专利名称：新的三唑并(4,5－d)嘧啶化合物的制作方法
技术领域：
本发明提供新的三唑并(4，5-d)嘧啶化合物，它们作为药物的用途、含有它们的组合物和它们的制备方法。
血小板粘附和聚集为动脉血栓形成的起始事件。尽管所述血小板粘附于内皮下表面的过程在修复损坏的血管壁方面可起重要的作用，这样启动的所述血小板聚集能够促成重要的血管床的急性血栓闭塞，导致高发病率的事件例如心肌梗死和不稳定的心绞痛。血小板介导的闭塞或再闭塞也危及用于防止或缓解这些疾病的手术例如血栓溶解和血管成形术的成功。
多种会聚途径导致血小板聚集。无论初始刺激物是什么，最后的常见的情况为通过使纤维蛋白原结合至膜结合位点，糖蛋白Ⅱb／Ⅲa(GPⅡb／Ⅲa)造成血小板交联。GPⅡb／Ⅲa的抗体或拮抗剂的高抗血小板效力通过它们干扰这个最后常见的情况来解释。然而，这种效力也可解释用这类药物时观察到的出血问题。凝血酶能够产生血小板聚集作用大大独立于其它的途径，但是，没有通过其它机理的先前的血小板活化，基本上定量的凝血酶不可能存在。凝血酶抑制剂例如肝素为高度有效的抗血栓药物，但是可再次产生过量的出血，因为它们作为抗血小板和抗凝血药物起作用(The TIMI 9aInvestigators(1994)，Circulation 90，第1624-1630页；The Global Use ofStrategies to Open Occluded Coronary Arteries(GUSTO)IIa Investigators(1994)Circulation 90，第1631-1637页；Neuhaus K．L．等(1994)Circulation 90，第1638-1642页)。
已经发现ADP作为血栓形成的关键介质起作用。ADP的关键性作用通过其它药物例如肾上腺素和5-羟色胺(5HT，血清素)将仅在ADP存在下产生聚集的事实得到支持。阿司匹林有限的抗血栓效力可反映这样的事实，即它仅阻断ADP的一个来源，其以血小板粘附随后血栓烷依赖的方式释放(参见例如Antiplatelet Trialists’Collaboration(1994)，Br．Med．J．308，第81-106页；AntiplateletTrialists’Collaboration(1994)，Br．Med．J．308，第159-168页)。阿司匹林对由其它来源的ADP例如损伤的细胞或在血湍流的情况下释放的ADP产生的聚集无作用。ADP诱导的血小板聚集由单独位于血小板膜上的P27-受体亚型介导。最近，已经显示对该受体的拮抗剂比其它的抗血栓药物提供更明显的改善。因此，需要寻找作为抗血栓药物的P27-拮抗剂。
现在已发现一系列三唑并(4，5-d)嘧啶衍生物为P27-受体拮抗剂。因此本发明第一方面提供式(Ⅰ)化合物或者它们药学上可接受的盐或溶剂合物 其中R1为C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C3-8-环烷基、芳基或噻吩基，每一基团由一个或多个选自卤素、OR8、NR9R10、SR11或C1-6烷基(其本身任选由一个或多个卤原子取代)的基团任选取代；R2为C1-8烷基、C2-8链烯基或C3-8环烷基，其中每一基团可由一个或多个选自的下列取代基任选取代卤素、OR8、NR9R10、SR11、C1-6烷基、C3-8环烷基、吡啶基或芳基(其中的后两个基团可由一或多个选自的下列取代基任选取代卤素、OR20、C(O)R11、NR14C(O)R15、NR16SO2R17、SO2NR18R19、硝基、NR12R13、SR11、亚甲二氧基或由一个或多个卤原子任选取代的C1-6烷基)；R3和R4两者为羟基；R5为氢或C1-6烷基；R6为由一个或多个选自C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、卤素、OR21、C3-6环烷基的基团任选取代的C1-6烷基。或者R6为C3-6环烷基，或者R6为-A-苯基或-A-吡啶基，其中每一个可由一个或多个选自C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、卤素、OC1-6烷基、C3-6环烷基或亚甲二氧基的基团任选取代；或者R5和R6与它们连接的氮原子一起形成由C1-6烷基任选取代的5至7-元饱和环；A为键或C1-6烷基；R8为氢、C1-6烷基(其可由一个或多个卤原子任选取代)或芳基(其可由一个或多个选自卤素、硝基、C(O)R11、OR20、SR11、NR12R13、NR14C(O)R15、NR16SO2R17、SO2NR18R19的取代基任选取代)；R9为氢、C1-6烷基(其可由一个或多个卤原子任选取代)或芳基(其可由一个或多个选自卤素、硝基、C(O)R20、OR20、SR11、NR12R13、NR14C(O)R15、NR16SO2R17、SO2NR18R19的取代基任选取代)；R10为氢、C1-6烷基或C(O)C1-6烷基；R12和R13独立为氢、C1-6烷基或者与它们连接的氮原子一起形成4-至8-元环；R15为C1-6烷基或苯基；R11、R14和R16独立为氢或C1-6烷基；R17为C1-6烷基或苯基；R18和R19独立为氢、C1-6烷基或苯基；R20为氢、苯基或C1-6烷基(其可由卤素任选取代)；R21为氢或C1-6烷基，条件是当R21为H时，R5必须为C1-6烷基。
无论单独或作为另一个基团的一部分，烷基基团可以为直链的或分枝的。芳基包括苯基和萘基。酰基包括C(O)C1-6烷基例如乙酰基和1-氧代丙基。
R1适宜为C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、芳基或噻吩基，每一基团可由一个或多个选自卤素、OR8、NR9R10、SR11或C1-6烷基(其可由一个或多个卤原子任选取代)的取代基任选取代。R1优选为C1-6烷基、噻吩基或三氟甲基苯基。R1更优选为甲基、丙基、丙烯基或噻吩基。
R2适宜为C1-8烷基、C2-8链烯基或C3-8环烷基，其中每一基团可由一个或多个选自下列的取代基任选取代卤素、OR8、NR9R10、SR11、C1-6烷基、C3-8环烷基、吡啶基或芳基(其后两个基团可由一个或多个选自下列的取代基任选取代卤素、OR20、C(O)R11、NR14C(O)R15、NR16SO2R17、SO2NR18R19、硝基、NR12R13、SR11、亚甲二氧基或由一个或多个卤原子任选取代的C1-6烷基。其中R8、R9、R10、R11、R14、R15、R16、R17、R18和R19如上定义。R2优选为由苯基任选取代的C1-6烷基或C3-8环烷基，所述苯基本身能够由卤素、OR8或C1-6烷基取代。R2更优选为由苯基、4-甲氧基苯基、3-氯苯基、4-甲基苯基或4-氟苯基任选取代的环丙基。
R5适宜为氢或C1-6烷基；R6为由一个或多个选自C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、卤素、OR21、C3-6环烷基的基团任选取代的C1-6烷基，或者R6为C3-6环烷基，或者R6为-A-苯基或-A-吡啶基，其中每一个可由一个或多个选自C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、卤素、OC1-6烷基、C3-6环烷基或亚甲二氧基的基团任选取代；或者R5和R6与它们连接的氮原子一起形成由C1-6烷基任选取代的5至7-元饱和环。R5优选为氢和R6优选为环丙基、甲基环丙基、C1-6烷基、由卤素(优选为一个或多个氟原子)取代的C1-6烷基。R5更优选为乙基、异丙基或异丁基，或者R5和R6与它们连接的氮原子一起形成吡咯烷环。最优选R5为氢和R6为甲基或2-氟乙基。
本发明特别优选的化合物包括那些在此举例说明的化合物，它们以游离碱和作为它们的药学上可接受的盐或溶剂合物两类形式存在。本发明进一步提供了制备式(Ⅰ)化合物的方法，该方法包括使式(Ⅱ)化合物 其中R1和R2如在式(Ⅰ)中定义或者为其被保护的衍生物，P1和P2为氢或保护基团和Y为CO2H与式(Ⅲ)化合物反应R5R6NH(Ⅲ)其中R5和R6如在式(Ⅰ)中定义并且以后任选以任何顺序·将一个或多个功能团转化为另一个功能团·除去任何保护基团·形成药学上可接受的盐或溶剂合物。
每个P1和P2能够独立代表的适宜的基团的实例为C1-6烷基(优选为甲基)、苄基、(C1-6烷基)3Si(优选为三甲基甲硅烷基)和C(O)(C1-6烷基)(优选为乙酰基)。所述两个基团P1和P2优选与它们所连接的原子一起完成一个环，例如，两个基团P1和P2一起表示亚烷基例如亚甲基，或者更优选为亚异丙基或者烷氧基亚甲基例如乙氧基亚甲基。
使用来自肽合成的已知方法(参见M．Bodanszky和A．Bondanszky，The Practice of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，1984)，优选在偶合试剂存在下进行式(Ⅱ)与(Ⅲ)化合物的反应。适宜的偶合试剂包括1，1’-羰基二咪唑和二环己基碳二亚胺；所述优选的偶合试剂为在N，N-二异丙基乙胺存在下使用的溴-三-吡咯烷-六氟磷酸鏻或苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基氨基)六氟磷酸鏻。该反应优选在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或四氢呋喃(THF)中进行，且优选在-15°至120°之间的温度，更优选在0℃至室温的温度下进行。
使用已知的反应条件，能够加入并且除去保护基团。保护基团的用途在‘有机化学中的保护基团’，由JWF McOmie编辑，Plenum出版社(1973)和‘有机合成中的保护基团’，第2版，TW Greene和PGM Wutz，Wiley-Interscience(1991)中有充分描述。
使其中Y为CO2H的式(Ⅱ)化合物活化的其它方法包括形成酰卤或乙酸酐。通过在碱例如吡啶存在下用酰卤例如乙酰氯处理可形成酸酐，或在惰性溶剂中通过用脱水剂例如乙酸酐或五氧化二磷处理可形成酸酐。通过以卤化剂例如P(Ⅲ)、P(V)或S(Ⅳ)卤代物例如三氯化磷处理酸可形成酰卤。通过酸与酰卤例如草酰溴的交换反应也可制备酰卤。在0至150℃的温度下，在卤化剂或酰卤作为溶剂或者在其它惰性溶剂例如二氯甲烷中可进行所述反应。优选在室温下，于二氯甲烷中用草酰氯处理进行活化。
使用本领域众所周知的方法进行脱保护作用。例如优选如下进行对于基团P1／P2的脱保护作用(ⅰ)当P1和P2中一个或两个表示COC1-6烷基时，这些基团能够通过碱性下水解除去，例如在10至100℃的温度下，优选所述温度为大约室温，在溶剂例如乙醇水溶液或四氢呋喃水溶液中，通过使用金属氢氧化物，优选为碱金属氢氧化物例如氢氧化钠或氢氧化锂或者季铵氢氧化物进行碱性水解，或者在溶剂例如1，4-二氧六环中，通过使用无机酸例如HCl或者强有机酸例如三氯乙酸能够进行酸性水解；(ⅱ)当P1和P2中一个或两个表示(C1-6烷基)3Si时，这些基团能够通过使用例如氟离子来源如四正丁基氟化铵或氟化氢除去；(ⅲ)当P1和P2中一个或两个表示C1-6烷基时，这些基团能够通过使用例如三溴化硼除去；(ⅳ)当P1和P2中一个或两个表示苄基时，这些基团能够通过在溶剂如乙酸中，在1至5个巴的压力的氢气氛下使用过渡金属催化剂例如披钯木炭氢解除去；和／或
(ⅴ)当P1和P2中一个或两个表示亚烷基或烷氧基亚烷基时，这些基团能够通过使用例如无机或有机酸除去，优选在室温下于甲醇／1，4-二氧六环中通过使用2M的盐酸水溶液除去。
式(Ⅲ)化合物为市售的化合物或者能够通过本领域技术人员已知的文献方法进行制备其中Y为CO2H、CONR5R6或CO2R’的式(Ⅱ)化合物能够在碱存在下通过使式(Ⅳ)化合物 其中R1、P1、P2R5和R6如上定义，L1为离去基团例如卤原子和R’为C1-6烷基或苄基，与其中R2如上定义的胺NH2R2或NH2R2的盐反应进行制备。NH2R2适宜的盐包括盐酸盐。适宜的碱包括有机碱如三乙胺或者无机碱如碳酸钾。使用在H Nishiyama等，Bull．Chem．Soc．，Jpn．，1995，68，1247，P．Newman．用于化学化合物的光学拆分方法，第1卷，胺和相关化合物；光学拆分和信息中心Manhattan学院，Riverdale，NY，1978，第120页，J．Vallgarda等，J．Chem．Soc．Perkin 1，1994，461中描述的方法，能够制备所述胺NH2R2。某些胺NH2R2为新化合物并且形成本发明的另一个方面。
式(Ⅳ)化合物能够通过在稀酸水溶液例如2M的HCl中使其中R1、Y、L1、P1和P2如上定义的式(Ⅴ)化合物 与金属亚硝酸盐例如碱金属亚硝酸盐特别是亚硝酸钠重氮化来制备，或者在-20至100℃下于惰性溶剂中用C1-6烷基亚硝酸盐重氮化来制备。优选的条件为在80℃下于乙腈中的亚硝酸异戊酯。
其中Y为CO2H的式(Ⅴ)化合物能够通过还原并水解其中R1、L1、P1和P2如上定义的式(Ⅵ)化合物来制备 例如在大约为室温的温度下，通过使用过渡金属催化剂例如在氢气氛下的披钯木炭氢化，优选在溶剂如乙醇中，在1至5个大气压的氢气氛下进行还原，或者通过在大约100℃的温度下，使用酸性溶剂例如乙酸中的铁进行还原。
为制备其中Y为CO2H的式(Ⅴ)化合物，在进行上述反应后，通过在20至150℃的温度下，在溶剂例如1，4-二氧六环中使用矿物酸例如HCl或强有机酸例如三氟乙酸，可进行衍生于所述式(Ⅵ)化合物的化合物的水解。优选在大约80℃的温度下，使用在含有碱土金属卤化物例如氯化钙的酸性溶剂例如乙酸中的铁进行所述还原和水解。
为制备其中R9为C1-6烷基或苄基的式(Ⅴ)化合物，在50至80℃的温度下，用在乙酸中的铁处理所述式(Ⅵ)化合物以使所述硝基被还原。然后在大约室温下，于水和C1-6烷基醇或者苄基醇的混合物中用硼氢化钠处理所生成的中间体。
在-10至100℃的温度下，在惰性溶剂例如四氢呋喃(THF)中，在碱例如其中M为金属的C1-6烷基-M或MH如丁基锂存在下，通过使其中L1和R1如上定义和L2为离去基团例如卤素原子，其中L1和L2优选为相同的式(Ⅶ)化合物 与其中P1如上定义的式(Ⅷ)化合物反应能够制备式(Ⅵ)化合物。 优选在室温下于THF中使用氢化钠。
通过用其中R1如上定义并且L3为适宜的离去基团例如卤原子的R1L3烷基化，随后通过硝化，其后所述两个醇转化为离去基团L1和L2，可由4，6-二羟基-2-巯基嘧啶制备式(Ⅶ)化合物。在碱例如N，N-二异丙基乙胺存在下，在适宜的溶剂例如1，4-二氧六环中通过使式(Ⅸ)化合物 与其中P1、P2、R1、R5、L1和L2如上定义的式(Ⅶ)化合物反应随后通过还原硝基，制备其中Y为CONR5R6的式(Ⅴ)化合物。可使用在WO 9528160中描述的方法制备式(Ⅸ)化合物。
所述基团SR1能够通过氧化所述硫互变，如使用oxone或mCPBA随后通过用其中R1为不同的R基团并且M为金属例如钠的化合物R1SM处理。
所有新的中间体形成本发明的另一个方面。
式(Ⅰ)化合物的盐可通过使游离的酸或其盐、或者游离的碱或它的盐或衍生物与一或者更多当量的所述适宜的碱(例如通过C1-6烷基或碱金属或碱土金属氢氧化物任选取代的氢氧化铵)或酸(例如氢卤酸(特别是HCl)、硫酸、草酸或磷酸)反应来形成。所述反应可在其中所述盐是不溶解的溶剂或介质中或者在其中所述盐是溶解的溶剂例如水、乙醇、THF或乙醚中进行，所述溶剂或介质可真空除去或通过冷冻干燥。所述反应也可是置换方法或者可在离子交换树脂上进行。所述非毒性的生理上可接受的盐是优选的，尽管其它的盐例如在使所述产物分离或纯化中是有用的。
本发明化合物作为P27-受体拮抗剂起作用。因此，所述化合物用于治疗，尤其是辅助治疗，特别是它们适于用作血小板活化、聚集和脱粒的抑制剂、抗血栓药物或者用于治疗或预防不稳定心绞痛、冠状血管成形术(PTCA)、心肌梗塞、周围血栓溶解、动脉粥样硬化的初期动脉血栓形成并发症例如血栓形成或栓塞中风、外周血管疾病、伴有或不伴有血栓形成的心肌梗塞、由于在动脉粥样硬化疾病进行手术例如血管成形术、动脉内膜切除术、斯坦特固定膜放置、冠状和其它血管移植术、手术或机械损伤血栓形成并发症例如事故或手术损伤后的组织抢救、重建手术包括皮肤和肌肉瓣所引起的动脉并发症、具有弥漫性血栓形成／血小板消耗成分的疾病例如播散性血管内凝血、血栓形成的血小板减少性紫癜、溶血性尿毒综合征、败血症的血栓形成并发症、成人呼吸窘迫综合征、抗磷脂综合征、肝素诱导的血小板减少症和子痫前期和子痫、或者静脉血栓形成例如深度静脉血栓形成、静脉闭塞疾病、血液学情况例如骨髓及骨髓增殖的疾病、包括血小板增多、镰形细胞疾病；或者用于预防机械诱导的血小板体内活化，例如心-肺旁路和体外膜氧化作用(预防小血栓栓塞)、机械诱导的血小板体外活化，例如用于保存血液产品，例如血小板集聚，或者旁路闭塞例如在肾透析和血浆除去法中、继发于血管损伤／炎症例如脉管炎、关节炎、肾小球性肾炎、炎性肠道疾病和器官移植排斥反应的血栓形成，例如偏头痛、雷诺现象、动脉粥样化蚀斑形成／进展的疾病、其中血小板衍化因子与所述疾病过程有关的血管狭窄／再狭窄和哮喘。
本发明进一步提供了本发明化合物在制备治疗上述疾病的药物中的用途。本发明也提供了制备治疗上述疾病的方法，该方法包括给予患有这类疾病的患者治疗有效量的本发明化合物。
所述化合物可以溶液剂、混悬剂、HFA气溶胶和干燥粉末制剂的形式局部给予例如肺部和／或气道给予；或者全身给药，例如以片剂、丸剂、胶囊剂、糖浆剂、散剂或颗粒剂形式口服给予，或者以无菌非肠道溶液剂或混悬剂的形式经非肠道给予，经皮下给予，或者以栓剂经直肠或者经皮的形式给予。
本发明化合物可以其本身或者作为与药学上可接受的稀释剂、辅助剂或载体混合的包含本发明化合物的药用组合物给药。特别优选地是组合物不含有能够引起副作用例如过敏反应的材料。
本发明化合物的干燥粉末制剂和加压的HFA气溶胶可通过口腔或鼻腔吸入给药。为了吸入所述化合物需要求细粉化。
本发明化合物也可借助干燥粉末吸入器给药。所述吸入器可为单或多剂量吸入器，并且可为呼吸干燥粉末吸入器。
一种可能性是使所述细分散的化合物与载体物质例如单-、双或多糖醇、糖醇或另一种多醇混合。适宜的载体包括糖和淀粉。或者所述细分散的化合物可通过另一种物质包衣。也可将该粉末混合物分散在硬明胶胶囊中，每一个胶囊含有所要求剂量的所述活性化合物。
另一种可能性是将细分散的粉末加工成在吸入过程中破裂的球形。可将所述团成球形的粉末填充到例如称作Turbuhaler的多单位剂量吸入器的药物贮库中，以剂单位计量所要求的剂量，然后由患者吸入。用这个系统，所述活性化合物可具有或不具有传递给患者的载体物质。
包含本发明化合物的所述药用组合物可方便地为用于口服给药的片剂、丸剂、胶囊剂、糖浆剂、散剂或颗粒剂；用于非肠道给药的灭菌的非肠道或皮下溶液剂、悬浮剂或用于直肠给药的栓剂。
对口服给药而言，所述活性化合物可与辅剂或载体例如乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉例如马铃薯淀粉、玉米淀粉或支链淀粉、纤维素衍生物、粘合剂例如明胶或聚乙烯吡咯烷酮和润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸钙、聚乙二醇、蜡、石蜡等混合，并且然后压制成片剂。如果需要包衣片剂，则可将如上描述的那样制备的芯用浓的糖溶液包衣，该溶液可含有例如阿拉伯胶、明胶、滑石粉、二氧化钛等。或者，所述片剂可以用溶解在易于挥发的有机溶剂或水性溶剂中的适宜的聚合物包衣。
对软明胶胶囊制剂而言，所述化合物可与例如植物油或聚乙二醇混合。使用以上提到的用于片剂的赋形剂例如乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、纤维素衍生物或明胶，硬明胶胶囊剂可含有所述化合物颗粒。所述药物的液体或半固体制剂也可填充到硬明胶胶囊中。
用于口服应用的液体制剂可以糖浆剂或混悬剂的形式存在，例如含有所述化合物的溶液剂，所述平衡为糖与乙醇、水、甘油和丙二醇的混合物。这样的液体制剂可任选含有本领域技术人员已知的着色剂、矫味剂、糖精和作为增稠剂的羧甲基纤维素或者其它的本领域已知的赋形剂。
本发明通过以下实施例举例说明。在所述实施例中，所述NMR波谱在Varian Unity Inova 300或400光谱仪中测定并且如下测量MS波谱在VG 70-250S或者Finnigan Mat Incos-XL光谱仪中得到EI波谱，在Finnigan Mat SSQ7000或Micromass Platform光谱仪中得到APCI波谱。制备型HPLC分离通常使用填充BDSC-18反相硅胶的Novapak、Bondapak或Hypersil柱。快速层析法(在实施例中指明为(SiO2))使用30-70μm的Fisher Matrix硅胶进行。
在质子NMR波谱中显示存在旋转异构体的实施例仅指明主要旋转异构体的化学位移。
按照实施例4步骤b)的方法，使用4-(1，1-二甲基乙基)苯硫酚，制备所述标题化合物。MS(APCI)588(M+H+，100％)。NMR δH(d6-DMSO)9．40(1H，d)，7．92(1H，t)，7．50(2H，d)，7．35(2H，d)，7．29(2H，t)，7．20(1H，m)，7．09(2H，d)，5．11(1H，d)，4．91(1H，d)，4．87(1H，dd)，4．37(1H，dd)，4．03(1H，dd)，3．10(3H，m)，2．71(1H，m)，2．40-2．10(3H，m)，1．33(1H，m)，1．26(9H，s)，1．07(1H，m)，1．03(3H，t)。
按照实施例50步骤a)的方法，使用实施例1步骤d)的产物和3-(4-三氟甲基苯基)丙基胺(如K Fujimura等在Bioorganic MedicinalChemistry，1997，5，1675中描述的那样制备)，制备标题化合物。MS(APCI)608(M+H+，100％)。b)[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-2，3-二羟基-N-((3-(4-三氟甲基苯基)丙基)氨基)-4-[7-[(2-苯基环丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-环戊烷甲酰胺按照实施例39步骤b)的方法，使用步骤a)的产物，制备所述标题化合物。Mpt215-217℃MS(APCI)568(M+H+，100％)。NMR δH(d6-DMSO)9．06-9．03(1H，t)，7．93-7．90(1H，t)，7．64-7．45(4H，m)，5．10-4．90(3H，m)，4．41(1H，m)，4．11-4．09(1H，dd)，3．55-3．49(1H，dd)，3．14-3．01(4H，m)，2．78-2．69(3H，m)，2．36-2．20(2H，m)，1．99-1．94(2H，m)，1．69-1．62(2H，m)，1．04-0．94(6H，m)。
按照实施例39步骤a)的方法，使用实施例1步骤c)的产物和4-(氨基甲基)吡啶，制备所述次标题化合物。MS(APCI)601(M+H+，100％)。b)[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-2，3-二羟基-4-[7-[(2-苯基环丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-N-(4-吡啶基甲基)-环戊烷甲酰胺按照实施例39步骤b)的方法，使用步骤a)的产物，制备所述标题化合物。Mpt140-145℃MS(APCI)561(M+H+，100％)。NMR δH(d6-DMSO)9．35(1H，d)，8．58-8．56(1H，t)，8．48(3H，m)，7．36-7．16(7H，m)，5．16-4．94(3H，m)，4．41-4．14(4H，m)，3．21-3．19(1H，m)，2．97-2．80(3H，m)，2．45-2．10(3H，m)，1．54-1．29(4H，m)，0．81-0．78(3H，t)。
按照实施例18步骤b)的方法，使用步骤a)的产物，制备所述标题化合物。Mpt175℃MS(APCI)515(M+H+，100％)。NMR δH(d6-DMSO)9．02(1H，t)，8．43(1H，d)，8．39(1H，d)，7．92(1H，t)，7．63(1H，d)，7．29(1H，dd)，5．11(1H，d)，4．98-4．93(2H，m)，4．45-4．40(1H，m)，4．12-4．00(1H，m)，3．56-3．50(2H，d)，3．12-3．05(4H，m)，2．80-2．63(3H，m)，2．32-2．25(2H，m)，1．72-1．64(6H，m)，1．05-0．93(6H，m)。
人静脉血(100ml)等量分成3个试管，每个试管含有3．2％作为抗凝剂的枸橼酸三钠盐(4ml)。在240G下将这些试管离心15分钟，以得到富集血小板的血浆(PRP)，向其加入300ng／ml前列环素，以在洗涤过程中稳定所述血小板。在125G下离心10分钟随后在640G下进一步离心15分钟，得到无红细胞的PRP。弃去上清液并把这些血小板再悬浮于改良的无钙蒂罗德液(10ml)(CFT)中，该溶液组成NaCl137mM、NaHCO311．9mM、NaH2PO40．4mM、KCl2．7mM、MgCl21．1mM、葡萄糖5．6mM，通入95％O2／5％CO2并在37℃下维持。随后加入另外300ng／mlPGI2，在640G下再一次将合并的悬浮液离心15分钟。弃去上清液并把这些血小板初步再悬浮于10ml的CFT中，并加入另外的CFT以调节最终的血小板数目达到2×105／ml。在3℃下，将最终悬浮液贮存在已经排除空气的60ml注射器中。为使得从正常功能的PGI2抑制作用恢复，在最后再悬浮液产生2小时后即将血小板用于聚集试验。
在所有研究中，将3ml等分的血小板悬浮液加入到含有CaCl2溶液(具有最终浓度1mM的50mM溶液的60μl)中。将人纤维蛋白原(Sigma，F4883)和8-硫代苯基茶碱(8-SPT，其用于阻断化合物的任何P1-激动剂活性)加入，以分别得到最终浓度0．2 mg／ml(在盐水中可凝固蛋白的10mg／ml溶液60μl)和300nM(在6％葡萄糖中15mM溶液10μl)。适宜的话以150μl体积将血小板或者缓冲液加入到96孔板上的单个孔中。在来自每个供体的血小板中将所有测定进行三次。
如下评价所述激动剂／拮抗剂活性效力。
在660nm下，使用通过所述板读数计上给出的吸收度的变化在96孔板上测量聚集应答。将Bio-Tec Ceres 900C或者Dynatech MRX用作所述板的读数计。
在660nm下读出所述板上每孔的吸收度，以建立基线图。将以10μl体积的盐水或者受试化合物的适当溶液加入到每一个孔中，得到0、0．01、0．1、1、10或100mM的最终浓度。然后于设置10下在定轨摇床上将所述板振摇5分钟并在660nm下读出所述吸收度。在这一点上的聚集指明为所述受试化合物的激动剂活性。然后将盐水或者ADP(30mM；450mM的10μl)加入到每一个孔中，并将所述板振摇另外5分钟后，在660nm下读出所述吸收度。
以对照ADP应答的％抑制作用评估拮抗剂效力，以得到IC50。所举例说明的化合物具有大于5．0的pIC50值。
权利要求
1．式(Ⅰ)化合物或者它们药学上可接受的盐或溶剂合物 其中R1为C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C3-8-环烷基、芳基或噻吩基，每一基团由一个或多个选自卤素、OR8、NR9R10、SR11或C1-6烷基(其本身任选由一个或多个卤原子取代)的取代基任选取代；R2为C1-8烷基、C2-8链烯基或C3-8环烷基，其每一基团可由一个或多个选自卤素、OR8、NR9R10、SR11、C1-6烷基、C3-8环烷基、吡啶基或芳基(其后两个基团可由一或多个选自卤素、OR20、C(O)R11、NR14C(O)R15、NR16SO2R17、SO2NR18R19、硝基、NR12R13、SR11、亚甲二氧基或其由一个或多个卤原子任选取代的C1-6烷基的取代基任选取代)的取代基任选取代；R3和R4两者为羟基；R5为氢或C1-6烷基；R6为由一个或多个选自C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、卤素、OR21、C3-6环烷基的基团任选取代的C1-6烷基。或者R6为C3-6环烷基，或者R6为-A-苯基或-A-吡啶基，其中每一个可由一个或多个选自C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、卤素、OC1-6烷基、C3-6环烷基或亚甲二氧基的取代基任选取代；或者R5和R6与它们连接的氮原子一起形成由C1-6烷基任选取代的5至7-元饱和环；A为键或C1-6烷基；R8为氢、C1-6烷基(其可由一个或多个卤原子任选取代)或芳基(其可由一个或多个选自卤素、硝基、C(O)R11、OR20、SR11、NR12R13、NR14C(O)R15、NR16SO2R17、SO2NR18R19的取代基任选取代)；R9为氢、C1-6烷基(其可由一个或多个卤原子任选取代)或芳基(其可由一个或多个选自卤素、硝基、C(O)R20、OR20、SR11、NR12R13、NR14C(O)R15、NR16SO2R17、SO2NR18R19的取代基任选取代)；R10为氢、C1-6烷基或C(O)C1-6烷基；R12和R13独立为氢、C1-6烷基或者与它们连接的氮原子一起形成4-至8-元环；R15为C1-6烷基或苯基；R11、R14和R16独立为氢或C1-6烷基；R17为C1-6烷基或苯基；R18和R19独立为氢、C1-6烷基或苯基；R20为氢、苯基或C1-6烷基(其可由卤素任选取代)；R21为氢或C1-6烷基，条件是当R21为H时，R5必须为C1-6烷基。
2．权利要求1的化合物，其中R1为C1-6烷基、噻吩基或三氟甲基苯基。
3．权利要求1或2的化合物，其中R2为其本身能够由卤素、OR8或C1-6烷基任选取代的苯基任选取代的C1-6烷基或C3-8环烷基。
4．权利要求1至3中任何一项的化合物，其中R5为氢和R6为由一个或多个氟原子取代的环丙基、甲基环丙基或C1-6烷基或者R5和R6与它们连接的氮原子一起形成吡咯烷环。
5．在此作为举例说明的化合物以游离碱形式和作为它们药学上可接受的盐或溶剂合物两种形式存在。
6．包含与药学上可接受的稀释剂、辅助剂或载体混合的权利要求1至5中任何一项的化合物的药用组合物。
7．权利要求1至5中任何一项的化合物用于治疗。
8．权利要求1至5中任何一项的化合物用于治疗心肌梗塞或不稳定心绞痛。
9．制备式(Ⅰ)化合物的方法，该方法包括；(a)使式(Ⅱ)化合物 其中R1和R2如在式(Ⅰ)中定义或者为其保护的衍生物，P1和P2为氢或保护基团和L为离去基团，与其中R1和R2如在式(Ⅰ)中定义的式(Ⅲ)化合物反应，R5R6NH(Ⅲ)或者(b)使式(Ⅳ)化合物 其中Y为CO2H、CO2R’或CONR5R6和R1、R5、R6、P1和P2如上定义并且L1为离去基团和R’为C1-6烷基或苄基，与其中R2如上定义的NH2R2或NH2R2的盐反应并且此后任选(a)或(b)并以任何方式进行·将一个或多个功能团转化为另一个功能团·除去任何保护基团形成药学上可接受的盐或溶剂合物。
全文摘要
本发明提供了新的式(Ⅰ)三唑并(4,5－d)嘧啶化合物,它们作为药物的用途、含有它们的组合物和它们的制备方法。
文档编号A61K31/519GK1291193SQ9980295
公开日2001年4月11日 申请日期1999年2月5日 优先权日1998年2月17日
发明者R·布朗, G·派劳德奥, B·斯普林托尔佩, S·托姆, P·维利斯 申请人:阿斯特拉曾尼卡英国有限公司