和水，在使用之前，适应新环境至少一周，其中对照组和模型组各16只，治疗组8只，治疗组在4周后，予四环素胃饲，按10mg/(kg 〃 d)剂量灌胃治疗4周；
[0028]S103、大鼠前列腺感染模型制作:
[0029]1%戊巴比妥钠溶液约1.2ml注射入大鼠腹腔全麻后，碘伏消毒大鼠尿道外口和会阴部，随后插入直径0.9mm，长2.5cm的无菌润滑聚乙烯尿管，一个胰岛素注射器抽吸0.2ml配制好的I标准麦氏单位的纳米细菌悬浮液注入雄性SD大鼠前列腺部尿道，对照组SD大鼠给予生理盐水同样方法注入；
[0030]S104、标本的收集:
[0031 ] 大鼠尿道被注射细菌为O周，在相同条件下饲养，在4周将对照组和模型组大鼠各处死8只，其余3组动物在第8周后处死，分别称量大鼠的体重，无菌条件下，切取腹侧和被侧叶前列腺组织，将前列腺包膜完全清除，留下纯的前列腺组织，并分别对应其称取重量；
[0032]S105、前列腺组织中细胞因子检测和纳米细菌再培养标本的收集。
[0033]进一步，SlOl所述的纳米细菌的菌种的培养与收集的具体方法为:
[0034]将经鉴定的纳米细菌的菌种接种于3ml RPMI 1640培养基或含10%热灭活γ —FBS的RPMI 1640培养基中悬浮，置于37°C、5% C02和95%空气条件下培养4?5周，整个操作中严格遵循无菌技术；每周观察标本的生长情况；分别用不加标本的RPMI 1640、含10%热灭活γ — FBS的不加标本的RPMI 1640、生理盐水加入RPMI 1640作阴性对照，然后在无菌条件下4°C、2000转速离心30分钟，收集培养出的细菌，置于4°C冰箱保存备用。
[0035]进一步，S105前列腺组织中细胞因子检测和纳米细菌再培养标本的收集的具体方法为:
[0036](I)在无菌条件下，将每组动物腹侧半叶组织称重，按重量加入冰盐水后，分别制成10%组织匀浆，在4°C低温条件、3000转/分下超速离心15分钟后，提取上清液1ml，置低温下(-20 0C )保存备测;
[0037](2)将离心管内的多余的液体移出，剩余管底的组织和液体约Iml用生理盐水稀释5倍，经0.45 μπι滤器过滤，4°C离心40min(20, OOOXg)，弃上清，留取管底Iml充分混勾，再用无菌生理盐水稀释5倍，经0.22 μπι滤器过滤，4°C离心40min(20, OOOXg)，弃上清，留取管底Iml充分混匀。加入3ml RPMI 1640培养基或含10%热灭活γ — FBS的RPMI1640培养基中悬浮，然后按纳米细菌培养的方法进行培养。
[0038]本发明为研宄纳米细菌对前列腺的致病作用的动物实验提供的实验材料，对于探索III型前列腺炎及结石的病因和发病机制，解除患者痛苦，减少病患和社会医疗机构的资金支出，节约更多的医疗资源有重要意义。
[0039]以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种纳米细菌感染动物前列腺引起慢性炎症的动物模型复制方法，其特征在于，所述的纳米细菌感染动物前列腺引起慢性炎症的动物模型复制方法包括: 步骤一、将经鉴定的纳米细菌的菌种进行培养并收集培养出的细菌，将所收集的细菌用PH为7.2的PBS液冲洗，用生理盐水稀释后，经ATB浊度仪比色后配制成3.0 X 18Cfu/ml的纳米细菌菌液混悬液备实验用； 步骤二、大鼠分组处理: 将40只大鼠平均随机分为5组，被分养在5个笼中，能自由获取食物和水，在使用之前，适应新环境至少一周，其中对照组和模型组各16只，治疗组8只，治疗组在4周后，予四环素胃饲，按10mg/ (kg.d)剂量灌胃治疗4周； 步骤三、大鼠前列腺感染模型制作: 1%戊巴比妥钠溶液1.2ml注射入大鼠腹腔全麻后，碘伏消毒大鼠尿道外口和会阴部，随后插入直径0.9mm,长2.5cm的无菌润滑聚乙烯尿管，一个胰岛素注射器抽吸0.2ml配制好的I标准麦氏单位的纳米细菌悬浮液注入雄性SD大鼠前列腺部尿道，对照组SD大鼠给予生理盐水同样方法注入； 步骤四、标本的收集: 大鼠尿道被注射细菌为O周，在相同条件下饲养，在4周将对照组和模型组大鼠各处死8只，其余3组动物在第8周后处死，分别称量大鼠的体重，无菌条件下，切取腹侧和被侧叶前列腺组织，将前列腺包膜完全清除，留下纯的前列腺组织，并分别对应称取重量； 步骤五、前列腺组织中细胞因子检测和纳米细菌再培养标本的收集。
2.如权利要求1所述的纳米细菌感染动物前列腺引起慢性炎症的动物模型复制方法，其特征在于，所述的纳米细菌的菌种的培养与收集的具体方法为: 将经鉴定的纳米细菌的菌种接种于3ml RPMI 1640培养基或含10%热灭活γ — FBS的RPMI 1640培养基中悬浮，置于37°C、5% C02和95%空气条件下培养4?5周，整个操作中严格遵循无菌技术；每周观察标本的生长情况；分别用不加标本的RPMI 1640、含10%热灭活γ — FBS的不加标本的RPMI 1640、生理盐水加入RPMI 1640作阴性对照，然后在无菌条件下4°C、2000转速离心30分钟，收集培养出的细菌，置于4°C冰箱保存备用。
3.如权利要求1所述的纳米细菌感染动物前列腺引起慢性炎症的动物模型复制方法，其特征在于，前列腺组织中细胞因子检测和纳米细菌再培养标本的收集的具体方法为: (1)在无菌条件下，将每组动物腹侧半叶组织称重，按重量加入冰盐水后，分别制成10%组织匀浆，在4°C低温条件、3000转/分下超速离心15分钟后，提取上清液1ml，置-20°C的低温下保存备测； (2)将离心管内的多余的液体移出，剩余管底的组织和液体Iml用生理盐水稀释5倍，经0.45 μ m滤器过滤，4°C离心40min(20, OOOXg)，弃上清，留取管底Iml充分混勾，再用无菌生理盐水稀释5倍，经0.22 μ m滤器过滤，4°C离心40min (20, 000 X g)，弃上清，留取管底Iml充分混匀，加入3ml RPMI1640培养基或含10%热灭活γ — FBS的RPMI 1640培养基中悬浮，然后按纳米细菌培养的方法进行培养。
【专利摘要】本发明公开了一种纳米细菌感染动物前列腺引起慢性炎症的动物模型复制方法，该方法包括：将经鉴定的纳米细菌的菌种进行培养并收集培养出的细菌配制成纳米细菌菌液混悬液；大鼠分组处理；大鼠前列腺感染模型制作；标本的收集；前列腺组织中细胞因子检测和纳米细菌再培养标本的收集。本发明为研究纳米细菌对前列腺的致病作用的动物实验提供的实验材料，对于探索Ⅲ型前列腺炎及结石的病因和发病机制，解除患者痛苦，减少病患和社会医疗机构的资金支出，节约更多的医疗资源有重要意义。
【IPC分类】A61K35-74, A61D7-00, A61D1-00
【公开号】CN104546216
【申请号】CN201510023514
【发明人】李军, 张新际, 吕宏迪, 郝少君, 王希东, 张正臣
【申请人】中国人民解放军第三七一医院
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年1月16日