如，关于受体或酶。

“组合疗法”(或“联合疗法”)是指施用本发明的化合物和作为特定治疗方案的一部分的至少第二药剂，该治疗方案旨在提供由这些治疗剂(即，本发明的化合物和至少第二药剂)的共同作用产生的有益作用。该组合的有益作用包括但不限于由治疗剂的组合产生的药代动力学或药效动力学共同作用。组合施用这些治疗剂通常在限定的时间段(通常数分钟、数小时、数天或数周，这取决于选择的组合)内进行。“组合疗法”可以但通常不旨在涵盖施用这些治疗剂中的两种或更多种作为附带且任意产生本申请的组合的单独单一疗法方案的一部分。“组合疗法”旨在包括以依次方式施用这些治疗剂，即其中各治疗剂在不同时间施用，以及以基本上同时的方式施用这些治疗剂或这些治疗剂中的至少两种。基本上同时施用可以例如通过向受试者施用具有固定比率的各治疗剂的单一胶囊或各治疗剂的多个单一胶囊来实现。顺序施用或基本上同时施用各治疗剂可以通过任何适当的途径来进行，这些途径包括但不限于口服途径、静脉内途径、肌肉内途径、和通过粘膜组织的直接吸收。可以通过相同途径或通过不同途径施用这些治疗剂。例如，可以通过静脉内注射施用选择的组合中的第一治疗剂，同时可以口服施用该组合中的其他治疗剂。可替代地，例如，可以口服施用所有治疗剂或可以通过静脉内注射施用所有治疗剂。施用治疗剂的顺序并不是严格关键的。

“组合疗法”还包括进一步与其他生物活性成分和非药物疗法(例如，手术或机械治疗)组合施用如上文所述的治疗剂。当组合疗法进一步包括非药物治疗时，非药物治疗可在任何合适的时间进行，只要从治疗剂与非药物治疗的组合的共同作用实现有益作用即可。例如，在适当的情况下，当从治疗剂的施用中暂时去除非药物治疗时(也许是数天甚至数周)，仍然实现有益作用。

本发明的化合物或化合物的组合的“有效量”是一种或多种化合物的量(数量或浓度)。在一个实施例中，将治疗有效量的化合物施用给需要治疗的受试者时，由疾病引起的症状在施用该化合物一次或多次时即刻或之后得以改善。待施用受试者的化合物的量将取决于具体的定障碍、施用方式、共-施用的化合物(如果有的话)以及受试者的特征(如总体健康、其他疾病、年龄、性别、基因型、体重和对药物的耐受性)。熟练的技术人员将能够依据这些和其他因素确定适当的剂量。对于任何化合物，治疗有效量最初可以在例如致瘤性细胞的细胞培养测定中或在动物模型(通常为大鼠、小鼠、兔、狗或猪)中估算。动物模型还可用于确定施用的适当浓度范围和途径。于是此类信息可用于确定用于在人中施用的可用剂量和途径。

术语“预防有效量”意指为防止或降低疾病风险而施用的本发明的化合物或化合物的组合的量(数量或浓度)-换句话说，为提供预防或防治作用而需要的量。治疗/预防功效和毒性可通过标准制药程序来确定，例如ed50(在群体的50％中治疗有效的剂量)和ld50(对群体的50％致死的剂量)。毒性作用与治疗作用之间的剂量比率是治疗指数，并且它可以被表示为ld50/ed50的比率。展现出大的治疗指数的药物组合物是优选的。剂量可以根据不同因素而变化，这些因素包括但不限于所采用的剂型、患者的敏感性和施用途径。

待施用于受试者的本发明化合物的量将取决于特定的障碍、施用方式、共-施用的化合物(如果有的话)以及受试者的特征(如总体健康、其他疾病、年龄、性别、基因型、体重和对药物的耐受性)。熟练的技术人员将能够依据这些和其他因素确定适当的剂量。

“受试者”包括哺乳动物，例如，人、伴侣动物(例如，狗、猫、鸟等)、农场动物(例如，牛、绵羊、猪、马等)、以及实验室动物(例如，大鼠、小鼠、豚鼠等)。典型地，受试者是人。

术语“测定”(“assay”或“assaying”)涉及实验条件的创建和关于暴露于具体实验条件的特定结果的数据的收集。例如，生物分子或靶分子(例如酶或受体)可以基于其作用于可检测底物的能力进行测定。化合物可以基于其与一个或多个特定靶分子结合的能力进行测定。

如本文所用，术语“配体”和“调节剂”可等同地用于指改变(即增加或降低)靶生物分子(例如酶或受体)活性的化合物。通常，配体或调节剂是具有特定生物系统或治疗用途的药理学和/或药代动力学特性的化合物。

与靶标和潜在结合性化合物之间的相互作用有关的术语“结合”表明，与通常的蛋白质缔合(即非特异性结合)相比，潜在结合性化合物与靶标缔合达到统计上显著相关的程度。因此，术语“结合性化合物”是指与靶分子具有统计学显著缔合的化合物。在一些实施例中，结合性化合物以约1mm或更小、约1μm或更小，例如约500nm、约400nm、约300nm、约200nm、或约100nm、约50nm或更小、约10nm或更小、或约1nm或更小的解离常数(kd)与特定的靶标相互作用。在与靶标结合的化合物的上下文中，术语“更大亲和力”和“选择性”表明该化合物比参考化合物，或比参考条件下的相同化合物的结合更紧密，即具有更低的解离常数。在一些实施例中，更大亲和力是至少约2、3、4、5、8、10、30、50、100、200、400、500、1000或10,000倍的更大亲和力。

本披露的化合物

本披露涉及胆汁酸(例如，奥贝胆酸)的同位素标记的(例如，氘化的)衍生物，包括其氨基酸缀合物和葡糖苷酸。

在一些实施例中，本披露涉及具有式i的化合物。

或其药学上可接受的盐，其中

r1是oh、o-葡糖苷酸、oso3h、so3h、co²r5、¹⁴co2r5、c(o)r6、或¹⁴c(o)r6；

r2是h、d或oh；

r3是oh或o-葡糖苷酸；

r4是oh或o-葡糖苷酸；

r5是h或取代的或未取代的烷基；

r6是nh(ch2)2so3h、nhch2co2h、或n(ch3)ch2co2h或葡糖醛酸部分，其中氢可以用氘替代；

当z11a不存在时，r11是z11b、羟基、卤素、烷氧基或氧代；

当z16b不存在时，r16是z16a、羟基、卤素、烷氧基或氧代；

r23是z23a或烷基；并且

z1a、z1b、z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z5、z6、z7、z8、z9、z11a、z11b、z12、z14、z15a、z15b、z16a、z16b、z17、z18、z19、z20、z21、z22a、z22b、z23a、z23b、z24a、z24b或z25独立地选自h(氢)或d(氘)，且z1a、z1b、z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z5、z6、z7、z8、z9、z11a、z11b、z12、z14、z15a、z15b、z16a、z16b、z17、z18、z19、z20、z21、z22a、z22b、z23a、z23b、z24a、z24b或z25中至少一个是d；并且

任何碳原子是¹¹c、¹²c、¹³c、或¹⁴c，任何氮原子是¹³n、¹⁴n或¹⁵n，且任何氧原子是¹⁵o、¹⁶o、¹⁷o或¹⁸o。

在一些实施例中，r2是氢。在一些实施例中，r2是羟基。在一些实施例中，r2是α-羟基。

在一些实施例中，r11是羟基或氧代。

在一些实施例中，r16是羟基或氧代。

在一些实施例中，r2是氢并且r11是羟基。

在一些实施例中，r2是羟基并且r11是羟基。

在一些实施例中，r23是甲基。在一些实施例中，r23是(s)-甲基。在一些实施例中，r23是(r)-甲基。

在一些实施例中，r6是牛磺酸(-nh(ch2)2so3h)、甘氨酸(-nhch2co2h)、或肌氨酸(-n(ch3)ch2co2h)。

在某些实施例中，本披露涉及具有与式ii、iii、iv和v对应化学结构的具有式i的化合物。

在某些实施例中，本披露涉及具有式ii的化合物

其中

z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z23a、或z23b独立地选自h或d，且z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z23a、或z23b中至少一个是d，且r1、r2、r3和r4如上所述。

在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z23a或z23b中至少两个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z23a或z23b中至少三个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z23a或z23b中至少四个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z23a或z23b中至少五个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z23a或z23b中至少六个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z23a或z23b中至少七个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z23a获z23b中至少八个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z23a或z23b中至少九个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z23a和z23b是d。

在一些实施例中，r2是氢。在一些实施例中，r2是羟基。在一些实施例中，r2是α-羟基。

在一些实施例中，具有式ii的化合物或其药学上可接受的盐的任何碳原子是¹¹c、¹²c、¹³c或¹⁴c，任何氮原子是¹³n、¹⁴n或¹⁵n，且任何氧原子是¹⁵o、¹⁶o、¹⁷o或¹⁸o。

在某些实施例中，本披露涉及具有式iii的化合物

其中

z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z11a、z23a或z23b独立地选自h或d，且z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z23a或z23b中至少一个是d，且r1、r2、r3、r4、和r11如上所述。

在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z11a、z23a或z23b中至少两个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z11a、z23a或z23b中至少三个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z11a、z23a或z23b中至少四个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z11a、z23a或z23b中至少五个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z11a、z23a或z23b中至少六个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z11a、z23a或z23b中至少七个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z11a、z23a或z23b中至少八个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z11a、z23a或z23b中至少九个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z11a、z23a和z23b中至少十个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z11a、z23a和z23b是d。

在一些实施例中，r2是氢。在一些实施例中，r2是羟基。在一些实施例中，r2是α-羟基。

在一些实施例中，r11是羟基或氧代。

在一些实施例中，r2是氢，并且r11是羟基。

在一些实施例中，r2是羟基，并且r11是羟基。

在某些实施例中，本披露涉及具有式iv的化合物

其中

z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、或z23b独立地选自h或d，且z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8或z23b中至少一个是d，r23是烷基，且r2、r3、r4如上所述。

在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8或z23b中至少两个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8或z23b中至少三个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8或z23b中至少四个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8或z23b中至少五个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8或z23b中至少六个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8或z23b中至少七个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8或z23b中至少八个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8或z23b是d。

在一些实施例中，r2是氢。在一些实施例中，r2是羟基。在一些实施例中，r2是α-羟基。

在一些实施例中，r23是甲基。在一些实施例中，r23是(s)-甲基。在一些实施例中，r23是(r)-甲基。

在一些实施例中，具有式iv的化合物或其药学上可接受的盐的任何碳原子是¹¹c、¹²c、¹³c或¹⁴c，任何氮原子是¹³n、¹⁴n或¹⁵n，且任何氧原子是¹⁵o、¹⁶o、¹⁷o或¹⁸o。

在某些实施例中，本披露涉及具有式v的化合物

其中

z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z16b或z23b独立地选自h或d，且z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z16b、z23a或z23b中至少一个是d，r16是羟基，且r2、r3、r4和r23如上所述。

在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z16b、z23a或z23b中至少两个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z16b、z23a或z23b中至少三个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z16b、z23a或z23b中至少四个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z16b、z23a或z23b中至少五个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z16b、z23a或z23b中至少六个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z16b、z23a或z23b中至少七个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z16b、z23a或z23b中至少八个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z16b、z23a或z23b中至少九个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z16b、z23a或z23b中至少十个是d。在一些实施例中，z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z16b,z23a或z23b是d。

在一些实施例中，r2是氢。在一些实施例中，r2是羟基。在一些实施例中，r2是α-羟基。

在一些实施例中，r16是α-羟基。在一些实施例中，r16是β-羟基。

在一些实施例中，r23是甲基。在一些实施例中，r23是(s)-甲基。在一些实施例中，r23是(r)-甲基。

在一些实施例中，具有式v的化合物或其药学上可接受的盐的任何碳原子是¹¹c、¹²c、¹³c或¹⁴c，任何氮原子是¹³n、¹⁴n或¹⁵n，且任何氧原子是¹⁵o、¹⁶o、¹⁷o或¹⁸o。

在一些实施例中，本披露涉及具有式vi的化合物

其中

z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z23a或z23b独立地选自h或d，且z2a、z2b、z3、z4a、z4b、z6、z7、z8、z23a或z23b中至少一个是d，且r1、r3和r4如上所述。

在一些实施例中，本披露涉及具有式vii的化合物

其中

r1、r2、r3、r4、r11、r16和r23如上所述。

在一些实施例中，本披露涉及具有式viii的化合物

其中

r1是¹⁴co2r5或¹⁴c(o)r6且r2、r3、r4、r11、r16和r23如上所述。

本披露的化合物的合成

本披露的一些实施例涉及用于制备具有式i的化合物的方法。

具有式i的化合物可以通过本领域已知的方法制备，例如，美国专利号7,932,244；8,114,862；9,238,673和9,611,289以及公开wo2014/066819和wo2017/062763中描述的那些，其各自的全部内容通过引用并入本文。

用于有机分子制备以及官能团转化和操控的标准合成方法和程序(包括保护基团的使用)可以从相关科学文献或从本领域中的标准参考教科书中获得。虽然不局限于任何一种或多种来源，公认的有机合成参考教科书包括：smith,m.b.；march,j.march'sadvancedorganicchemistry:reactions,mechanisms,andstructure[马奇的高等有机化学：反应、机理和结构],第5版；约翰威利父子出版公司(johnwiley&sons):纽约,2001；以及greene,t.w.；wuts,p.g.m.,protectivegroupsinorganicsynthesis[有机合成中的保护基],第3版；约翰威立父子公司:纽约,1999。

在一些实施例中，本披露涉及用于制备具有式ii的化合物的方法。在一些实施例中，本披露涉及用于制备具有式iii的化合物的方法。在一些实施例中，本披露涉及用于制备具有式iv的化合物的方法。在一些实施例中，本披露涉及用于制备具有式v的化合物的方法。在一些实施例中，本披露涉及用于制备具有式vi的化合物的方法。在一些实施例中，本披露涉及用于制备具有式vii的化合物的方法。在一些实施例中，本披露涉及用于制备具有式viii的化合物的方法。

在一个方面中，本申请涉及用于制备具有式(i)的氘化化合物的方法。根据所希望的氘化位点，在一些情况下，来自d2o中的氘可以直接交换进入成品药品化合物或交换进入用于合成药物分子的试剂(h.esaki等人,tetrahedron[四面体],2006,62,10954；h.esaki等人,chem.eur.j.[欧洲化学杂志],2007,13,4052)。在质子溶液中，可交换的质子(例如在羟基或胺基团中的那些)与溶剂交换质子。如果d2o是溶剂，氘核将在这些位置处掺入。可以使用多种方法(如nmr光谱法)跟踪交换反应。由于这种交换是平衡反应，氘的摩尔量应该比底物的可交换质子高。例如，通过用d2o稀释h2o溶液(例如，十倍)，将氘添加至在h2o中的化合物。通常在生理ph(7.0–8.0)下进行交换。h/d交换反应也可以由酸、碱或金属催化剂(例如铂)催化。已经经历h/d交换的分子的氘化模式可以在非质子环境中维持。氘气也是用于将氘掺入分子的有用的起始材料。烯键和炔键的催化氘化是掺入氘的快速途径(h.j.leis等人,curr.org.chem.[当前有机化学],1998,2,131)。在氘气存在下，金属催化剂(即pd、pt和rh)可以用于直接将氘交换在含有烃的官能团中的氢(美国专利号3,966,781)。多种氘化试剂和合成结构单元是可商购的。

本披露的一些实施例涉及基于本领域中的已知方法(包括但不限于方案1-11中所示的程序)制备具有式i、ii、iii、iv、v、vi、vii和viii的氘化化合物的方法。方案1-11中所示的方法是基于将奥贝胆酸(oca)作为起始材料，但可以应用于本披露的任何胆汁酸类似物以制备具有式i-viii的化合物。

方案a：

在一些实施例中，可以根据方案1制备d10-oca类似物。如同所示，d10-oca类似物可以通过如下方法来制备：首先在氘化甲醇存在下用碱(例如甲醇钠)处理3,7-二酮-oca甲酯，并在环境温度或高温下，用在d2o中的氘氧化钠同步处理，以生成3,7-二酮-(d8)-oca。用氘化还原剂(例如像，nabd4)进一步处理生成d10-oca。如本文所述，获得的d10-oca可以与不同的部分(例如，牛磺酸、甘氨酸、其他氨基酸、葡糖醛酸或它们的氘化对应物)偶联，以生成d10-oca衍生物。

方案1.d10-oca类似物

在一些实施例中，根据方案2制备d7-oca类似物。如同所示，d7-oca类似物可以在环境温度下，通过用naod在d2o中处理3,7-二酮-oca来制备。通过¹h-nmr监测反应，直到氘交换完成并获得d5-3,7-二酮-oca。接下来，用nabd4处理d5-3,7-二酮-oca中间体，以生成d7-oca。如本文所述，获得的d7-oca可以与不同的部分(例如，牛磺酸、甘氨酸、其他氨基酸、葡糖醛酸或它们的氘化对应物)偶联，以生成d7-oca衍生物。

方案2.d7-oca类似物

在一些实施例中，可以根据方案3制备d5-oca(c3)的类似物。如同所示，d5-oca(c3)类似物可以通过在n-甲基吗啉氧化物存在下使用氧化剂(例如催化剂tpap)将oca氧化成3-酮基-oca来制备。在一些实施例中，在n-甲基吗啉氧化物存在下使用氧化剂(例如催化剂tpap)的反应，选择性地提供3-酮基oca。在d2o中3-酮基-oca与naod反应，然后处理nabd4生成d5-oca(c3)。如本文所述，获得的d5-oca可以与不同的部分(例如，牛磺酸、甘氨酸、其他氨基酸、葡糖醛酸或它们的氘化对应物)偶联，以生成d5-oca(c3)衍生物。

方案3.d5-oca类似物(c3)

在一些实施例中，可以根据方案4制备d5-oca(c6)的类似物。如同所示，d5-oca(c6)类似物可以通过氧化oca以生成3,7-二酮-oca来制备。在一些实施例中，可以使用例如naocl或rucl3和naio4进行氧化。在某些实施例中，使用rucl3和naio4氧化oca提供了完全转化为3,7-二酮oca。在环境温度下，用氘氧化钠在d2o中处理3,7-二酮-oca，生成3,7-二酮-(d5)-oca。用nabh4进一步处理3,7-二酮衍生物生成d5-oca。如本文所述，获得的d5-oca可以与不同的部分(例如，牛磺酸、甘氨酸、其他氨基酸、葡糖醛酸或它们的氘化对应物)偶联，以生成d5-oca(c6)衍生物。

方案4.d5-oca类似物(c6)

在一些实施例中，可以根据方案5制备d4-oca类似物(c3(d)-c7(d)-c23(d2)-oca)。如同所示，d4-oca类似物(c3(d)-c7(d)-c23(d2)-oca)可以通过在甲醇的存在下，用hcl处理oca，以生成oca甲酯(oca-ome)来制备。通过在meod中用naome处理oca-ome，将氘引入c23位，以生成d2-oca-ome。在d2o中用naod进行酯水解生成d2-oca，将其在naio4的存在下，用催化剂rucl3进行氧化，以生成d2-3,7-二酮-oca。在naod的存在下，在d2o中，使用nabd4对二酮进行还原，以生成d4-oca。获得的d4-oca可以与不同的部分(例如，牛磺酸、甘氨酸、其他氨基酸、葡糖醛酸或它们的氘化对应物)偶联，以生成d4-oca衍生物。

方案5.d4-oca类似物(c3(d)-c7(d)-c23(d2)-oca类似物)

在一些实施例中，可以根据方案6制备c23(d2)-oca类似物。如同所示，c23(d2)-oca类似物可以通过在甲醇的存在下用hcl处理oca，以生成oca甲酯(oca-ome)来制备。通过在meod中用naome处理oca-ome，将氘引入c23位，以生成d2-oca-ome。在d2o中用naod进行酯水解生成d2-oca。获得的d2-oca可以与不同的部分(例如，牛磺酸、甘氨酸、其他氨基酸、葡糖醛酸或它们的氘化对应物)偶联，以生成d2-oca衍生物。

方案6.c23(d2)-oca类似物

在一些实施例中，本披露涉及oca缀合物，其中氨基酸残基的氢被氘完全或部分取代。在这些实施例中的一个中，缀合物被完全氘化。通过本文所述方法(包括但不限于方案1-6中所示的程序)制备的任何胆汁酸中间体可以通过使用合适的偶联试剂转化为相应的缀合物。

合适的偶联剂包括但不限于碳二亚胺，例如二环己基碳二亚胺(dcc)、二异丙基碳二亚胺(dic)、n-(3-二甲基氨基丙基)-n’-乙基碳二亚胺·hcl(edac·hcl、edc·hcl、wsc·hcl)；鏻-和铵-(亚铵-)型试剂，其包括例如，苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲氨基)-鏻六氟磷酸盐(bop)、苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐溴-三吡咯烷基-鏻六氟磷酸盐7-氮杂-苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(pyaop)、乙基氰基(羟基亚氨基)乙酸盐-o2)-三-(1-吡咯烷基)-鏻六氟磷酸盐(pyoxim)、3-(二乙氧基-磷酰基氧基)-1,2,3-苯并[d]三嗪-4(3h)-酮(depbt)、n-[(7-氮杂-1h-苯并三唑-1-基)(二甲氨基)-亚甲基]-n-甲基甲烷铵六氟磷酸盐n-氧化物(hatu)、n-[(5-氯-1h-苯并三唑-1-基)-二甲氨基-吗啉代]-脲鎓六氟磷酸盐n-氧化物(hdmc)、n-[(7-氮杂-1h-苯并三唑-1-基)(二甲氨基)-亚甲基]-n-甲基甲烷铵四氟硼酸盐n-氧化物(tatu)、2-(6-氯-1h-苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n’-四甲基铵六氟磷酸盐(hctu)、n-[(5-氯-1h-苯并三唑-1-基)-二甲氨基-吗啉代]-脲鎓六氟磷酸盐n-氧化物(hdmc)、2-(1h-苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n’-四甲基铵基四氟硼酸盐/六氟磷酸盐(tbtu(bf4^-)/hbtu(pf6^-))、1-[1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代乙基亚氨氧基)-二甲氨基-吗啉代]-脲鎓六氟磷酸盐(comu)、四甲基氟甲脒六氟磷酸盐(tffh)和2-(1-氧基-吡啶-2-基)-1,1,3,3-四甲基异硫脲鎓四氟硼酸盐(tott)；和其他偶联剂，例如，n-乙氧基羰基-2-乙氧基-1,2-二氢喹啉(eedq)；2-丙烷膦酸酐(t3p)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓盐(dmtmm)和相关化合物，双-三氯甲基碳酸酯或“三光气”(btc)以及1,1’-羰二咪唑(cdi)。

一些偶联反应(例如，酰胺键的形成)需要以下添加剂的存在(例如，以增强反应性并且还降低差向异构体以及n-酰脲的形成)，例如像，1-羟基苯并三唑(hobt)、hobt-6-磺酰胺甲基树脂·hcl(200-400目)、n-羟基琥珀酰亚胺(hosu)、1-羟基-7-氮杂-1h-苯并三唑(hoat)、乙基2-氰基-2-(羟亚胺基)乙酸酯(oxyma)和4-(n,n-二甲氨基)-吡啶(dmap))。

一些偶联反应(例如，酰胺键的形成)需要以下碱的存在，例如，三乙胺、二异丙基乙胺(dipea)、n-甲基吗啉(nmm)、对称-三甲基吡啶、2,6-二甲基吡啶、cs2co3、nahco3等。

在一些实施例中，本披露涉及一种制备具有式i的氨基酸缀合物的方法。

方案b：

其中a是氨基酸残基(受保护的或未受保护的)或是其中至少一个氢被氘或氚替代的氨基酸残基(氨基酸残基的羧基基团可以是受保护的或未受保护的)。

在一些实施例中，甘氨酸缀合物，例如，d5-oca-o(d2)gly，可以如方案7中所示制备。

方案7.d5-oca-o(d2)gly

在一些实施例中，d5-oca-o(d2)gly类似物可以通过使用例如在n-甲基吗啉氧化物存在下的催化剂tpap，将oca氧化成3-酮基-oca来制备。在d2o中用naod处理3-酮基-oca生成d4-3-酮基-oca，将其用还原剂(例如nabd4)处理，以生成d5-oca(也如方案3和4所示)。使用偶联剂，例如4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓(dmt-mm)，实现d5-oca与d2-甘氨酸甲酯的偶联，以得到d5-oca-o(d2)gly-ome。在d2o中使用naod进行酯水解以得到d5-oca-o(d2)gly。

在一些实施例中，牛磺酸缀合物，例如，d5-oca-o(d4)tau，可以如方案8所示来制备。

方案8.d5-oca-o(d4)tau

在一些实施例中，d5-oca-o(d4)tau类似物可以通过在d4-牛磺酸和偶联剂(例如，n-乙氧基羰基-2-乙氧基-1,2-二氢喹啉(eedq)、1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(hatu)和2,6-二氯苯甲酰基氯或其他肽偶联剂)和碱(例如，三乙胺、dipea、2,6-二甲基吡啶、cs2co3等)的存在下，处理d5-oca来制备。

在一些实施例中，例如在方案1-6中所示，氘交换和还原(例如，使用nabd4)在一锅中进行。在一些实施例中，氘交换和还原作为两个连续步骤进行。

本披露的一些实施例涉及具有式i、ii、iii、iv、v和vi的化合物，这些化合物的至少一个碳-12(¹²c)被放射性碳-14(¹⁴c)或碳-13(¹³c)替代。在某些实施例中，本披露的化合物(式i-vi)用至少一个¹⁴c(例如化合物vii或viii)标记。用¹⁴c标记的化合物可以通过本领域已知的不同方法来制备。

量化代谢物的一般方法是合成药物的碳-14-标记形式。通过用放射性碳-14替代碳-12原子，研究人员得到了一种化学上相同的类似物，从而能够在生物系统中追踪药物的途径。有时优先于氚选择碳-14放射性同位素，因为标记的确切位置可以基于用于标记的合成途径来选择。碳存在于几乎所有的药物分子的骨架中，因此允许针对更可能在代谢上稳定的放射性标记位点而选择的位置。

碳-14标记的化合物通常表现出比其氚标记的对应物更高的放射化学稳定性，这是由于氚标记的材料的更高比活性。这具有在储存或使用放射性标记的化合物期间增加显著自辐射分解(放射性化学分解)风险的作用。使用闪烁计数还在非常低的水平上检测到碳-14，使得该碳-14可用于其中接近药理学阈值的剂量是常见的研究。

在一些实施例中，本披露的化合物(式i-vi)可以用至少一个¹⁴c(例如化合物vii或viii)标记。在一些实施例中，如方案9所示，可以通过使用放射性标记试剂(例如，[1-¹⁴c]乙醛)将¹⁴c掺入分子中。

方案9.[¹⁴c]oca

在一些实施例中，在约-65℃至约-78℃(例如，约-70℃)下，在合适溶剂(例如，thf)中，在氯三甲基硅烷或其他用于保护c3-羟基(或任何其他羟基基团)的合适试剂的存在下，将起始材料(例如，化合物c1)用lda处理，以制备化合物c2。在惰性气氛(例如，氮气)下，在约-65℃至约-78℃(例如，-70℃)下，在合适的溶剂(例如，二氯甲烷)中，可以将化合物c2用[1-¹⁴c]乙醛和三氟化硼醚合物处理。以提供化合物[¹⁴c]c3。在约35℃至约55℃(例如，45℃)下，在合适的溶剂(例如，甲醇)中，可以将化合物[¹⁴c]c3用碱(例如，氢氧化钠)处理，以得到化合物[¹⁴c]c4。在室温(例如，在约20℃，或约25℃，或约30℃)下，然后在约100℃至约130℃(例如，115℃)下，在氢氧化钠和5％钯碳的存在下，将化合物[¹⁴c]c4氢化为[¹⁴c]oca酮c5。可以将[¹⁴c]oca酮c5进行纯化(例如，通过hplc)。在一些实施例中，放射性标记的前体[¹⁴c]oca酮c5的质量被认为是对[¹⁴c]ocac6化合物的质量的关键控制。可以将纯化的[¹⁴c]oca酮c5用约75℃至约85℃(例如，80℃)下的碱(例如，氢氧化钠)，并然后用在约100℃下的水性硼氢化钠处理，以提供粗[¹⁴c]ocac6。可以将粗[¹⁴c]ocac6进行纯化(例如，通过柱色谱法)。在一些实施例中，可以将来自快速柱的[¹⁴c]ocac6材料用quadrapure^tmtu钯清除剂进行处理。在一些实施例中，可使用制备型hplc(例如，使用c18柱)将经过滤的材料进一步纯化。

在一些实施例中，[¹⁴c]oca具有高比活性。在这些实施例中的一者中，可以按[¹⁴c]oca与oca的比率，将[¹⁴c]oca高比活性组分与oca冷组分组合，以产生[¹⁴c]oca药物物质，该药物物质具有在临床试验或其他研究中用于施用(例如静脉或口服)的[¹⁴c]-oca溶液中使用所需的比活性。然后，可以将该材料用oca进一步稀释，以产生[¹⁴c]oca药物物质，该药物物质具有用于在临床试验或其他研究中用于在胶囊中的[¹⁴c]oca药物中使用所需的比活性。

在一些实施例中，例如，如方案10和11中所示，可以通过使用放射性标记试剂(例如，k¹⁴cn)将¹⁴c掺入分子(具有式i的化合物)中的位置c24处。方案10或11中所示的方法分别基于将奥贝胆酸(oca)和化合物100作为起始材料，但可以应用于本披露的任何胆汁酸类似物(即，具有式i的化合物)，以制备具有式i-viii的化合物的¹⁴c衍生物。

方案10.[¹⁴c-24]oca

在一些实施例中，具有式i、ii、iii、iv、v、vi、vii和viii的化合物是葡糖苷酸。本披露的葡糖苷酸通过本领域已知的方法制备，包括柯尼希斯-克诺尔(koenigs-knorr)反应(annewadouachi等人,molecules[分子]16(2011),3933-3968)。具有式i的葡糖醛酸化的化合物包括但不限于3-o-葡糖苷酸、7-o-葡糖苷酸、11-o-葡糖苷酸、12-o-葡糖苷酸、24-o-葡糖苷酸、或二葡糖苷酸或三葡糖苷酸(例如像，3,7-二葡糖苷酸或3,7,11-三葡糖苷酸)。具有式i的葡糖苷酸可以通过本领域已知的方法制备，并且在方案12和13中列举。

在一些实施例中，本披露涉及具有式i的3-o-葡糖苷酸。方案12中所示的方法基于奥贝胆酸(oca)作为起始材料，但可以应用于本披露的任何胆汁酸类似物(即，具有式i的化合物)，以制备具有式i-viii的3-o-葡糖醛酸化的化合物。

方案12.oca-3-o-葡糖苷酸

在一些实施例中，可以使用例如甲醇和对甲苯磺酸保护所述3-羟基化合物(例如，oca)，例如，转化为甲酯。可以将受保护的化合物(例如oca-甲酯)用碳酸银和乙酰溴-α-d-葡糖醛酸甲酯(受保护的葡糖醛酸)处理，以提供受保护的3-o-葡糖苷酸(例如，受保护的oca-3-o-葡糖苷酸)，可以使用本领域已知的方法将其脱保护，以给出具有式i的3-o-葡糖苷酸(例如，oca-3-o-葡糖苷酸)。在一些实施例中，葡糖苷酸起始材料可被放射性标记。

在本披露的一些实施例中，具有式i的化合物可以被氚化。可以根据本领域已知的方法，例如，使用氚化的还原剂(如nabt4)从相应的3-、7-、11-或12-酮基化合物制备具有式i的氚化化合物。在这些实施例中的一个中，具有式i的化合物具有在c3位置处掺入的氚。在这些实施例中的一个中，具有式i的化合物具有在c11位置处掺入的氚。在这些实施例中的一个中，具有式i的化合物具有在c12位置处掺入的氚。在这些实施例中的一个中，氚可以在c7位置处掺入。

在一些实施例中，本披露涉及具有式i的24-o-葡糖苷酸。方案13中所示的方法基于奥贝胆酸(oca)作为起始材料，但可以应用于本披露的任何胆汁酸类似物，以制备具有式i-viii的24-o-葡糖醛酸化的化合物。

方案13.oca的[³h]oca-24-葡糖苷酸

如方案13中所示，可以使用氚化的还原剂(例如nabt4)从c7-酮基化合物制备具有式i的c7氚化化合物，例如[³h]oca。可以通过本领域已知的方法和本文所述的方法制备具有式i的放射性标记的和葡糖醛酸化的化合物(例如oca的[³h]oca-24-葡糖苷酸)。

在一些实施例中，具有一个或多个羧基或羟基基团的具有式i的化合物(例如，在c23位置处)，可以在碳酸银的存在下用受保护的葡糖醛酸(例如，乙酰溴-α-d-葡糖醛酸甲酯)处理以提供葡糖醛酸化的化合物(例如，中间体2)。可以将中间体2进行纯化或无需纯化即可用于下一步骤。酶催化的连续脱保护(水解)得到具有式i的葡糖醛酸化化合物，例如，[³h]oca-24-葡糖苷酸。可以用于脱保护的水解酶包括但不限于转移酶、水解酶和裂解酶。在一些实施例中，脱保护可以涉及las酶、csr酶、cal-b酶及其组合。

在一些实施例中，可以使用包括柱色谱法(例如，反相色谱法)的不同方法将具有式i-viii的化合物进行纯化。本披露的所有放射性标记的化合物可以通过不同的分析方法进行表征，该方法包括，例如质谱法、hplc和nmr(¹h、¹³c、hmbc(异核多键相关))。在一些实施例中，通过nmr光谱法分析具有式i-viii的化合物。氢和氘原子核在其磁性特性方面不同，因此可以通过nmr光谱法区分它们。在¹hnmr谱中将不会观察到氘核，并且相反地，在²hnmr谱中也不会观察到质子。如果在高度氘化样品的¹hnmr谱中观察到小信号，则这些信号被称为残余信号。它们可以用于计算分子中的氘化水平。在²hnmr谱中没有观察到类似的信号，因为与¹h分析相比，该技术的灵敏度低。氘核通常表现出与其类似的质子非常类似的化学位移。也可以通过¹³cnmr光谱法进行分析：氢(1/2)和氘(1)的不同旋转值导致了不同的分裂多重性。nmr光谱法可以用于确定分子的位点特异性氘化。在一些实施例中，通过¹h-nmr确定氘的掺入。在这些实施例中的一个中，本披露化合物中每个氘原子处的氘掺入是至少约52.5％(富集因子是至少约3500)。在这些实施例中的一个中，本披露化合物中每个氘原子处的氘掺入是至少约60％(富集因子是至少约4000)。在这些实施例中的一个中，本披露化合物中每个氘原子处的氘掺入是至少约67.5％(富集因子是至少约4500)。在这些实施例中的一个中，本披露化合物中每个氘原子处的氘掺入是至少约75％(富集因子是至少约5000)。在这些实施例中的一个中，本披露化合物中的氘掺入是至少约82.5％(富集因子是至少约5500)。在这些实施例中的一个中，本披露化合物中的氘掺入是至少约90％(富集因子是至少约6000)。在这些实施例中的一个中，本披露化合物中的氘掺入是至少约95％(富集因子是至少约6333.3)。在这些实施例中的一个中，本披露化合物中的氘掺入是至少约97％(富集因子是至少约6466.7)。在这些实施例中的一个中，本披露化合物中的氘掺入是至少约99％(富集因子是至少约6600)。在这些实施例中的一个中，本披露化合物中的氘掺入是至少约99.5％(富集因子是至少约6633.3)。

列举的方案和条件不旨在具有限制性。

药物组合物

“药物组合物”是含有活性剂(例如，具有式i-viii的同位素标记的化合物或其药学上可接受的盐)的配制品，该配制品呈适于向受试者施用的形式。

在一些实施例中，本披露涉及药物组合物，其包含具有式i、ii、iii、iv、v、vi、vii或viii的化合物和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。在一些实施例中，本披露涉及药物组合物，其包含具有式i的化合物和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。在一些实施例中，本披露涉及药物组合物，其包含具有式ii的化合物和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。在一些实施例中，本披露涉及药物组合物，其包含具有式iii的化合物和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。在一些实施例中，本披露涉及药物组合物，其包含具有式iv的化合物和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。在一些实施例中，本披露涉及药物组合物，其包含具有式v的化合物和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。在一些实施例中，本披露涉及药物组合物，其包含具有式vi的化合物和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。在一些实施例中，本披露涉及药物组合物，其包含具有式vii的化合物和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。在一些实施例中，本披露涉及药物组合物，其包含具有式viii的化合物和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。

在一个实施例中，该药物组合物处于散装形式或单位剂型。单位剂型是多种形式中的任一种，包括例如胶囊、iv袋、片剂、气雾剂吸入器上的单个泵或小瓶。单位剂量组合物中活性成分的量是有效量并且根据所涉及的具体治疗而变化。

本申请提供了药物组合物，其包含具有式i的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。本披露的药物组合物可以通过肠内、口服、透皮、肺部、吸入、口腔、舌下、腹膜内、皮下、肌肉内、静脉内、直肠、胸膜内、鞘内、鼻内、肠胃外或局部来施用。

具体地，片剂、包衣片剂、胶囊、糖浆、悬浮液、滴剂或栓剂用于肠内施用；溶液(优选油性或水性溶液)，此外，悬浮液、乳液或植入物用于肠胃外施用；并且软膏、乳膏或粉末用于局部应用。合适的剂型包括但不限于胶囊、片剂、小丸、糖衣丸、半固体、粉末、颗粒、栓剂、软膏、乳膏、洗剂、吸入剂、注射剂、巴布膏剂、凝胶、胶带剂、滴眼剂、溶液、糖浆、气溶胶、悬浮液、乳液，它们可以根据本领域已知的方法生产，例如如下所述：

片剂：将活性成分/砂助剂混合，将所述混合物压缩成片剂(直接压缩)，任选地在压缩之前将混合物的一部分制粒。

胶囊：将一种或多种活性成分和助剂混合以获得可流动粉末，任选地将粉末制粒，将粉末/颗粒填充到打开的胶囊中，将胶囊盖封。

半固体(软膏、凝胶、乳膏)：将一种或多种活性成分溶解/分散在水性或脂肪载体中；随后将水/脂肪相与互补的脂肪/水相混合，均化(仅乳膏)。

栓剂(直肠和阴道)：将一种或多种活性成分溶解/分散在通过加热液化的载体材料(直肠：载体材料通常是蜡；阴道：载体通常是受热的胶凝剂溶液)中，将所述混合物浇注成栓剂形式，退火并且从这些形式中撤出栓剂。

气溶胶：将活性剂分散/溶解在推进剂中，将所述混合物装入雾化器中。

用于肠胃外施用的合适配制品包括呈水溶性形式(例如，水溶性盐)的活性化合物的水溶液和碱性溶液。此外，可以施用活性化合物的悬浮液，如适当的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪油，例如芝麻油，或合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯或聚乙二醇-400(这些化合物可溶于peg-400)。水性注射悬浮液可含有增加悬浮液粘度的物质，包括例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇和/或葡聚糖，任选地，悬浮液还可以含有稳定剂。对于作为吸入喷雾剂的施用，可以使用其中活性成分溶解或悬浮在推进剂气体或推进剂气体混合物(例如，co2或氯氟烃)中的喷雾剂。活性成分在此有利地以微粉化形式使用，在这种情况下，可以存在一种或多种另外的生理学上可接受的溶剂，例如乙醇。可以借助常规吸入器施用吸入溶液。此外，还可以添加稳定剂。

用于肠胃外、皮内或皮下施用的溶液或混悬液可以包括以下组分：无菌稀释剂，如注射用水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗细菌剂，如苄醇或对羟苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，如乙二胺四乙酸；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节张力的试剂，如氯化钠或右旋糖。可以用酸或碱(如盐酸或氢氧化钠)调节ph。肠胃外制剂可以封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。

用于局部或透皮施用的剂型包括但不限于粉末、喷雾剂、软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、溶液、贴剂和吸入剂。在一个实施例中，在无菌条件下将活性成分与药学上可接受的载体并且与需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。

合适的赋形剂是适合于肠内(例如，口服)、肠胃外或局部施用并且不与本披露的产物反应的有机或无机物质，例如水；植物油；苄醇；亚烷基二醇；聚乙二醇；三乙酸甘油酯；明胶；碳水化合物，如乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇或淀粉(玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉)；纤维素制剂；和/或磷酸钙(例如磷酸三钙或磷酸氢钙)；硬脂酸镁；滑石；明胶；黄蓍胶；甲基纤维素；羟丙基甲基纤维素；羧甲基纤维素钠；聚乙烯吡咯烷酮和/或凡士林。如果希望，可以添加崩解剂，如上述淀粉以及还有羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、或海藻酸或其盐(如海藻酸钠)。助剂包括但不限于流动调节剂和润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸或其盐，如硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇。

适合于可注射用途的药物组合物包括无菌水溶液(在水溶性的情况下)或分散体以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、cremophoreltm(basf，新泽西州帕西波尼)或磷酸盐缓冲盐水(pbs)。在所有情况下，组合物必须是无菌的并且应在存在可易注射性的程度上是流动的。它在制造和储存条件下必须是稳定的并且必须防止微生物(如细菌和真菌)的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。可以例如通过使用如卵磷脂的包衣、通过在分散情况下保持所需粒度以及通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。防止微生物的作用可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如，对羟苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等)来实现。在许多情况下，将优选的是组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(如甘露醇、山梨糖醇)或氯化钠。可以通过在组合物中包含延迟吸收的药剂(例如，单硬脂酸铝和明胶)来实现可注射组合物的延长吸收。可以通过以下方式制备无菌注射液：根据需要，向在适当溶剂中的需要量的活性化合物中掺入以上列举的组分中的一种或多种的组合，接着进行过滤灭菌。通常，通过将活性成分掺入无菌媒介物中来制备分散体，所述无菌媒介物含有碱性分散介质和来自以上列举的那些的所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法为真空干燥和冷冻-干燥，这些方法产生活性成分的粉末加上来自其先前无菌-过滤溶液的任何另外的希望成分。本披露的化合物可例如用于生产注射制剂。所指示的制剂可以被灭菌和/或可以含有赋形剂，如润滑剂、防腐剂、稳定剂和/或润湿剂、乳化剂、用于影响渗透压的盐、缓冲物质、着色剂、调味剂和/或芳香剂。如果希望，它们还可含有一种或多种其他活性化合物，例如，一种或多种维生素。

对于通过吸入的施用，从含有合适的推进剂(例如，气体，如二氧化碳)的压力容器或分配器或者喷雾器中以气溶胶喷雾剂的形式递送活性成分。

也可以通过透粘膜或透皮的方式进行全身施用。对于透粘膜或透皮施用，在配制品中使用适于待被渗透的屏障的渗透剂。此类渗透剂通常是本技术领域熟知的，并且对于透粘膜施用，包括例如洗涤剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。透粘膜施用可以通过使用鼻喷雾剂或栓剂来实现。对于透皮施用，将活性化合物配制成如本领域中通常已知的软膏、油膏、凝胶、或乳膏。

本领域技术人员应理解，有时有必要依据例如患者的年龄和病症对剂量进行常规改变。该剂量也将取决于施用途径。

本领域技术人员应认识到某些施用途径的优点。施用的剂量将取决于接受者的年龄、健康和体重，同期治疗(如果有的话)的种类、治疗频率、和希望的作用的性质。

在一个实施例中，本申请的药物组合物是口服施用的。

口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用的药学上可接受的载体。它们可以被封装在明胶胶囊中或被压缩成片剂。出于口服治疗性施用的目的，可以向活性化合物中掺入赋形剂并且以片剂、锭剂、或胶囊的形式使用。口服组合物也可以使用用作漱口水的流体载体来制备，其中将在流体载体中的化合物口服施用并且漱口(swished)并且吐出或吞咽。可以包括药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料，作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可以含有以下成分中的任一种或具有类似性质的化合物：粘合剂，如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，如淀粉或乳糖；崩解剂，如海藻酸、primogel或玉米淀粉；润滑剂，如硬脂酸镁或sterotes；助流剂，如胶体二氧化硅；甜味剂，如蔗糖或糖精；或调味剂，如薄荷、水杨酸甲酯、或橙味调味剂。例如，口服组合物可以是片剂或明胶胶囊，其包含活性成分连同a)稀释剂，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素和/或甘氨酸；b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂还有c)粘合剂，例如硅酸铝镁、淀粉糊剂、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果希望，d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐、或泡腾混合物；和/或e)吸收剂、着色剂、调味剂和甜味剂。

糖衣丸核心具有合适的包衣，如果希望，这些包衣可耐受胃液。为此目的，可以使用浓缩的糖溶液，这些糖溶液可以任选地含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。

为了生产耐受胃液的剂型包衣或提供具有延长作用优点的剂型(修饰的释放剂型)，片剂、糖衣丸或丸剂可以包含内剂和外剂组分，后者相对于前者呈包封物的形式。这两种组分可以被肠溶层分开，所述肠溶层用来抵抗在胃中的崩解并且允许内组分完整地传入十二指肠中或延迟释放。多种材料可用于此类肠溶层或包衣，这样的材料包括许多聚合酸以及聚合酸与如虫胶、乙酰醇的材料的混合物，使用如邻苯二甲酸乙酰基纤维素、乙酸纤维素或邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素的合适纤维素制剂的溶液。可以将染料或颜料添加到片剂或糖衣丸包衣中，例如用于鉴定或以便表征活性化合物剂量的组合。合适的载体物质是适合于肠内(例如，口服)或肠胃外施用或局部施用并且不与本披露的化合物反应的有机或无机物质，例如水、植物油、苄醇、聚乙二醇、明胶、碳水化合物(如乳糖或淀粉)、硬脂酸镁、滑石和凡士林。

可用于口服的其他药物制剂包括由明胶制成的插接式胶囊(push-fitcapsule)以及由明胶和如甘油或山梨糖醇的增塑剂制成的密封式胶囊。插接式胶囊可以含有呈颗粒形式的活性化合物，这些活性化合物可以与填充剂(如乳糖)、粘合剂(如淀粉)和/或润滑剂(如滑石或硬脂酸镁)以及任选地稳定剂混合。在软胶囊中，活性化合物优选溶解或悬浮于合适的液体(如脂肪油或液体石蜡)中。

其中可掺入本披露组合物的用于口服施用的液体形式包括水溶液、适当调味的糖浆、水性或油性悬浮液、以及含食用油(如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油)的调味乳液，以及酏剂和类似的药用媒介物。用于水性悬浮液的合适的分散剂或悬浮剂包括合成胶和天然胶，如黄蓍胶、阿拉伯树胶、海藻酸盐、葡聚糖、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或明胶。

用于口服施用的剂型可以包含修饰的释放配制品。术语“立即释放”被定义为具有式i的化合物或其药学上可接受的盐在相对短的时间段(通常高达约60分钟)内从剂型中释放。术语“修饰的释放”被定义为包括延迟释放、延长释放和脉冲释放。术语“脉冲释放”被定义为药物从剂型的一系列释放。术语“持续释放”或“延长释放”被定义为具有式i的化合物或其药学上可接受的盐在延长的时间段内从剂型连续释放。

尤其有利的是以剂量单位形式配制口服或肠胃外组合物以便于施用和剂量统一。如本文所用，剂量单位形式是指作为针对有待治疗的受试者的单一剂量适合的物理上离散单位；每个单位含有经计算产生与所需药用载体相关的希望治疗效果的预定量的活性成分。对于本申请的剂量单位形式的规格决定于并且直接取决于通过活性成分的独特特征和有待实现的特定治疗效果。

在治疗应用中，根据本申请使用的药物组合物的剂量取决于以下因素而变化：除影响所选剂量的其他因素之外尤其是药剂，接受患者的年龄、体重和临床状况，以及施用疗法的临床医师或执业医师的经验和判断。

本披露的化合物的剂量可以在从约0.01mg/kg/天至约500mg/kg/天的范围内。在一个实施例中，日剂量优选在约0.01mg/kg与10mg/kg体重之间。

在这些实施例中的一个中，该组合物或配制品每剂型包含约0.1mg至约1500mg的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施例中，该配制品或组合物包含约1mg至约100mg的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施例中，该配制品包含约1mg至约50mg。在另一个实施例中，该配制品包含约1mg至约30mg。在另一个实施例中，该配制品包含约4mg至约26mg。在另一个实施例中，该配制品包含约5mg至约25mg。在一个实施例中，该配制品包含约1mg至约5mg。在一个实施例中，该配制品包含约1mg至约2mg。

药物剂的有效量是这样的量，该量提供如由临床医师或其他有资格的观察者注意到的客观上可识别的改进。

药物组合物可以与施用说明书一起包括在容器、试剂盒、包装、或分配器中。

含有本申请的游离形式、盐、和/或其固态形式的药物组合物可以通常已知的方式例如借助常规混合、溶解、制粒、糖衣丸制造、磨粉、乳化、胶囊化、包埋、或冻干方法来制备。可以常规方式使用一种或多种药学上可接受的载体来配制药物组合物，所述载体包含促进将活性成分加工成可药用制剂的赋形剂和/或助剂。当然，适当的配制品取决于所选的施用途径。

具有式i的化合物或其药学上可接受的盐的配制和施用技术可以在remington:thescienceandpracticeofpharmacy[雷明顿：药学科学与实践],第19版,马克出版公司(mackpublishingco.),宾夕法尼亚州伊斯顿(1995)或其任何后续版本中找到。

将活性成分与药学上可接受的载体一起制备，这些载体保护化合物免于从体内快速消除，如控制释放配制品，包括植入物和微囊化递送系统。可以使用可生物降解、生物相容的聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯、和聚乳酸。

用于制备此类配制品的方法对本领域技术人员而言是显而易见的。

施用方法

本披露的一些方面涉及使用具有式i的经氘化和/或放射性标记的胆汁酸衍生物(包括具有式ii、iii、iv、v、vi和vii的化合物)对各种肝、代谢、肾、心血管、胃肠道和癌症疾病、障碍或病症进行治疗、预防、改善或调节的方法。在一些实施例中，具有式i的化合物或其药学上可接受的盐用于改善代谢谱、安全性、耐受性和/或功效。

在一些实施例中，本申请涉及在有需要的受试者中调节fxr(例如，激活fxr)的方法，该方法包括施用治疗有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。

在一些实施例中，本披露涉及在有需要的受试者中对fxr介导的疾病或障碍进行治疗、预防或改善的方法，该方法包括施用治疗有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。

在一些实施例中，本申请涉及在有需要的受试者中调节tgr5(例如，激活tgr5)的方法，该方法包括施用治疗有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。

在一些方面，本披露涉及具有式i的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗或预防或改善tgr5介导的疾病或障碍。

在某些实施例中，本披露涉及在有需要的受试者中对fxr或tgr5介导的病症、疾病或障碍进行治疗或预防的方法，该方法包括施用包含治疗有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐的组合物。

在一个实施例中，本披露涉及对受试者的慢性肝病进行治疗或预防的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，本披露涉及治疗慢性肝病的方法。在一个实施例中，本披露涉及预防慢性肝病的方法。在一个实施例中，fxr介导的肝病选自胆汁淤积肝病(如又称原发性胆汁性胆管炎(pbc)的原发性胆汁性肝硬化(pbc))、原发性硬化性胆管炎(psc)、慢性肝病、非酒精性脂肪肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、丙型肝炎感染、酒精性肝病、由于进行性纤维化造成的肝损伤和肝纤维化。fxr介导的疾病的其他实例还包括门静脉高压、胆汁酸腹泻、高血脂症、高ldl-胆固醇、高hdl-胆固醇、高甘油三酯和心血管疾病。其他肝病包括脑腱黄瘤病(ctx)、药物诱导的胆汁淤积症、妊娠肝内胆汁淤积症、胃肠外营养相关的胆汁淤积症(pnac)、细菌过度生长或败血症相关的胆汁淤积症、自身免疫性肝炎、慢性病毒性肝炎、肝移植相关的移植物抗宿主疾病、活供体移植肝再生、先天性肝纤维化、胆总管结石病、肉芽肿性肝病、肝内或肝外恶性肿瘤、舍格伦综合征(sjogren'ssyndrome)、类肉状瘤病、威尔逊氏病(wilson'sdisease)、戈谢氏病(gaucher'sdisease)、血色素沉着症以及α1-抗胰蛋白酶缺乏症。

在一个实施例中，本披露涉及对受试者的胆汁淤积症的一种或多种症状(包括胆汁淤积症的并发症)进行治疗或预防的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，本披露涉及调节胆汁淤积症的一种或多种症状的方法。

具有式i的化合物或其药学上可接受的盐可用于治疗或预防肝内或肝外胆汁淤积症(包括但不限于胆道闭锁、产科胆汁淤积症、新生儿胆汁淤积症、药物诱导的胆汁淤积症、丙型肝炎感染引起的胆汁淤积症、慢性胆汁淤积肝病如原发性胆汁性肝硬化(pbc)以及原发性硬化性胆管炎(psc))的一种或多种症状。

在一个实施例中，本披露涉及增强受试者的肝再生的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，该方法增强针对肝移植的肝再生。

在一个实施例中，本披露涉及对受试者的纤维化进行治疗或预防的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。

因此，如本文所用，术语纤维化是指所有公认的纤维化障碍，包括由于病理症状或疾病导致的纤维化、由于物理创伤导致的纤维化(“创伤性纤维化”)、由于放射性损伤导致的纤维化，以及由于暴露于化学治疗剂导致的纤维化。如本文所用，术语“器官纤维化”包括但不限于肝纤维化、肾纤维化、肺纤维化和肠纤维化。

在一个实施例中，肾脏疾病是糖尿病性肾病、局灶性节段性肾小球硬化(fsgs)、高血压性肾硬化、慢性肾小球肾炎、慢性移植肾小球病、慢性间质性肾炎或多囊性肾病。

在一些实施例中，本披露涉及对受试者的心血管疾病进行治疗、预防或调节的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，心血管疾病选自动脉粥样硬化、动脉硬化、血脂异常、高胆固醇血症、高血脂症、高脂蛋白血症和高甘油三酯血症。

术语“高血脂症”是指血液中存在异常升高水平的脂质。高血脂症可以按至少三种形式出现：(1)高胆固醇血症，即升高的胆固醇水平；(2)高甘油三酯血症，即升高的甘油三酯水平；(3)混合型高血脂症，即高胆固醇血症和高甘油三酯血症的组合。术语“血脂异常”是指血浆中异常水平的脂蛋白，包括降低和/或升高水平的脂蛋白(例如，升高水平的ldl、vldl和降低水平的hdl)二者。

在一个实施例中，本披露涉及选自在受试者中降低胆固醇水平或调节胆固醇代谢、分解代谢、膳食胆固醇的吸收、以及胆固醇逆转运的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。

在另一个实施例中，本披露涉及对受试者的影响胆固醇、甘油三酯或胆汁酸水平的疾病进行治疗或预防的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。

在一个实施例中，本披露涉及降低受试者的甘油三酯的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。

在一个实施例中，本披露涉及对受试者中与胆固醇水平升高相关的疾病状态进行预防的方法。在一个实施例中，该疾病状态选自冠状动脉疾病、心绞痛、颈动脉疾病、中风、脑动脉硬化和黄瘤。

在一个实施例中，本披露涉及对受试者的脂质障碍进行治疗或预防的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。

在一个实施例中，本披露涉及对影响受试者的脂质代谢的疾病(即，脂肪代谢障碍)的一种或多种症状进行治疗或预防的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，本披露涉及对影响脂质代谢的疾病的一种或多种症状进行治疗的方法。在一个实施例中，本披露涉及对影响脂质代谢的疾病的一种或多种症状进行预防的方法。在一个实施例中，本披露涉及降低受试者的脂质积累的方法。

在一个实施例中，本披露涉及对受试者的胃肠疾病进行治疗、预防或调节的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，胃肠疾病选自炎症性肠病(ibd)、肠易激综合征(ibs)、细菌过度生长、吸收不良、放射后结肠炎和显微镜下结肠炎。在一个实施例中，该炎症性肠病选自克罗恩病和溃疡性结肠炎。

在一个实施例中，本披露涉及对受试者的肾脏疾病进行治疗、预防或调节的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，肾脏疾病选自糖尿病性肾病、局灶性节段性肾小球硬化(fsgs)、高血压性肾硬化、慢性肾小球肾炎、慢性移植肾小球病、慢性间质性肾炎和多囊肾病。

在一个实施例中，本披露涉及对受试者的代谢疾病进行治疗或预防的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，该代谢疾病选自胰岛素抵抗、高血糖症、糖尿病、糖胖症和肥胖症。在一个实施例中，糖尿病是i型糖尿病。在一个实施例中，糖尿病是ii型糖尿病。

糖尿病，通常称为多尿症，是指通常特征为在葡萄糖的产生和利用方面有代谢缺陷而导致无法保持身体内适当的血糖水平的疾病或病症。

在ii型糖尿病的情况下，疾病的特征为胰岛素抵抗，其中胰岛素丧失其在跨越宽的浓度范围内发挥其生物学作用的能力。这种对胰岛素反应性的抵抗导致肌肉中葡萄糖摄取、氧化和贮存的胰岛素激活不足，以及对脂肪组织中的脂类分解和肝中的葡萄糖产生和分泌的胰岛素抑制不足。所导致的病症是血糖升高，这也称作“高血糖症”。由于微血管和大血管疾病的风险增加，不受控制的高血糖与死亡率增加和过早死亡有关，这些疾病包括视网膜病变(由于眼睛中的血管损伤导致的视力受损或丧失)；神经病变(由于血管损伤神经系统导致的神经损伤和足部问题)；和肾病(由于肾脏中血管损伤导致的肾脏疾病)、高血压、脑血管疾病和冠心病。因此，控制葡萄糖稳态是治疗糖尿病的至关重要的途径。

胰岛素抵抗被假设为使高血压、葡萄糖耐受不良、高胰岛素血症、甘油三酯水平增加和hdl胆固醇降低、以及中心性肥胖症和全身性肥胖症的簇集联合。胰岛素抵抗与葡萄糖耐受不良、血浆甘油三酯的增加和高密度脂蛋白胆固醇浓度的降低、高血压、高尿酸血症、较小较密低密度脂蛋白颗粒、和高循环水平的纤溶酶原活化物抑制剂-1的结合已被称为“x综合征”。因此，提供了治疗或预防与胰岛素抵抗有关的任何病症(包括构成“x综合征”的疾病状态、病症或障碍的簇集)的方法。

在一个实施例中，本发明涉及对受试者的代谢综合征进行治疗、预防或改善的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的本披露的化合物或其药学上可接受的盐。

在一些实施例中，本披露涉及对受试者的癌症进行治疗、预防、改善或调节的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，癌症选自肝细胞癌(hcc)，也被称为恶性肝细胞瘤、胆管细胞癌、结直肠癌、胃癌、肾癌、前列腺癌、肾上腺癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、唾液腺癌、卵巢癌、子宫体癌和肺癌。

在这些实施例中的一个中，该肝细胞癌选自下组，该组由以下组成：早期肝细胞癌、非转移性肝细胞癌、原发性肝细胞癌、晚期肝细胞癌、局部晚期肝细胞癌、转移性肝细胞癌、缓解期肝细胞癌或复发性肝细胞癌。

在另一个实施例中，将选自索拉非尼、舒尼替尼、厄洛替尼或伊马替尼的至少一种药剂与本披露的结晶形式共施用以治疗癌症。在一个实施例中，将至少一种选自以下各项的药剂与本发明化合物共施用以治疗癌症：阿巴瑞克、阿地白介素、别嘌呤醇、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、贝伐单抗、卡培他滨、卡铂、顺铂、多西他赛、阿霉素、厄洛替尼、依西美坦、5-氟尿嘧啶、氟维司群、吉西他滨、醋酸戈舍瑞林、伊立替康、二甲苯磺酸拉帕替尼、来曲唑、亚叶酸、左旋咪唑、奥沙利铂、紫杉醇、帕尼单抗、培美曲塞二钠、卟吩姆钠、他莫昔芬、拓扑替康和曲妥珠单抗。

用于癌症的适当治疗取决于肿瘤来源的细胞的类型、恶性肿瘤的阶段和严重程度、以及促成肿瘤的遗传异常。

癌症分期系统描述癌症进展的程度。一般而言，分期系统描述肿瘤扩散的程度，并且将具有相似预后和治疗的患者分入同一分期组。一般而言，对于已变得有侵入性或转移的肿瘤，预后较差。

在一种类型的分期系统中，情况被分为四个阶段，用罗马数字i至iv表示。在i期，癌症常是局部的并且通常是可治愈的。ii期和iiia期癌症通常更晚期，并且可能已侵入周围组织并且扩散至淋巴结。iv期癌症包括已经扩散至淋巴结外部位的转移性癌症。

另一种分期系统是tnm分期，代表以下类别：肿瘤、结节和转移。在此系统中，恶性肿瘤根据各个类别的严重程度来描述。例如，t将原发肿瘤的程度从0至4分类，其中0代表不具有侵入活性的恶性肿瘤，并且4代表已从原始部位延伸侵入其他器官的恶性肿瘤。n将淋巴结受累的程度分类，其中0代表无淋巴结受累的恶性肿瘤，并且4代表伴有广泛淋巴结受累的恶性肿瘤。m将转移的程度从0至1分类，其中0代表无转移的恶性肿瘤，并且1代表具有转移的恶性肿瘤。

这些分期系统或这些分期系统的变型或者其他合适的分期系统可用于描述如肝细胞癌的肿瘤。取决于癌症的阶段和特征，只有很少的选择可用于治疗肝细胞癌。治疗包括手术、用索拉非尼治疗、和靶向疗法。一般来说，手术是用于早期局部肝细胞癌的第一线治疗。另外的全身治疗可用于治疗侵入性肿瘤和转移性肿瘤。

在一个实施例中，本披露涉及对受试者的胆结石进行治疗、预防或改善的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。

胆囊中胆结石的存在可能导致急性胆囊炎，这是一种炎性病症，其特征为胆囊中胆汁的滞留以及常由肠道微生物(主要是大肠杆菌和拟杆菌属物种)引起的继发感染。胆道的其他部分中胆结石的存在可能导致胆管阻塞，这可导致严重的病症，如上行性胆管炎或胰腺炎。

在一个实施例中，本披露涉及治疗、预防或改善胆固醇胆结石病的方法。

在一个实施例中，本披露涉及对受试者的神经疾病进行治疗或预防的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，该神经疾病是中风。

在一个实施例中，本披露涉及对参与胆汁酸稳态的一种或多种基因的表达水平进行调节的方法。

在一个实施例中，本披露涉及通过向细胞施用oca的结晶形式对细胞中的一种或多种选自cyp7αl和srebp-ic的基因的表达水平进行下调的方法。在一个实施例中，本披露涉及通过向细胞施用本发明的结晶形式对细胞中的一种或多种选自ostα、ostβ、bsep、shp、ugt2b4、mrp2、fgf-19、pparγ、pltp、apocii、和pepck的基因的表达水平进行上调的方法。

实现所希望的生物效应所需要的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐的量将取决于许多因素，如预期的用途、施用方式以及受者，并且最终将由负责的医师或兽医来判断。一般来说，用于治疗fxr介导的疾病和病症的典型日剂量例如可以预期在约0.01mg/kg至约100mg/kg的范围内。此剂量可以作为单一单位剂量或作为若干个单独的单位剂量或者作为连续输注来施用。类似的剂量将可适用于其他疾病的治疗、病症以及包括预防和治疗胆汁淤积性肝脏疾病的疗法。

在一些实施例中，本披露涉及使用有效量的具有式i的化合物(包括具有式ii、iii、iv、v、vi、vii和viii的化合物)或其药学上可接受的盐作为代谢或药代动力学探针的方法。在某些实施例中，本披露涉及使用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐作为代谢探针的方法。在某些实施例中，本披露涉及使用有效量的具有式i的化合物或其药学上可接受的盐作为药代动力学探针的方法。

本披露还涉及用于对疾病或病症(例如，由fxr或tgr5介导的疾病和病症)进行治疗、预防、改善或调节的药物的制造，其中该药物包含具有式i的化合物或其药学上可接受的盐。

本披露还涉及用于对疾病或病症(例如，由fxr或tgr5介导的疾病和病症)进行治疗、预防、改善或调节的药物的制造，其中该药物包含组合物，该组合物包含具有式i的化合物或其药学上可接受的盐或其药学上可接受的赋形剂。

除非另外规定，否则此处使用的所有百分比和比率都是按重量计。本申请的其他特征和优点从不同的实例中显而易见。所提供的实例说明了可用于实践本申请的不同组分和方法。这些实例不限制所要求保护的申请。基于本披露，技术人员可以鉴别和使用可用于实践本申请的其他组分和方法。

实例

实例1：d5-oca

方法1：

将通过用tpap/nmo氧化oca制备的3-酮基-oca(52.5g，125.6mmol)溶解于400ml的d2o中，并添加naod(40％在d2o中，35ml)。将混合物在90℃下搅拌4小时。分批添加nabd4(7.77g，185mmol)并在90℃下继续搅拌2小时。将该混合物冷却至室温，并用水性柠檬酸淬灭。将产物用etoac萃取(2x)。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，并浓缩。将材料吸收在1l水和10gnaoh中。将溶液用10％hcl缓慢酸化直到ph2。将沉淀物收集，并且用水洗涤，然后在真空中干燥。

将另一批3-酮基-oca(18.4g，44mmol)转化并与第一批合并。合并的批次具有约为95％的hplc纯度。通过柱色谱法获得纯的d5-oca(二氧化硅；dcm/meoh2％-10％)。将纯材料，d5-oca溶解于含有16gnaoh的3l水中，并用10％hcl(水溶液)将该溶液缓慢酸化直到ph2。将沉淀物过滤，并且用水洗涤，然后在真空中干燥(43g，61％)。化学纯度：99.4％；同位素纯度：>95％。¹hnmr(300mhz，cd3od)证实了这种化合物的身份(图1)。

方法2：

替代性地，可以通过使用nabh4还原二酮，将氘掺入位置2(2d)、4(2d)和6(1d)，以生成d5-oca。

实例2：d7-oca

将3,7-二酮-oca(100mg，0.24mmol)溶解在0.75ml的d2o中，并添加10滴naod(40％在d2o中)。将混合物在90℃下搅拌2小时，然后添加nabd4(21mg，0.50mmol)。在90℃再继续搅拌2小时。将该混合物冷却至室温，并用水性柠檬酸淬灭。将产物用etoac萃取(2x)。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，并浓缩。将粗材料通过柱色谱法进行纯化(二氧化硅；氯仿/hoac9:1)。将适当的级分收集并浓缩，在甲醇中再溶解，并用水沉淀。浓缩后获得呈白色固体的d7-oca(75mg，75％)。¹hnmr(300mhz，cd3od)证实了这种化合物的身份(图2)。

实例3：c23(d2)-oca

使用甲醇和hcl或对甲苯磺酸从oca制备oca-ome(甲酯)。在添加oca-ome(3.5g，8.1mmol)之前，将钠(0.4g，17.8mmol)添加至15ml的ch3od并完全溶解。将混合物在70℃下搅拌过夜。将溶剂蒸发，并添加新鲜的ch3od(15ml)。将混合物再回流6小时，并且冷却至室温。添加naod(40％在d2o中，1ml)，并将混合物搅拌过夜。浓缩后，将材料用2％hoac再溶解于氯仿中，并再次浓缩。将粗材料通过柱色谱法进行纯化(二氧化硅；dcm/meoh5％-10％)得到呈白色固体的d2-oca(2.6g，62％)。¹hnmr(300mhz，cd3od)证实了这种化合物的身份(图3)。

实例4：c3(d)-c7(d)-c23(d2)-oca

将3,7-二酮-(d2)oca(1.6g，3.8mmol)溶解于10ml的h2o中，并添加naoh(0.15g，3.8mmol)。将混合物加热至90℃，并添加nabd4(0.64g，15.3mmol)。在90℃再继续搅拌2小时。将该混合物冷却至室温，并用水性柠檬酸淬灭。将产物用etoac萃取(2x)。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，并浓缩。将粗材料通过柱色谱法进行纯化(二氧化硅；dcm/meoh5％-10％)得到呈白色固体的d4-oca(1.1g，69％)。¹hnmr(300mhz，cd3od)证实了这种化合物的身份(图4)。

实例5：c2(2d)-c4(2d)-oca

将如实例1所述制备的3-酮基-oca(5g，12.0mmol)溶解于40ml的d2o中，并添加naod(40％在d2o中，3.5ml)。将混合物在90℃下搅拌4小时。分批添加nabh4(0.67g，17.7mmol)并在90℃下继续搅拌2小时。将该混合物冷却至室温，并用水性柠檬酸淬灭。将产物用etoac萃取(2x)。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，并浓缩。将材料溶解于100ml水和1.0g的naoh中。将溶液用10％hcl(水溶液)缓慢酸化直到ph2。将沉淀物收集，并且用水洗涤，然后在真空中干燥。

实例6：(d5)-oca的氘化甘氨酸缀合物，d5-oca-o(d2)gly

将d5-oca(2.0g，4.7mmol)溶解于75mldmf中，并添加三乙胺(4.7g，47mmol)并将混合物搅拌5min。添加4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(3.9g，14.1mmol)，并将该混合物搅拌5min。添加d2-gly-ome·hcl(1.77g，14.1mmol)并继续搅拌过夜。将混合物倾倒入水中，并用etoac(2x)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，并浓缩。将粗材料通过柱色谱法进行纯化(二氧化硅；dcm/meoh3％-7％)，得到呈白色泡沫的d5-oca-o(d2)gly-ome(1.6g，68％)。

将d5-oca-o(d2)gly-ome(1.6g，3.2mmol)溶解于20ml的ch3od中，并添加naod(40％在d2o中，1ml)。将混合物搅拌1小时并用柠檬酸淬灭(5g在100ml水中)。将产物用etoac萃取(2x)。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，并浓缩。将材料用2当量的naoh吸收在水中。将该溶液用1nhcl酸化至ph1，并将沉淀物收集，并且在真空中干燥，得到呈白色固体的d5-oca-o(d2)gly(1.0g，64％)。¹hnmr(300mhz，cd3od)证实了这种化合物的特身份(图5)。

实例7：(d5)-oca的氘化牛磺酸缀合物，d5-oca-o(d4)tau

将d5-oca(1.65g，3.87mmol)、d4-牛磺酸(0.50g，3.87mmol)、dipea(1.0g，7.74mmol)和eedq(0.96g，3.87mmol)溶解于25mldmf中，并在90℃下搅拌2.5小时。将该混合物冷却至室温，并添加5mlnaoh。将混合物浓缩并用甲苯汽提两次。将残余物溶解于水(40ml)中并用乙酸乙酯(3×)洗涤。将水层用6n的hcl酸化至ph1，并用乙醚(3×)和乙酸乙酯(3×)洗涤。将水层部分浓缩直到一些产物油出现。允许混合物静置一段时间，并将水从油性产物中倾析出。将油性产物浓缩并用ch3cn/meoh汽提两次。将灰白色固体通过rp-isco(rp＝反相)进行纯化。将适当的级分收集，浓缩并用ch3cn/meoh汽提两次，得到呈白色固体的d5-oca-o(d4)tau(1.3g，62％)。¹hnmr(300mhz，cd3od)证实了这种化合物的身份(图6)。

实例8：oca-3-o-葡糖苷酸

步骤1：oca甲酯

将oca(212.7mg，0.51mmol)、无水甲醇(6ml)和对甲苯磺酸(19.6mg，0.11mmol)的溶液超声处理2小时，在此时该反应完成(利用tlc)。将溶剂经由温和的氮气蒸发，并将残余物在真空(在室温下)中干燥30分钟。填充氯仿(8ml)和饱和水性碳酸氢钠(5.2ml)，并分离水层。将有机层依次用水(5ml)和盐水(5ml)洗涤。有机层经硫酸钠干燥，并过滤。将滤液通过旋转蒸发进行浓缩，以得到呈透明油的oca-甲酯(227mg，100％产率)。¹hnmr证实了这种化合物的身份。

步骤2：中间体1的合成

将oca-甲酯(227mg，0.52mmol)在无水甲苯(8ml)中的溶液用碳酸银(672.7mg，2.4mmol)和乙酰溴-a-d-葡糖醛酸甲酯(1034.9mg，2.6mmol)处理。将所得溶液在室温下搅拌四天，在此时该反应完成(利用hplc)。将反应混合物通过1.0μmptfe注射器式过滤器过滤，并将该注射器式过滤器用乙酸乙酯(2x5ml)洗涤。将经合并的滤液经由旋转蒸发进行蒸发，并将残余物通过硅胶快速柱色谱法进行纯化以得到粗中间体1(183mg)。通过¹hnmr、¹³cnmr和hmbcnmr确认中间体1的结构。如通过在c3质子(3.45ppm)和1’异头碳(99ppm)之间的hmbc偶联表明，葡糖苷酸在3位置中。

步骤3：oca-3-o-葡糖苷酸的合成

将中间体1(150mg，0.2mmol)在甲醇(12ml)中的溶液用6.5ml水性2mlioh(13mmol)处理。将所得溶液在室温下搅拌2小时，在此时该反应完成(利用tlc)。将溶剂经由缓慢的氮气流蒸发。添加水(2ml)并逐滴添加浓盐酸，直到溶液的ph值为4-5(如通过窄范围的ph试纸所测量的)。将溶剂经由旋转蒸发进行蒸发，并将所得残余物在真空中干燥过夜。将粗产物在3ml的0.1％(v/v％，在水中的乙酸)中的浆液应用于预洗涤(用3个柱体积的甲醇，然后用5个柱体积的在水中的0.1％乙酸洗涤)的10克c18柱体上。经将经合并的含有产物的级分(如通过tlc确定)经由旋转蒸发进行蒸发，并在真空中干燥，以得到oca-3-o-葡糖苷酸(64mg，0.1mmol，50％产率来自中间体1，10％的总产率来自oca)。通过¹hnmr分析oca-3-o-葡糖苷酸(表1和图7)。

表1：oca-3-o-葡糖苷酸的¹hnmr

600mhznmr

实例9：[³h]oca-24-葡糖苷酸

步骤1：[³h]oca的合成

将7-酮(217.6mg，0.52mmol)在水(2.4ml)中的溶液和50％的naoh水溶液(0.21ml)加热至90℃以得到溶液a。将所得溶液转移至含有nabt4(7.4mg，0.19mmol，49mci)的干燥反应管中。将该管密封并在90℃下加热1小时。添加另外未标记的nabh4(75mg，2.0mmol)，并在90℃下再继续加热3小时。将所得混合物冷却至室温，并用乙酸正丁酯(3ml)与柠檬酸(1.329g，6.92mmol)在水(1.7ml)中的溶液的混合物进行稀释。分离各层，并弃去水相。使用240.6mg7-酮和5.7mg的nabt4重复该反应。将来自两个反应的经合并的有机层经由硅胶快速柱色谱法进行蒸发和纯化(用1/2(v/v，己烷/乙酸乙酯)洗脱)，以得到[³h]-oca(198mg，0.47mmol，4.8mci，6％产率来自nabt4，43％产率来自7-酮)。进行oca标准品的hplc/uv色谱和[³h]-oca的放射-hplc色谱。

步骤2：中间体2的合成

将[³h]-oca(198mg，0.47mmol，4.8mci)和未经标记的oca(200mg，0.48mmol)在无水dmf(40ml)中的溶液用碳酸银(754.4mg，2.7mmol)和乙酰溴-a-d-葡糖醛酸甲酯(485.4mg，1.2mmol)处理。将所得溶液在室温下搅拌四天，此时组成是21％的产物、71％的[³h]-oca和8％的副产物(利用放射-hplc)。将反应混合物通过0.45μmptfe注射器式过滤器过滤，并将注射器式过滤器用乙酸乙酯(2x10ml)洗涤。将经合并的滤液经由旋转蒸发进行蒸发，并将残余物经由硅胶快速柱色谱法进行纯化。将经合并的含有产物的级分经由旋转蒸发进行蒸发，得到粗中间体2(168mg，0.23mmol，0.87mci，80％纯度，具有20％[³h]-oca，利用放射-hplc)，将其无需进一步纯化而用于下一步骤。通过¹hnmr、¹³cnmr和hmbcnmr确认未标记的中间体2的结构。

步骤3：中间体3的合成

将中间体2(168mg)在dmso(23ml)和93ml的25mm柠檬酸缓冲液(ph＝5)中的溶液用las酶(供应商＝奥德里奇公司(aldrich)，1.245g)和csr酶(供应商＝日本和光化学公司(wakochemical)，1.209g)处理。将所得溶液在40℃下加热2小时，在此时该反应完成(利用放射-hplc)。将所得混合物冷却至室温，并将其应用于预洗涤(用3个柱体积的甲醇，然后用5个柱体积的在水中的0.01％乙酸洗涤)的10克c18sep-pak柱体上。依次用(每种3个柱体积)在水中的0.01％甲酸，、80/20、50/50、40/60、30/70、20/80和10/90(v/v％，在水中的0.01％甲酸/乙腈)，然后用纯乙腈洗涤柱体。将经合并的含有产物的级分(如利用放射-hplc确定)经由旋转蒸发进行蒸发，并在真空中干燥，以得到中间体3(72.3mg，0.12mmol)。

步骤4：[³h]-oca-24-葡糖苷酸的合成

将中间体3(72.3mg，0.12mmol)在dmso(6.4ml)和70ml的25mm柠檬酸缓冲液(ph＝5)中的溶液用cal-b酶(供应商奥德里奇公司，42.3mg)处理。将所得溶液在40℃下加热3小时，在此时该反应完成(利用放射-hplc)。将所得混合物冷却至室温，并将其应用于预洗涤(用3x柱体积的甲醇，然后用5个柱体积的在水中的0.01％乙酸洗涤)的10克c18sep-pak柱体上。依次用(每种3个柱体积)在水中的0.01％甲酸，90/10、80/20、70/30、60/40、50/50和40/60(v/v％，在水中的0.01％甲酸/乙腈)洗涤柱体。将经合并的含有产物的级分(如利用放射-hplc确定)经由旋转蒸发进行蒸发，并在真空中干燥以得到[³h]-oca-24-葡糖苷酸(39mg，0.065mmol，14％的总产率来自[³h]-oca)。通过¹hnmr(表2和图8)和hmbcnmr确认[³h]-oca-24-葡糖苷酸的结构。用于oca-24-葡糖苷酸甲酯和[³h]oca-24-葡糖苷酸的¹hnmr谱(3.0–5.0ppm区域的扩展)的比较图(图9)表明甲酯质子(oca-24-葡糖苷酸甲酯中，在3.78ppm处的单峰)不存在于[³h]oca-24-葡糖苷酸中。

表2：[³h]-oca-24-葡糖苷酸的¹hnmr

600mhznmr

实例10.[¹⁴c-24]oca

将3,7-二-tfa-oca(5.6g，9.1mmol)溶解于四氯化碳(112ml)中，并在70-75℃下且在光存在下，在pb(oac)4和碘的存在下进行搅拌。反应完成后，将混合物冷却，用水性亚硫酸氢钠洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩成残余物。将该残余物在硅胶上进行色谱分离，生成3,7-二-tfa-碘化物中间体(3.2g，4.61mmol)。通过将中间体溶解于甲醇中，并用水性碳酸钾处理来去除tfa保护基团，从而在二氯甲烷中萃取处理后生成二醇中间体(1.85g，3.68mmol)。将二醇中间体(1.3g，2.59mmol)溶解于dmf中，并用[¹⁴c]氰化钾(1.1当量，2.85mmol)处理。反应完成后，进行水性处理并用二氯甲烷萃取，以生成腈中间体(1.0g，2.49mmol)。将腈中间体在乙醇中的10wt％的氢氧化钠中回流。反应完成后，将混合物浓缩并用水稀释。将[¹⁴c-24]oca通过用柠檬酸调节ph值，用乙酸乙酯萃取，并浓缩至固体(1.0g,2.38mmol)进行分离。

实例11.[¹⁴c-24]100

将3,7,11-三-tfa-100(5.0g,6.9mmol)溶解于四氯化碳(100ml)中并在70℃-75℃下且在光的存在下，在pb(oac)4和碘的存在下进行搅拌。反应完成后，将混合物冷却，用水性亚硫酸氢钠洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩成残余物。将该残余物在硅胶上进行色谱分离，以生成3,7,11-三-tfa-碘化物中间体(2.8g，3.45mmol)。通过将中间体溶解于甲醇中，并用水性碳酸钾处理来去除tfa保护基团，从而在二氯甲烷中萃取处理后生成三醇中间体(1.45g，2.79mmol)。将三醇中间体溶解于dmf中，并用[¹⁴c]氰化钾(1.1当量，3.07mmol)处理。反应完成后，进行水性处理并用二氯甲烷萃取，以生成腈中间体(1.0g，2.48mmol)。将腈中间体在乙醇中的10wt％的氢氧化钠中回流。反应完成后，将混合物浓缩并用水稀释。将[¹⁴c-24]100通过用柠檬酸调节ph值，用乙酸乙酯萃取，并浓缩至固体(1.0g，2.33mmol)进行分离。

实例12：具有高比活性的[¹⁴c]oca(在105mci标度上进行合成)。

步骤1：化合物c2的制备

将二异丙胺和四氢呋喃(thf)在大约-20℃下、在氩气下搅拌。将正丁基锂缓慢添加，并将混合物在冷却至大约-70℃之前在大约-20℃下进行搅拌。添加氯三甲基硅烷并搅拌混合物。将溶解于thf中的化合物c1缓慢添加，并在大约-70℃下搅拌，并然后温热至大约-50℃并进一步搅拌。添加水性碳酸氢钠，并将混合物温热至室温。将水层分离，并用乙酸乙酯洗涤。将有机层合并，并用水性碳酸氢钠、水和盐水洗涤，并经硫酸钠干燥。将溶液过滤、用甲苯洗涤、旋转蒸发并在真空下干燥，以产出呈黄色油状物的化合物c2。

步骤2：化合物[¹⁴c]c3的制备

将[1-¹⁴c]乙醛、化合物c2和二氯甲烷在大约-70℃下、在氮气下搅拌。缓慢添加醚合三氟化硼，并将该反应在大约-70℃下搅拌，并然后在室温下搅拌过夜。使氮气鼓泡通过溶液。然后将该溶液在冰浴中冷却，并添加水性碳酸氢钠。将水层分离并用二氯甲烷洗涤。将有机层合并，并经硫酸钠干燥。将溶液过滤，旋转蒸发，并将残余物通过快速色谱法(二氧化硅，正己烷:乙酸乙酯)进行纯化。将该溶液旋转蒸发，添加甲醇并旋转蒸发，以产出呈胶状的[¹⁴c]c3。

步骤3：化合物[¹⁴c]c4的制备

将化合物[¹⁴c]c3、甲醇和氢氧化钠在大约45℃下搅拌。将该反应冷却，部分旋转蒸发以去除甲醇，并添加水。将该溶液在冰浴中冷却并用水性磷酸酸化。将混合物用二氯甲烷萃取。将有机层合并，并经硫酸钠干燥。将溶液过滤、旋转蒸发并在真空下干燥，以产出呈固体的化合物[¹⁴c]c4。步骤4：[¹⁴c]oca酮c5的制备

将[¹⁴c]c4溶解于氢氧化钠中，添加5％钯碳，并在室温下、然后在大约115℃下氢化。将反应冷却至室温，过滤并在冰中冷却。将溶液用浓盐酸酸化，并用二氯甲烷萃取。将二氯甲烷溶液经硫酸钠干燥，过滤并旋转蒸发。将残余物溶解于乙醇乙腈:水中，以给出含有[¹⁴c]oca酮c5的溶液。将该溶液通过hplc(c18柱，盐酸水溶液:乙腈)进行纯化。将该溶液旋转蒸发，添加水，并将该溶液再次旋转蒸发。将固体在真空下干燥，以产出[¹⁴c]oca酮c5。

放射性标记的前体[¹⁴c]oca酮c5的质量被认为对于[¹⁴c]ocac6药物物质的质量是至关重要的，并因此根据表3中给出的结果进行控制。

表3.用于[¹⁴c]ocac6合成的关键中间体

步骤5：[¹⁴c]ocac6的制备

将[¹⁴c]oca酮c5悬浮于2m氢氧化钠中，并加热至大约80℃。添加硼氢化钠在水中的溶液，并将所得反应混合物在大约100℃下加热。通过tlc监测反应进程。将水和二氯甲烷添加至反应混合物。为淬灭该反应，在搅拌的同时缓慢添加正磷酸，直到无泡腾发生且无固体残留。将水层分离并用二氯甲烷萃取。将有机层合并，经硫酸钠干燥、过滤并蒸发，以产出呈白色固体的粗[¹⁴c]ocac6。将粗[¹⁴c]ocac6溶解于最小体积的乙酸乙酯中，并用等体积的庚烷稀释。将溶液加载到硅胶柱上，并用庚烷:乙酸乙酯(在乙酸乙酯中1％乙酸)洗脱。将级分收集并通过tlc分析。将含有[¹⁴c]ocac6的级分合并，用水洗涤，用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩以去除溶剂。

将来自快速柱中的材料溶解于二氯甲烷中，并用quadrapuretu钯清除剂搅拌至少16小时。将该清除剂通过过滤去除并在减压下浓缩滤液以去除溶剂。将来自滤液的材料使用制备型hplc(c18柱，用5mm磷酸钠:乙腈:甲醇洗脱)进一步纯化。将含有[¹⁴c]ocac6的级分合并，并将有机溶剂在减压下去除。将剩余的水溶液用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯萃取物合并，用盐水洗涤，并在减压下分批去除溶剂。

将纯化的[¹⁴c]ocac6在搅拌下溶解于0.2m的氢氧化钠中。将溶液过滤、用水洗涤并在室温下储存。分开地，搅拌和过滤0.2m盐酸。将[¹⁴c]ocac6在氢氧化钠中的溶液逐滴添加至盐酸中。将所得悬浮液搅拌，并将固体通过离心收集。将该固体用水洗涤，离心，并然后将该固体转移至烧结漏斗中，并在抽吸下进行干燥。所得干燥的产物是具有高比活性的[¹⁴c]ocac6。

将[¹⁴c]oca通过质谱、hplc和¹hnmr进行表征。数据表明，该技术合成的终产物，[¹⁴c]oca药物物质具有99.6％的化学纯度和98.0％的放射化学纯度，其被认为具有用于临床用途的合适的质量。该批次也满足比活性需求(获得的结果为299.4kbqmg-1)。

将获得自[¹⁴c]oca(图10)的¹hnmr谱与获得自oca参考材料(图11)的¹hnmr谱进行比较。

针对[¹⁴c]oca的质谱(meoh:0.5％氨，9:1，10μg/ml，20μl/mininf，es-，锥孔＝85v，温度＝80℃)：

化学式(未标记的):c26h44o4

准确质量:420.32

针对参考标准oca的质谱(meoh:0.5％氨，9:1，10μg/ml，20μl/mininf，es-，锥孔＝85v，温度＝80℃)：

实例13：临床研究

本研究的目标是确定oca的绝对生物利用度，并评估健康男性受试者对oca的吸收、分布、代谢和排泄。另外，对oca和碳-14([¹⁴c]-oca的口服药代动力学(pk)，以及[¹⁴c]-oca的静脉内(iv)药代动力学(pk)进行评估。

简化的研究型医药产品档案(simpd)描述了用于静脉施用的[¹⁴c]-oca溶液(20μg/ml)、胶囊中的[¹⁴c]-oca药物和oca片剂。本研究使用非放射性标记的oca药物物质和药物产品(oca片剂(25mg))。

为了获得具有临床使用所需的比活性的[¹⁴c]oca，[¹⁴c]oca在高比活性下合成，并且然后使用非放射性标记的oca进行放射性稀释，以提供给提议的临床试验使用的具有正确的比活性的最终[¹⁴c]oca药物物质。上述合成在105mci标度上进行。[¹⁴c]oca高比活性组分可以按[¹⁴c]oca与oca大约1:6的比率与oca冷组分组合，以产生[¹⁴c]oca药物物质，该药物物质具有在临床试验或其他研究中用于静脉施用(例如，20μg/ml)或口服施用的[¹⁴c]-oca溶液所需的比活性。然后，该材料可以进一步以[¹⁴c]oca与oca1:2的因子(总1:12)进行稀释，以产生[¹⁴c]oca药物物质，该药物物质具有用于在临床试验或其他研究中的胶囊中的[¹⁴c]oca药物所需的比活性。

oca的绝对生物利用度

绝对生物利用度是指施用剂量的无改变地吸收到全身循环中的百分比。迄今为止，人类受试者的数据表明，oca的pk谱与胆汁酸预期的谱一致。存在吸收迅速，随后与甘氨酸和牛磺酸广泛缀合(代谢)以分别形成经历广泛肝肠循环的糖苷-oca和牛磺-oca。血浆浓度在食物摄入后不久显著增加，与胆囊排空进入十二指肠一致。一小部分的缀合物随后被解缀合，在结肠中重新形成母体药物(oca)。值得注意的是，糖苷-oca和牛磺-oca已被证明具有与母体药物相同的药理学作用，因此，它们的血浆pk谱值得关注。本研究还研究了总代谢物谱。

(a)ivpk作为绝对生物利用度评估的一部分

第1部分的pk目标是确定oca的绝对生物利用度，确定[14c]oca微量示踪剂剂量的静脉内(iv)pk，并评估oca的口服pk。在第1部分中，受试者被施用口服剂量(方案a：25mgoca片剂)，然后在口服剂量施用1小时45分钟后施用iv微量示踪剂剂量(方案b：100μg[14c]-oca)。15分钟iv输注在口服剂量的估计的tmax(2小时)处结束。

总放射活性的平均血浆浓度如图12所示，而[¹⁴c]-oca的平均血浆浓度如图13所示。在完成iv给药后测量血浆中的最高放射活性浓度，并且4小时内oca浓度迅速下降。在最初的下降之后，由于肝肠循环，观察到低水平的oca延长谱和总放射活性。总放射活性的浓度在36小时和60小时的测量中显示出暴露峰值，这可能是由于饭后胆囊释放的缀合物所致。

表4总结了[¹⁴c]-oca的药代动力学参数和总放射活性。在暴露超过72小时时，[¹⁴c]-oca的auc0-t占总放射活性的大约20％，表明oca缀合物(糖苷-oca，牛磺-oca和潜在的其他代谢物)的形成占循环放射活性的大部分。此外，[¹⁴c]-oca显示中等清除值和相对较低的分布体积。

表4：iv血浆药代动力学参数的平均值(sd)：方案b，第1研究部分：pk群体(n＝5)

auc0-t＝可定量分析物从时间0到最后取样时间的浓度相对于时间的曲线下面积；cl＝总血浆清除率；cmax＝血浆中观察到的分析物的最大浓度；iv＝静脉内；n/a＝不适用；oca＝奥贝胆酸；vss＝稳态下的分布体积；vz＝分布体积；方案b＝15分钟iv输注100μg[¹⁴c]-oca

(b)口服pk作为绝对生物利用度评估的一部分

为了评估口服pk，在口服剂量(方案a：25mgoca)后测量oca及其缀合物的血浆浓度。随着时间的推移，oca的平均(sd)血浆浓度如图14所示，pk参数如表5所示。oca被迅速吸收；中值tmax为0.5小时。在cmax之后，4小时内oca浓度迅速下降，其与oca的iv谱一致。随后的oca浓度在给药后长达72小时平均仍低于cmax的10％。在72小时内观察到oca的延长谱(图4)。母体oca的这种低水平持续性很可能是由于回肠和结肠内共生细菌对糖苷-oca和牛磺-oca进行了解缀合，然后是oca的再吸收。

图15显示了总oca(oca、糖苷-oca和牛磺-oca之和)随时间的平均(sd)血浆浓度(注：总oca计算为每个时间点处的oca、糖苷-oca和牛磺-oca浓度之和，每个时间点处的糖苷-oca和牛磺-oca浓度表示为oca的质量当量)。表5总结了oca、糖苷-oca、牛磺-oca和总oca的药代动力学参数。与[¹⁴c]-oca结果一致，总oca的最大暴露发生在餐后，与胆囊释放和肝肠再循环一致，导致在长达给药后72小时观察到暴露水平。基于总oca(auc0-t)的总体暴露，糖苷-oca和牛磺-oca是暴露的主要成分，其中来自母体(oca)的贡献最小(小于10％)。

表5：平均(sd)口服血浆药代动力学参数(方案a，第1研究部分：pk群体(n＝5))

auc0-t＝可定量分析物从时间0到最后取样时间的浓度相对于时间的曲线下面积；cmax＝血浆中观察到的分析物的最大浓度；f＝如通过对于口服给药的剂量标准化auc/对于iv给药的剂量标准化auc的比率确定的绝对生物利用度；糖苷-oca＝奥贝胆酸的甘氨酸缀合物；oca＝奥贝胆酸；牛磺-oca＝奥贝胆酸的牛磺酸缀合物；tmax＝最大血浆浓度的时间

^a总oca计算为每个时间点处的oca、糖苷-oca和牛磺-oca浓度之和，每个时间点处的糖苷-oca和牛磺-oca的浓度表示为oca的质量当量

^b中值和范围

注：方案a是单次口服剂量为用240ml的水施用的25mgoca片剂

绝对生物利用度通过用于口服给药的剂量标准化的auc与用于iv给药的剂量标准化的auc的比率来确定。如表5所示，oca的平均绝对生物利用度(f)是大约17％。生物利用度的该相对较低值与胆汁酸进入肝脏(oca作用的主要部位)的典型的有效摄取相一致。胆汁酸的pk结果与预期一致。oca在肠中被迅速吸收，并且在肝脏中被吸收，并与甘氨酸和牛磺酸缀合。糖苷-oca和牛磺-oca是暴露的主要成分，其中来自母体(oca)的贡献最小。肝肠再循环产生延长谱，其中在饭后发生最大的暴露。

第1部分(绝对生物利用度)的结果表明，oca的口服生物利用度为17％。在口服剂量为25mg的oca和iv微量示踪剂剂量为100μg的[¹⁴c]-oca后，随着缀合物(糖苷-oca和牛磺-oca)的浓度增加并持续超过72小时，总放射活性和[¹⁴c]-oca的浓度在最初4小时内迅速下降。餐后总oca(oca、糖苷-oca和牛磺-oca之和)的暴露达到高峰，与胆囊释放和肝肠循环一致。总之，这些数据表明，oca在肠内迅速吸收，并且在肝内吸收，在肝中在经由胆汁排泄前与甘氨酸和牛磺酸缀合。

质量平衡和代谢物鉴定(oca的吸收、分布、代谢和排泄)(健康男性受试者)

大鼠的临床前质量平衡和放射性标记的单剂量pk研究检查了oca及其代谢物的胆汁、尿液和粪便排泄。这些结果表明，单次口服施用后自[¹⁴c]oca衍生的放射活性主要在粪便中排泄(主要是由于广泛的胆汁排泄)，并且oca的排泄似乎与天然胆汁酸的排泄一致。这项研究试图确认人中的消除途径。

第2部分的pk目标是口服25mg剂量的[¹⁴c]-oca后，评估来自排泄物的质量平衡回收率，并评估血浆、尿液和粪便样本中[¹⁴c]-oca的代谢物谱。第2部分还评估了总放射性在血细胞中的分布程度，并鉴定了占10％以上的循环总放射活性的代谢物。

(a)口服药代动力学

随着时间的推移，血浆中总放射活性和总oca的浓度显示在图16(注：总oca计算为每个时间点处的oca、糖苷-oca和牛磺-oca浓度之和，每个时间点处的糖苷-oca和牛磺-oca浓度表示为oca的质量当量)和图17(注：总oca计算为每个时间点处的oca、糖苷-oca和牛磺-oca的浓度，每个时间点处的糖苷-oca和牛磺-oca的浓度表示为oca的质量当量。总放射活性的单位是oca的质量当量(即ng-eqoca/ml)。这些浓度相差的量一致，表明存在循环的oca代谢物，而不是糖苷-oca和牛磺-oca。基于放射活性代谢谱、质谱和葡糖苷酸代谢物的可信标准，鉴定了另外两种oca代谢物：oca-3葡糖苷酸和oca-24葡糖苷酸。

在表6中总结了oca和其缀合物以及总放射活性的药代动力学参数。与第1部分观察到的结果相似，oca被迅速吸收；中值tmax为1.25小时。在cmax之后，前4小时内oca浓度迅速下降。总oca(包括缀合物)的最大暴露发生在餐后，其与胆囊释放和肝肠再循环一致，导致在大约4周采样时间段内观察到暴露水平。

表6：血浆药代动力学参数的均值(sd)：方案c，第2研究部分：pk群体，(n＝8)

auc0-t＝可定量分析物从时间0到最后取样时间的浓度相对于时间的曲线下面积；cmax＝血浆中观察到的分析物的最大浓度；糖苷-oca＝奥贝胆酸的甘氨酸缀合物；oca＝奥贝胆酸；牛磺-oca＝奥贝胆酸的牛磺酸缀合物；tmax＝最大血浆浓度的时间

注：方案c＝25mg口服剂量的[14c]-oca

^a总oca计算为每个时间点处的oca、糖苷-oca和牛磺-oca浓度之和，每个时间点处的糖苷-oca和牛磺-oca浓度表示为oca的质量当量

^b中值和范围

(b)质量平衡

在接受口服[¹⁴c]-oca的受试者的尿液和粪便中放射活性的平均累积回收率(累积％ae(排泄量))示于图18中。在单次口服剂量为25mg的[¹⁴c]-oca后，在住院患者采样期结束时(给药后504小时)，从尿液和粪便中回收了所施用的总放射活性的平均75.1％(范围在28.3％和97.5％之间)。从尿液中回收了总放射活性的平均2.83％(范围在1.57％至4.00％)，并在研究性产品施用后的前312小时内在尿液中回收了大多数的药物相关性物质。在给药后504小时从粪便中回收了平均72.3％(25.2％-95.9％)。然而，由于仅1名受试者在504小时实现了累积回收率大于90％，其他7名受试者在给药后504小时(7/8的受试者直到816小时，3/8的受试者直到给药后888小时，2/8的受试者直到给药后1152小时)后进行另外的家庭粪便收集。来自每名受试者的总回收率(合并的尿液和粪便，采样长达1152小时)范围在从施用的放射活性的76.31％至111.28％。在1152小时，从粪便中回收了所施用的总放射活性的平均87.0％(范围在73.2％至107％)。在用研究性产品给药552小时之内，回收粪便中的大多数药物相关性物质。在第2部分(质量平衡)中，质量平衡数据证实了oca的主要消除途径是通过粪便。在整个收集期间内，从粪便中回收了所施用的放射活性的平均87％，从尿液中回收了较少的百分比(＜3％)。

等效形式

本领域技术人员将认识到或能够仅使用常规实验就确定本文具体描述的具体实施例的许多等效物。此类等效物旨在被涵盖于以下权利要求的范围内。