红花籽粕降糖有效部位的制备方法及其用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种红花籽柏降糖有效部位的制备及其用途。
【背景技术】
[0002] 红花籽，中药称"白平子"，是红花Safflower (Carthamustinctorius L.)的种子。 红花籽柏是红花籽提取红花油后的副产品。红花是一种古老的1~2年生草本植物，在古 埃及已有4000年的历史。现在公认的红花属有20~25个种。自张骞从西域把红花引入 我国已有2100多年的栽培和用药历史。目前，红花主要分布在河南、浙江、四川、云南、新 疆等20多个省（区），大多为红花的花和油作药用，对红花籽柏很少利用，未引起足够的重 视，许多资源浪费掉了。红花籽脱脂后的籽柏部分在很多国家和地区多作为牲畜的饲料或 有机肥料，去油红花籽柏中含较丰富的蛋白质，无毒、无异味，并含18种氨基酸，是一种较 优质的蛋白质。1966年Kopa等人报导：可用70-80%酒精脱除红花籽饼粉的苦味和泻药成 分用于食品的浓缩蛋白。1970年Goodban等人的专利方法：红花籽加热到60-65°C，滚压 将籽仁破碎，用己烷抽提，过滤，收集悬浮的蛋白得到食用蛋白粉。红花籽柏中含有许多天 然抗氧化物质，对红花籽柏的研宄大部分为针对5-羟色胺的制备，此类物质除具有极强的 抗氧化活性外，还可以调节机体内的免疫反应、抑制肿瘤和消炎抑菌作用、保护机体中的NK 细胞免受程序性死亡、强烈抑制黑色素生成等活性。红花的花和红花籽的含油部分是具有 软化血管、降低血脂、胆固醇、防止动脉粥样硬化等作用，关于这类降糖降脂有效部位制备 方法的研宄较多。但是，红花籽柏的药用和营养价值主要取决于脱壳程度，完全脱壳的红花 籽饼柏具有很高的药用和营养价值。目前研宄表明，脱脂并脱去红花籽的苦味有多种方法， 如甲醇提取、氯仿提取等，并通过二、三次提取可脱去红花籽粉中的苦味泻药成分和红花籽 柏中剩余的酚基葡糖苷。除此之外，经过检索，红花降糖有效部位的制备研宄较多，但有关 红花籽柏降糖除本课题组申请了"一种红花籽柏提取物的降糖用途"和有关于其中含有的 5-羟基色胺具有降糖活性外，没有发现红花籽柏具有糖尿病防预活性的报道，但专利中的 方法中还涉及使用氯仿，在实际应用中具有一定的局限性。因此本课题组又进一步发明了 使用大孔树脂的新制备方法。
[0003] 糖尿病是一种常见的世界性多发病。它是由人体自身分泌的胰岛素不足的或胰岛 素敏感性下降而引起。而胰岛素的作用是调节人体内糖的代谢，即促进血糖合成糖元，加速 血糖分解，降低血糖浓度。维吾尔医认为，糖尿病的发病原因除与四大"何里提"学说中的 胆汁质旺盛引起五脏虚弱有关外，其致病因素大多是综合性的，尤以嗜烟、酒、过食肥甘和 精神过度紧张三者居多，肾虚为本，燥热、瘀血为标。维吾尔医治疗糖尿病给予调理"何里 提"、降低血糖、增强体质、止渴、促进胰岛素分泌、改善B细胞环境、增强胰岛素敏感性、改善 胰岛素抵抗、改善B细胞凋亡、助消化为基本原则上采取维吾尔医饮食疗法、药物疗法、非 药物疗法等系统的治疗方式进行治疗。
[0004] 随着社会的进步以及人们生活水平的提高，糖尿病患者，尤其是II型糖尿病（非 胰岛素依赖型糖尿病）人数成倍增长。蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP-1B，protein tyrosine phosphatase 1B)已有研宄表明蛋白酪氨酸磷酸酶IB (PTP-IB，protein tyrosine phosphatase 1B)在胰岛素信号转导与能量代谢过程中发挥重要的调节作用，是治疗II型 糖尿病和肥胖症的最有希望的药物靶标之一。PTP-IB通过对胰岛素受体激酶（insulin receptor kinase，IRK)或IRK活性片段的磷酸化酪氨酸残基去磷酸化作用对胰岛素信号 传导进行负调节。在新生肝细胞中，PTP-IB的减少增加了 IRA/GLUT-4复合物，从而增加葡 萄糖的吸收。在肝脏中特异性删除PTP-IB基因，可以改善代谢综合症的状况和削弱饮食引 起的内质网压力，Ali MI等人的研宄也指出删除蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP-IB)基因后会明 显改善肥胖且瘦素抵抗的小鼠的外周胰岛素抵抗和动脉血管功能。因此蛋白酪氨酸磷酸酶 (PTP-IB)是治疗II型糖尿病、肥胖等疾病的重要靶点之一。
[0005] α -葡萄糖苷酶抑制剂是一类具有糖结构的新型抗糖尿病药物，目前临床上应用 的有阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇。现已作为治疗2型糖尿病的首选药和1型糖尿病 的辅助药物普遍应用于临床。α -葡萄糖苷酶位于小肠刷状缘膜上皮细胞，它能将双糖，如 蔗糖、麦芽糖等水解成可被小肠吸收的单糖，是食物中碳水化合物水解的关键酶。因此，抑 制该酶能够延缓碳水化合物的消化，减少葡萄糖吸收入血，进而抑制餐后高血糖，改善对血 糖的控制，缓解高胰岛素血症，同时可以提高糖耐量，从而可达到防治糖尿病及其并发症发 生的目的。
[0006] 本发明直接针对蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP-IB)和α -葡萄糖苷酶为靶点进行筛选。
【发明内容】
[0007] 本发明目的在于，提供一种红花籽柏降糖有效部位的制备方法及其用途，该方法 从红花籽柏中采用有机溶剂回流提取，大孔树脂分离纯化获得降糖有效部位，并阐明其医 学用途，经初步的活性筛选试验证明：通过本发明所述的方法获得的红花籽柏有效部位具 有蛋白酪氨酸磷酸酶IB(PTP-IB)和α-葡萄糖苷酶抑制抑制作用，可作为原料或辅助剂用 于防治糖尿病的药物或保健品。
[0008] 本发明所述的一种红花籽柏降糖有效部位的制备方法，该方法按下列步骤进行：
[0009] a、将红花籽清洗，粉粹，按常规方法进行脱脂后，加入5-30倍量体积浓度为 50-75%乙醇水溶液，在温度40-82°C的条件下加热回流提取1-3次，每次为1-4小时，过滤， 合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到红花籽柏提取物；
[0010] b、将得到的红花籽柏提取物用水稀释后加入预先准备好的大孔树脂柱，以水洗至 还原糖反应阴性，再分别以浓度为10%、70%、95%乙醇溶液进行梯度洗脱，收集10%和 95%的流出液，浓缩即可得到具有降血糖活性的红花籽柏有效部位。
[0011] 步骤 b 所用的大孔树脂型号为 HPD100、HPD300、HPD500、HPD600、AB-8、DlOl 或 ADS-17。
[0012] 所述方法获得的红花籽柏有效部位在制备糖尿病药物筛选靶点-蛋白质酪氨酸 磷酸酶IB具有抑制作用。
[0013] 所述方法获得的红花籽柏有效部位在制备糖尿病药物筛选靶点α -葡萄糖苷酶 具有抑制作用。
[0014] 所述方法获得的红花籽柏有效部位在制备治疗降血糖的保健品或其他功能性食 品中的用途。
【具体实施方式】 [0015] I
[0016] 实施例1
[0017] 取红花籽400g进行清洗，粉碎，按常规方法进行脱脂后，置于圆底烧瓶中，加入5 倍量体积浓度为50 %的乙醇水溶液，温度40°C，加热回流提取3次，每次4h，过滤，合并提取 液，减压浓缩至无醇味，得到红花籽柏提取物29. 8g ;
[0018] 将红花籽柏提取物加入水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂HPD100柱 中吸附，水洗至还原糖（MOLISH)反应阴性，再用5倍体积浓度为10%、70%、95%乙醇水溶 液梯度洗脱，收集10%和95%的流出液，浓缩后即可得到4. Ilg具有降血糖活性的红花籽 柏有效部位。
[0019] 实施例2
[0020] 取红花籽400g进行清洗，粉碎，按常规方法进行脱脂后，置于圆底烧瓶中，加入10 倍量体积浓度为55%的乙醇水溶液，温度50°C，加热回流提取3次，每次3h，过滤，合并提取 液，减压浓缩至无醇味，得到红花籽柏提取物32.