一种包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物及其制备方法与流程

1.本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物及其制备方法。


背景技术：

2.脂肪肝是指由于各种原因引起肝脏内脂肪过大积累导致的疾病，非常容易引发肝硬化，严重威胁着人们的身体健康。脂肪肝是一种常见的弥漫性肝病，如能及时诊治可使其逆转，反之，部分病人可发展为脂肪性肝炎，甚至肝硬化。因此，早期诊治对组织脂肪肝进展和改善预后十分重要。脂肪肝一般分为两大类，一类是酒精性脂肪肝，此类患者中只有少部分人可能出现血脂增高；另一类是非酒精性脂肪肝，其原因比较复杂，包括肥胖、糖尿病、高血脂、药物及遗传因素，此外还有一部分原因不明的脂肪肝。
3.据国内文献《实验性兔脂肪肝肝脂酶活性变化及茶多酚的研究》的研究发现，绿茶提取物中的茶多酚可增加肝组织中肝脂酶的活性、降低肝组织中过氧化脂含量，对脂肪肝有一定的防治作用。国内用茶多酚的氧化产物茶色素进行了大规模的临床观察，发现茶色素有一定的调血脂作用及茶多酚降低总胆固醇、甘油三脂水平。然而该文献中并未给出将绿茶提取物制成药物并将该药物应用于临床以治疗脂肪肝的具体建议。
4.茶多酚中含有30种以上的酚性物质，按其化学结构可分为四类，即儿茶素、黄酮、黄酮醇、花白素、花青素、酚酸类和缩酚酸类，在这四类物质中，儿茶素的含量占茶多酚总量的60％～80％，其为茶多酚中最有效的成分。儿茶素(epigallocatechin gallate，egcg)又叫表没食子儿茶素
‑3‑
没食子酸酯，外观为白色粉末，直接服用虽可在一定程度上对治疗脂肪肝有一定疗效，但是却无法控制儿茶素的释放过程，进而无法发挥儿茶素的最大功效，造成原料药的极大浪费。由于儿茶素其为水溶性物质，在油脂中几乎不溶解，解决儿茶素不能在油脂中溶解问题的方法主要有溶剂法、乳化法和分子修饰法，乳化法和微胶囊法是目前最为关注的课题，是解决茶多酚脂溶性的理想方法之一，现今对儿茶素脂溶性微胶囊虽有众多研究报导，但主要存在粒径偏大、分布较宽(10
‑
1000μm)，对于儿茶素的缓释和微胶囊的脂溶性也未达到理想效果。
5.为了解决上述技术问题，申请号为201310172301.8的发明专利公开了一种茶多酚脂溶性微胶囊及其制备方法，所述茶多酚脂溶性微胶囊的芯材由茶多酚与还原型谷胱甘肽组成，所述茶多酚与谷胱甘肽的质量比为95～99:1～5，所述茶多酚脂溶性微胶囊的壁材为阿拉伯胶、糊精、玉米糖浆、乙基纤维素、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯中的一种或几种，所述芯材与壁材的质量比为1:1～4；该茶多酚脂溶性微胶囊的制备方法如下：先分别制备芯材乳化液和壁材溶液，然后将芯材乳化液加入壁材溶液中高速搅拌均质然后喷雾干燥得茶多酚脂溶性微胶囊。
6.上述茶多酚脂溶性微胶囊虽然提高了茶多酚的脂溶性以及茶多酚的缓释效果，然而该发明的茶多酚脂溶性微胶囊采用单层壁材(脂溶性壁材)，该壁材在经过口腔、消化道、胃部中的某个部位时会发生全面性破裂，壁材中的芯材会一次性释放，茶多酚的浓度到达
峰值，而胃部不能全部吸收，多余的茶多酚在胃酸的辅助下被胃部中的食糜所消耗，造成芯材的浪费。


技术实现要素：

7.本发明为了解决上述技术问题，提供了一种包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物及其制备方法，所述包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物中采用微胶囊形式，该微胶囊包括芯材和复合壁材，该复合壁材可延缓芯材的释放过程，使得芯材能够顺利进入肠道以被充分吸收；该脂肪肝治疗药物的制备方法可获得性能稳定的复合壁材。
8.本发明解决其技术问题，采用的技术方案为：
9.一种包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物，其原料药按重量份计为，鲜茶叶15
‑
25份、山楂15
‑
25份、三七15
‑20份、蒲公英根15
‑
18份、石斛茎15
‑
18份、五味子10
‑
15份、甘草10
‑
13份、莪术10
‑
13份、菊花8
‑
10份、荷叶8
‑
9份、决明子5
‑
8份和白芍5
‑
7份。
10.进一步的，所述的原料药按重量份计为，鲜茶叶23
‑
25份、山楂20
‑
23份、三七20
‑
24份、蒲公英根17
‑
18份、石斛茎16
‑
18份、五味子13
‑
15份、甘草12
‑
13份、莪术12
‑
13份、菊花9
‑
10份、荷叶8
‑
9份、决明子6份和白芍6份。
11.进一步的，所述的原料药按重量份计为，鲜茶叶25份、山楂23份、三七24份、蒲公英根18份、石斛茎18份、五味子15份、甘草13份、莪术12份、菊花10份、荷叶8份、决明子6份和白芍6份。
12.一种包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物，其为微胶囊制剂，包括上述原料药制成的芯材和复合壁材，芯材包埋于复合壁材中，所述的复合壁材由外层壁材和内层壁材复合而成，芯材包埋于内层壁材中，内层壁材为脂溶性壁材，外层壁材为水溶性壁材，所述脂溶性壁材为阿拉伯胶、β
‑
环糊精、玉米糖浆、乙基纤维素、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素领苯二甲酸酯中的一种或几种，所述的外层壁材为水溶性抗菌肽；所述的芯材与内层壁材、外层壁材的质量比为1:1:1。
13.本发明还提供了一种包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物的制备方法，包括以下内容：
14.(a)将芯材加入水或乙酸乙酯中，浸渍制得芯材溶液，备用；
15.(b)向油品中加入乳化剂和助剂，充分溶解并搅拌均匀后加入芯材溶液，高速搅拌均匀得到芯材乳化液；
16.(c)将内层壁材溶于水或乙醇或乙酸乙酯中获得内层壁材溶液，备用；
17.(d)将芯材乳化液加入内层壁材溶液中，高速搅拌均质后喷雾干燥，得到中间体；
18.(e)将酪蛋白壳聚糖明胶加水溶解，调整ph，随后对酪蛋白壳聚糖明胶恒温水浴，不断搅拌并持续加入酪蛋白壳聚糖明胶至饱和，向酪蛋白壳聚糖明胶饱和溶液中加入抗菌肽并使用磁力搅拌器混合均匀，获得外层壁材挂载溶液；
19.(f)将中间体加入外层壁材挂载溶液中，外层壁材挂载溶液将包覆在中间体外并在干燥后形成包覆膜，获得一种包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物。
20.优选的，所述的所述油品为大豆油、玉米油、菜籽油、花生油、山茶油、棕榈油、橄榄油、石油醚中任意一种。
21.优选的，所述的石油醚选自沸程为60～90℃的石油醚。
22.优选的，所述乳化剂为司盘40、司盘80、吐温60、甘油单硬脂酸酯、聚甘油脂肪酸酯或聚甘油蓖麻醇酸酯。
23.优选的，所述述助剂为柠檬酸、维生素c、维生素e或大豆磷脂。
24.优选的，所述抗菌肽选用水溶性抗菌肽。
25.本发明提供的鲜茶叶的提取物中富含茶多酚，茶多酚能极强的清除有害自由基，阻断脂质过氧化过程，提高人体内酶的活性，降低肝组织中过氧化脂质含量。
26.山楂，性微温、味酸甘，其化饮食，消肉积，消滞血胀，山楂能够增强心肌收缩力，增加心脏输出量，减慢心率，扩张冠状血管，具有降血压、降血脂等作用。
27.三七，性温、味甘微苦，三七的提取物三七总皂苷具有强心、降压、保肝、抗炎、降低血中胆固醇、免疫调节和抗病毒之功效。
28.蒲公英根，含蒲公英醇、蒲公英赛醇、ψ
‑
葡公英甾醇、蒲公英甾醇、β
‑
香树脂醇、豆甾醇、β
‑
谷甾醇、胆碱、有机酸、果糖、蔗糖、葡萄糖、葡萄糖甙以及树脂、橡胶等，蒲公英提取物被用于治疗肝脏和胆囊阻塞，改善肝功能，促进胆汁分泌和作为利尿剂使用。
29.石斛茎，性微寒、味甘淡微苦，归胃、肺、心、肾经。体坚质润。石斛滋阴清热，养胃生津，润肺止咳，益肾明目；具有强筋降脂、护肝利胆、降低血糖等功效。
30.五味子，五味子能够促进肝脏的解毒过程、保护肝脏免受毒害，并能再生因滥用酒精、药物或者肝炎而受损的肝脏组织。
31.甘草，性平、味甘，归心、肺、脾、胃经。补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药。
32.决明子，性微寒，味甘苦，具有清肝明目、养阴清热、润肠通便的功效，决明子的提取物有降血压、降血脂和通便的作用。
33.莪术，辛、苦、温，入肝、脾经，具有破血行气、消积止痛的功效。
34.菊花，味甘苦，性耐寒，有散风清热、清肝明目和解毒消炎等作用，菊花茶具有降血压、降血脂等功效。
35.荷叶，性凉，可以清心火、平肝火、泻脾、消肺火，具有清热解暑的功效。荷叶中的生物碱，具有降血脂的作用；并能阻止脂肪的吸收，具有减肥的功效。
36.白芍，性酸、苦、微寒，归肝、脾经。功效主要有养血敛阴、柔肝止痛、平抑肝阳。
37.本发明提供的包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物具有降血压、降血脂、保肝护肝的功效，同时兼具清毒解热、消炎抗肿等功能，本发明的治疗药物能够提高肝脏细胞抗氧化的能力，阻断脂质过氧化过程，提高人体内酶的活性，降低肝组织中过氧化脂质含量。
38.本发明的有益效果是：包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物中采用微胶囊形式，该微胶囊包括芯材和复合壁材，该复合壁材可延缓芯材的释放过程，使得芯材能够顺利进入肠道以被充分吸收；该脂肪肝治疗药物的制备方法可获得性能稳定的复合壁材，且该复合壁材的外层壁材具有抗氧化性和抗菌性，延长了药物的保质期。
具体实施方式
39.下面通过具体的实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保
护的范围。
40.实施例1
41.一种包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物，其原料药按重量份计为，鲜茶叶15份、山楂15份、三七15份、蒲公英根15份、石斛茎15份、五味子10份、甘草10份、莪术10份、菊花8份、荷叶8份、决明子5份和白芍5份。
42.一种包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物，其为微胶囊制剂，包括上述原料药制成的芯材和复合壁材，芯材包埋于复合壁材中，所述的复合壁材由外层壁材和内层壁材复合而成，芯材包埋于内层壁材中，内层壁材为脂溶性壁材，外层壁材为水溶性壁材，所述脂溶性壁材为阿拉伯胶、β
‑
环糊精、玉米糖浆、乙基纤维素、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素领苯二甲酸酯中的一种或几种，所述的外层壁材为水溶性抗菌肽；所述的芯材与内层壁材、外层壁材的质量比为1:1:1。
43.本发明还提供了一种包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物的制备方法，包括以下内容：
44.(a)将原料药加入水或乙酸乙酯中浸渍24h后获得浸提液，过滤并却滤液为芯材溶液，备用；
45.(b)向30g石油醚中加入5g司盘40和1g大豆磷脂，充分溶解并搅拌均匀后加入芯材溶液，高速搅拌均匀得到芯材乳化液；
46.(c)将40g的β
‑
环糊精溶于40g乙酸乙酯中获得内层壁材溶液，备用；
47.(d)将芯材乳化液加入内层壁材溶液中，25℃、15000rpm转速条件下高速搅拌均质15min后喷雾干燥，得到中间体；
48.(e)将酪蛋白壳聚糖明胶加水溶解，调整ph为7.0，随后对酪蛋白壳聚糖明胶溶液80℃恒温水浴，不断搅拌并持续加入酪蛋白壳聚糖明胶至饱和，加入bcp12水溶性抗菌肽后，采用磁力搅拌器混合均匀，获得外层壁材挂载溶液；
49.(f)将中间体加入外层壁材挂载溶液中，外层壁材挂载溶液将包覆在中间体外，50℃恒温干燥箱中干燥5h，挂载于中间体上的外层壁材溶液在干燥后形成包覆膜，中间体被包埋于外层壁材中，从而获得纳米级的包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物。
50.采用激光粒度仪对包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物的粒径和zeta电位进行测定，采用场发射扫描电子显微镜观察其形态结构，发现制备的芯材包封率为(80
±
5)％，包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物的平均粒径为(220
±
10)nm，平均zeta电位为(66.8
±
2.2)mv，具有球形或类球形微观结构。
51.通过本方法制备的包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物较现有的茶多酚脂溶性胶囊的抗氧化性能提供了10倍，抗氧化时间提高了8倍。
52.实施例2
53.一种包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物，其原料药按重量份计为，鲜茶叶25份、山楂25份、三七20份、蒲公英根18份、石斛茎18份、五味子15份、甘草13份、莪术13份、菊花10份、荷叶9份、决明子8份和白芍7份。
54.一种包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物，其为微胶囊制剂，包括上述原料药制成的芯材和复合壁材，芯材包埋于复合壁材中，所述的复合壁材由外层壁材和内层壁材复合而成，芯材包埋于内层壁材中，内层壁材为脂溶性壁材，外层壁材为水溶性壁材，所述脂溶
性壁材为阿拉伯胶、β
‑
环糊精、玉米糖浆、乙基纤维素、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素领苯二甲酸酯中的一种或几种，所述的外层壁材为水溶性抗菌肽；所述的芯材与内层壁材、外层壁材的质量比为1:1:1。
55.本实施例中的一种包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物的制备方法，同实施例1。
56.实施例3
57.一种包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物，其原料药按重量份计为，鲜茶叶25份、山楂23份、三七24份、蒲公英根18份、石斛茎18份、五味子15份、甘草13份、莪术12份、菊花10份、荷叶8份、决明子6份和白芍6份。
58.一种包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物，其为微胶囊制剂，包括上述原料药制成的芯材和复合壁材，芯材包埋于复合壁材中，所述的复合壁材由外层壁材和内层壁材复合而成，芯材包埋于内层壁材中，内层壁材为脂溶性壁材，外层壁材为水溶性壁材，所述脂溶性壁材为阿拉伯胶、β
‑
环糊精、玉米糖浆、乙基纤维素、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素领苯二甲酸酯中的一种或几种，所述的外层壁材为水溶性抗菌肽；所述的芯材与内层壁材、外层壁材的质量比为1:1:1。
59.本实施例中的一种包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物的制备方法，同实施例1。
60.实验例
61.下面通过试验进一步验证包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物的治疗效果：
62.1、脂肪肝小鼠造模及验证
63.脂肪分为酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝和其他脂肪肝，针对上述三种脂肪肝类型，本实验对酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝类型进行验证，因此需要实用小鼠进行造模以获得酒精性脂肪肝小鼠模型和非酒精性脂肪肝小鼠模型。
64.1.1酒精性脂肪肝小鼠模型
65.采用嗜酒性的c57bl/6小鼠，10周龄的小鼠20只，其中雄鼠和雌鼠各半，随机将小鼠分成2组，对照组和造模组各半，每笼两只小鼠进行喂养；对照组投喂液态饲料，造模组则投喂加入高度白酒的液体饲料，连续喂养5周。
66.1.2非酒精性脂肪肝小鼠模型
67.采用嗜酒性的c57bl/6小鼠，10周龄的小鼠20只，其中雄鼠和雌鼠各半，随机将小鼠分成2组，对照组和造模组各半，每笼两只小鼠进行喂养；对照组投喂普通饲料并正常饮水，造模组投喂高脂饲料并正常饮水，连续喂养5周。
68.2、脂肪肝小鼠模型的验证
69.投喂5周后，分别对酒精性脂肪肝各非酒精性脂肪肝小鼠进行称重，且进行穿刺并采集各小鼠的肝组织，同时采集各小鼠的血清，光镜下观察各小鼠的肝细胞组织的变化，同时检测血清中的胆固醇(tc)、三酰甘油(tg)、谷丙转氨酶(alt)和谷草转氨酶(ast)各指标的变化。
70.肝组织病理学检测可见酒精性脂肪肝小鼠模型的造模组和非酒精性脂肪肝小鼠模型的造模组肝组织有大油滴和小脂滴，肝细胞肿胀，胞质易见脂肪空泡，肝细胞有明显的炎性改变，而两个造模组的血清中tc、tg、alt和ast均有明显提高，此时表明酒精性脂肪肝小鼠模型和非酒精性脂肪肝小鼠模型均造模成功。
71.3、小鼠脂肪肝的治疗效果验证
72.将酒精性脂肪肝小鼠造模组和非酒精性脂肪肝小鼠造模组分别分成2组，即酒精性脂肪肝小鼠对照组、酒精性脂肪肝小鼠验证组、非酒精性脂肪肝小鼠对照组和非酒精性脂肪肝小鼠验证组，同时选取1组正常小鼠作为空白对照组；
73.空白对照组，简称non，正常小鼠，投喂普通颗粒饲料；
74.酒精性脂肪肝小鼠对照组，简称con
‑
al，酒精性脂肪肝小鼠，投喂普通颗粒饲料；
75.酒精性脂肪肝小鼠验证组，简称ex
‑
al，酒精性脂肪肝小鼠，投喂加入加入包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物颗粒的饲料；
76.非酒精性脂肪肝小鼠对照组，简称con
‑
nonal，非酒精性脂肪肝小鼠，投喂普通颗粒饲料；
77.非酒精性脂肪肝小鼠验证组，简称ex
‑
nonal，非酒精性脂肪肝小鼠，投喂加入加入包含绿茶提取物的脂肪肝治疗药物颗粒的饲料；
78.投喂饲料时，应保证酒精性脂肪肝小鼠对照组、酒精性脂肪肝小鼠验证组、非酒精性脂肪肝小鼠对照组和非酒精性脂肪肝小鼠验证组的普通颗粒饲料等量。
79.3.1各组大鼠肝脏组织病理形态学改变
80.he染色结果：空白对照组肝小叶结构完整，肝细胞未见明显变化，酒精性脂肪肝小鼠对照组和非酒精性脂肪肝小鼠对照组的肝组织有大油滴和小脂滴，肝细胞肿胀，胞质易见脂肪空泡，肝细胞有明显的炎性改变；投喂本发明药物的酒精性脂肪肝小鼠和非酒精性脂肪肝小鼠的肝细胞肿胀消失，形态大致正常，肝内的脂肪滴相较与对照组具有明显的减少，炎性细胞浸润减轻。
81.电镜观察结果：空白对照组的肝小叶结构完整，肝细胞未见明显变性；对照组的肝细胞出现脂肪变性，脂肪滴大小不一，肝细胞肿胀，肝细胞有炎性改变；酒精性脂肪肝小鼠验证组和非酒精性脂肪肝小鼠验证组的肝细胞明显可见脂肪滴减少，肿胀消失，同时肝细胞的炎症消失。
82.3.2 tc、tg、alt和ast的验证
83.表1各组小鼠血清中的tc、tg、alt和ast的比较
[0084][0085]
从表1中可以看出con
‑
al和con
‑
nonal的血清中tc和tg均高于non组的tc和tg值，说明本实验的脂肪肝小鼠造模成功，而ex
‑
al和ex
‑
nonal的血清中tc和tg值明显低于con
‑
al和con
‑
nonal的血清中tc和tg值，说明本发明的药物对于酒精性脂肪肝细胞和非酒精性
脂肪肝细胞均有明显的改善和治疗作用，而本发明的药物对于非酒精性脂肪肝细胞的改善效果要优于酒精性脂肪肝细胞。从表1中可以看出，ex
‑
al和ex
‑
nonal组与con
‑
al和con
‑
nonal相比，无统计学的差异，表明本发明提取物制剂对于脂肪肝的毒性处于较低水平。
[0086]
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
[0087]
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。