本发明属于中药炮制技术领域,具体而言,涉及一种利用复合菌种发酵制备淡豆豉的方法。
背景技术:
淡豆豉为豆科植物大豆glycinemax(l.)merr.成熟种子与青蒿、桑叶共同发酵加工而成,是《中国药典》自1963年版至2015年版一直收载的品种,具有解表除烦,宣发郁热的功效,用于感冒,寒热头痛,烦躁胸闷,虚烦不眠。现代研究证实,淡豆豉含有异黄酮、低聚糖、大豆皂苷、豆豉纤溶酶、γ-氨基丁酸等多种生理活性成分,具有降低三高、抗氧化、抗癌、溶解血栓及类雌激素样作用,对心血管疾病、糖尿病、骨质疏松、乳腺癌及女性更年期综合征等疾病的预防和控制有较好的作用。
由于淡豆豉各地炮制规范中记载的制作方法各有不同,存在一药数法、各地各法或法同质异的现象,以致于市场上销售的淡豆豉发酵程度不一,使淡豆豉质量不可控从而直接影响临床疗效。目前,淡豆豉的制备工艺仍采用传统自然发酵方法,发酵菌种、发酵温度、发酵时间等工艺参数在药典中均未明确,由于各地环境、气候、发酵方法差异而导致淡豆豉质量不稳定而出现伪劣混杂等问题,成品质量参差不齐、伪劣混杂,色泽不佳等,特别是自然发酵过程中可能会带入有毒、有害微生物,使淡豆豉存在致病菌污染风险,影响其使用的安全性和有效性;传统发酵周期长,采用菌种发酵虽然能缩短周期,在酶活方面并没有相关深入研究,复合菌株发酵制备淡豆豉报道较少。而且,随着对淡豆豉的有效成分分析逐渐深入,对其应用范围也逐渐扩大,淡豆豉具有新的功效,还需要科技人员深入研究。
技术实现要素:
本发明的目的是为了解决目前传统淡豆豉炮制方法,可能会带入有毒、有害微生物,使淡豆豉存在致病菌污染风险影响其使用的安全性和有效性;而且淡豆豉色泽不佳的问题。以及目前没有一种采用淡豆豉制备治疗口腔溃疡药物的问题。而提供了一种利用复合菌种发酵制备淡豆豉的方法,以及利用该淡豆豉制备治疗口腔溃疡药物的应用。
本发明的一种利用复合菌种发酵制备淡豆豉的方法,它是按照以下步骤进行的:
步骤一、取大豆用清水清洗后,加入2~3倍重量的水浸泡12~16h,沥干,避光放置,进行发芽处理24~48h;
步骤二、向青蒿和桑叶中加水共同煎煮2次,每次1h,合并滤液,浓缩待用;
步骤三、将步骤二的浓缩液加入到步骤一发芽处理后的大豆中,并加入占大豆重量0.02%的青矾进行浸泡10~14h;于121℃、0.105mpa的条件下灭菌蒸煮30~40min;取出置于室温冷却,得到发酵基质;
步骤四、在无菌条件下,取步骤三蒸煮后的发酵基质按照质量体积比为100g:1~2ml的比例接种枯草芽孢杆菌、伞枝梨头霉菌和保加利亚乳杆菌的混合液,先于25~28℃培养7d,再于40~45℃培养3d,然后50℃以下干燥,即得淡豆豉;
其中,大豆、青蒿和桑叶的质量比100g:7-10g:7-10g。
本发明的淡豆豉用于制备治疗口腔溃疡的药物;该药物是将淡豆豉研磨成粉末制成。
本发明的淡豆豉用于制备治疗口腔溃疡的药物;所述的治疗口腔溃疡的药物按重量份数是由10~12份的栀子、25~35份的连翘、25~35份的桑白皮、10~15份的党参、10~15份的黄芪、25~35份的神曲、25~35份的山楂、45~55份的麦芽、10~15份的枳壳、10~15份的苍术、10~12份的草豆蔻、25~35份的淡豆豉、25~35份的锦鸡儿和8~10份的甘草组成。
本发明的淡豆豉用于制备治疗口腔溃疡的药物;所述的治疗口腔溃疡的药物分为内服药和外用药;所述的外用药为淡豆豉粉末;内服药按重量份数是由10~15份的党参、10~15份的茯苓、10~15份的白术、8~10份的小茴香、10~15份的山药、10~15份的山楂、10~15份的神曲、10~15份的淡豆豉、10~12份的黄柏和4~6份的甘草组成。
本发明的淡豆豉用于制备治疗口腔溃疡的药物;所述的治疗口腔溃疡的药物分为内服药和外用药;所述的外用药为淡豆豉粉末;内服药按重量份数是由30~50份的核桃内壳和30~50份的女贞叶制成。
本发明包含以下有益效果:
本发明研究发现将淡豆豉研磨成末,外敷溃疡面局部后,能够能让口腔溃疡(尤其是复发性口腔溃疡)快速好转,尤其是在睡前使用,敷在局部,一晚过后疼痛就会明显好转,多用几日溃疡几近痊愈。若辅佐以淡豆豉制备的内服用药,能够治愈口腔溃疡。可以说,淡豆豉单独作为药物使用治疗口腔溃疡是本发明的新发现。本发明的治疗口腔溃疡的药物可以为淡豆豉外用药,也可以联合内服药一起使用,效果更佳。
淡豆豉制备的内服药物,其方解为:口腔溃疡为湿热症,因此,本发明以栀子、桑白皮作为清热解表药物,枳壳、苍术、草豆蔻健脾胃,助消化,去除燥湿,口腔溃疡久病而虚,因此,以淡豆豉、草豆蔻、锦鸡儿补虚,增强体质;气虚者辅佐以党参、黄芪;豆豉,气味苦寒,入肺胃两经,善开发上焦之郁热,宜泄阴浊之留着,其药理作用与治疗口腔溃疡颇合,淡豆豉含有丰富的蛋白质、脂肪、糖类、维生素b族、菸酸及钙、铁、磷盐等物质,其作用不但利于溃疡之发作期,还能有效地制止复发。
在治疗口腔溃疡一段时间后,虽然溃疡症状减轻,但是脾虚纳运未复,应当调和脾胃;因此采用党参、茯苓、白术、小茴香、山药、山楂、神曲、淡豆豉、黄柏和甘草组成的内服药。
而核桃内壳和女贞叶的内服药,煎汤后作茶饮,连服1~2周,并配合淡豆豉涂抹于口腔溃疡病患处,口腔溃疡能够得到有效治疗。
淡豆豉含有丰富的蛋白质、脂肪、糖类、维生素b族、菸酸及钙、铁、磷盐等物质,本发明经研究发现,在经枯草芽孢杆菌、伞枝梨头霉菌和保加利亚乳杆菌复合发酵得到的淡豆豉,具有较高的蛋白酶、纤溶酶和β-葡萄糖苷酶活性,可促进大豆蛋白充分降解为小肽和氨基酸,提高纤溶酶活性和大豆异黄酮苷类成分的转化率,进而提高其生物利用度。
伞枝梨头霉菌发酵产生的葡萄糖苷酶能够对大豆中的异黄酮苷类进行分解从而转化成能够被人体小肠吸收的游离型苷元,产生的大豆低聚糖能够具有改善肠道环境、降血压和胆固醇以及增强免疫力作用。保加利亚乳杆菌可以有效改善口味。
经发芽处理后的大豆,尤其是黑豆,发芽处理后,黑豆能够产生更多氮磷物质,有利于伞枝梨头霉菌吸收利用,且黑豆之间所形成的间隙,更佳利于菌株发酵。
本发明通过加入青矾能够提高淡豆豉的亮度,增强其成色;使其外观更佳。
本发明采用复合菌种在无菌条件下发酵制备淡豆豉,可有效避免有害菌的污染,安全性高。
本发明采用25-28℃先培养7d,再于40-42℃培养3d的发酵工艺,明确淡豆豉的发酵工艺参数,提高有效成分含量,使生物活性达到最佳。
经本发明炮制得到的淡豆豉,尿激酶在20~100iu/ml,纤溶酶活性可达2204iu/g,苷元总量可达1335.23μg/g;而且,淡豆豉中不含有沙门菌、大肠埃烯菌、耐胆盐革兰氏阴性菌等致病菌。
具体实施方式
具体实施方式一:本实施方式的一种利用复合菌种发酵制备淡豆豉的方法,它是按照以下步骤进行的:
步骤一、取大豆用清水清洗后,加入2~3倍重量的水浸泡12~16h,沥干,避光放置,进行发芽处理24~48h;
步骤二、向青蒿和桑叶中加水共同煎煮2次,每次1h,合并滤液,浓缩待用;
步骤三、将步骤二的浓缩液加入到步骤一发芽处理后的大豆中,并加入占大豆重量0.02%的青矾进行浸泡10~14h;于121℃、0.105mpa的条件下灭菌蒸煮30~40min;取出置于室温冷却,得到发酵基质;
步骤四、在无菌条件下,取步骤三蒸煮后的发酵基质按照质量体积比为100g:1~2ml的比例接种枯草芽孢杆菌、伞枝梨头霉菌和保加利亚乳杆菌的混合液,先于25~28℃培养7d,再于40~45℃培养3d,然后50℃以下干燥,即得淡豆豉;
其中,大豆、青蒿和桑叶的质量比100g:7-10g:7-10g。
具体实施方式二:本实施方式与具体实施方式一不同的是:大豆为黑豆或黄豆。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三:本实施方式与具体实施方式一不同的是:步骤二中加水量为青蒿和桑叶18倍重量。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式四:本实施方式与具体实施方式一不同的是:步骤二中的滤液浓缩至相对密度为1.10~1.12g/cm3。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式五:本实施方式与具体实施方式一不同的是:所述的枯草芽孢杆菌、伞枝梨头霉保加利亚乳杆菌株均分离自淡豆豉饮片;其中,枯草芽孢杆菌为(bacillussubtilissubsp.subtilis),保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心,保藏编号为:cicc24713。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式六:本实施方式与具体实施方式一不同的是:所述的枯草芽孢杆菌和伞枝梨头霉菌混合液的浓度为107~109cfu/ml。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式七:本实施方式与具体实施方式一不同的是:枯草芽孢杆菌、伞枝梨头霉菌和保加利亚乳杆菌的质量比为3~4:2~3:1。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式八:本实施方式利用具体实施方式一制备的淡豆豉的应用,它用于制备治疗口腔溃疡的药物;该药物是将淡豆豉研磨成粉末制成。
具体实施方式九:本实施方式利用具体实施方式一制备的淡豆豉的应用,它用于制备治疗口腔溃疡的药物;所述的治疗口腔溃疡的药物按重量份数是由10~12份的栀子、25~35份的连翘、25~35份的桑白皮、10~15份的党参、10~15份的黄芪、25~35份的神曲、25~35份的山楂、45~55份的麦芽、10~15份的枳壳、10~15份的苍术、10~12份的草豆蔻、25~35份的淡豆豉、25~35份的锦鸡儿和8~10份的甘草组成。
本实施方式治疗口腔溃疡是将作为外用药的淡豆豉联合内服药一同使用,内外药共施,有效治愈口腔溃疡。
具体实施方式十:本实施方式利用具体实施方式一制备的淡豆豉的应用,它用于制备治疗口腔溃疡的药物;所述的治疗口腔溃疡的药物分为内服药和外用药;所述的外用药为淡豆豉粉末;内服药按重量份数是由10~15份的党参、10~15份的茯苓、10~15份的白术、8~10份的小茴香、10~15份的山药、10~15份的山楂、10~15份的神曲、10~15份的淡豆豉、10~12份的黄柏和4~6份的甘草组成。
本实施方式治疗口腔溃疡是将作为外用药的淡豆豉联合内服药一同使用,内服药能够调和脾胃,从根本上防治口腔溃疡。
具体实施方式十一:本实施方式利用具体实施方式一制备的淡豆豉的应用,它用于制备治疗口腔溃疡的药物;所述的治疗口腔溃疡的药物分为内服药和外用药;所述的外用药为淡豆豉粉末;内服药按重量份数是由30~50份的核桃内壳和30~50份的女贞叶制成。
本实施方式治疗口腔溃疡是将作为外用药的淡豆豉联合内服药一同使用,核桃内壳与女贞叶煎汤后,用作茶饮,每日1剂,连续服用1~2周。能够有效治疗缓解口腔溃疡。
本发明内容不仅限于上述各实施方式的内容,其中一个或几个具体实施方式的组合同样也可以实现发明的目的。
通过以下实施例验证本发明的有益效果:
实施例1
本实施例的一种利用复合菌种发酵制备淡豆豉的方法,它是按照以下步骤进行的:
称取黑豆100g,青蒿10g,桑叶10g,备用;
步骤一、取黑豆用清水清洗后,加入2倍重量的水浸泡14h,沥干,避光放置,进行发芽处理24h;
步骤二、向青蒿和桑叶中加水共同煎煮2次,每次1h,合并滤液,浓缩至110ml,相对密度为1.10~1.12g/cm3,待用;
步骤三、将步骤二的浓缩液加入到步骤一发芽处理后的大豆中,并加入占大豆重量0.02%的青矾进行浸泡12h;于121℃、0.105mpa的条件下灭菌蒸煮40min;取出置于室温冷却,得到发酵基质;
步骤四、在无菌条件下,取步骤三蒸煮后的发酵基质按照质量体积比为100g:2ml的比例接种枯草芽孢杆菌、伞枝梨头霉菌和保加利亚乳杆菌的混合液(菌液浓度为107-109cfu/ml),先于28℃培养7d,再于42℃培养3d,然后50℃以下干燥,即得淡豆豉;其中,枯草芽孢杆菌、伞枝梨头霉菌和保加利亚乳杆菌的质量比为4:2:1。
枯草芽孢杆菌标准菌株和伞枝梨头霉菌株分别为bacillussubtilissubsp.subtilis(cicc24713),lichtheimiaornata和lactobacillusbugaricus,均分离自淡豆豉饮片并经酶活筛选为优势菌株。
实施例2
本实施例的一种利用复合菌种发酵制备淡豆豉的方法,它是按照以下步骤进行的:
称取黑豆100g,青蒿7g,桑叶7g,备用;
步骤一、取黄豆用清水清洗后,加入2倍重量的水浸泡14h,沥干,避光放置,进行发芽处理24h;
步骤二、向青蒿和桑叶中加水共同煎煮2次,每次1h,合并滤液,浓缩至100ml,相对密度为1.10~1.12g/cm3,待用;
步骤三、将步骤二的浓缩液加入到步骤一发芽处理后的大豆中,并加入占大豆重量0.02%的青矾进行浸泡12h;于121℃、0.105mpa的条件下灭菌蒸煮40min;取出置于室温冷却,得到发酵基质;
步骤四、在无菌条件下,取步骤三蒸煮后的发酵基质按照质量体积比为100g:2ml的比例接种枯草芽孢杆菌、伞枝梨头霉菌和保加利亚乳杆菌的混合液(菌液浓度为107-109cfu/ml),先于25℃培养7d,再于40℃培养3d,然后45℃以下干燥,即得淡豆豉;其中,枯草芽孢杆菌、伞枝梨头霉菌和保加利亚乳杆菌的质量比为4:3:2。
枯草芽孢杆菌标准菌株和伞枝梨头霉菌株分别为bacillussubtilissubsp.subtilis(cicc24713),lichtheimiaornata和lactobacillusbugaricus,均分离自淡豆豉饮片并经酶活筛选为优势菌株。
将实施例1、实施例2与不同产地市售淡豆豉纤溶酶活性和大豆异黄酮苷元检测结果及控制菌检出情况如表格1。
表1
从表格1可见,市售淡豆豉纤溶酶活性低,大豆异黄酮苷元含量较低,说明大豆异黄酮苷的转化率低,且均含有沙门菌、大肠埃希菌、耐胆盐革兰氏阴性菌等控制菌,而实施例1、实施例2的纤溶酶活性为市售淡豆豉的4-9倍,且苷元含量为市售淡豆豉的4-40倍,说明其活性和生物利用度均显著提高,且不含控制菌,说明其不存在含有致病菌的风险,使用起来更加安全、有效。
将实施例1和2得到的淡豆豉分别进行口腔溃疡临床治疗;
选取患有口腔溃疡病例120例,年龄在20~60岁,平均年龄34岁,症状:患者的口腔粘膜出现多个大小不等的溃疡,表面覆盖灰白色或黄色假膜,中央凹陷,周围粘膜红而微肿,溃疡处明显灼痛,严重影响食欲,且部分患者伴有口臭、大便干涩、头痛的症状,多数会患者为反复发作。
治疗标准:
治愈:口腔内部溃疡面消失愈合,无红肿、灼痛,其它伴有症状消失。
好转:溃疡面个数明显减少,溃疡直径明显缩小,无红肿灼痛,其它伴有症状消失。
无效:溃疡面个数、溃疡面直径、红肿灼痛感无改善,仍存在其它伴有症状。
将120例患者分为8组,分别为组1、组2、组3、组4、组5、组6、组7和组8;每组采用本发明不同药物进行治疗具体如下:
药物组1:采用实施例1的淡豆豉磨成粉末;使用方法:睡前,将淡豆豉粉末敷于患处,次日去除,连续施用3~7天。
药物组2:采用实施例2的淡豆豉磨成粉末;使用方法:睡前,将淡豆豉粉末敷于患处,次日去除,连续施用3~7天。
药物组3:采用实施例1的淡豆豉磨成粉末作为外用药;
外用药使用方法:睡前,将淡豆豉粉末敷于患处,次日去除,连续施用3~7天。
并用实施例1的淡豆豉制备内服药,该内服药按重量份由12份的栀子、30份的连翘、30份的桑白皮、15份的党参、15份的黄芪、30份的神曲、30份的山楂、50份的麦芽、15份的枳壳、15份的苍术、12份的草豆蔻、30份的淡豆豉、30份的锦鸡儿和10份的甘草组成;将上述药物煎制成汤,服用(用法:1日1次,服用1~2周);
药物组4:采用实施例2的淡豆豉磨成粉末作为外用药;
外用药使用方法:睡前,将淡豆豉粉末敷于患处,次日去除,连续施用3~7天。
并用实施例2的淡豆豉制备内服药,该内服药按重量份由12份的栀子、30份的连翘、30份的桑白皮、15份的党参、15份的黄芪、30份的神曲、30份的山楂、50份的麦芽、15份的枳壳、15份的苍术、12份的草豆蔻、30份的淡豆豉、30份的锦鸡儿和10份的甘草组成;将上述药物煎制成汤,服用(用法:1日1次,服用1~2周);
药物组5:采用实施例1的淡豆豉磨成粉末作为外用药;
外用药使用方法:睡前,将淡豆豉粉末敷于患处,次日去除,连续施用3~7天。
并用实施例1的淡豆豉制备内服药,该内服药按重量份由15份的党参、15份的茯苓、15份的白术、10份的小茴香、15份的山药、15份的山楂、15份的神曲、15份的淡豆豉、12份的黄柏和6份的甘草组成;将上述药物煎制成汤,服用(用法:1日1次,服用1~2周);
药物组6:采用实施例2的淡豆豉磨成粉末作为外用药;
外用药使用方法:睡前,将淡豆豉粉末敷于患处,次日去除,连续施用3~7天。
并用实施例2的淡豆豉制备内服药,该内服药按重量份由15份的党参、15份的茯苓、15份的白术、10份的小茴香、15份的山药、15份的山楂、15份的神曲、15份的淡豆豉、12份的黄柏和6份的甘草组成;将上述药物煎制成汤,服用(用法:1日1次,服用1~2周);
药物组7:采用实施例1的淡豆豉磨成粉末作为外用药;
外用药使用方法:睡前,将淡豆豉粉末敷于患处,次日去除,连续施用3~7天。
并用实施例1的淡豆豉制备内服药,该内服药按重量份由50份的核桃内壳和50份的女贞叶组成;将上述药物煎制成汤,服用(用法:1日1次,服用1~2周);
药物组8:采用实施例2的淡豆豉磨成粉末作为外用药;
外用药使用方法:睡前,将淡豆豉粉末敷于患处,次日去除,连续施用3~7天。
并用实施例2的淡豆豉制备内服药,该内服药按重量份由50份的核桃内壳和50份的女贞叶组成;将上述药物煎制成汤,服用(用法:1日1次,服用1~2周);
将上述药物组1-8分别用于组1-8,进行口腔溃疡治疗,结果见表2。
表2
典型病例如下:
病例一
张某,女,27岁,口腔溃疡反复发作5年以上,每次发作较上次更难痊愈,舌面及两颊有多个豆大的溃疡,边缘色红微肿,疼痛难忍,饮食难咽,苦口,口干,大便溏。服用本实施例药物组3的药物7日,病情消失,口腔溃疡未再发作。
病例二
刘某某,男,35岁,口腔溃疡反复发作3年,每次发作较上次更难痊愈,口腔黏膜角化差的部位生出溃疡呈圆形或椭圆形,大小、数目不等的溃疡,周围有红晕,感疼痛,反复发作,苦口,口干,大便溏。施用本实施例药物组1的药物7日,病情消失,口腔溃疡未再发作。
病例三
张某某,男,43岁,口腔溃疡反复发作10年,溃疡小,数量多,分布较广泛,溃疡周围黏膜红而微肿,溃疡局部灼痛明显,大便溏。施用本实施例药物组6的10日,病情消失,口腔溃疡未再发作。
病例四
徐某某,女23岁,口腔溃疡1年,口腔内侧现多处溃疡,表面覆盖黄色假膜,周围黏膜红而微肿,灼痛感强,溃疡局部灼痛明显,大便溏。施用本实施例药物组8的7日,病情消失,口腔溃疡未再发作。
可以理解的是,以上实施方式仅仅是为了说明本发明的原理而采用的示例性实施方式,然而本发明并不局限于此。对于本领域内的普通技术人员而言,在不脱离本发明的精神和实质的情况下,可以做出各种变型和改进,这些变型和改进也视为本发明的保护范围。