专利名称：用动物和/或植物油制备高浓度多不饱和脂肪酸及其酯的方法，获得的混合物及其预防或 ...的制作方法
技术领域：
本发明是关于用各种动物和/或植物油为原料制取高浓度二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸酸混合物及其酯的方法，也涉及所制备的混合物以及用它们来预防或治疗疾病的用途。
签于这些油脂可用作食物或营养物，本发明的方法也适合于对这类油脂进行脱臭和脱酸处理。
众所用知，从人类生理学上讲，多不饱和脂肪酸起着重要的作用，尤其是因为它们具有这两方面的作用结构作用，即作为细胞膜的磷脂成分；功能作用，作为前列腺素的先质。
实际上，属于α-亚麻酸族的脂肪酸对于大脑、视网膜或性腺的发展与功能以及对于PGI3和TXA3的形成起着基础作用，特别是对于防止血小板凝固具有重要的作用。
在上述脂肪酸中，特别重要的是ω-3族长链脂肪酸，即二十碳五烯酸(205ω-3)，简称EPA，二十二碳六烯酸(226w-3)，简称DHA，它们都是在相关酶(Δ-去饱和酶)的作用下，由α-亚麻酸去饱和及链延长而衍生的产物。
作为PGI3和TXA3的先质，EPA具有防止血小板凝固和抗凝血的作用，即它能够抑制环氧酶(类似于阿司匹灵的作用)和/或与花生四烯酸竞争该酶，结果使已知为血小板凝结剂的PGE2和TXA2的合成减少。
DHA是最重要的人脑类脂成分，以很高的浓度存在于染色体膜的磷脂中，这使研究者们设想DHA在传递神经脉冲时起了作用。
另外，由于DHA是血小板细胞的结构组分，通过增加血小板流动性能，使DHA直接起到了重要的抗凝血作用。
近来通过人体研究证明，随着年龄的增长(35岁以后)，Δ-6-去饱和酶减少，因此发生了上述酸的内源缺乏症，该症应该通过饮食或适宜的混合物来治疗。可是，迄今为止，一些实际困难妨碍了所说的酸在治疗方面或作为营养成分的广泛应用，而另一方面，根据上面有关生化和药理学的叙述，这种应用又是极其重要的。所说的这些实际困难主要包括从鱼油中萃取所说的酸，它们的提纯和浓缩达到药用合理的值以及变味处理。
尽管人们已经建议和公开了许多方法，但一直没有达到令人满意的效果，其中，虽然EPA和/或DHA具有作为药物或营养成分的巨大潜力，但直到目前仍限制使用这些酸。根据不同技术，目前已知的方法有如脱脂、逆流萃取，尿素加成法、液相色谱法和蒸馏法，这些方法的产率相当低，而且所获得的产品暴露在光或空气中很容易受损。许多已知方法的目的仅在于提纯二十碳五烯酸，却破坏了其它有用的不饱和脂肪酸如DHA。
例如US4,377,526披露了提纯EPA或其酯的方法，其中包括用尿素处理，然后分馏。采用这种方法，EPA的得率大于70％，但同时DHA的残存量仅为3～5％。
另外，就本发明申请人所知，迄今所有涉及制取该产品或类似产品的已获专利权的方法都或多或少地结合采用了化学或物理操作方法，例如，利用尿素优选沉淀出少量不饱和酸(WO87/03899，JP57-187397)，或者用超临界流体萃取(JP60-214757，JP60-115698)。
为了获得高滴定率的DHA酸或其酯，另一些专利还采用了色谱法，即采用硅胶直到低极性共聚物的各种色谱床(JP-61-291540、JP-61-037752、JP-58-109444及GB2090529)。
另一方面，在有些专利中采用了分子蒸馏法(如JP-113099)在该方法过程中，分子蒸馏不是方法的特征步骤，仅仅是作为一种粗提纯的手段。
本发明的方法除了采用普通的甘油三酯水解以获得酸外，完全是基于分子蒸馏技术，通过适当改变操作条件，采用分子蒸馏以获得本发明的全部产品，而不必用任何其它化学或物理的处理方法。
因此，本发明的目的是在易于工业领域应用的条件下，提供一种从各种原料油中萃取高产率DHA和EPA乙酯和游离脂肪酸的方法，获得一种稳定无臭味产品，在人体治疗中可以用作药物和食疗品。
另外，本发明的方法仅需要非常少的化学处理步骤，在该方法中这些处理是技术即分子蒸馏技术所必须使用的，因为在其操作条件下，能最大限度地保护本发明的产品，实际上，已知这些产品非常易于发生化学和热降解现象。最后，从工业经济的可行性观点出发，分子蒸馏本身非常适合于连续性生产，其操作费用极低。
本发明的方法中仅仅使用分子蒸馏技术就可以获得以下效果1)高质量产品，这也是由于未采用过多的化学步骤之故；2)高浓度产品，对于EPA-DHA混合物产品浓度可高达90％，当产品仅是DHA时，其浓度可达96％，上述浓度大大地高于现有的相应专利方法中所说的浓度；
3)可作不同用途的不同滴定率产品，仅仅通过简单地适当改变分子蒸馏的参数，就可获得作食疗品用的至药物用的产品；4)本发明的方法特别适用于工业化生产，与许多上述的专利方法完全不同，那些方法实现从实验室级到工业化规模都存在投资大，问题多的缺点；5)另一个优点是，当需要制备乙酯时，可以在最后的操作步骤中进行，即在适当的浓度和滴定率下，将酸产物转化成相应的酯，从减少工业生产费用的观点考虑，这是一个很大的优点，而且提供了一种任何现有专利文献中都没有公开的方法；6)本发明的方法用于工业化生产也是理想的，这是因为当提供必要的设备后，该方法就可以实现连续化作业，用最少的劳力而获得最高的产品得率。
采用本发明方法而获得的EPA/DHA混合物之高滴定率(高达90％)和高纯度能使药物效果更佳，这是因为服用了ω3系列的多不饱和酸尤其是EPA/DHA的结果。
由于EPA/DHA的浓度高，一方面可以制备出份量轻，颗粒较小的药物，便于下咽或给药，另一方面，可以减少日服次数或给药量。
本发明EPA/DHA产品的特有特性能使该产品在治疗高血脂以及相应的病变、血栓形成、血小板凝固、心肌梗塞、高血压方面显示较好的治疗效果和配方，可作为抗凝血剂，能防止动脉粥样硬化、脑血管梗塞、由血管舒缩性痉挛引起的血管损伤和堵塞、糖尿病及其并发症、急性和慢性炎症、自免疫综合病症、防止非类固醇消炎药物对胃肠的付作用以及预防肿瘤。
EPA与DHA的浓度比是随着提取这两种产物之有机物中各自的天然含量而变化的(如各种鱼类、鱼油、甲壳类动物、海藻类等等)主要含EPA/DHA混合物或除含有其它不饱和脂肪酸外还含有EPA/DHA之混合物的医疗特性已在过去的几篇专利文献中有所披露，具体是用于治疗血栓、血胆甾醇过多、心肌局部缺血(WO87/03899)、防止动脉硬化、脑血管梗塞、高血脂、心肌梗塞(EP-A1-0228314)、预防动脉粥样硬化、作为抗凝血酶素、降高血压药(JP62-091188)、血栓病变、血小板凝固、自免疫综合症、急性和慢性炎症、动脉粥样硬化、心肌梗塞、静脉血栓、高血脂、高血压、由血管舒缩性痉挛引起的血管损伤和堵塞、糖尿病(WO87/02247)、防止非类固醇消炎药物的副作用(EP-A1-0195570)、预防糖尿病并发症(JP60-248610)、血胆甾醇过多、甘油三酯过多(DE3438630)，作为抗凝血药物、治疗血胆甾醇过多(BE899184)。另外，EPA和DHA都对多不饱和脂肪酸的新陈代谢有影响，促进具有高生物活性的物质的形成，即ecosanoids，它具有防止肿瘤的活性。
通过主要采用ω3型多不饱和脂肪酸，EPA和DHA的先质，已经证实了上述的活性(JP57-18739、BE897806)。
有关产品的制备在上述的参考文献中已作了介绍，产品通常是制备成一般属于ω3型多不饱和脂肪酸的纯混合物，但所得EPA/DHA浓度与用本发明方法制备的EPA/DHA浓度相比，总是要要低得很多。
DHA是一种高不饱和长碳链脂肪酸，属于“ω3”型脂肪酸，它不同低级动物中存在的DHA，低级动物中存在有二十碳五烯酸(EPA)和DHA，而在人体中只有微量的EPA，但发现DHA的浓度很高。
DHA完全是以酯化形式存在于膜甘油卵磷脂中，特别存在于某些区域，如CNS，染色体结合膜和视网膜细胞中。
属于ω3型多不饱和脂肪酸和DHA的新陈代谢先质EPA现已被确认为具有非常高的生物和医疗活性值。
在由α-亚麻酸起始至变成DHA的新陈代谢过程中，用EPA给药不会导致转变成DHA(除少量外)，而服入的一部分DHA反而转变成EPA。
实际上，口服酯和/或游离酸形式的DHA可以大大增加原生质卵磷脂中DHA和EPA的含量(Hiroi等人，1978)。
因此，DHA除了完成其自身的任务外，由于其反向转变EPA，则DHA也保证具有了EPA的特殊生物作用。
在现有专利文献中，申请人已经披露ω3型多不饱和脂肪酸混合物具有多种医疗活性，其中尤其强调DHA具有治疗高血脂及相应的病变，血栓形成、血小板凝固、心肌梗塞和高血压的作用，可作为抗凝血药物，能防止动脉粥样硬化、脑血管梗塞，由血管舒缩痉挛引起的血管损伤和堵塞、糖尿病及其并发症、急性和慢性炎症、自免疫综合病症、防止非类固醇消炎药物对胃肠的副作用以及防治肿瘤(WO87/03899、EP-A1-0228314、JP62-091188、WO87/02247、EP-A1-0195570、JP60-248610、DE3438630、BE899184、JP57-187397、BE897806)。
作为单质的DHA在医疗止被认为可以作为血小板凝固防止剂，有人已经披露了其预防血栓的应用(GB1098065、GB2090529)。
实际上，现有技术研究中使用的DHA，其浓度要比本发明方法制备的DHA的浓度低得多。
另外，本发明的提取方法采用的是分子蒸馏法，既不用化学处理，也不用物理处理，其特征在于与现有产品相比，能获得高纯度的DHA。
采用不同的实验模式，可显示出高浓度(96％)和纯化的DHA对于高血脂症的活性，实际上，当DHA给药量减少到一定程度后，实验结果表明胆甾醇和甘油三酯的含量增大。
考虑所得到的结果，根据DHA在有机体内部的作用原理以及当用DHA给药时在不同区域所观察到的现象结论，其特征和医疗性能可归纳如下治疗和预防血脂症(dislipemic)和相应的病变，例如高脂蛋白血症、血胆甾醇过多、甘油三酯过多、脂肪新陈代谢的变更，由胆甾醇引起的对脉管的损坏、动脉粥样硬化、黄瘤、糖尿病性视网膜病，防止血栓形成，防止主动脉和右动脉硬化，作为辅助剂治疗可能诱发高脂蛋白血症的疾病(糖尿病、甲状腺机能减退、尿毒症等等)，心肌梗塞、血小板凝固、高血压、作为医用抗凝血剂、脑血管梗塞、急性和慢性炎症、糖尿病、自免疫综合病症、防止由非类固醇消炎药物引起的副作用、防止肿瘤、伴随视力下降的视网膜病、ceroidoses，以及与记忆和衰老相关的过程。
以下详细说明本发明的方法，以便了解所说方法的内容，确信完全可以达到上面所说的本发明的目的和优点。
原料油脂的碱性水解(NaOH)，一直进行到甘油三酯完全水解为止；收集所生成的固体皂并立即用无机酸水溶液进行酸化；用石油醚充分萃取所生成的酸，将萃取物相互合并，并用水充分洗涤，接着将其浓缩，直到除去全部溶剂；生成的产物仅用分子蒸馏法进行处理，采用这种方法可以获得本发明的全部产品。
A)由EPA和DHA组成的复合物A-1 总浓度为35～40％A-2 总浓度为40～50％A-3 总浓度为50～60％A-4 总浓度为60～70％A-5 总浓度为70～80％A-6 总浓度为80～90％B)由DHA构成的产品B-1 总浓度90％B-2 总浓度96％制取A-1产品的方法将该方法第一步(皂化)获到的脂肪酸混合物进行分子蒸馏，操作压力为10-3mmHg，蒸发器内温度为110～120℃，以便除去操作带来的杂质和本身的杂质，这些杂质构成残留物。
馏出物保持了原料油脂中原始存在的EPA和DHA之浓度(采用鱼油时，EPA为15～20％，DHA为15～20％)，该馏出物中没有上述杂质存在，其本身构成A-1产品，这也是其后A-2、A-3、A-4产品的原料。制取A-2产品的方法在压力为10-3mmHg、蒸发器温度为50℃下，将A-1产品进行分子蒸馏。残留物即为A-2产品，增加EPA和DHA滴定率可以破坏低分子量(C16和C18)的脂肪酸，由此形成馏出物。制备A-3产品的方法在上述条件下，不同的只是将蒸发器温度提高到60℃，将A-1产品进行分子蒸馏，残留物即是A-3产品，增加EPA和DHA滴定率可以破坏低分子量脂肪酸(C16和C18)，由此形成馏出物。制备A-4产品的方法在上述条件下，不同是只是将蒸发器温度升高到70℃，将A-1产品进行分子蒸馏，残留物即为A-4产品，增加EPA和DHA滴定率可以破坏低分子量脂肪酸(C16和C18)，由此形成馏出物。制备A-5产品的方法在上述条件下，不同的只是将蒸发器的温度升到75℃，将A-4产品进行分子蒸馏，残留物即为A-5产品，增加EPA和DHA滴定率可以破坏低分子量脂肪酸(C16～C18和低不饱和C20)，由此形成馏出物。制备A-6产品的方法在上述条件下，不同的只是将蒸发器温度提至80℃，将产品A-5进行分子蒸馏，残留物即为A-6产品，增加EPA和DHA滴定率可以破坏低分子量脂肪酸(C16～C18和低不饱和C20)，由此构成馏出物。制备B-1产品的方法在上述条件下，不同的只是蒸发器的温度为85℃，将A-6产品进行双重分子蒸馏，残留物即是B-1产品(DHA90％)，馏出物主要是由EPA和少量其它酸组成的。制备B-2产品的方法在与制备B-1所采用的相同条件下，蒸发器温度为85℃，将B-1产品进行分子蒸馏，残留物是由96％DHA组成的，馏出物主要是由EPA和少量其它酸组成的。
制备脂肪酸乙酯的一般方法可选择组成原料油脂之甘油酯的酯交换法。
根据常规技术，酯交换法就是将各种动物或植物油脂与乙醇在酸性介质中进行反应。
将反应产物与等体积的水进行混合，再用石油醚或环己烷对全部混合物进行萃取。
用水将有机萃取物洗涤至中性，干燥浓缩直至除去全部溶剂。
将得到的产品进行分子蒸馏，该操作是在连续公开的条件下进行的。
实际操作的实例向事先已溶有2.5千克浓硫酸的混合反应器内加入80千克鱼油和50千克乙醇。
在容器处于密闭、氮气气氛中，温度直到82℃±2℃和回流条件下使混合物进行反应。
6小时后，开始检测试剂混合物中是否还有脂肪酸甘油酯存在。
通过采用以石油醚∶二乙醚∶乙酸(85∶14∶1)作为洗涤液之硅胶板的薄层色谱法(T、L、C)来签别对照。
展开剂是由浓硫酸与甲醇比为1∶1的混合物组成的。
在105℃下用该混合物处理硅胶板几分钟，在靠近起始线处，甘油三酸酯呈黑点状，清晰可见，当色谱对照表明反应结果时，停止加热回路，将液体混合物进行蒸馏，以除去过量的乙醇。
将留下的蒸馏残留物冷却到室温，然后向其中加入200千克水和150千克石油醚或环己烷，振动后排掉水。
反复水洗(每份200千克)3～5次，直到卸料呈中性反应。
用无水硫酸钠干燥环己烷溶液，并采用真空蒸馏法(20mmHg)于60℃除去环己烷。
将残留物贮存在氮气氛中以备下一步分子蒸馏使用。
C)由EPA和DHA乙酯组成的复合物C-1所含总浓度为35～40％；C-2所含总浓度为40～50％；C-3所含总浓度为50～60％；C-4所含总浓度为60～70％；C-5所含总浓度为70～80％；C-6所含总浓度为80～90％；D)由DHA乙酯组成的复合物D-1总浓度90％D-2总浓度90％制备C-1产品的方法在压力为10-3mmHg，蒸发器温度为90～110℃下，将上述酯交换获得的脂肪酸乙酯混合物进行分子蒸馏，以除去加工带来的杂质和本身存在的杂质，也即残留物。
使馏出物保持于原料油脂中原始存在之EPA和DHA的浓度(用鱼油时，EPA为15～20％，DHA为15～20％)，并且没有上述杂质存在，由该馏出物组成C-1产品并用作以后C-2、C-3、C-4产品的原料。制备C-2产品的方法在压力为10-3mmHg、蒸发器温度为50℃下将C-1产品进行分子蒸馏，残留物即为C-2产品，增加EPA和DHA乙酯滴定率可以破坏低分子量的脂肪酸乙酯(C16和C18)，由此构成了馏出物。制备C-3产品的方法在上述条件下，不同的只是蒸发器温度增加到60～70℃，将C-1产品进行分子蒸馏，残留物即是C-3产品，增加EPA和DHA乙酯以破坏低分子量脂肪酸乙酯(C16和C18)，由此组成馏出物。制备C-4产品的方法在上述条件下，不同的是蒸发器温度升到70～80℃，将C-1产品进行分子蒸馏，残留物即是C-4产品，增加EPA和DHA乙酯滴定率可以破坏低分子量脂肪酸乙酯(C16和C18)，由此组成馏出物。制备C-5产品的方法在上述条件下，不同的是蒸发器温度升到80～90℃，将C-4产品进行分子蒸馏，残留物即为C-5产品，增加EPA和DHA乙酯滴定率以破坏低分子量脂肪酸乙酯(C16和C18以及低不饱和(20)，由此构成馏出物。制备C-6产品的方法在相当于约8倍于C-5量的溶剂(乙醇或丙酮或等同物)中添加2倍于C-5量的尿素进行混合。
将混合物加热至尿素全部溶解，然后向其中加入预定量的C-5。
冷却后过滤出沉淀，再以小型真空装置浓缩醇溶液。
在浓缩物中加入水，并用等量的环己烷萃取全部混合物。
用水反复洗涤有机相以除去所有残留的尿素。
最后将有机溶液干燥并通过真空蒸馏除去全部溶剂。
在上述条件下，不同的是蒸发器温度为70～90℃，将上述产物进行分子蒸馏，残留物即为C-6产品，增加EPA和DHA乙酯滴定率以破坏低分子量脂肪酸乙酯(C16和C18以及低不饱和C20)由此组成馏出物。制备D-1产品的方法在上述条件下，不同的是蒸发器温度调至75～95℃，将C-6产品进行双重分子蒸馏，残留物即D-1产品(DHA乙酯90％)，馏出物主要由EPA乙酯和少量其它脂肪酸乙酯组成。制备D-2产品的方法在与制备D-1方法相同的条件下，蒸发器温度为75～95℃，将C-1产品进行分子蒸馏，残留物由96％的DHA乙酯组成，馏出物主要由EPA乙酯和少量其它酸乙酯组成。
下列实施例用以详细说明本发明的方法，但对本发明所要保护的范围没有任何限制。
实施例1
将100千克原料油脂溶于150升(95℃)的乙醇中，再与5千克浓硫酸混合。
将全部混合物置于N2气氛中，并回流直至除去所有残留的甘油三酯。
在真空条件下除去大部分溶剂，向残留物中加入5倍于其量的水，再用常规用量的溶剂(石油醚、环己烷或等同物)进行萃取，将有机萃取物洗涤至中性，真空下干燥浓缩以除去所有的溶剂。
将用上述方法得到的，由原料中甘油三酯构成的脂肪酸乙酯的混合物组成的产物装到按上述条件进行操作的分子蒸馏器中。
实施例2制备C-6产品的方法主要在于用尿素处理C-5产品，继而进行分子蒸馏。
将120升95℃的乙醇与20千克尿素混合物加热至尿素充分溶解，向该溶液中加入15～20升C-5产品，在氮气氛中加热振荡全部混合物。
冷却后，经过滤除去沉淀。
在小型真空装置中浓缩得到的醇溶液，向油性残留物中加入80～100升水和80～100升溶剂(石油醚或环己烷或等同物)，振荡混合物，萃取有机相部分，并且用水洗涤几次，将有机相干燥，真空下蒸发除去全部溶剂。
将上述产物投入分子蒸馏器中，在上述条件下蒸馏，以获得由C-5产品组成的残留物。
净化步骤是本发明生产方法的一个辅助步骤。以下参照为实现本发明方法而专门设计的设备来说明为获得相应产品所需的阶段。
生产方法基本包括三个主要阶段和一些中间处理以及作为有效加工和提纯产品所必需的最终处理步骤所说的加工可以示意说明如下1.将原料甘油三酯进行酯交换变成乙酯，以ETR表示，2.用漂土进行第一次净化处理，用TTE1表示，3.用分子蒸馏进行浓缩，用DMV表示，4.用尿素处理，用TRU表示，5.用漂土进行第二次净化处理，用TTE2表示，6.全部除去加工所用溶剂，用DF表示。
很明显，1，3和4阶段对获得最终产品起着决定性作用。
在加工的每个阶段之间进行分析对照，以便使其与说明部分相对应。1.脂交换ETR显然该阶段是为以后的分子蒸馏阶段能获得多不饱和脂肪酸乙酯而设的，正如我们以下所看到的，分子蒸馏是一项可以使蒸馏在比标准温度低得多的温度下进行的技术，而在标准温度下，产品会发生降解现象，因此，由于乙酯的作用，与甘油三酯相比，增大了其挥发度，从而保护了我们所感兴趣的有用的脂肪酸之顺式多不饱和结构。
另外，酯交换可以使产品脱臭，除去所有最后水溶性杂质，并破坏可能存在的维生素A和D残留物。1.1酯交换过程(ETR)
其中R、R′、R″、为C14-C24的各种不饱和程度的烷基。如果鱼油的开始用量为500千克，则必须使用以下用量的各种试剂100％变性乙醇(2％MEC) 312.5 千克硫酸 26.250 千克去离子水 2500千克环己烷I 540 千克环己烷II 250 千克硫酸钠100 千克使用设备(参见流程
图1)TA101-106 不锈钢装料器和临时贮存器RE106 装有载频控制的干扰抑制器(Codant)的用于回流和蒸馏的3m3搪瓷反应器RE107 3m3不锈钢反应器DSL15 3m3混合反应器F15 不锈钢过滤器实际操作过程(全部过程在氮气氛中进行)1.由TA101、102、103分别将油、乙醇和硫酸卸入RE106中，时间6小时；2.加热至回流，时间1小时；3.回流10～12小时，取样检查反应是否完全；4.真空蒸馏乙醇，时间6小时；5.冷却物料并将其输送到已装有去离子水和来自TA104的第一批环己烷的RE107中，时间2小时；6.搅拌两相物料1/2小时，当两相物料完全分离时停止搅拌；7.将下层水相分离并输送到TA106中；8.将有机相输送到TA105中；9.再将TA106中的水相反回到RE107中，并由TA104向其中加入第二批环己烷；10.重复第6步所说的操作过程；11.将下层水相分离并输送到净化装置以便除去。12.将有机相输送到DSL15，从第5步到第12步操作共需8-10小时；13.将无水硫酸钠加到DSL15之溶液中，然后搅拌至少3小时，在氢气氛下使混合物通过F15进行过滤，将溶液转移到RE106中，时间需要6小时；14.在氮气流中蒸馏和充分汽提溶剂7-8小时，15.将物料转移到转筒式干燥器中。
整个操作过程结束时，乙酯混合物本身呈流体状，黑褐色，色谱分析图形由附录A给出。2.净化TTE1在酯化(ETR)阶段结束时，接着酯化阶段1(ETR)的合理连续过程是净化阶段2，实际上，这一操作步骤还没有立刻被应用到该方法的操作阶段中，直到目前还在不断变化。
该第一步净化步骤是很必要的，因为这样可以全部除去固体粒子，也可以除去在贮存期间能引起变质的具有氧化或过氧化(变色)特性的物质，更重要的是，该变质过程可能在分子蒸馏器内部发生(特别在高温下容易产生)，而导致在蒸馏器内壁上形成聚合物薄层，一方面，这会对蒸馏过程产生不良影响，降低热能传递，另一方面，必需进行经常性的和耗资大的维修操作。2.1实际操作1.按ETR实际操作的第13步，可直接用环己烷溶液在同样的设备(见流程图2)中进行操作。
称出与乙酯理论产率之15％相当的Tonsil 70CCFF漂土。2.将称过重的漂土加到环己烷溶液中。3.将溶液加热至80℃，维持30秒钟，连续搅拌和通入氢气流。4.冷却后，使溶液通过F15过滤，将产物转移到处于氢气过压下的不锈钢收集罐中。5.进行上述ETR之第14和15步实际操作。
ETR和TTE阶段的全部操作时间为1小时54分钟。
通过增加压滤机的溶液通道可以提高过滤速度。
接着将乙酯混合物收集到处于氮气过压下的适宜的不锈钢容器内，并且加入0.03％的生育酚，整个处理过程的产率为100％。试验对该方法所获得的酯进行所需的分析试验气相色谱滴应按照原料说明进行过氧化物值小于10残留溶剂小于250PPm(G.C近似于5)最后一步试验是非常重要的，因为溶剂含量高于规定值的产物会影响分子蒸馏过程而不能被接受。3.分子蒸馏DMV先简单介绍分子蒸馏，再说明几步操作过程3.1分子蒸馏和短路蒸馏分子蒸馏是一项较新的尚未广泛应用于工业化生产的分离技术，能解决大量用常规蒸馏技术所不能解决的问题，因为可以处理热不稳定性物质；可以获得很高的纯度；大大降低能源消耗。
另外，分子蒸馏不存在污染，在这种特殊情况下，可以产生出全部能被利用的付产品。
分子蒸馏是根据以下原理进行的，欲蒸馏的产品薄膜(分子)被分布在加热壁上，分子保留在此壁上足够的时间以获得本身被蒸发所需的能量，由于这一过程是在高真空条件下进行的，所以分子有一自由行程，温度能保持在比标准沸点温度低得多的条件，然后将挥发部分收集在冷却壁上。
分子蒸馏是按下述过程进行的将欲蒸馏的物料送到蒸馏塔的顶部，当物料进入蒸馏塔时，由旋转辊将物料分散到分子蒸馏器的加热壁上。
这样，在分子蒸馏器的整个内表面上形成有液膜，操作条件(温度、真空度)使更多的挥发性分子蒸发，然后这些蒸发的分子又被捕集到冷凝器上。
靠旋转元件使液膜不断更新，以保证物质不致于保留在加热壁上过长的时间，这样可以避免降解的可能性。任何没有被蒸发的物质由于重力作用而从壁上流下，最后被收集作为残留物。
在分子蒸馏技术中，短路蒸馏显示了巨大的优点，这里，加热壁与冷凝器之间的距离大大地缩小了，这样，本身已从加热壁上离去的分子立即碰到冷却壁上并冷凝在该壁上，因此，分子不致于在其所通过的短路程中相互碰撞，更重要的是，由于分子的立刻冷凝作用，可以获得很高和均匀的真空，从而可进一步降低操温度，确保产品的稳定性。
图1说明短路蒸馏的原理；图2表示工业用蒸发器的示意图，图3为实验室用蒸发柱的示意图，其中涂黑部分表示在加热壁上形成均匀膜的所谓“吹扫系统”，这可避免形成热点来破坏产品的完整性。该蒸馏柱内采用的吹扫系列是由带有垂直安装在底座上之棒条的转子构成的，在该棒条上间隔安装有涂有聚四氟乙烯之玻璃纤维制成的空心辊。
转动时，这些空心辊由离心力作用紧靠着加热壁旋转，从而使液膜形成。3.2设备的说明这是一台带有以下特性的双级设备处理的产量最小 克/小时 10～20最大3000热交换表面积蒸发器平方分米 2×4.3冷凝器 2×2.2加热所需功率 千瓦 2.7
可变化的温度 250旋转速度 转/分钟 25～2000工作压力带/不带分散泵毫巴 1.10-3/5.10-2尺寸长度 毫米 1200宽度 400流程图3表示与原始设计的中试设备相间的分子蒸馏装置，流程图4表示最新改进的情况。
主要的改进是安装了初级排气管(4)和计量泵(5)，该计量泵使得单位小时流量比原装量的增加了，也可以单独供料达数小时之久，最后，装有通风阀和相应自动泵送系统(10)的量筒(8)在不停止生产情况下排出产品。
显然，这些改进提高了整个设备的生产能力，使其更接近于工业化生产设备。3.2.1维修操作经改进后的设备不需要繁复的维修操作，所需要的操作有以下三个方面a)检查旋转和分散泵中的油面。
旋转泵运转1000工作小时后或目测油时发现油已变质而需要更换时，更换旋转泵中的润滑油。
当分散泵每运转500工作小时后或因为意外情况，该设备已经失去真空，致使大量氧化已经与油接触，则需要更换其中的润滑油。
检查油面并定时更换加热恒温器中的油。b)每周拆卸和清洗一次计量泵压头，检查油面。c)每周清洗一次蒸馏塔。
定期更换吹扫系统的聚四氟乙烯辊。3.3操作过程说明将上述酯交换过程产生的衍生物进行分子蒸馏。
用双级蒸馏装置，通过两阶段来获得分子蒸馏后的EPA-DHA富集物，这一过程可以用下列示意图表示
图5上述图示中的字母将用于以下描述在第一阶段终止，得到用DIIK085表示的馏出物，其中EPA+DHA的平均含量为45％。
在第二阶段R2终止时，所收集的产品用RK090表示，该产品EPA+DHA的平均含量为58％。制备DIIK085的方法(参见流程图2)。
将原料酯装入定量给料罐(3)，再用计量泵(1)泵送到初级排气段(4)，保持在60℃下，真空度约为5.10-2毫巴。
流速为恒定值1350毫升/小时。
在下列操作条件下，酯从脱气器进入第一蒸发塔，温度为115℃，真空度1.10-3毫巴，吹扫系统转速为350转/分钟。
第一次蒸发的残留物通过流动捕集器(11)进入第二蒸发塔。
操作条件是温度125℃，真空度1.10-3毫巴，吹扫系统转速300转/分钟，两个蒸发器中冷凝器的温度保持在恒定值8℃。
将馏出物收集在处于氮气氛中的适宜容器中。制备RKO90的方法将DIIK085装入接收室3中。
计量泵流速(2)为1250毫升/小时。
第一蒸发器的条件为温度105℃，真空度10-3毫巴，吹扫系统转速350转/分钟。
第二蒸发器的条件为温度90℃，真空度10-3毫巴，吹扫系统转速350转/分钟。D.M操作参数一览表I阶段 II阶段I步 II步I步 II步脱气器温度(℃) 6060 60 60冷凝器温度(℃) 8 8 8 8蒸发塔(℃) 115 125 105 90脱气器压力(毫巴) 5.10-25.10-25.10-25.10-2蒸发塔内的压力(毫巴) 10-310-310-310-3流速(毫升/小时) 1350 1250旋转速度(转/分钟)350 350350 350必须记住，操作人员可以随时将上述的操作参数进行微小的变化，以便优化生产。事实上，因为这是天然产品，所以就会有组分上的各种变化。还必须记住。计量泵的泵送流速会有某些变化的可能性，这种变化的可能性因以下二方面是完全可能的1)泵计量机构的两个基本元件是两个球阀，由于所处理的物料的性质，它们可能会发生部分堵塞，并且引起上述的不便，除非及时地进行维修。2)产品的粘度会发生微小的变化，由流速的变化就可以反映出这点。
但是，流速的变化不应超过规定值的2～3％，否则，产品的组成就会有很大的变化。
用RK090表示的残留物是由分子蒸馏衍生出的最终产品，最后，将其收集到加有0.03％生育酚、处于过压氮气氛下的适合的不锈钢容器内。
产品清澈，颜色为深黄至浅橙黄色。
取样后进行下列常规试验气相色谱滴定过氧化指数分子蒸馏的产率从1000千克乙酯中可制得400千克DIIK085和200千克RK090，换言之，总产率为20％参见流程图3，可以了解如何重新利用中间产物。
RK085是DHA含量高的产品，DHA含量为50～60％，是获得浓缩DHA的基本原料，而原料产品中RK085的含量为16％。
DIK085是EPA/DHA含量低的产品，所以在加工过程的任何阶段都不能被重新利用，但是，由于它可以在化妆品和涂料工业上被重新利用，还是具有很大的工业利用价值。
DIK085约占原料酯的48％。
DIK090和DIIK090都含有平均含量的EPA和DHA但EPA在数量上占优势(附在色谱图H、I上)。
两者(EPA和DHA)的总含量约为16％。
对沉积的残留物DIK090和DIIK090进行一些TRu试验。
这些试验表明，可以部分回收这些产品，这样就可以再进行循环加工，用这种方法自然会增加最终产率。4.用尿素处理TRu4.1概述用尿素将分子蒸馏后的浓缩产物RK090进行化学处理，这步操作可使最低滴定率达85％，而EPA/DHA之比实际上保持不变。
后一个因素正是必须进行化学处理的根本原因，也可以采用分子蒸馏的物理方法来获得85％的滴定率，但是，这对最后的产率有不利的影响，产物EPA/DHA比例不适，DHA含量偏高(产物中EPA含量30％，DHA为55％)。
这就违背了本发明之明确的目的，有以下两个原因1)在此过程中，鱼油的优势主要在于其EPA含量，因此，具有上述特性的产品是很不理想的。2)该加工产物必须尽可能如实地反映出沙丁鱼油中自然存在的EPA/DEA的比例。
尿素的作用是形成加合物，其作用原理还不清楚，很可能是低不饱和度的脂肪酸乙酯的作用。该加合物是热溶性的，当逐渐冷却时，便会析出块状沉淀。
然后可以将该固体加合物过滤，以便从含有高滴定率多不饱和脂肪酸乙酯的溶液中将其分离出去。4.2实际过程对于起始量为9.1千克的RK090(约10升)，则下列试剂的用量必须是96％体积比(V/V)的乙醇64千克(约80升)工业尿素15千克15％氯化钠溶液354千克环己烷31.6千克整个过程都在氮气氛中进行。
将乙醇和称量的尿素加到装有立式刮板搅拌装置的反应器内，其内部温度一直升到70℃，使尿素全部溶解。
这时，将溶液稍微冷却(约66℃)，借助进料装置向其中加入RK090，当所有物料全部加完后，将温度重新调至70℃，并维持在该温度下10分钟，尔后停止蒸汽流，逐渐冷却至室温(20°)，在该条件下将反应混合物存放12小时。
在冷却到内部温度为20℃的同时，存放反应混合物至少12小时是反应完全的基本条件。
这时，过滤混合物。
排放第一反应器中的物料，并直接用硅藻土板式压滤机压滤该物料，通过氮气流施加在压滤机上的压力不超过1.5个大气压。
将清澈的溶液转送到另一个反应器中，由此进行真空浓缩。
在浓缩过程中，还会有未与乙酯发生反应的过量尿素析出。
这样可以避免除去所有的乙醇，事实上，如果进一步蒸馏乙醇，就会形成面团状的大块物料，坚硬而不易混合。
用一份15％NaCl(55升)回收浓缩残留物，再用环己烷萃取。经第一步萃取后，用15％NaCl溶液洗涤有机相三次，当检测溶液中是否存在尿素的试验显示为阴性反应时，则洗涤完全，可以使用奈斯勒试剂进行该项试验。
萃取过程相当长，这说明由于形成乳化液是很难解决的。
在具有大量产物存在的两相内表面上形成的多泡沫部分，可将温度提高到40～50℃，有助于乳化液重新溶解。同时，可以过滤出上述中间产物部分，接着重新萃取。
当然，也可以采用使乳化液根本无法形成的合适的有机溶剂。
用加入无水硫酸钠的办法使环己烷溶液脱水，将澄清溶液转送第二个反应器中进行最后脱色处理。
该操作是上述2.1小点已作过描述的操作步骤的重复，这里，Tonsil 70CCFF漂土的百分含量不同，其重量为最终产品理论产率的10％。5.最后净化DF净化是通过分子蒸馏器更快获得最终产品的一个步骤，以便绝对除去TBE处理过程中的残留溶剂。
最终产品用气相色谱法分析，结果表明，总的EPA+DHA滴定率不小于85％，其中EPA/DHA比例为EPA40～40％，DHA40～46％。
DHA通过多个机理作用于某些代谢过程如人体区域，对某些病理确实有明显的药理效用。使用DHA制备物是很重要的，该制备物要含有至少5～10％的α-生育酚，目的在于可防止有损DHA的过氧化现象，由于DHA的高不饱和度，容易引起氧化现象发生。1)DHA对多不饱和脂肪酸之新陈代谢的作用自然，多种脂肪酸族共同存在时，从代谢的观点考虑，属于这些脂肪酸族的每一种化合物，彼此之间都是相互关联的。
由这些化合物组成的三种主要类型多不饱和脂肪酸是n-9、n-6和n-3代谢系列，这些脂肪酸采用上述简称的命名所赋予的意思分别为距甲基端(同时与羧基端相距最远)最近的双键在第9、6和3个C原子上。
由于包含在甲基端和与其最近的双键之间的脂肪酸分子部分在分子所经历的代谢转化(去饱和与链延长)期间保持不变，所以可以得出结论，由代谢相互转化作用所形成的所有化合物也保持该结构特征不变。上述代谢系列脂肪酸的各自母体化合物是油酸、亚油酸以及α-亚油酸，DHA即属于这类。
亚油酸和α-亚油酸在高等有机体中是无法被合成的。
因此，从营养学观点考虑，这些在高等有机体内起着重要生物作用的化合物是必需化合物，必须通过食物摄取。
由于存在于肝脏(网状内皮原生质系统)内的去饱和酶和链延长酶的活性作用，能发生上述脂肪酸变成链更长。不饱和度更高的化合物的代谢转化反应。
下面的说明是很重要的，因为这是关于各种多不饱和脂肪酸的新陈代谢作用的。a)对所存在的这类反应，尤其是去饱和反应的调节过程是限制过程。b)三种类型脂肪酸之先质的转化速度彼此是非常不同的，α-亚油酸183(n-3型)的转化速度最高，亚油酸(182，n-6)的转化速度低得多，油酸的转化速度最低。c)三种类型的多不饱和脂肪酸在新陈代谢过程中存在竞争对抗作用，即较大亲合力的脂肪酸对较小亲合力脂肪酸的代谢转化具有抑制作用，相反，食物中对酶催化系统具有高亲合力之脂肪酸的缺乏(例如，缺乏必需的亚油酸和α-亚油酸)不会妨碍低亲合力脂肪酸(油酸)的转化作用。
因此，一旦出现必需脂肪酸不是时，则油酸就会转化成二十碳三烯酸C203，n-9。d)由于食物所提供的各种多不饱和脂肪酸(n-3、n-6、n-9)之间的互相代谢作用，可以得出结论，脂肪酸的相互比例决定了属于不同种类型的C18-化合物将代谢转化成不饱和度更高，链更长的化合物，继而也决定了这些化合物与原生质和组织类脂的结合。
用n-3类型多不饱和脂肪酸如DHA给药，由于其代谢作用以及它们与组织的结合作用，因此是非常重要的，事实上，很明显，例如用DHA给药能使该化合物与细胞类脂结合，这种结合又取决于多种因素，例如，食物中n-6型脂肪酸的相对含量，还有与n-6脂肪酸(亲合力)相比，DHA的相对亲合力，因为不同细胞种类中有多种磷脂库。2)DHA对于血管区域，动脉粥样硬化、血小板功能以及血栓形成的作用。
根据以上所述，有关DHA对于多种不饱和脂肪酸新陈代谢之影响的作用是很重要的，它可以对C20多不饱和脂肪酸，具有高生物活性产品的先质即eicosanoids产生作用，Eicosanoids是一类通过以下两条主要途径，由花生四烯酸(AA)经酶催化氧化而衍生的主要物质；在环氧酶作用下，导致前列腺素、前列腺环素以及凝血恶烷的形成，在脂肪氧合酶作用下，导致含氧酸和白细胞三烯(leukotriense)的形成。
有些特殊的eicosanoids在调节重要功能和构成某些过程之基础的机理中起作用，如在形成血栓中和在血管域(活化I3前列腺环素或PGI3而不是PGI2的生成)。
由于特殊eicosanoids的形成以及随其后所生成的非活性TXA3，DHA对于血小板凝固也起作用(生物化学、生物物理学工业研究，第117期，作者Rao G.H.R等人，第549页，1983年)。但是，用纯DHA给药对某些系统的作用则完全与EPA所显示的效果不同。
事实上，虽然用DHA给药后可以产生防止血小板凝固的活性，但发现对AA的新陈代谢作用没有特别的影响，不同于用EPA给药时所产生的效果(Hirai等人，“前列腺素、血栓形成和白细胞三烯研究进展”，第17卷，Eds，Samuelsson B.，PaolettiR.和Ramwell P.W.，Raven出版社，纽约，第838页，1978)，据该资料介绍，与血小板类脂结合的DHA既不容易被释放，自然也不会转化成其它化合物。
另外，根据Talesnik和Carleton的研究(TalesnikJ和Carleton Hsia J.，欧洲药学杂志，第80期，第255页，1982)，DHA可以抑制由AA引起的冠状动脉血管收缩。
由此可以得出结论，DHA由于直接转化或间接转化成对于C20脂肪酸的新陈代谢具有阻碍作的EPA，可以导致特殊eicosanoids的形成，具有预防或治疗作用的可能性，作为抗凝血素，能延长流血时间，作为冠状血管舒张素以及血小板凝固抑制剂。3)DHA对于免疫系统以及炎症的作用属于n-3类型的脂肪酸(DHA即属于这类)在改变免疫力和发炎反应中起着重要的作用，这是因为细胞多不饱和脂肪酸的变性，继而改变了前列腺素和白细胞三烯的合成，以及承担免疫和发炎反应的细胞(白细胞、单核细胞、T和B淋巴细胞)。
在发炎过程中，DHA通过竞争抑制花生四烯酸酯转化成PGE2而对合成前列腺素起作用，所以用它作为抗类固醇消炎剂如消炎痛(Corey E.J.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.第80期，第3581页，1983)。
另外，各种其它细胞活化过程也可以通过改变结构膜类脂中的多不饱和脂肪酸如n-3类型脂肪酸给药来得到改善。其中，一个重要的作用就是使细胞内的Ca受刺激后游动，以及使肌醇磷酸酯由膜磷酸肌醇库中产生。4)DHA对视觉机能、ceroidosis，记忆和衰老过程的作用在视网膜和神经之突触处中含有高浓度DHA，这些结构中的DHA减损(通过对试验动物调整饮食来实现)会引起视觉机能失灵(Tinoco J等人，生物化学及生物物理学报，486期，575页，1977)。
因此，从医疗学的观点出发，在治疗与视网膜甘油磷脂中DHA浓度降低相关的疾病时，采用高纯度DHA似乎是非常有益的。
DHA减损会引起行为无规律并伴随有记忆力减退。事实上，正如Lamptey和WalKer所能发现的(Lamptey M.S.和Walker B.L.营养学杂志，106期，86页，1976)，根据饲喂不同剂量n-3脂肪酸的小鼠显示的记忆力与其大脑中22∶6(DHA)的含量成正比。更有趣的是ceroidosis与DHA浓度之间也有联系，Ceroidosis是一种病状，其中，褐色的脂褐质色素(ceroid)会沉积在消化道滑肌的细胞内部以及肝脏、肌肉和CNC中。
Pullarkat和他的同事们(Pullarkat R.K等人Neuropdiatrie 9期，127页，1978)已证明，青少年神经ceroidosis中，在白细胞DHA下降(在所有被检查的患者中发现)之病情轻重之间存在着相互联系。
另外，他们在以前的研究中还发现，成人与青少年大脑内部存在的磷脂酰丝氨酸中DHA含量的减少就会引起神经ceroidosis。
提供外来的，高纯度DHA可以认为是治疗上述疾病的有效方法。
如上所述，DHA已被发现在高级动物体内是以酯的形式存在于膜甘油磷脂中的，在一些主要的组织甘油磷脂中〔卵磷脂(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸(PS)和磷脂酰肌醇(PI)〕，尤其是大脑中的PE和PS含有相对多的DHA。在合成突触体的膜上，相对于总脂肪酸，DHA的相对浓度可高达20％，与存在于其它组织中的主要多不饱和脂肪酸AA的相对比值为大于1。所说的两种磷脂PE和PS存在于内细胞膜表面上，因此，在这些磷脂中高DHA含量提醒我们想到，这些脂肪酸在细胞内部可以起到某些作用，也是一个有趣的发现，在大脑中PC和PI或者含有极少量的DHA，(属于第一种情况)，或者根本不含任何DHA(属于第二种情况)(Galli C等人“前列腺素和血栓形成的研究进展”第4卷，Eds Coceani F和Olley P.M.Raven出版社，纽约，181页，1978)。
在同样的工作中，已发现了在突触体膜的磷脂中存在特别大量的22∶6(DHA)，食用富含n-3脂肪酸尤其是DHA的油(如鱼油)食物可以明显增加膜类脂中该多不饱和脂肪酸的含量。
在衰老期，当人们食用同样的食物时，大脑内部的该多不饱和酸的含量也还是下降(White H.B等人“神痉化学杂志”18期，1337页，1971)。
在由老龄小鼠的大脑突触体分离出的类脂中发现与成年小鼠相比，其DHA含量大大下降，对于小鼠的研究也说明，在衰老期，由食物提供的DHA与大脑类脂的结合能力明显降低(Eddy D.E.Harman D.J，Am，Ger，Soc.25期，220页，1977)。这些作者认为，这种结合能力的降低是由于在老化时期大脑内部类脂过氧化作用的增加所致。
因此，在所有这些导致记忆和老化过程的复杂机理中，可使用浓缩DHA的可能性似乎是特别重要的。
另外，一个重大的价值在于，制药工业中使用的几种独特药物含有脑磷脂(DHA的天然所在部位)，具有下列的作用机理和特征
磷脂酰丝氨酸在衰老时期，它对大脑代谢之机能产生一定的影响，对于慢性脑神痉一有机体综合病症，特别是对于与之相关的病症，记忆力下降，精神错乱。注意力不集中，精绪不稳、急躁、抑郁以及焦虑都有疗效。
间脑磷脂hypotalamus磷脂的脂质体可以促进hypotalamus新陈代谢，增加多巴胺代谢和酪氨羟基化酶以及腺苷酸环化酶的活性，从而增加环状腺苷酸(AMP)的含量，该效果本身尤其反映在hypotalamus脑垂体枢椎的机能上，作为大脑代谢辅助剂使用可以调整神经内分泌失调，例如在发育期出现的抑郁综合症、焦躁以及更年期综合症和性腺激素减弱等。
脑磷脂它可以促进神经代谢，调节膜的酶活性，增强神经传递质的代谢作用，用于治疗神经病综合症，例如，脑血管动脉硬化，更年期忧郁综合症，帕金森氏综合症，脑颅骨损伤，心身郁滞以及与CNC代谢不正常相关的各种病症。5)DHA对于心脏功能的作用近10年以前，就有人提出n-3型脂肪酸对于心血管区域的各种生理机能具有有益的作用。
在促进这一理论发展中起着决定性作用的重要的实际观察工作是对消费大量富含DHA鱼的居民(特别是爱斯基摩人)进行某些流行病研究，研究结果表明，虽然在这些居民的食物中含有大量的脂肪，但他们的心血管疾病的发病率却极低。
通过对小鼠进行饲喂含有不同脂肪酸组分的食物的试验，结果发现，心脏的代谢功能与心脏磷脂中DHA的含量有密切的关系(Gudbjarnason S等人，Acta Biol.Med.Germ，37卷，777页，1987)。
事实上，提供的儿茶酚胺片剂包括使心脏类脂中的DHA取代亚油酸的情况，同时，饲喂不同食物的一组小鼠的心跳频率与食物内类脂组分中DHA的含量成比例。
在治疗某些心脏疾病时，除了DHA所产生的直接作用外，它的治疗特性和预防能力还与下列一些不同的活性有关，如抗动脉粥样硬化活性，抗凝血活性。降血脂活性以及防止血小板凝固活性。6)DHA对血脂过多的作用高脂蛋白血症是一种血液中胆固醇或含有脂蛋白的甘油三酯的浓度超过了正常生理极限的疾病。
目前，在患有这种疾病的患者当中，血浆中高胆固醇和/或甘油三酯浓度的患者据估计约有95％，其重病患者的比例随着年龄和性别的不同而变化。
高脂蛋白血患者可以分成第一种和第二种患者。
第一种高脂蛋白血患者可以分为两种，单基因高脂蛋白血患者(遗传产生)和多基因高脂蛋白血患者(由先天因素再加上食用不当，食物过多和肥胖而引起的)。
第二种患者表现有某些严重的新陈代谢紊乱的病症，如糖尿病、甲状腺机能减退、尿毒症、酗酒，或者如为避孕而使用口服避孕药时所产生的付产用。
所以，有科学的根据可以证明，高浓度脂蛋白会加速动脉硬化的恶化，随后又会引起类似于血栓形成和心肌梗塞等不易治愈的病症。根据统计，在美国大约有一半的疾病都是由于这类病症所引起的。
随着工业文明的发展和社会福利的相对增加，人们(特别是在过去的几十年中)开始贪饮食物，无论从数量上还是从出于饮食营养观点质量上考虑，人们都过于贪食了，事实上，大大增加了富含胆固醇和饱和脂肪酸的食物的摄取，这是引起高血脂病增加的主要原因之一。
对于所有高脂蛋白血患者的第一种治疗办法是进食维持标准体重所需的食物，以减少血液中类脂的浓度。
不吃含饱和动物脂的食物，以多不饱和的植物油代之，现已表明，这是治愈类脂型病症的首要条件。
根据上述理由，我们认为，DHA(多不饱和长碳链脂肪酸)对高血脂病产生治疗作用是可能的，因此，进行一些基本的药理试验，采用的是对动物进行口服给药的试验办法，以证明DHA所可能具有的活性。
所有试验中，采用的是Sprague-Pawlty天竺鼠，并且使用滴定率为96％的高浓度酯化DHA。
将每组试验动物用已知具有降血脂活性之分子的安妥明(氯苯丁酯)或烟碱酸进行处理，以便验证试验的有效性，所有的动物在被杀死的时候都处于禁食状况。A)DHA对于由Nath食物所引起的高血脂症的活性Nath食物是一种如上所述的，富含胆固醇和胆酸的食物，当食用4～5周便可使动物患上高血脂症。
使用原体重约为80～100克的雄性鼠，将这些动物分成6个试验小组1)对照组(C)；2)对照组+Nath食物(CD)；3)安妥明，300毫克/千克·天+Nath食物(CL)；
4)DHA，50毫克/千克·天+Nath食物；5)DHA，150毫克/千克·天+Nath食物；6)DHA，500毫克/千克·天+Nath食物；试验持续5周，在此期间，检测和记录动物的基本状态(生长，食物消耗等等)。
试验结束时，在禁食条件下，将动物杀死，以便测定有关参数(总胆固醇、甘油三酯)。
测试结果表明，用高浓度DHA给药可以抑制由饲喂Nath食物而引起的高血脂症(图4)。B)DHA对于由Triton WR1339引起的高血脂症的作用。
Triton WR1339或者Tyloxapol是一种能够增加试验动物血液中甘油三酯和胆固醇含量的物质。
使用原体积约为200克的雄性鼠，将动物分成6个试验小组1)对照组(C)2)对照组+Triton(CT)；3)烟酸，500毫克/千克·天+Triton(AN)；4)DHA，50毫克/千克·天+Triton；5)DHA，150毫充/千克·天+Triton；6)DHA，500毫克/千克·天+Triton；动物在饲喂Triton WR1339之前，用烟酸，DHA或仅用载体预处理2天，当用Triton WR1339处理后18小时，在禁食状况下，杀死动物，以便测定血中总胆固醇和甘油三酯的含量。
在该试验中，用DHA给药证实该化合物能降低通过用TritonWR1339处理而改变的血浆类脂含量(图5)C)DHA对于由乙醇引起的甘油三酯过多症的作用用乙醇对小鼠进行亚急性给药，使其处于甘油三酯过多状态。
在该试验中，使用原体重约为200克的雄性小鼠，将动物分成6个试验小组1).对照组(C)；2).对照组+乙醇(CE)；3).安妥明，200毫克/千克·天+乙醇(CL)；4).DHA，50毫克/千克·天+乙醇；5).DHA，150毫克/千克·天+乙醇；6).DHA，500毫克/千克·天+乙醇。
用10％乙醇溶液随意对鼠进行口服给药，或按0.5克/鼠给药，致使小鼠患上甘油三酯过多症。
从第一次摄取乙醇的前一天开始，按试验用所给定的物质对动物进行处理，到第4天，最后一次用乙醇处理后2小时，杀死这些动物测定甘油三酯含量。
由该试验获得了非常可靠的结果，事实上，口服高浓度DHA大大抑制了由乙醇引起的甘油三酯过多症(图6)。
总之，考虑到上述试验所获得的结果，使用高滴定率DHA(96％)治疗高血脂症或与之相关的病症是绝对合理的。
最后，需要说明的是，对于本发明的方法可以进行许多改进、变化、增加和/或更换局部非实质性内容，工艺步骤和操作细节，这些都不违背本发明的思想，也不超出本发明所要保护的范围，用以下的权利要求来限定本发明的保护范围。
权利要求
1.一种用动物和/或植物油脂制备高浓度多不饱和脂肪酸混合物及其酯的方法，其特征在于将原料油进行碱性水解，所形成的固体皂用无机酸水溶液进行酸化，所生成的混合物再用石油醚萃取完全，合并的萃取物经洗涤和浓缩后，在适当改变温度和压力参数下，进行一步或多步分子蒸馏，以获得所有需要的最终产品。
2.根据权利要求1所说的方法，其特征在于第一步分子蒸馏是在压力为10-3mmHg，蒸发器温度约为110～120℃下进行的。
3.根据权利要求1所说的方法，其特征在于随后的分子蒸馏步骤是在温度由50℃增加到约80℃的条件下进行的，以便增加所获得的多不饱和脂肪酸的滴定率，破坏增大分子量的脂肪酸。
4.根据权利要求1所说的方法，其特征在于获得的多不饱和脂肪酸主要是二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)。
5.根据权利要求4所说的方法，其特征在于为获得主要由DHA组成的浓度大于90％的这样较高浓度的残留物，在不低于85℃的较高温度下，将经过上述各步分子蒸馏后的产品进行进一步分子蒸馏。
6.根据上述一项或多项权利要求所说的方法，其特征在于，为制备经分子蒸馏所获得之多不饱和脂肪酸的乙酯，在酸性介质中用乙醇处理脂肪酸，向反应产物中加入等体积的水，全部混合物再用石油醚萃取，将醚萃取液干燥后蒸发至除去全部溶剂，然后在约100℃高温下，将产物再进行一次分子蒸馏，以除去全部的由处理带来的杂质。
7.根据权利要求1-5中一项或多项权利要求的方法所获得的多不饱和脂肪酸混合物。
8.根据权利要求6所说的方法而获得的多不饱和脂肪酸乙酯混合物。
9.根据权利要求7所说的混合物，其特征在于多不饱和脂肪酸主要是二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)。
10.根据权利要求9所说的混合物，其特征在于按照所进行的分子蒸馏步数，混合物总浓度约为35～90％。
11.根据权利要求5的方法所获得的基本由DHA组成的，总浓度约为90％的产品。
12.根据权利要求1-7的方法所获得的EPA乙酯和DHA乙酯之混合物。
13.根据权利要求1-7的方法所获得的由DHA乙酯组成的高浓度(至少90％)产品。
14.用权利要求7-13所说的产品或混合物作为食疗品添加剂的用途。
15.用权利要求7-13所说的产品或混合物作为药理活性物质，以达到预防或治疗为目的的用途。
16.用权利要求7-10或12所说的混合物治疗和预防高血脂及其相关的病症，治疗血栓形成，血小板凝固，心肌梗塞，高血压，作为抗凝血剂，防止动脉粥样硬化，脑血管梗塞，由血管舒缩性痉挛引起的损伤和闭塞，糖尿病及其并发症，急性和慢性炎症，自免疫综合症，防止非类固醇消炎剂在胃肠中的付产品以及预防肿瘤。
17.用权利要求11和13所说的DHA或其乙酯治疗和预防高血脂以及与之相关的病症，如高脂蛋白血症，血胆固醇过多，甘油三酯过多，脂肪代谢失调，由胆固醇而引起的脉管损伤，动脉粥样硬化，黄瘤，糖尿病性视网膜病，防止血栓形成，防止主动脉和冠状动脉硬化，作为辅助剂以治疗可能引起高脂蛋白血症的疾病(糖尿病，甲状腺机能减退、尿毒症等等)，治疗心肌梗塞、急性和慢性炎症，糖尿病，自免疫综合症，防止由非类固醇消炎药物引起的付产品，防止肿瘤，治疗伴有视力下降的视网膜病，Cerpidoses，延缓记忆力减退和衰老过程。
全文摘要
本发明提供了一种主要采用分子蒸馏法从动植物油脂中制取多不饱和脂肪酸即二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)的先进方法，该方法尤其适用于大规模工业化生产，采用该方法可以制备出由EPA和DHA组成的或由它们的乙酯组成的总浓度为35～90％的混合物，由DHA单独组成的或其酯组成的总浓度大于90％的产品，这些混合物可以用于多种目的，从食疗品用途到特殊的治疗用途，可以治疗众多的代谢紊乱、失调、疾病和炎症等。
文档编号A61K31/19GK1040050SQ89104628
公开日1990年2月28日 申请日期1989年5月26日 优先权日1988年5月27日
发明者乔瓦尼·莫斯卡滕纳, 马克斯·齐格力 申请人:斯塔莱尔有限公司