专利名称：自身免疫性疾病治疗药的制作方法
技术领域：
本发明涉及期待作为自身免疫性疾病治疗药的非类固醇系抗雌激素，例如托来米芬(トレミワエン)的应用。
作为自身免疫性疾病，可以举出胶原病等。从疾病部位的观点来看，可以举出支持组织和结缔组织的变性疾病，唾液腺的自身免疫性变性疾病，尤其是斯耶格伦病；肾脏的自身免疫性变性疾病，尤其是全身性红斑狼疮和肾小球肾炎；关节的自身免疫性变性疾病，尤其是慢性关节风湿病；血管的自身免疫性变性疾病，例如全身性坏死和肉芽肿性血管炎；还可举出多发性硬化症等。
目前，在自免疫疾病的药物治疗中，使用免疫抑制剂、核酸拮抗剂、代谢拮抗剂等。另外作为对症疗法，也使用抗炎剂、血液凝固拮抗剂等。但是，这些药物的效果是不充分的。
就免疫抑制剂来说，已知有诱发糖尿病、肾脏障碍、感染症等副作用，在使用核酸拮抗剂、代谢拮抗剂时，常产生肝障碍、骨髓障碍等副作用。
因此，自身免疫性疾病的药物治疗现状是极不令人满意的。
本发明的目的是提供作用于免疫系统、与以往药剂作用机理不同且严重副作用小的自身免疫性疾病的治疗药物。
本发明人为了寻求这样的治疗药，反复专心研究的结果，发现非类固醇系抗雌激素对于自身免疫性疾病具有优异的治疗效果，基于这种认识完成了本发明。
本发明是关于以非类固醇系抗雌激素或其药理学上允许的盐为有效成分的自身免疫疾病治疗药。
在本发明中所使用的非类固醇系抗雌激素是具有三苯基(C2-C5)链烯或者三苯基(C2-C5)链烷骨架的化合物，最好是在1位和2位的碳上有三个被苯基取代的C2-C5链烯或者C2-C5链烷类。该化合物在苯基上可以有一或二低级烷基(C1-C3)氨基低极烷氧基(C1-C3)、羟基等取代基，并且上述链烯或者链烷骨架中的烷基中可以有卤素等取代基。
作为非类固醇系抗雌激素剂的具体例子，可举出托来米芬(特公平4-19973)、他莫昔芬(特公昭59-21861)、4-羟基他莫昔芬(特开昭54-44644)、3-羟基他莫昔劳(特开昭57-122049)、N-去甲基托来米芬或者4-羟基托来米芬(特开平3-(63015)等，尤其托来米芬是令人满意的。
在刊物中描述了所有这些化合物的抗肿瘤效果(キヤンサ一.クモセラピ一·アント"·ファ一マコロシ"一17；109-113，1986及上述特许公报)。
作为其药理学上允许的盐，特别合适的是例如盐酸盐、硫酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐和磷酸盐。
在自免疫性疾病治疗中，作为能够与本申请的非类固醇系抗雌激素合用的药剂，可举出氢化泼尼松、泼尼松和氢化可的松等糖质类皮质激素，其中泼尼松是最令人满意的。
糖质类皮质激素基于其自身抗炎症作用等具有自身免疫性疾病治疗效果，它与本发明的非类固醇系抗雌激素或者其药理学上允许的盐合用时，已知能相互提高其治疗效果。
本发明的治疗药尤其对全身性红斑狼疮显示优异的作用效果。
因而本发明是关于下述的治疗。
(1)以非类固醇系抗雌激素或者其药理学上允许的盐为有效成分的自身免疫性疾病治疗药。
(2)非类固醇系抗雌激素是具有三苯基(C2-C5)链烯或三苯基(C2-C5)链烷骨架的化合物(1)的自身免疫性疾病治疗药。
(3)以托来米芬或者药理学上允许的盐为有效成分的自身免疫性疾病治疗药。
(4)在上述(1)或(2)中，自身免疫性疾病是胶原病，肾脏变性疾病，例如肾炎，尤其是肾小球肾炎，伴随自身免疫障碍的血管炎、唾液腺炎或者关节炎的治疗药。
(5)在上述(1)或(2)中，自身免疫性疾病是全身性红斑狼疮的治疗药。
(6)用来与糖质类皮质激素合用的上述(1)或(2)的治疗药。
本发明的自身免疫性疾病治疗药可以口服、非口服或者静脉注射给药。
一般说来，将发挥上述有效成分效果的量与合适的药用载体的其他辅助剂组合使用。这里所说的“发挥效果的量”是以不引起不良的副作用为目的发挥药理活性的量。在各种场合的正确给药量，是随许多因素，例如给药方式、被给药患者的个体差别、将化合物给药时的状态等而变化的，当然也随投给的衍生物结构而变化。
通常，上述有效成分的给药量是，成人每天约10-1000mg，较好是约20-500mg，更好是约30-300mg。
与糖质类皮质激素合用时，糖质类皮质激素成人每天投给约1-100mg、较好是约2-60mg，非类固醇系抗雌激素成人每天投给约10-700mg、较好是约20-500mg、更好是约30-300mg。
通常与本发明的有效成分一起使用的药用载体的其他辅助剂可以是固体状，也可以是液体状，一般考虑给药途径来选择。例如作为固体载体可以举出乳糖、蔗糖、明胶和琼脂等，作为液体载体可以举出水、糖浆、花生油和橄榄油等。除此之外，还可以使用本领域的普通技术人员公知的合适载体。将本发明的有效成分与载体组合，可以形成各种容许的剂形，例如片剂、胶囊剂、栓剂、液剂、乳液剂和粉剂等。
在本发明治疗药的制剂中，非类固醇系抗雌激素或其药理学上允许的盐的含量可以根据制剂的形态在很大范围内变化，但是一般是0.01-100%(重量)，最好是0.1-70%(重量)，制剂中的其余部分通常是由药用载体的其他辅助剂构成。
MRL/Mp-1pr/1pr小鼠随着年龄增加，伴随免疫复合体的沉积，自然发生肾小球肾炎、血管炎、唾液腺炎和多发性关节炎等病症。因此，MRL/Mp-1pr/1pr小鼠作为人的全身性红斑狼疮、斯耶格伦病、慢性关节风湿病、或者多发性动脉炎等自身免疫性血管炎的实验模型被广泛使用。
下面，根据非类固醇系抗雌激素剂对MRL/Mp-1pr/1pr小鼠的淋巴组织肿大、肾小球肾炎、血管炎、唾液腺炎和关节炎的抑制效果的试验来说明本发明。
本发明的治疗药的有效成分-非类固醇系抗雌激素，例如托来米芬及其药理学上允许的盐，作为自身免疫疾病等变性性疾病，例如全身性红斑狼疮的治疗药，显示优异的效果。
实施例例1将2[4-(Z)-4-氯-1，2-二苯基-1-丁烯基]苯氧基-N，N-二甲基乙胺柠檬酸盐(柠檬酸托来米芬)给药，治疗在MRL/Mp-1pr/1pr小鼠中自然发病的自身免疫疾病。
(1)试验方法在试验中使用8周龄的雌性MRL/Mp-1pr/1pr小鼠。将柠檬酸托来米芬(特公平4-19973)悬浮在0.5%羧甲基纤维素中制成悬浮液，以相当于有效成分100mg/kg的量，每日1次连续13周口服给药。
(2)用柠檬酸托来米芬抑制MRL/Mp-1pr/1pr小鼠的脾脏和淋巴结肿大。
将柠檬酸托来米芬以100mg/kg剂量，每日1次连续13周口服给药，显著地抑制MRL/Mp-1pr/1pr小鼠的脾脏和淋巴结肿大(参阅表1)。
在MRL/Mp-1pr/1pr小鼠中，由于1pr基因(淋巴增殖基因)的存在，随着年龄增加，脾脏和全身淋巴结显著肿大。这种1pr基因编码小鼠的Fas抗原，在MRL/Mp-1pr/1pr小鼠中，由于基因中有什么异常存在，没有发现Fas抗原。因此，自身反应性T细胞在胸腺不接受介入Fas抗原的负选择，出现在末梢组织，引起淋巴组织肿大、自身免疫症状。即使在慢性关节风湿病等人的自身免疫疾病中，也确认存在自身反应性T细胞。
本试验结果表明，柠檬酸托来米芬等非类固醇系抗雌激素剂抑制自身反应性T细胞的出现，从而抑制脾脏和淋巴结肿大，显示治疗自身免疫疾病的可能性。
表1 柠檬酸托来米芬1)对MRL/Mp-1pr/1pr小鼠的脾脏和淋巴结肿大的抑制效果
1)柠檬酸托来米芬以100mg/kg剂量、每日1次、从8周龄连续13周口服给药。
2)在对比组中，仅同样投给0.5%羧甲基纤维素3)标准偏差。
4)[脾重量/体重比]＝ (脾脏重量)/(小鼠体重) ×100。
5)[淋巴结重量/体重比]＝ (淋巴结重量)/(小鼠重量) ×100。
(3)柠檬酸托来米芬对MRL/Mp-1pr/1pr小鼠的肾功能障碍的抑制在给药结束后剖检对照组和柠檬酸托来米芬给药组的小鼠，对肾脏进行病理组织学检验。并且用各组的血清测定BUN(血中尿素氮)，测定肾机能的变化(参阅表2)。如表2中所示，柠檬酸托来米芬显著改善了MRL/Mp-1pr/1pr小鼠的肾小球肾炎和因肾小球肾炎而引起的肾功能障碍。
MRL/Mp-1pr/1pr小鼠的肾小球肾炎是由于免疫复合体沉积而发病的。另一方面，即使在人的全身性红斑狼疮(SLE)等自身免疫性疾病中也发现伴随免疫复合体沉积的肾小球肾炎。本试验结果表明，对这些SLE肾病、肾小球肾炎等肾脏的变性性疾病来说，柠檬酸托来米芬等非类固醇系抗雌激素剂是有用的治疗药。
表2 柠檬酸托来米芬对MRL/Mp-1pr/1pr小鼠的肾小球肾炎抑制和肾功能改善效果
将肾脏固定在10%缓冲甲醛水中后，照通常方法制成石蜡切片，制成HE、PAS染色标本。肾小球体的障碍程度记为0(无障碍)、1(轻度障碍)、2(中度障碍)、3(重度障碍)。各小鼠的每个肾脏观察25个肾小球体，求出平均值。
2)用富士ト"ラィヶム分析器测定BUN。
3)标准偏差。
(4)柠檬酸托来米芬对MRL/Mp-1pr/1pr小鼠的唾液腺炎、血管炎、关节炎发病的抑制就对照组和柠檬酸托来米芬给药组的小鼠的唾液腺、肾血管、膝关节炎进行病理组织学检查。
如表3所示，柠檬酸托来米芬抑制了MRL/Mp-1pr/1pr小鼠唾液腺、血管炎、关节炎的发病。
本结果表明，柠檬酸托来米芬或者柠檬酸他莫昔芬等非类固醇系抗雌激素剂是自身免疫性的唾液腺炎(斯耶格伦症)、同关节炎(慢性关节风湿病)、同血管炎(坏死性和肉芽肿性血管炎)等的治疗药。
表3 柠檬酸托来米芬对MRL/Mp-1pr/1pr小鼠的唾液腺炎、肾血管炎和关节炎产生的改善效果
1)将唾液腺、肾脏、膝关节固定在10%缓冲甲醛水中后，照通常方法制成石蜡切片，制成HE、PAS染色标本。障碍程度记为0(无障碍)、1(轻度障碍)、2(中度障碍)、3(重度障碍)。
2)标准偏差。
例2将柠檬酸托来米芬和糖质类皮质激素一起给药对MRL/Mp-1pr/1pr小鼠中自然发病的自身免疫性疾病的效果(1)试验方法使用12周龄的雌性MRL/Mp-1pr/1pr小鼠。以30mg/kg和15mg/kg的柠檬酸托来米芬(TOR)、从12周龄至21周龄的9周、每日2次连续口服给药。作为阳性对照药的类皮质激素(氢化泼尼松)，同样以8、4、2mg/kg天、每日1次皮下给药。另外，用相同的给药方法将托来米芬和糖质类皮质激素合并给药。在全部给药期结束的第二天摘出肾脏，在PLP固定液中固定后，制成冻结切片。用这种冻结切片实施由抗Mac-2单克隆抗体(ハィフ"リテツケ公司，圣迭戈，美国)而产生的免疫染色。在显微镜下对各肾脏周围的10-20个肾小球体数浸润在各肾小球体中的Mac-2阳性细胞(活性化巨噬细胞)的数目，求出每一个小球体的平均Mac-2阳性细胞数，评价肾小球体肾炎的障碍程度(各n＝13)。
结果示于表4中。
表4将柠檬酸托来米芬和糖质类皮质激素一起给药对MRL/Mp-1pr/1pr小鼠的肾小球肾炎而产生的改善效果组别Mac2阳性细胞数对照组7.5±1.5柠檬酸托来米芬(TOR)30mg/kg6.2±1.015mg/kg6.5±1.2氢化泼尼松(P)8mg/kg5.8±0.84mg/kg7.9±0.72mg/kg9.4±1.0对照组11.3±1.2氢化泼尼松(P)4mg/kg9.1±1.42mg/kg7.7±1.0P 4mg/kg,TOR 30mg/kg合用 4.1±0.5*P 4mg/kg,TOR 15mg/kg合用 4.3±0.5*P 4mg/kg,TOR 7.5mg/kg合用 3.5±0.5*
P 2mg/kg,TOR 30mg/kg合用 3.6±0.7*P 2mg/kg,TOR 15mg/kg合用 2.8±0.5*P 2mg/kg,TOR 7.5mg/kg合用 4.3±0.6*＊P＜0.01(t-检定)氢化泼尼松(P)和柠檬酸托来米芬(TOR)合用组与对照组、或者氢化泼尼松单独给药组相比较，Mac2阳性细胞数均显著减少，另一方面，氢化泼尼松、柠檬酸托来米芬单独与对照组相比，Mac2阳性细胞数没有明显减少。由此看出，两种药剂合用具有相乘地抑制肾小球肾炎障碍的效果。
例3生存率比较试验作为自身免疫疾病的病态模型而使用NZB/NZW的F1小鼠(全身性红斑狼疮的病态模型)，进行由投给柠檬酸托来米芬而产生的存活率的比较试验。
(1)试验方法实验动物使用NZB(雌性)/NZW(雄性)的F1-杂交小鼠。由Bomholtgaard公司(丹麦)购进这些5周龄的小鼠。
试验组及用量·对照(雄性)将聚乙二醇每周3次口服给药·对照(雌性)将聚乙二醇每周3次口服给药·柠檬酸托来米芬30mg/kg/天70mg/kg溶解在聚乙二醇中，每周3次口服投给雌性NZB/NZW的F1小鼠·柠檬酸托来米芬30mg/kg/天7mg/kg溶解在聚乙二醇中，每周3次口服投给雌性NZB/NZW的F1小鼠(2)结果各试验组的小鼠存活率示于
图1中。
除2只外，所有雌性对照小鼠在2年的跟踪期间内死亡。这些组中的50%小鼠在40周龄前死亡，20%(4/20)1年后仍存活。
另一方面，雄性对照组中，5只在最初24周期间(图中未示出)因症状恶化而造成感染症，而将这5只的结果除去。雄性对照小鼠的47%2年后还存活。
两个托来米芬给药组中，小鼠的存活率与雌性对比组相比，明显地提高。在40周龄时在3mg/kg托来米芬给药组中只有1只(1/20)死亡，而30mg/kg托来米芬给药组中有3只(3/20)死亡。
在1年后，在3mg/kg和30mg/kg托来米芬给药组中各有80%和85%的小鼠存活，这些值也比雌性对照组(20%)更接近于雄性对照组(≈90%)的值。
另外，在低用量和高用量的托来米芬组中，分别有25%(5/20)和10%(2/20)的小鼠2年后还存活。
由以上的60只雌性和15只雄性NZB/NZW的F1小鼠的跟踪数据显示，托来米芬具有显著提高雌性小鼠存活率的作用。
例4制剂例下面示出以非类固醇系抗雌激素或者其药理学上允许的盐作为有效成分的本发明的自身免疫性疾病治疗剂的制剂例，但有关本发明制剂例并不局限于这些制剂例。
制剂例1制成含有下列成分的200mg片剂。
柠檬酸托来米芬20mg淀粉85mg乳糖90mg硬脂酸镁5mg制剂例2制成含有下列成分的200mg片剂。
柠檬酸他莫昔芬20mg淀粉85mg乳糖90mg硬脂酸镁5mg图1是NZB/NZW的F1小鼠的托来米芬给药组和对照组的存活率比较。
权利要求
1.含有以非类固醇系抗雌激素或者其药理学上允许的盐作为有效成分的自身免疫性疾病治疗药。
2.权利要求1所述的治疗药，其中，非类固醇系抗雌激素是具有三苯基(C2-C5)链烯或者三苯基(C2-C5)链烷骨架的化合物。
3.权利要求1所述的治疗药，其中，非类固醇系抗雌激素是托来米芬。
4.权利要求1所述的治疗药，其中，自身免疫性疾病是肾脏的变性性疾病。
5.权利要求1所述的治疗药，其中，自身免疫性疾病是伴随自身免疫障碍的唾液腺炎。
6.权利要求1所述的治疗药，其中，自身免疫性疾病是伴随自身免疫障碍的血管炎。
7.权利要求1所述的治疗药，其中，自身免疫性疾病是全身性红斑狼疮。
8.权利要求1所述的治疗药，其中，自身免疫性疾病是肾小球肾炎。
9.权利要求1所述的治疗药，其中，非类固醇系抗雌激素是托来米芬，自身免疫性疾病是关节的自身免疫性变性疾病。
10.权利要求1所述的治疗药，它与糖质类皮质激素合用。
全文摘要
本发明是关于以非类固醇系抗雌激素，例如柠檬酸托来米芬等作为有效成分的自身免疫性疾病治疗药。抗雌激素剂，例如柠檬酸托来米芬对自身免疫性疾病等变性性疾病显示出优异的治疗效果。
文档编号A61K31/56GK1100930SQ93120398
公开日1995年4月5日 申请日期1993年10月27日 优先权日1992年10月27日
发明者伊藤润平, 宫崎修, 浴本久雄, 小山道则, 才野哲之, L·莰嘉斯, A·瓦里 申请人:日本化药株式会社, 奥里昂·伊萨马公司