本揭露提供眼用制剂及眼睛的治疗方法。
背景技术：
肼屈嗪是已知的降血压药物，藉由放松血管平滑肌的血管扩张作用产生降血压效果。更具体而言，肼屈嗪改变钙代谢，从而干扰血管平滑肌内的钙移动，进而影响血管平滑肌收缩状态的开始或延长(
除了降血压的医药用途，通过引用结合到本文中的美国专利8,088,773教示肼屈嗪用于治疗非新血管性或干性年龄相关性黄斑变性。年龄相关性黄斑变性是一种慢性疾病，是造成发达国家60岁以上老年人丧失视力的主因。该疾病主要分为干性及湿性两种形式。干性为病变早期，视力退化与视网膜色素上皮层(retinalpigmentepithelium,rpe)产生隐结(drusen)有关，湿性为病变发展至晚期，发病过程的主要特征为脉络膜新生血管生成(choroidalneovascularisation,cnv)，其特性为脉络膜形成不正常的血管增生，此种异常增生的血管容易破裂出血，不断恶化导致视力减退。
盐酸肼屈嗪水溶液在储存期间可能经历降解形成强烈着色的不溶性产物。盐酸肼屈嗪水溶液的稳定性被发现和溶液ph值有关。测试不同ph值(ph1至12)的盐酸肼屈嗪水溶液稳定性发现，ph3.5的环境下肼屈嗪有最佳的储存稳定性(halasi等人,1990,jparenterscitechnol.,44(1):30-4.)。
肼屈嗪接触金属会变色。如同其他肼衍生物，肼屈嗪在氧气和金属离子如cu2+、fe2+和fe3+中会氧化为自由基(sinha等人,1982,biochemicalandbiophysicalresearchcommunications105(3)：1044-1051)。为了解决这一问题，通常的做法是加入螯合剂以改善稳定性。例如，美国专利5,185,372和6,468,548中都教示通过螯合剂来提高稳定性。在中国专利cn102813621a中，为了增加溶液的稳定性，额外加入edta螯合剂来解决稳定性的问题。
通过引用结合到本文中的美国专利9,254,287公开了一种用于治疗年龄相关性黄斑变性的盐酸肼屈嗪眼用组合物。在该专利的眼用制剂组合物方案中含有螯合剂以螯合金属离子。螯合剂的使用使制剂成本变高。然而，即使加入螯合剂的盐酸肼屈嗪水溶液仍然无法避免溶液变色的问题，给制剂的存储和使用带来了很大困扰。这一问题一直以来无法得到很好的解决。
技术实现要素：
在一方面，本揭露提供一种眼用组合物，以提供治疗眼疾病和病况的稳定肼屈嗪局部制剂，其中包含0.02至2重量％的肼屈嗪药学活性药物；其中，基本不包含用于螯合金属离子的乙二胺四醋酸根离子。
在一些实施方案中，所述组合物的ph值在4.0至4.4之间并且以温度50℃以上储存经过四周维持无色透明澄清。
在一个实施方案中，眼用组合物包含治疗有效量的肼屈嗪药学活性药物，一或多种缓冲剂、等渗剂和防腐剂，其中不含有螯合剂。根据本揭露的其他实施例，视情况眼用组合剂还可以包含润滑剂、ph调节剂、粘度增强剂和稀释剂等中的一种或者多种。
在另一个实施方案中，眼用组合物包含量介于约0.02至2重量％之间的肼屈嗪药学活性药物、ph介于3.9至4.5之间量介于8至12重量％之间的乙酸盐缓冲溶液、量介于0.25至1重量％之间的氯化钠、量介于0.015至0.06重量％之间的羟苯甲酸甲酯和量介于0.01至0.04重量％的苯扎氯铵溶液。
在另一个实施方案中，药学活性药物是盐酸肼屈嗪，该药物以介于0.5至2重量％之间的量存在。
在另一个实施方案中，乙酸盐缓冲溶液的ph为约3.5至4.5、3.5至4.2、3.5至4.0、3.8至4.4或4.0至4.5，且含量为10重量％。
在一个实施方案中，乙酸盐缓冲溶液由乙酸钠和2n乙酸组成。
在另一个实施方案中，苯扎氯铵溶液浓度为50％。
在一个实施方案中，组合物进一步包含0.5至2重量％的丙二醇，优选丙二醇以约1重量％的量存在。在另一个实施方案中，羟苯甲酸甲酯以约0.03重量％的量存在。在又另一实施方案中，苯扎氯铵溶液以约0.02重量％的量存在。
本揭露提供一种眼用组合物，以提供治疗眼疾病和病况的稳定肼屈嗪局部制剂，其中包含：0.02至2重量％的肼屈嗪药学活性药物；8至12重量％的乙酸盐缓冲溶液，所述乙酸盐缓冲溶液浓度为2n；0.25至1重量％的氯化钠；0.015至0.06重量％的羟苯甲酸甲酯；以及0.01至0.04重量％的苯扎氯铵溶液，所述苯扎氯铵溶液浓度为50％；其中，基本不包含用于螯合金属离子的乙二胺四醋酸根离子。
如上所述的眼用组合物，其中该乙酸盐缓冲溶液的ph值为约3.5至4.5、3.5至4.2、3.5至4.0、3.8至4.4或4.0至4.5，且含量为10重量％。
如上所述的眼用组合物，其中该乙酸盐缓冲溶液由乙酸钠及2n乙酸所组成。
在一个实施方案中，药学活性药物是盐酸肼屈嗪，该药物以介于0.5至2重量％之间的量存在。
在一个实施方案中，眼用组合物进一步包含0.5至2重量％的丙二醇。
在一个实施方案中，眼用组合物中丙二醇含量为1重量％。
在一个实施方案中，眼用组合物中羟苯甲酸甲酯含量为0.03重量％。
在一个实施方案中，眼用组合物中苯扎氯铵溶液的含量为0.02重量％。
在另一方面，本揭露提供制备眼用组合物的方法。在一个实施方案中，所述方法包括将稀释剂和ph介于约3.5至4.5的一种或更多种缓冲溶液混合形成第一临时混合物，将一种或更多种等渗剂加入第一临时混合物中形成第二临时混合物，将一种或更多种防腐剂加入第二临时混合物中形成第三临时混合物，将包含肼屈嗪的药学活性药物加入第三临时混合物中形成眼用制剂。
在一个实施方案中，所述方法包括将稀释剂和ph介于约3.5至4.5的一种或更多种缓冲溶液混合形成第一临时混合物，将一种或更多种润滑剂加入第一临时混合物中形成第二临时混合物，将一种或更多种等渗剂加入第二临时混合物中形成第三临时混合物，将一种或更多种防腐剂加入第三临时混合物中形成第四临时混合物，将包含肼屈嗪的药学活性药物加入第四临时混合物中形成眼用制剂。
在一个实施方案中，缓冲液是ph为约3.9至4.5的乙酸盐缓冲溶液，其以在组合物中提供介于约8至12重量％之间的乙酸盐缓冲溶液的量加入。在另一个实施方案中，乙酸盐缓冲溶液以在制剂中提供约10重量％乙酸盐缓冲液的量加入。在进一步的实施方案中，乙酸盐缓冲溶液由乙酸钠和2n乙酸组成。
在一个实施方案中，润滑剂是以在制剂中提供介于约0.5至2重量％之间的丙二醇的量加入的丙二醇。在进一步的实施方案中，丙二醇以在组合物中提供约1重量％丙二醇的量加入。
在进一步的实施方案中，等渗剂是以在组合物中提供介于约0.25至1重量％之间的氯化钠的量加入的氯化钠。在一个实施方案中，氯化钠以在组合物中提供约0.5重量％氯化钠的量加入。
在又另一个实施方案中，防腐剂是以在组合物中提供介于约0.01至0.04重量％之间的苯扎氯铵的量加入的苯扎氯铵。在另一个实施方案中，苯扎氯铵溶液以在组合物中提供约0.02重量％苯扎氯铵溶液的量加入。在进一步的实施方案中，加入第二防腐剂，其中第二防腐剂是以在组合物中提供介于约0.015至0.06重量％之间的羟苯甲酸甲酯的量加入的羟苯甲酸甲酯。在又另一个实施方案中，羟苯甲酸甲酯以在组合物中提供约0.03重量％羟苯甲酸甲酯的量加入。
在实施方案中，药学活性药物是以介于约0.5至2重量％之间存在于组合物中的肼屈嗪。在进一步的实施方案中，药学活性药物是盐酸肼屈嗪。在具体的实施方案中，药学活性药物是以约1重量％存在于组合物中的盐酸肼屈嗪。
在实施方案中，一个或更多个添加步骤另外包括在添加的同时混合。
在另外一方面，本揭露提供用于治疗黄斑变性的方法。在实施方案中，所述方法包括将本文所述治疗有效量的眼用组合物给予有黄斑变性风险或诊断为黄斑变性的受治者的眼中。在一个实施方案中，所述黄斑变性是年龄相关性黄斑变性。在具体的实施方案中，所述年龄相关性黄斑变性是干性年龄相关性黄斑变性。
具体实施方式
为使本揭露实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本揭露实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本揭露一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本揭露中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本揭露保护的范围。
本揭露中对可能出现的术语定义如下：
本文中使用的“受治者”一词，意指哺乳类，例如人类或动物。
浓度、量、ph值等通常以范围形式呈现，不应解释为对本揭露范围的不可变更限制。因此，范围的描述应视为已明确公开所有可能的亚范围以及该范围内的各个数值。例如，对例如3.8至4.4的ph范围的描述应视为具有明确公开的亚范围例如3.8至4.4、3.8至4.2、3.8至4.0、4.0至4.4、4.2至4.4、3.9至4.2、4.0至4.2等，以及该范围内的各个数值，例如3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3和4.4。
“治疗有效量”是指可用于预防、治疗视觉障碍或视力减退或眼疾病或减慢视觉障碍或视力减退或眼疾病的进展的药学活性药物或药物的量。
在本文中提及的“药学活性药物”、“药物”或通过名称提及的任何具体组合物或化合物，例如肼屈嗪，包括药理活性化合物及其制药可接受的盐。所述药理活性药物的盐可由酸衍生，实例包括但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸和磷酸。
根据本揭露的一个实施例，眼用组合物包含肼屈嗪药学活性药物，一或多种缓冲剂、等渗剂、和防腐剂，其中不含有螯合剂。螯合剂有一个或多个多齿配体提供多对电子与中心体形成配位键。例如结构式i所示乙二胺四醋酸根离子提供2个氮原子和4个羧基氧原子共6个配位与金属(m)结合：
本揭露发现，与现有技术中存在的教示不同，在包含肼屈嗪的眼用组合物中加入螯合剂并不会提高稳定性，解决变色的问题。更进一步地，与本领域普通技术人员的预料相反，不包含螯合剂的肼屈嗪眼用组合物具有更高的稳定性，能够解决存储和使用过程中的变色问题。因此，本揭露的不包含螯合剂的肼屈嗪眼用组合物不但具有更低的成本而且具有更高的稳定性。
在一些实施例中，本揭露的包含肼屈嗪的眼用组合物中基本不含有用于螯合金属离子的乙二胺四醋酸根离子。在一些实施例中，本揭露的包含肼屈嗪的眼用组合物不包括乙二胺四醋酸二钠、乙二胺四醋酸四钠和乙二胺四醋酸二钠二水合物。
合适的缓冲剂是本领域已知的，包括而不限于乙酸盐、抗坏血酸盐、三羟甲基氨基甲烷、乙酸钠三水合物、乙酸、柠檬酸盐缓冲剂、硼酸盐、碳酸盐、乙酸盐和/或磷酸盐。眼用溶液的ph范围一般为约3.0至7.7,大部分眼用溶液的ph为约5至7。在实施方案中，本揭露制剂的ph介于约3.0至7.7或约5至7之间。在优选的实施方案中，眼用溶液的ph为约3.5至4.5、3.5至4.2、3.5至4.0、3.8至4.4或4.0至4.5。应了解，所用缓冲剂将取决于要保持的ph值。在其它实施方案中，也可利用ph调节剂用来调节制剂的ph值。应了解，可以使用本领域已知的和适于局部给予眼的任何ph调节剂。在非限制性的实施方案中，ph调节剂选自氢氧化钠和/或盐酸。示例性缓冲剂包括乙酸钠三水合物usp(美国药典)和乙酸usp(2n)。另外的示例性缓冲剂为包含乙酸钠三水合物usp和乙酸usp的乙酸盐缓冲溶液usp。
等渗剂一般是生理上耐受的并赋予制剂合适的张度以防止水跨越与制剂接触的细胞膜的净扩散的作用剂或化合物。合适的等渗剂包括但不限于盐(包括氯化钠)和糖(例如右旋糖和乳糖)。眼的重量摩尔渗透压浓度为约290mosmol/kg。眼用溶液的重量摩尔渗透压浓度范围一般介于约250至350mosmol/kg，其大部分落入约290至300mosmol/kg之间。在实施方案中，本揭露制剂的重量摩尔渗透压浓度应处于或接近眼的重量摩尔渗透压浓度。在具体的非限制性实施方案中，本揭露制剂的重量摩尔渗透压浓度一般介于约250至350mosmol/kg之间或介于约290至300mosmol/kg之间。在一个具体实施方案中，本揭露制剂的重量摩尔渗透压浓度为约300mosmol/kg。示例性等渗剂是氯化钠usp。
在一个实施方案中，组合物的ph介于约3.5和4.5之间。在一个优选的实施方案中，组合物的ph介于约3.8和4.4之间。在另一个实施方案中，组合物的ph介于约4.0和4.4之间。
合适的防腐剂是本领域已知的，包括但不限于苯扎氯铵、羟苯甲酸甲酯(methylparabenen)、三氯叔丁醇、硫柳采(thimerol)、对羟基苯甲酸丙醋和聚季按盐-1(polyquaterniaum-1)。按照fdaadvisoryreviewpanelonotcophthalmicdrugproducts(日期为1979年12月的最终报告)，用于眼用制剂的苯扎氯铵usp的最大浓度为0.013％，羟苯甲酸甲酯nf的最大浓度为0.1-0.2％。苯扎氯铵usp抗细菌最有活性，但被认为抗假单胞菌和霉菌较弱。羟苯甲酸甲酯nf抗真菌和革兰氏阳性细菌最有活性，但被认为抗革兰氏阴性细菌较弱。示例性防腐剂包括苯扎氯铵nf和/或羟苯甲酸甲酯nf。
根据本揭露的其他实施例，视情况眼用组合剂还可以包含润滑剂、ph调节剂、稀释剂和粘度增强剂等中的一种或者多种。
合适的润滑剂包括但不限于丙二醇、聚乙二醇、聚乙烯醇和甘油。示例性润滑剂为丙二醇usp。
合适的稀释剂是本领域已知的，包括但不限于纯净水usp和注射用水。示例性稀释剂包括水，尤其是注射用水usp和盐水。
合适的粘度增强剂是本领域已知的，包括但不限于聚乙烯醇、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。
临床上，重复剂量的局部盐酸肼屈嗪制剂用于年龄相关性黄斑变性受治者是安全的，并且耐受性良好(ralston等人，2010,arvoabstracts，摘要号913/a196)。在一些实施方案中，本文所述方法涉及用本文所述组合物预防年龄相关性黄斑变性或减慢年龄相关性黄斑变性的发展。在一个实施方案中，考虑用本文所述制剂防止或减慢诊断有非渗出性或渗出性年龄相关性黄斑变性的患者的脉络膜新生血管生成的方法。
在一个实施方案中，将1重量％肼屈嗪眼用溶液滴注在受治者眼中至少每日一次，而在其它实施方案中，介于每日一至五次。在又一个实施方案中，将0.5至4重量％肼屈嗪眼用溶液滴注在受治者眼中至少每日一次，而在其它实施方案中，每日一至五次。在另外的实施方案中，将0.5至2重量％肼屈嗪眼用溶液滴注在受治者眼中至少每日一次，而在其它实施方案中，每日一至五次。
下列实例阐明本文提供的例示性方法。这些实例并未意图且不得推断为限制揭露范围。将可明显得知方法可用本文特别描述以外方式实施。本文就教示观点而言，可有众多修改及变化，且因此在揭露范围内。
实施例：实施例1：制剂可通过逐步添加各成分来制备。
在实施方案中，制备眼用组合物制剂的方法包括：首先在搅拌下将适量的缓冲溶液加入适量的纯净水中。优选将纯净水装入大小合适的容器中以容纳最终制剂的体积。缓冲溶液可单独制备或可以市售购买。在一个非限制性实施方案中，缓冲溶液是乙酸盐缓冲溶液。在一个非限制性实施方案中，乙酸盐缓冲溶液包含乙酸钠、乙酸和纯净水。在一个示例性实施方案中，乙酸盐缓冲溶液的ph为约4.2至4.6。在具体的实施方案中，缓冲液的ph为4.2。作为非限制性实例，乙酸盐缓冲溶液可通过将1.75g乙酸钠和18.6ml乙酸2n加入1l量瓶中，用适量纯净水补充至1000ml来制备。此示例性缓冲溶液的ph应为约4.2。
在搅拌的同时将一种或更多种润滑剂加入缓冲溶液中。将所得溶液a混合直到润滑剂完全或几乎溶解。在一个非限制性实施方案中，润滑剂是丙二醇。在搅拌的同时将一种或更多种等渗剂加入溶液a中。将所得溶液b混合直到等渗剂完全或几乎完全溶解。在搅拌的同时将一种或更多种防腐剂加入溶液b中。将所得溶液c混合直到防腐剂完全或几乎完全溶解。在搅拌的同时将一种或更多种治疗剂(包括但不限于盐酸肼屈嗪)加入溶液c中。将所得溶液d混合直到治疗剂完全或几乎完全溶解。
应了解，其中使用一种以上类型的成分(例如两种或更多种防腐剂)的情况下，成分可一起或单独加入。其中单独加入成分的情况下，可在加入下一种成分之前将溶液彻底混合或几乎彻底混合。在此过程中，可测量制剂参数，并以此调节制剂。例如，需要的情况下可测量并调节ph值。
表1和表2所示是根据本揭露实施例的包含肼屈嗪的眼用制剂的8种具体配置方案，分别将其命名为配方a-配方h。其中，各成分均按质量百分比添加。根据实际情况，可使用稀释剂，或者稀释剂与粘度增强剂的混合溶液等将制剂整体质量百分比补充至100％。
如表1和表2中所示，配方a-配方e均可以得到无色透明的澄清溶液，而配方f-配方h初始得到的溶液即已变色。
表1
表2
实施例2：通过提高储存温度加速药物的化学或物理变化检验本揭露制剂的稳定性。
将实施例1中的配方a-配方h的8种盐酸肼屈嗪制剂装入玻璃样品小瓶中。将制剂在40℃和50℃下保存以评价加速药物的化学或物理变化下的储存情况。在时间为零和一、二、三、四周时测溶液活性成分的ph、重量摩尔渗透压浓度(osmol/kg)和含量(％)，并观察溶液的外观和颜色。
结果如表3至表10所示，配方f、配方g和配方h的盐酸肼屈嗪制剂在室温下，初始溶液就已经变色。在40℃下储存历时四周，配方a、配方b、配方c、配方d和配方e都可以维持无色澄清透明。在50℃下储存历时三周，配方a、配方b和配方c已经产生变色；然而，在50℃下储存历时四周，出乎意料地只有配方d和配方e仍然维持无色澄清透明。
表3：配方a经时的稳定性检验结果
表4：配方b经时的稳定性检验结果
表5：配方c经时的稳定性检验结果
表6：配方d经时的稳定性检验结果
表7：配方e经时的稳定性检验结果
表8：配方f稳定性经时的检验结果
表9：配方g经时的稳定性检验结果
表10：配方h经时的稳定性检验结果
通过以上的实施例可以看出，ph值对于制剂的稳定性具有影响。配方f-配方h初始状态就已经变色。在一些实施例中，本揭露的制剂的ph值为约3.5至4.5、3.5至4.2、3.5至4.0、3.8至4.4或4.0至4.5。
进一步地，通过以上的实施例可以看出，是否包含螯合剂对于制剂的稳定性也具有影响。与本领域中的教示相反，加入螯合剂并未提高制剂的稳定性。出人意料地，未加入螯合剂配方d和配方e，相比于加入螯合剂的配方a-配方c具有更好的稳定性；即使在50℃情况下保存4周仍能保持无色透明澄清的状态。
如所属技术领域具有一般知识者可理解方式，本文中“包含”表示包括，但不限于，并允许纳入未指定要项、步骤、成分或组分。“基本不含”意指通过测定，指定成份或组分的量不高于0.001％。
除非另行指出，说明书和权利要求项中用于表达成份数量、性质的全部数字，在所有情况下均应视为由“约”一词修饰。因此，除非相反指出，说明书和权利要求书中所列的数值参数为近似值，可能依据本揭露试图取得所需性质而异。需要进一步厘清时，“约”一词与所列数值或范围并用时，表示较多或略少于该所列数值或范围，至该所列数值的±20％范围内；该所列数值的±19％；该所列数值的±18％；该所列数值的±17％；该所列数值的±16％；该所列数值的±15％；该所列数值的±14％；该所列数值的±13％；该所列数值的±12％；该所列数值的±11％；该所列数值的±10％；该所列数值的±9％；该所列数值的±8％；该所列数值的±7％；该所列数值的±6％；该所列数值的±5％；该所列数值的±4％；该所列数值的±3％；该所列数值的±2％；或该所列数值的±1％。
虽然发明大范围中所列数值范围和参数为近似值，特定态样所列数值会尽可能精确回报。然而任何数值包含其对应检测测量中发现的标准差必然导致的固有特定误差。
本文中使用的“一”、“该”及类似指称对象用语，将推断为同时涵盖单数和复数，除非在本文中另行指出，或由其前后文明确反驳。本文所载数值范围，仅意图做为个别指称范围内每个独立数值之速记法。除非本文中另行指出，每个个别数值均纳入说明书中，如同在本文中个别重申。本文所述的全部方法可用任何适当顺序进行，除非本文另行指出，或由其前后文另行明确反驳。本文提供的任何及全部实例或例示性用语(如，“例如”)，仅意图进一步阐明发明，而未对权利要求范围设立限制。
本文中所述的特定态样，包括发明者所知，实行发明的最佳模式。当然所属技术领域具通常知识者阅读先前叙述时，可明显得知这些所述态样的变化。发明者预期具通常技术者视情况采用此类变化，且发明者意图令发明以本文具体描述以外方式实行。因此，此揭露在适用法律允许范围内，包括权利要求范围所载的主题之所有修改及等同项。还有，本揭露已涵盖前述要项的所有可能变化之任何组合，除非本文另行指出，或由其前后文另行明确反驳。