本发明属于生物药品应用领域，具体涉及转铁蛋白的在抗抑郁药物的应用及包含转铁蛋白的组合物，以及转铁蛋白在制备预防或/和改善或/和治疗抑郁症的药物中的应用
背景技术：
：：抑郁症(majordepressivedisorder,mdd)，以显著而持久的心境低落为主要临床特征，是心境障碍的主要类型。临床可见心境低落与其处境不相称，情绪的消沉可以从闷闷不乐到悲痛欲绝，自卑抑郁，甚至悲观厌世，可有自杀企图或行为。据世界卫生组织统计，全球抑郁症发病率约为11％，约有3.4亿抑郁症患者。当前抑郁症已成为世界第四大疾病，预计到2020年将成为仅次于心血管疾病的人类第二大疾患。抑郁症是一个复杂的疾病，涉及多个生物学过程和通路，包括神经递质系统、炎性反应、氧化应激、氮化应激、神经营养和神经发生、皮质醇、下丘脑-垂体-肾上腺轴(moylan,s.；maes,m.；wray,n.r.；berk,m.theneuroprogressivenatureofmajordepressivedisorder:pathwaystodiseaseevolutionandresistance,andtherapeuticimplications.mol.psychiatry18:595–606；2012.)。最近，研究表明炎症系统与抑郁症的病理及生理变化密切相关，研究表明，长期慢性应激激活外周及中枢免疫系统，大量炎性细胞因子的释放，是抑郁症发生的重要机制(王艳，张蒙夏，谭思杰，等.慢性应激与抑郁症发病机理研究进展[j].中南医学科学杂志，2015,43(6):703-707.)。转铁蛋白(transferrin,tf)是一个分子量约为79kda的糖蛋白，半衰期为8-10天。转铁蛋白主要由肝脏合成，可以结合两个三价铁离子(fe3+)。转铁蛋白可以从人血浆中提取或重组表达。可用于临床的转铁蛋白可以通过cohn法分离，离子交换层析和超滤的方法获得(vonbonsdorffl,h,lindeberge,nymant,harjua,parkkinenj.developmentofapharmaceuticalapotransferrinproductforironbindingtherapy.biologicals2001；29:27–37.)。在现有技术中，至今尚无利用转铁蛋白或将其联用其他药物用于制备治疗/改善抑郁症药物的报道。技术实现要素：本发明的目的在于提供转铁蛋白的在抗抑郁药物的应用及包含转铁蛋白的组合物。本发明的目的是通过以下技术方案实现的：转铁蛋白在制备预防或/和改善或/和治疗抑郁症的药物中的应用。一种包含转铁蛋白的组合物，转铁蛋白和其他组分，所述其他组分包括：临床治疗抑郁症的一线药物中的一种或多种；优选地，按质量份数，所述组合物包括：转铁蛋白1质量份，所述临床治疗抑郁症的一线药物(1/3)～3质量份；更优选地，所述组合物包括：转铁蛋白1质量份，所述临床治疗抑郁症的一线药物1质量份。在优选的实施方式中，所述临床治疗抑郁症的一线药物包括：氟西汀。在优选的实施方式中，所述组合物还包括药学上可接受的载体。在优选的实施方式中，所述转铁蛋白的制备原料包括人血浆cohniv组分。在优选的实施方式中，所述转铁蛋白的制备方法依次包括：预处理液制备步骤，疏水层析纯化步骤；优选地，还包括浓缩置换步骤。在优选的实施方式中，所述预处理液制备步骤中，将血浆cohniv组分依次经过第一次复溶处理，第一次离心处理，第一次过滤处理，调节ph处理，去除杂质蛋白处理，第二次离心处理，第二次过滤处理，得到预处理液；所述疏水层析纯化步骤中，将所述预处理液经过缓冲液置换处理，疏水层析处理，得到纯化转铁蛋白；优选地，所述纯化转铁蛋白的纯度为大于等于95％；优选地，所述浓缩置换步骤中，将所述纯化转铁蛋白进行超滤处理、置换处理，得到转铁蛋白。在优选的实施方式中，所述第一次复溶处理，采用pbs缓冲液复溶，所述血浆cohniv组分与所述pbs缓冲液的质量体积比为1：(2-10)，优选为1：3.5；优选地，所述pbs缓冲液为：10-50mmol/lpbs，ph6.0-8.0，更优选为20mmol/lpbs，ph7.5；所述第一次离心处理，转速为4,000-15,000rpm，温度为0-10℃，优选为10,000rpm，4℃，保留上清液用于所述第一次过滤处理；所述第一次过滤处理，采用孔径为0.1-1.0μm，优选为0.45μm滤膜，过滤后取滤液用于所述调节ph处理；所述调节ph处理，将所述滤液的ph值调节为6.5-7.5，优选为7.0；更优选采用1mol/l柠檬酸钠溶液作为ph调节剂；所述去除杂质蛋白处理，向调节ph后的滤液中加入蛋白沉淀剂去除杂质蛋白；更优选地，所述蛋白沉淀剂选自：peg4000和/或乙醇溶液；进一步优选地，所述peg4000与调节ph后的滤液的质量体积比为10-20％，优选为15％；所述乙醇溶液的体积百分浓度为90-98％，优选为96％，温度为0至零下10℃，优选为零下4℃；所述第二次离心处理，转速为4,000-10,000rpm，温度为0-10℃，优选为10000rpm，4℃，保留上清液用于第二次过滤处理；所述第二次过滤处理，采用孔径为0.1-1.0μm，优选为0.45μm滤膜，得到的滤液作为预处理液。在优选的实施方式中，所述疏水层析纯化步骤中，所述缓冲液置换处理，采用hitrapdesalting脱盐柱，采用的平衡缓冲液为：10-50mmol/lpbs,ph6.0-8.0，其中(nh4)2so4的浓度为0.5-3mol/l，优选为20mmol/lpbs,ph7.0,(nh4)2so4浓度为1.5mol/l；所述疏水层析处理，先将所述平衡缓冲液平衡所述辛基疏水柱，再用所述平衡缓冲液淋洗所述辛基疏水柱，再用洗脱缓冲液洗脱所述疏水层析柱为辛基疏水柱，用octylsepharose4fastflow装填；所述平衡缓冲液为：10-50mmol/lpbs,ph6.0-8.0，其中(nh4)2so4浓度为1.5-3mol/l，优选为20mmol/lpbs,ph7.0,(nh4)2so4浓度为1.5mol/l；所述洗脱缓冲液为：10-50mmol/lpbs,ph6.0-8.0，其中(nh4)2so4浓度为0.9-1.4mol/l，优选为20mmol/lpbs,ph7.0,(nh4)2so4浓度为1.2mol/l；优选地，所述超滤处理，采用1kd-10kd，优选为3kd超滤膜；所述置换处理，采用的置换缓冲液为：10-50mmol/lpbs，ph7.0-7.4，优选为20mmol/lpbs，ph7.2。所述组合物在制备预防或/和改善或/和治疗抑郁症的药物中的应用。相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：1、本发明中，转铁蛋白可以起到抗抑郁的作用。对于不可预知抑郁小鼠的实验结果表明转铁蛋白可缩短悬尾及强迫游泳不动时间、提高血清中5-ht和da含量，提示小鼠抑郁症病情有所减轻。2、在本发明中，转铁蛋白可以与氟西汀联合使用，进一步提高治疗效果。3、本发明还提供一种转铁蛋白制备方法，该法能从目前常用的nitschmann-kistler或cohn6法或cohn6+9法生产血液制品时废弃物cohniv组分里提取转铁蛋白，其充分、合理地利用了有限的血浆，减少了血浆资源的浪费。4、本发明转铁蛋白的制备方法较为简单，而且可以直接工业化放大生产，大规模地应用于制药工业。具体实施方式为了更好地对本发明的技术特征和效果进行说明，下面采用具体实施方式对本发明进行详细说明，但本发明并不限于此。第一方面，本发明提供转铁蛋白在制备预防或/和改善或/和治疗抑郁症的药物中的应用。本发明在动物实验中验证了不同浓度转铁蛋白，以及转铁蛋白与氟西汀联用对慢性不可预知抑郁小鼠模型的影响，结果表明转铁蛋白及其与氟西汀联用，均可缩短悬尾及强迫游泳不动时间、提高血清中5-ht和da含量。第二方面，本发明提供了一种包含转铁蛋白的组合物，包括：转铁蛋白和其他组分，其他组分包括：临床治疗抑郁症的一线药物中的一种或多种；该临床治疗抑郁症的一线药物包括：氟西汀。在优选的实施方式中，按质量份数，该组合物包括：转铁蛋白1质量份，临床治疗抑郁症的一线药物(1/3)～3质量份(例如：可以为1/3质量份、2/3质量份、1质量份、2质量份、3质量份中任意值或任意二者之间的数值范围)；更优选地，该组合物包括：转铁蛋白1质量份，临床治疗抑郁症的一线药物1质量份。本发明采用的氟西汀为市售产品，优选购自sigma公司。所述组合物还包括药学上可接受的载体。上述药学上可接受的载体包括：药学上可接受的抛射剂、缓冲液、明胶、单糖、多糖、氨基酸、螯合剂、糖醇、聚乙二醇、以及表面活性剂中的一种或多种。所述组合物中的几种成分，可以分别单独使用，也可以混合后再共同使用。所述转铁蛋白可以是采用目前任何方法制备的人转铁蛋白，优选是采用如下方法制备的转铁蛋白，其采用人血浆cohniv组分作为原料，得到的转铁蛋白的sds-page变性胶电泳图中清晰可见1条分子量约为79kd的条带，人血浆cohniv组分是指按nitschmann-kistler法，或cohn6法，或cohn6+9法生产人血液制品时的废弃物——cohniv组分；该转铁蛋白也可以通过基因重组表达的方式获得；也可以采用市售产品。上述转铁蛋白的具体制备方法如下：依次包括以下步骤：预处理液制备，疏水层析纯化，浓缩置换。步骤一、预处理液制备：本步骤的目的为复溶人血浆cohniv组分沉淀中的蛋白质，去除助滤剂，并去除复溶后的一些杂蛋白。分步骤一、第一次复溶处理：将cohniv组分固体溶解到pbs缓冲液中，混合均匀，得到第一次复溶液。上述人血浆cohniv组分与pbs缓冲液的质量体积比(w/v)为1：(2-10)，优选为1：3.5；上述pbs缓冲液为：10-50mmol/lpbs，ph6.0-8.0，优选为20mmol/lpbs，ph7.5。分步骤二、第一次离心处理：将上述第一次复溶液离心，保留上清液，作为第一次上清液。上述离心的转速为4,000-15,000rpm，温度为0-10℃，优选为10,000rpm，4℃。分步骤三、第一次过滤处理：将上述第一次上清液用0.1-1.0μm，优选为0.45μm的滤膜过滤，得到滤液，作为第一次过滤液。分步骤四、调节ph处理：在上述第一次过滤液中加入1mol/l的柠檬酸钠溶液，得到调节ph值后的过滤液，其ph值为6.5-7.5，优选为7.0。分步骤五、去除杂质蛋白处理：搅拌上述调节ph值后的过滤液同时向其中缓慢加入蛋白沉淀剂至沉淀自动沉降变实(此处的变实指：上清和沉淀有明显的分界线，上清变得透亮，沉淀数量不再增多)，之后取上清液，作为去除杂质蛋白液，以备下一步的离心。上述蛋白沉淀剂优选为聚乙二醇4000(peg4000)，peg4000与调节ph值后的过滤液的质量体积比为10-20％，优选为15％。上述蛋白沉淀剂也可以为体积百分浓度为90-98％、优选为96％，温度为零下10℃，优选为零下4℃的乙醇溶液；由于采用乙醇溶液在沉淀过程中会产热，所以乙醇溶液要保持低温。本分步骤可以有效去除一部分杂质蛋白，同时还可以沉淀病毒，提高产品的安全性。分步骤六、第二次离心处理：将上述去除杂质蛋白液离心，保留上清液，作为第二次上清液。上述离心的转速为4000-15000rpm，温度为0-10℃，优选为10000rpm，4℃。分步骤七、第二次过滤处理：将上述第二次上清液用0.1-1.0μm，优选为0.45μm的滤膜过滤，得到滤液，作为人血浆cohniv组分预处理液。步骤二、疏水层析纯化：本步骤的目的是从人血浆cohniv组分预处理液中去除其他蛋白杂质，分离得到纯化转铁蛋白。分步骤一、缓冲液置换处理：本分步骤中，选用hitrapdesalting脱盐柱，置换上述人血浆cohniv组分预处理液，使其初始盐浓度和ph与平衡缓冲液(10-50mmol/lpbs，ph6.0-8.0，0.5-3mol/l(nh4)2so4，优选为20mmol/lpbs,ph7.0,1.5mol/l(nh4)2so4)相同。具体的操作为：(1)将hitrapdesalting脱盐柱预先用5-10倍柱体积的平衡缓冲液(10-50mmol/lpbs,ph6.0-8.0,其中(nh4)2so4浓度为0.5-3mol/l，优选为20mmol/lpbs,ph7.0,其中(nh4)2so4浓度为1.5mol/l)来平衡，直至电导率检测器显示流出的液体的ph值和该平衡缓冲液的一致。(2)再将适量的上述人血浆cohniv组分预处理液进料到hitrapdesalting柱。(3)再用平衡缓冲液(包括10-50mmol/lpbs,ph6.0-8.0,其中(nh4)2so4浓度为0.5-3mol/l，优选为20mmol/lpbs,ph7.0,其中(nh4)2so4浓度为1.5mol/l)对hitrapdesalting柱进行淋洗，根据uv280峰图收集蛋白溶液，得到置换缓冲液的cohniv蛋白溶液。分步骤二、疏水层析处理：本分步骤中，选用辛基疏水柱(octylsepharose4fastflow装填)。具体的操作为：(1)预先用5-10倍柱体积的平衡缓冲液(10-50mmol/lpbs,ph6.0-8.0,其中(nh4)2so4浓度为1.5-3mol/l，优选为20mmol/lpbs,ph7.0,其中(nh4)2so4浓度为1.5mol/l)平衡辛基疏水柱，直至电导率检测器显示流出的液体的ph值和该平衡缓冲液的一致。(2)然后将适量的上述置换缓冲液的cohniv蛋白溶液进料到辛基疏水柱。(3)再用平衡缓冲液(10-50mmol/lpbs,ph6.0-8.0，其中(nh4)2so4浓度为1.5-3mol/l，优选为20mmol/lpbs,ph7.0,其中(nh4)2so4浓度为1.5mol/l)进行淋洗，使目标成分充分与辛基疏水柱结合，根据uv280峰图收集流穿液(又名穿透液)。(4)再用洗脱缓冲液(10-50mmol/lpbs,ph6.0-8.0，其中(nh4)2so4浓度为0.9-1.4mol/l，优选为20mmol/lpbs,ph7.0,其中(nh4)2so4浓度为1.2mol/l)进行洗脱，得到的洗脱液即为纯化转铁蛋白。作为优选的实施方式，上述制备方法还包括：步骤三、浓缩置换步骤：分步骤一、浓缩处理：将上述纯化转铁蛋白采用1kd-10kd，优选为3kd的超滤膜浓缩，得到浓缩液。上述步骤二的层析过程会稀释样品，本分步骤的目的为将样品浓缩达到可以使用的程度。分步骤二、置换处理：采用置换缓冲液通过透析或超滤的方法，将上述浓缩液中的高浓度盐(主要是硫酸铵)置换到置换缓冲液中，取透析膜内的蛋白溶液或超滤膜上的蛋白溶液即为转铁蛋白。本分步骤的目的是将浓缩液含有的高浓度盐(主要是硫酸铵)的缓冲液置换到pbs缓冲液中。其中采用的置换缓冲液为10-50mmol/lpbs，ph7.0-7.4，优选为20mmol/lpbs，ph7.2。采用透析时：优选上述置换缓冲液作为透析缓冲液，透析时间为20-72h，优选为24h，透析体积比是1：(100-10000)，优选为1：500，保留透析膜内的蛋白溶液，即为转铁蛋白。采用超滤时：优选上述置换缓冲液作为超滤缓冲液，超滤膜的规格为1-10kd，优选为3kd，压力为0.1-0.3mpa，优选为0.1mpa，保留超滤膜上的蛋白溶液，即为转铁蛋白。本发明中涉及的质量体积比(w/v)是指：固体的质量(g)与液体体积(ml)之间的比例，如：上述人血浆cohn组分与pbs缓冲液的质量体积比(w/v)为1：3.5，是指人血浆cohniv组分量取1g时，pbs缓冲液则量取3.5ml。下面通过实施例对本发明转铁蛋白的制备、鉴定和应用进行说明。以下实施例中涉及的分子生物学操作如未注明具体试验条件和方法，请参照sambrookj等主编，科学出版社，2017，分子克隆实验指南(第四版)或相应产品的说明书。实施例1本实施例为转铁蛋白的制备方法，包括以下步骤：s1：人血浆cohniv组分预处理液制备：(1)第一次复溶：将按nitschmann-kistler法生产血液制品时的废料——人血浆cohniv组分固体溶解到20mmol/lpbs溶液(ph7.5)中，按照1：3.5(w/v)溶解后，用磁力搅拌器，混合均匀，得到第一次复溶液。(2)第一次离心：将第一次复溶液于10000rpm，4℃离心，得到第一次上清液。(3)第一次过滤：将第一次上清液用0.45μm滤膜过滤，得到第一次过滤液。(4)调节ph：将第一次过滤液用1mol/l柠檬酸钠将ph值调到7.0。(5)去除杂质蛋白：在第一次过滤液中加入15％(w/v)的peg4000，需要在搅拌的同时缓慢加入，peg4000完全溶解后待沉淀变实，取上清，作为去除杂质蛋白液。(6)第二次离心：将去除杂质蛋白液于10000rpm，4℃离心，得到第二次上清液。(7)第二次过滤：将第二次上清液用0.45μm滤膜过滤，获得人血浆cohniv组分预处理液。s2：人血浆cohniv组分预处理液疏水层析纯化：(1)缓冲液置换处理：a)将hitrapdesalting脱盐柱(1×8cm)预先用5-10倍柱体积的平衡缓冲液(20mmol/lpbs,ph7.0,1.5mol/l(nh4)2so4)平衡，直至电导率检测器显示流出的液体的电导值和该平衡缓冲液的一致。b)将适量的上述人血浆cohniv组分预处理液进料到hitrapdesalting柱。c)用平衡缓冲液(20mmol/lpbs,ph7.0,1.5mol/l(nh4)2so4)对hitrapdesalting柱进行淋洗，根据uv280峰图收集蛋白溶液，得到置换缓冲液的cohniv蛋白溶液。(2)疏水层析处理：a)预先用5-10倍柱体积的平衡缓冲液(20mmol/lpbs,ph7.0,1.5mol/l(nh4)2so4)平衡辛基疏水柱(octylsepharose4fastflow装填)，直至电导率检测器显示流出的液体的电导值和该平衡缓冲液的一致。b)将适量的上述置换缓冲液的cohniv蛋白溶液进料到辛基疏水柱。c)用平衡缓冲液(20mmol/lpbs,ph7.0,1.5mol/l(nh4)2so4)进行淋洗，根据uv280峰图收集穿透液。d)用洗脱缓冲液(20mmol/lpbs,ph7.0,1.2mol/l(nh4)2so4)进行淋洗，根据uv280峰图收集洗脱液，即为纯化转铁蛋白。s3：浓缩置换：(1)浓缩：利用3kd超滤膜，将纯化转铁蛋白浓缩得到浓缩液。(2)置换：将浓缩液采用透析的方式，时间为24h，体积比为1:500，透析缓冲液为20mmol/lpbs(ph7.2)，取透析膜内蛋白溶液作为转铁蛋白。s4：灭菌：将上述转铁蛋白采用过滤除菌，滤膜为0.22μm低蛋白吸附的pvdf膜，压力为5bar，得到灭菌后的转铁蛋白。实施例2本实施例是实施例1步骤s4得到的灭菌后的转铁蛋白(tf溶液)单独及其与氟西汀联用。以下检测例中，采用如下的实验动物和药物、模型建立方法、实验方法、检测方法、统计分析方法。一、实验动物：8周龄spf级c57bl/6小鼠，雄性(购于北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物生产许可证：北京百善scxk(京)2016-0006)。二、实验药物：生理盐水(山东华鲁制药有限公司，h18121510)；人转铁蛋白(即：实施例1的步骤s4得到灭菌后的转铁蛋白)；氟西汀(fluoxetine,sigma,f132)；5-ht(5-羟色胺)，da(多巴胺)elisa试剂盒(上海酶联生物科技有限公司)。三、模型建立：参考mathieunollet等给出的慢性不可预知抑郁小鼠模型的构建方法进行模型建立(nollet,m.,leguisquet,a.m.,andbelzung,c.(2013).modelsofdepression:unpredictablechronicmildstressinmice.currprotocpharmacolchapter5,unit565.)，具体操作如下：动物饲养在两个隔音的饲养间，一间用于饲养正常对照组，一间用于饲养模型组和给药组。正常对照组每笼饲养4-5只，不给予任何刺激，自由进食进水。其余各组单笼饲养，于6周内给予小鼠不同的慢性应激刺激原(cs)(具体见表1)。小鼠需要在整个昼夜周期中暴露于慢性应激刺激原，顺序随机但同一应激原不得连续应用，以使小鼠不能预知给予的刺激原。为了增加刺激强度，第一周后应激原可以合并使用。表1实验刺激原四、实验方法：1、悬尾实验：将小鼠尾末端1cm处粘在离地面15cm的木板上，使其处于倒立姿势，小鼠悬尾6分钟，记录后4分钟内累计不动的时间。2、强迫游泳实验：将小鼠分开置于开放状态的圆柱形烧杯(直径14cm，高20cm)，往里加入25±1℃的水，水深10cm，小鼠强迫游泳6分钟，记录后4分钟内累计不动的时间。小鼠停止游动，漂浮在水中保持不动，或者仅做一些为保持平衡必要轻微的动作视为不动。五、神经递质含量检测方法：按照试剂盒说明书方法测定小鼠血清中5-ht和da的含量。六、统计学分析方法：本实验使用统计学分析软件graphpadprism来统计分析实验结果，计量数据以均值±标准误)差表示，使用单因素方法分析(one-wayanova)和turkey’s多因素t检验进行各组间比较，p<0.05表明组间差异有统计学意义。检测例1转铁蛋白对慢性不可预知抑郁小鼠作用研究实验动物分组及给药方式：将适应性饲养一周的小鼠80只随机分为正常组、模型组(cs)、转铁蛋白低剂量组(10mg/kg体重/次)、转铁蛋白高剂量组(30mg/kg体重/次)、氟西汀组(20mg/kg体重/次)，每组16只。转铁蛋白用pbs溶解至所需给药浓度、氟西汀是以生理盐水溶解至所需给药浓度，模型组给予同等体积的生理盐水。分组和给药方式如表2所示。表2实验分组及给药方式检测1：转铁蛋白对慢性不可预知抑郁小鼠悬尾及强迫游泳不动时间的影响实验结果如表3所示，与正常组相比，模型组小鼠的悬尾及强迫游泳不动时间显著延长；与模型组相比，转铁蛋白高剂量组(30mg/kg体重)、氟西汀组(20mg/kg体重)小鼠悬尾及强迫游泳不动时间显著缩短；与模型组相比，转铁蛋白低剂量组(10mg/kg体重)小鼠悬尾及强迫游泳不动时间没有显著缩短，但有缩短趋势。表3不同处理对慢性不可预知抑郁小鼠悬尾及强迫游泳不动时间的影响(n＝16；)注：与正常比较###p<0.0001；与模型组比较*p<0.05。检测2：转铁蛋白对慢性不可预知抑郁小鼠血清中5-ht和da含量的影响实验结果如表4所示，与正常组相比，模型组小鼠血清5-ht和da含量显著下降；与模型组相比，转铁蛋白高剂量组(30mg/kg体重)、氟西汀组(20mg/kg体重)小鼠血清中5-ht和da含量显著升高；与模型组相比，转铁蛋白低剂量组(10mg/kg体重)小鼠血清中5-ht和da含量没有显著升高，但有升高趋势。表4不同处理对慢性不可预知抑郁小鼠血清中5-ht和da含量的影响(n＝16；)注：与正常比较#p<0.05；与模型组比较**p<0.01，***p<0.001。检测例2转铁蛋白联合氟西汀对慢性不可预知抑郁小鼠作用研究。在同一只实验动物中转铁蛋白和氟西汀的质量比为1:(2/3)(如实施例2所述)。实验动物分组及给药方式：将适应性饲养一周的小鼠64只随机分为4组，每组16只。分组以及给药信息见表5。表5实验分组及给药方式检测1：转铁蛋白联合氟西汀对慢性不可预知抑郁小鼠悬尾及强迫游泳不动时间的影响实验结果如表6所示，与正常组相比，模型组小鼠的悬尾及强迫游泳不动时间显著延长；与模型组相比，转铁蛋白氟西汀联用组和氟西汀组小鼠悬尾及强迫游泳不动时间显著缩短；且转铁蛋白氟西汀联用组在强迫游泳实验中不动时间显著低于氟西汀组(p<0.05)。结果提示转铁蛋白联合氟西汀治疗抑郁症效果优于单用氟西汀治疗。表6不同处理对慢性不可预知抑郁小鼠悬尾及强迫游泳不动时间的影响(n＝16；)注：与正常比较###p<0.001；与模型组比较*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。检测例3分组更多的转铁蛋白及转铁蛋白和氟西汀联用对慢性不可预知抑郁小鼠作用研究实验动物分组及给药方式：将适应性饲养一周的小鼠105只随机分为7组：正常组、模型组、转铁蛋白低剂量组(10mg/kg体重/次)、转铁蛋白高剂量组(30mg/kg体重/次)、氟西汀低剂量组(10mg/kg体重/次)、氟西汀高剂量组(20mg/kg体重/次)、转铁蛋白(10mg/kg体重/次)与氟西汀(10mg/kg体重/次)联用组，每组15只。转铁蛋白用生理盐水溶解至所需给药浓度、氟西汀以生理盐水溶解至所需给药浓度，正常组和模型组给予同等体积的生理盐水。分组和给药方式如表2所示。表2实验分组及给药方式检测1：转铁蛋白对慢性不可预知抑郁小鼠悬尾及强迫游泳不动时间的影响实验结果如表3所示，与正常组相比，模型组小鼠的悬尾及强迫游泳不动时间显著延长；与模型组相比，转铁蛋白高剂量组(30mg/kg体重)、氟西汀高剂量组(20mg/kg体重)、转铁蛋白(10mg/kg体重/次)与氟西汀(10mg/kg体重/次)联用组小鼠悬尾及强迫游泳不动时间显著缩短；与模型组相比，转铁蛋白低剂量组(10mg/kg体重)、氟西汀低剂量组(10mg/kg体重)小鼠悬尾及强迫游泳不动时间没有显著缩短，但有缩短趋势；转铁蛋白(10mg/kg体重/次)与氟西汀(10mg/kg体重/次)联用组分别与转铁蛋白低剂量组(10mg/kg体重)和氟西汀低剂量组(10mg/kg体重)相比，小鼠悬尾及强迫游泳不动时间显著缩短。表3不同处理对慢性不可预知抑郁小鼠悬尾及强迫游泳不动时间的影响(n＝15；)注：与正常组比较aaap<0.0001；与模型组比较bbbp<0.0001，bbp<0.01，bp<0.05；与转铁蛋白低剂量组(10mg/kg体重/次)比较cccp<0.0001，cp<0.05；与氟西汀低剂量组(10mg/kg体重/次)比较ddp<0.01，dp<0.05。检测2：转铁蛋白对慢性不可预知抑郁小鼠血清中5-ht和da含量的影响实验结果如表4所示，与正常组相比，模型组小鼠血清5-ht和da含量显著下降；与模型组相比，转铁蛋白高剂量组(30mg/kg体重)、氟西汀高剂量组(20mg/kg体重)、转铁蛋白(10mg/kg体重/次)与氟西汀(10mg/kg体重/次)联用组小鼠血清中5-ht和da含量显著升高；与模型组相比，转铁蛋白低剂量组(10mg/kg体重)、氟西汀低剂量组(10mg/kg体重)小鼠血清中5-ht和da含量没有显著升高，但有升高趋势；转铁蛋白(10mg/kg体重/次)与氟西汀(10mg/kg体重/次)联用组分别与转铁蛋白低剂量组(10mg/kg体重)和氟西汀低剂量组(10mg/kg体重)相比，小鼠血清中5-ht和da含量显著升高。表4不同处理对慢性不可预知抑郁小鼠血清中5-ht和da含量的影响(n＝15；)注：与正常组比较aaap<0.0001，aap<0.01；与模型组比较bbbp<0.0001，bbp<0.01；与转铁蛋白低剂量组(10mg/kg体重/次)比较cccp<0.0001，ccp<0.01；与氟西汀低剂量组(10mg/kg体重/次)比较dddp<0.0001，dp<0.05。当前第1页12当前第1页12