具有增强免疫力的当归制剂、制备方法及其应用与流程

本发明涉及当归技术领域，特别是涉及一种具有增强免疫力的当归制剂、制备方法及其应用。

背景技术：

当归是伞形科当归属一种多年生草本植物。其干燥的贮藏根是我国一味常用中药材，药用历史悠久，历代本草均有记载，始记于《神农本草经》，谓之“当归味温，主呃逆上气”被列为中品。有补血、和血、调经止血、润肠滑肠之功效，为医家常用，素有“十方九归”之称。

目前，市面上的当归单方产品主要是当归醇提流浸膏为主的当归口服液、当归片、当归丸等。此类当归单方产品的主要作用是为女性补血活血、调经止痛，而不具备增强免疫力的作用，应用范围较窄。

技术实现要素：

基于此，有必要针对当归单方产品应用范围窄的问题，提供一种具有增强免疫力的当归制剂、制备方法及其应用。

一种具有增强免疫力的当归制剂，包括如下组分：当归醇提物和当归水提物。

上述当归制剂具有增强免疫力的功能，还具有补血活血、调经止痛的作用。此外，该当归制剂的稳定性效果好，不含酒精，且成本低，农残、重金属合格，无毒副作用。

本发明还提供一种具有增强免疫力的当归制剂的制备方法，包括如下步骤：

向当归中加入醇或者醇溶液，醇提之后分别得到醇提液和药渣，之后将所述醇提液浓缩、干燥，得到当归醇提物；

向所述药渣中加入水，水提得到水提液，之后将所述水提液浓缩、干燥，得到当归水提物；以及

将所述当归醇提物和所述当归水提物混匀、制剂，即得。

上述具有增强免疫力的当归制剂的制备方法，经醇提和水提后制成当归制剂，具有增强免疫力的功能，还具有补血活血、调经止痛的作用。

在其中一个实施例中，所述向当归中加入醇或者醇溶液之前还包括如下步骤：将当归粉碎、过筛，得到当归粗粉。

在其中一个实施例中，所述当归与所述醇或者醇溶液的料液比为1：(7-9)；和/或

所述醇溶液为浓度为75vol％-85vol％的乙醇水溶液。

在其中一个实施例中，所述醇提的温度为80℃-90℃；和/或

所述醇提的次数为1次-3次。

在其中一个实施例中，所述药渣与所述水的料液比为1：(9-10)。

在其中一个实施例中，所述水提的温度为90℃-110℃；和/或

所述水提的次数为1次-3次。

在其中一个实施例中，所述干燥的方式为真空干燥；和/或

所述真空干燥的温度为60℃-65℃。

在其中一个实施例中，具有增强免疫力的当归制剂的制备方法，包括如下步骤：

将当归粉碎，过10目筛，得到当归粗粉；称取60g当归粗粉，加入480ml浓度为80vol％的乙醇水溶液，85℃下加热回流提取3h，分别得到第一醇提液和药渣前体；向所述药渣前体中加入480ml浓度为80vol％的乙醇水溶液，85℃下加热回流提取2h，分别得到第二醇提液和药渣；将所述第一醇提液和所述第二醇提液混匀后浓缩至相对密度为1.25，之后在60℃下真空干燥，得到当归醇提物；

向所述药渣中加入540ml水，100℃下加热回流提取2h，分别得到第一水提液和水提药渣；向所述水提药渣中加入540ml水，100℃下加热回流提取1h，得到第二水提液；将所述第一水提液和所述第二水提液混匀后浓缩至相对密度为1.25，之后在60℃下真空干燥，得到当归水提物；以及

将所述当归醇提物、所述当归水提物和30g麦芽糊精混匀，之后加入浓度为90vol％的乙醇水溶液制粒、干燥，即得。

本发明还提供一种具有增强免疫力的药物，包含所述的具有增强免疫力的当归制剂。

上述药物中包含了具有增强免疫力的当归制剂，使其也具有增强免疫力的作用。

附图说明

图1为本发明一实施方式的具有增强免疫力的当归制剂的制备方法的流程图。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本发明一实施方式的一种具有增强免疫力的当归制剂，包括：当归醇提物和当归水提物。

当归的化学成分主要包括藁本内酯类及其异构物、香豆素类、多糖类、黄酮类及有机酸类等。当归含挥发油类成分和有机酸，主要为丁二酸、菸酸、尿嘧啶、腺嘌呤、藁本内酯、维生素b12、维生素e、谷固醇、亚叶酸、丁烯基酞内酯、阿魏酸/胆碱、5-羟基呋喃醛、微量元素(如锌、铜、铁、锰、钾、钠、钙等)、磷脂以及维生素a等成分。当归提取物的化学成分主要包括藁本内酯类及其异构物、香豆素类、多糖类、黄酮类及有机酸类等。当归提取物的有效成分为藁本内酯和正丁基。

在其中一实施方式中，当归制剂还包括辅料。辅料可以选择淀粉、麦芽糊精等。更优选地，辅料为麦芽糊精。

优选地，当归提取物(当归醇提物+当归水提物)的质量与辅料的质量比为1:1。

请参见图1，本发明一实施方式的一种具有增强免疫力的当归制剂的制备方法，包括如下步骤：

s10、向当归中加入醇或者醇溶液，醇提之后分别得到醇提液和药渣，之后将醇提液浓缩、干燥，得到当归醇提物。

其中，向当归中加入醇或者醇溶液之前还包括如下步骤：将当归粉碎、过筛，得到当归粗粉。

优选地，当归粉粹之后过10目筛，制成当归粗粉。这样可以更好的与醇或者醇溶液更均匀的混合，有利于当归醇提物的提取。

这里的醇溶液指的是醇的水溶液。具体的，醇提的操作为：加热回流提取，收集醇提液。在这里，醇提之后的得到的药渣是经离心，去除醇或者醇溶液的，为下一步当归药渣水提备用。

优选地，当归与醇或者醇溶液的料液比为1：(7-9)。

优选地，醇溶液为浓度为75vol％-85vol％的乙醇水溶液。优选地，醇提的温度为80℃-90℃，醇提的次数为1次-3次。这样更有利于当归中的有效成分的提取，而且提取率最优。

优选地，干燥的方式为真空干燥，真空干燥的温度为60℃-65℃。

s20、向药渣中加入水，水提得到水提液，之后将水提液浓缩、干燥，得到当归水提物。

具体的，水提的操作为：加热回流提取，收集水提液。

优选地，药渣与水的料液比为1：(9-10)。水提的温度为90℃-110℃。水提的次数为1次-3次。干燥的方式为真空干燥，干燥的温度为60℃-65℃。

s30、将当归醇提物和当归水提物混匀、制剂，即得。

一般的，制作当归制剂时还需要加入辅料。优选地，当归提取物(当归醇提物+当归水提物)的质量与辅料的质量比为1:1。

具体的，该步骤的操作为：将当归醇提物、水提物和辅料混匀，加入90％的乙醇水溶液制粒，之后放入烘箱中干燥，得到干燥颗粒；将干燥颗粒放入胶囊填充机中，填充为0.3g/粒的胶囊，胶囊填充完毕后进行抛光，之后采用口服固体药用聚酯进行分装，之后进行外包装、检验、入库。

当然，制剂的类型并不限于胶囊，还可以是片剂、颗粒剂等。

在其中一个实施方式中，具有增强免疫力的当归制剂的制备方法，包括如下步骤：

当归粉碎，过10目筛，得到当归粗粉；称取60g当归粗粉，加入480ml浓度为80vol％的乙醇水溶液，85℃下加热回流提取3h，分别得到第一醇提液和药渣前体；向药渣前体中加入480ml浓度为80vol％的乙醇水溶液，85℃下加热回流提取2h，分别得到第二醇提液和药渣；将第一醇提液和所述第二醇提液混匀后浓缩至相对密度为1.25，之后在60℃下真空干燥，得到当归醇提物。

向药渣中加入540ml水，100℃下加热回流提取2h，分别得到第一水提液和水提药渣；向水提药渣中加入540ml水，100℃下加热回流提取1h，得到第二水提液；将第一水提液和第二水提液混匀后浓缩至相对密度为1.25，之后在60℃下真空干燥，得到当归水提物。

将当归醇提物、水提物和30g麦芽糊精混匀，之后加入浓度为90vol％的乙醇水溶液制粒、干燥，即得。

在该实施方式中，当归与浓度为80vol％的乙醇水溶液的料液比是1：8，药渣与水的料液比是1：9，当归醇提物和当归水提物的质量和与麦芽糊精的质量比为1：1。另外，该实施方式中的药渣是经过离心操作去除浓度为80vol％的乙醇水溶液的，药渣前体和水提药渣是经过过滤操作的。

上述具有增强免疫力的当归制剂的制备方法，在特定的条件下进行醇提和水提后制成当归制剂，具有增强免疫力的功能，而且具有补血活血、调经止痛的作用。

一种具有增强免疫力的药物，包含所述的具有增强免疫力的当归制剂。

上述药物中包含了具有增强免疫力的当归制剂，使其也具有增强免疫力的作用。

以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

将当归粉碎，过10目筛，得到当归粗粉；称取60g当归粗粉，加入480ml浓度为80vol％的乙醇水溶液，85℃下加热回流提取3h，分别得到第一醇提液和药渣前体；向药渣前体中加入480ml浓度为80vol％的乙醇水溶液，85℃下加热回流提取2h，分别得到第二醇提液和药渣；将第一醇提液和所述第二醇提液混匀后浓缩至相对密度为1.25，之后在60℃下真空干燥，得到当归醇提物。

向药渣中加入540ml水，100℃下加热回流提取2h，分别得到第一水提液和水提药渣；向水提药渣中加入540ml水，100℃下加热回流提取1h，得到第二水提液；将第一水提液和第二水提液混匀后浓缩至相对密度为1.25，之后在60℃下真空干燥，得到当归水提物。

将当归醇提物、当归水提物和30g麦芽糊精混匀，之后加入浓度为90vol％的乙醇水溶液制粒，之后放入烘箱中干燥，得到干燥颗粒，将干燥颗粒放入胶囊填充机中，填充为0.3g/粒胶囊，即得当归胶囊。

实施例2

将当归粉碎，过10目筛，得到当归粗粉；称取60g当归粗粉，加入480ml浓度为85vol％的乙醇水溶液，80℃下加热回流提取3h，分别得到第一醇提液和药渣前体；向药渣前体中加入480ml浓度为85vol％的乙醇水溶液，85℃下加热回流提取2h，分别得到第二醇提液和药渣；将第一醇提液和第二醇提液混匀后浓缩至相对密度为1.25，之后在65℃下真空干燥，得到当归醇提物。

向药渣中加入600ml水，110℃下加热回流提取2h，分别得到第一水提液和水提药渣；向水提药渣中加入600ml水，110℃下加热回流提取1h，得到第二水提液；将第一水提液和第二水提液混匀后浓缩至相对密度为1.25，之后在65℃下真空干燥，得到当归水提物。

将当归醇提物、当归水提物和30g麦芽糊精混匀，之后加入浓度为90vol％的乙醇水溶液制粒，之后放入烘箱中干燥，得到干燥颗粒，将干燥颗粒放入胶囊填充机中，填充为0.3g/粒胶囊，即得当归胶囊。

实施例3

将当归粉碎，过10目筛，得到当归粗粉；称取60g当归粗粉，加入420ml浓度为80vol％的乙醇水溶液，80℃下加热回流提取3h，分别得到第一醇提液和药渣前体；向药渣前体中加入420ml浓度为80vol％的乙醇水溶液，80℃下加热回流提取2h，分别得到第二醇提液和药渣；将第一醇提液和第二醇提液混匀后浓缩至相对密度为1.25，之后在60℃下真空干燥，得到当归醇提物。

向药渣中加入540ml水，90℃下加热回流提取2h，分别得到第一水提液和水提药渣；向水提药渣中加入540ml水，90℃下加热回流提取1h，得到第二水提液；将第一水提液和第二水提液混匀后浓缩至相对密度为1.25，之后在60℃下真空干燥，得到当归水提物。

将当归醇提物、当归水提物和30g麦芽糊精混匀，之后加入浓度为90vol％的乙醇水溶液制粒，之后放入烘箱中干燥，得到干燥颗粒，将干燥颗粒放入胶囊填充机中，填充为0.3g/粒胶囊，即得当归胶囊。

对比例1

本对比例1的当归水提胶囊，步骤类似实施例1，区别在于提取工艺仅含水提，不含醇提。

本发明的当归胶囊稳定性考察。

采用加速试验，在温度37±2℃、相对湿度rh75±5％、避免光线直射的条件下贮存3个月。即对放置0、1、2、3个月样品进行考察。结果如表1所示：

表1当归胶囊的质量标准

由上述结果可以看出，本发明的当归胶囊在加速条件下，放置0个月、1个月、2个月、3个月，检测产品指标均符合质量标准要求，由此说明本发明的当归胶囊单方产品稳定性好。

本发明的当归胶囊的增强免疫力的效果验证。

参照《保健食品检验与评价技术规范(2003年版)》的试验方法选择试验和方法，进行增强免疫力作用的动物试验。所选择的实验项目包括：

(1)体重、脏器/体重比值测定：胸腺/体重比值，脾脏/体重比值

(2)细胞免疫功能测定：小鼠脾淋巴细胞转化实验

(3)体液免疫功能测定：血清溶血素实验

(4)单核-巨噬细胞功能测定：小鼠碳廓清实验

(5)nk细胞活性测定：乳酸脱氢酶测定法

1材料与方法

1.1样品：实施例1的当归胶囊样品组(以下简称样组)、对比例1的当归水提胶囊样品组(提取工艺仅含水提，不含醇提，以下简称水组)。人体推荐摄入量为6g/60kgbw/d，除阴性对照组外，另设市场样品无限极增免口服液(以下简称市场样品)作为阳性对照组。用生理盐水配制所需浓度的灌胃液。

1.2动物及分组：spf级balb/c小鼠336只，体重在18g-22g，先将小鼠随机分为4组，每组里面再分为7个亚组，分别接受生理盐水对照组、低样组、中样组、高样组(相当于人体推荐剂量的5倍、10倍、20倍)、中水组、高水组(相当于人体推荐剂量的10倍、20倍)以及无限极市场样品组。

灌胃量：中低高剂量组分别称取2g、4g、8g样品溶在20ml生理盐水中制成浓度分别为0.1g/ml、0.2g/ml、0.4g/ml的灌胃液。

饲料：全价营养配合饲料，动物自由摄食饮水，于昼夜更替为12h的spf级动物房饲养。

1.3方法：按照《保健食品检验与评价技术规范(2003年版)》中增强免疫力功能检验方法进行。给予受试物的灌胃体积为20ml/kg·bw，1次/d，连续30d。

1.3.1cona诱导的小鼠淋巴细胞转化试验(mtt)

各组动物连续灌胃30d，颈椎脱臼处死动物，无菌取脾，置于盛有适量无菌hank’s液的平皿中，轻轻将脾磨碎，制成单个细胞悬液，经200目筛网过滤，用hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)，然后将细胞悬浮于1mlrpmi1640完全培养液中，用台盼蓝染色计数活细胞数(应在95％以上)，调整细胞浓度为3×106个/ml。将每一份细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75μlcona液(相当于7.5μg/ml)，另一孔作为对照，置37℃、5％co2孵箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的rpmi1640培养液，同时加入mtt(5mg/ml)50μl/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。将溶解液移入2ml比色杯中，722分光光度计上在波长570nm测定od值。

1.3.2血清溶血素试验

各组动物连续灌胃30d，制备2％(v/v)的绵羊红细胞(srbc)悬液，每只鼠腹腔注射0.2ml进行免疫。继续灌胃给予受试物5d后，摘除眼球取血于离心管内，放置1h，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000r/min离心10min，收集血清。用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释度的血清分别置于微量血凝试验板内，每孔100μl，再加入100μl0.5％(v/v)的srbc悬液，混匀，装入湿润的平盘内加盖，于37℃温箱孵育3h，观察血球凝集程度。

1.3.3小鼠碳廓清试验

各组动物连续灌胃30d，按每10g体重0.1ml尾静脉注射稀释4倍的印度墨汁。注入墨汁后立即计时，并于2min、10min分别从内眦静脉丛取血20μl，将其加到2ml0.1％na2co3溶液中，722分光光度计在600nm波长处测定光密度值，以0.1％na2co3溶液作空白对照。小鼠处死，取肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，称重。按下列公式计算吞噬指数。

1.3.4nk细胞活性测定

各组动物连续灌胃30d，颈椎脱臼处死动物，无菌取脾，置于盛有适量无菌hank’s液的平皿中，轻轻将脾磨碎，制成单个细胞悬液，经200目筛网过滤，用hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)，裂解红细胞后，加入hank’s液，1000r/min离心10min。然后将细胞悬浮于1mlrpmi1640完全培养液中，用台盼蓝染色计数活细胞数(应在95％以上)，调整细胞浓度为2×107个/ml。实验前24h将靶细胞(yac-1)进行传代培养，用rpmi1640完全培养液调整细胞浓度为4×10⁵个/ml。取靶细胞(yac-1)和效应细胞(脾细胞)各100μl(效靶比50：1)，加入u型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％np40或2.5％triton各100μl；上述各项均设三个平行孔，于37℃、5％co2培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μl置平底96孔培养板中，同时加入ldh基质液100ul,反应10min，每孔加入1mol/l的hcl30μl，在酶标仪490nm处测定光密度值(od)。

1.4数据处理：采用spss20对数据进行统计分析

2结果

2.1胸腺/体重比值及脾脏/体重比值

样品对balb/c小鼠的胸腺/体重以及脾脏/体重的影响分别见表2.1.1和表2.1.2。结果表明，中样、高样组(相当于人体推荐剂量的10倍、20倍)下，可显著提高小鼠脾脏/体重比值；水组(中水、高水)可显著降低小鼠的胸脏/体重比值。由此可见，实施例1的当归胶囊样品组可以明显增加免疫系统脾脏指数。虽然当归胶囊样品组对胸腺指数没有明显增加，但较水组(显著降低)而言，其效果更佳。

表2.1.1当归提取物对小鼠脾脏/体重比值的影响(n＝10，)

表2.1.2当归提取物对小鼠胸腺/体重比值的影响(n＝10，)

2.2cona诱导的小鼠淋巴细胞转化试验(mtt)

结果见表2.2.1，该试验结果表明：实施例1的当归胶囊样品组(低、中、高样组)od差值均高于对照组(生理盐水组)，但不具有显著性。市场样品组与对照组比较差异有显著意义，可以得出市场样品具有增强细胞免疫功能的作用，而实施例1的当归胶囊样品对细胞免疫有一定的作用，但不具有显著性。

表2.2.1当归提取物对cona诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(n＝9，)

2.3血清溶血素试验

结果见表2.3.1，该试验表明：与对照组相比，低样、中样组和市场样品组血清抗体水平组间差异具有统计学意义，且均值都大于对照组，可以得出低样、中样组和市场样品组都能提高小鼠血清抗体水平，具有增强体液免疫功能的作用。而其它组样品均不具有增强体液免疫功能的作用。可以判断实施例1的当归胶囊样品可增强体液免疫功能。

表2.3.1当归提取物对小鼠血清抗体水平的影响(n＝7或8，)

2.4小鼠碳廓清试验

结果见表2.4.1，该实验结果表明：与对照组相比，低样、中样、高样组的巨噬细胞吞噬指数均高于对照组，且中样组能明显提高小鼠单核-巨噬细胞功能，其他组不具备提高小鼠单核-巨噬细胞的功能。

表2.4.1当归提取物对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响(n＝9，)

2.5nk细胞活性测定

结果见表2.5.1，该实验结果表明：与对照组相比，低样、中样、高样组均能提高小鼠nk细胞活性，且中、高样组具有显著性，可以判断当归胶囊样品可增强nk细胞活性。而市场样品会显著降低nk细胞活性。

表2.5.1当归提取物对小鼠nk细胞活性的影响(n＝9，)

3结论

综上所述，本发明的当归胶囊样品可提高脾脏指数，增强体液免疫功能，增强nk细胞活性，对细胞免疫功能和单核-巨噬细胞功能具有一定的作用。根据食品药品监督总局办公厅发布的《保健食品检验与评价技术规范(2003年版)》中免疫功能检验方法结果判定的原则，可判定本发明的当归胶囊具有增强免疫力功能的作用。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。