茶籽粕中综合提取茶籽皂素、茶籽多肽、茶籽多糖的方法
【专利摘要】本发明公布了一种以茶籽粕为原料，综合提取茶籽皂素、茶籽多肽、茶籽多糖的方法。其提取方法为：将脱脂的茶籽粕与乙醇混溶，经胶体磨和均质机处理后，采用水浴醇提法，经离心，超膜滤化，浓缩，得到茶籽皂素。将离心得到的沉淀与水混合后，采用超声波-微波提取，离心，上清液调pH、第二次离心、沉淀复溶、酶解、灭酶、超膜滤化、喷雾，得到茶多肽。将第二次离心得到的上清液喷雾，得到粗茶籽多糖，然后采用超膜滤化，醇沉法，即可得到高纯度的茶籽多糖。本方法工艺简单，生产成本与设备低，并且产品提取率高、纯度高，大大增加了茶籽粕的附加值。为茶籽粕的高效综合利用提供了新的思路和方法。
【专利说明】茶籽粕中综合提取茶籽皂素、茶籽多肽、茶籽多糖的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种从茶籽柏提取生物活性物质的方法。
【背景技术】
[0002]茶籽皂素又称茶皂苷、茶皂甙，皂素中的一类。研究发现茶籽皂素具有溶血和鱼毒、抗虫杀菌作用，抗渗消炎、化痰止咳、镇痛、抗癌等药理功能。茶籽皂素也是一种具有较强的发泡、乳化、分散、湿润等作用的优良天然非离子型表面活性剂。可广泛应用于日化、建材、纺织、农药等领域，具有较高的经济价值。
[0003]茶籽多肽易被人体消化吸收，具有抗氧化、降血压、降低胆固醇含量、促进钙吸收的生理功能。茶籽多糖是一种类似灵芝多糖和人参多糖的一种高分子化合物(分子量4万-10万)。现代医学研究发现，茶籽多糖具有“2防3降4抗”的功效，即防辐射、防治心血管疾病、降血糖、降血脂、降血压、抗癌、抗凝、抗血栓、抗动脉粥样硬化等多种保护血相和增强人体非特异性免疫能力的功效。
[0004]有文献报道茶籽柏中茶籽阜素含量为11-17%、粗蛋白含量为15_18%、多糖含量为45-49%。据不完全统计，我国每年油茶籽柏的产量超过50万吨，但长期以来并没有得到综合性合理利用，不仅造成了资源的大量浪费也污染了环境。近年来，对茶籽柏开发利用已日益引起各地高度重视，然而如何从茶籽柏中综合提取茶籽皂素、茶籽多肽、茶籽多糖，并将其纯化得到一类用途广泛、性能优异的高品质产品，对解决茶籽柏的综合利用尤为重要。
[0005]目前没有关于从茶籽柏中综合制备茶籽皂素、茶籽多肽、茶籽多糖的报道。因此，急需一种可以最大化的提高茶籽柏附加值的方法，从而实现茶籽柏产品的综合性开发生产。
【发明内容】
[0006]本发明旨在提供一种可以从茶籽柏中综合制备茶籽皂素、茶籽多肽、茶籽多糖的方法，以弥补现有技术的不足，同时提高其纯度。该方法工艺简单，生产成本低，产品提取率高、纯度高、质量好。
[0007]其具体工艺方案如下:
一种从茶籽柏中综合提取茶籽皂素、茶籽多肽、茶籽多糖的方法，其特征在于包括如下步骤:
(O茶籽柏粉碎至300-400目，用石油醚对其进行脱脂处理；
(2)茶籽皂素提取:将(I)中脱脂后的茶籽柏与无水乙醇按质量体积比g/mL1:2-1:6混溶，50°C水浴提取2h，提取6次；离心，取上清液超膜滤化，截留液为纯化的茶籽皂素溶液，浓缩至乙醇快完全消失，加热水溶解，冻干，得茶籽皂素；
(3)茶籽多肽提取:将(2)中离心得到的沉淀自然晾干，按料液比g/mL1:2加水；用ImoL/L的NaOH溶液调pH至10.0，采用超声波-微波双波辅助提取2次，I次提取2h，超声波和微波功率为200-400? ;离心，取上清液，调pH至4.5，第二次离心得沉淀和上清液；将沉淀再溶于水中，加胰蛋白酶量为底物的0.6%，酶解2.5h，沸水浴灭酶6-10min ;采用超膜滤化，截留液为纯化后的多肽溶液，喷雾干燥得茶籽多肽；
(4)茶籽多糖提取:将(3)中第二次离心得到的上清液进行喷雾干燥得粗茶多糖；按料液比l:4(g/mL)溶于无水乙醇中，超膜滤化，截留液为纯化后的茶籽多糖溶液，沉淀12h，沉淀冻干即为茶籽多糖。
[0008]为了达到更好的效果，所述步骤(2)50°C水浴提取2h之前，先过胶体磨和40Mpa均质机；
步骤(3)超声波和微波最佳功率为600w ；
步骤(2)超膜滤化具体为选用截留分子量为2000Da的超滤膜进行分离纯化，切向流速为 4L/ m2.min,压力为 60psi ；
步骤(3)超膜滤化具体为选用截留分子量为3000Da的超滤膜进行分离纯化，切向流速为 6L/ m2.min,压力为 60psi ；
步骤(4)超膜滤化具体为选用截留分子量为50000Da的超滤膜进行分离纯化，切向流速为，8L/ m2.min,压力为 60psi ;
步骤(3)喷雾干燥进风温度182°C、出风温度80~100°C ；
步骤(4)喷雾干燥进风温度182°C、出风温度80~100°C。
[0009]本发明具有以下优点:
(O实现了茶籽柏中茶籽皂素、茶籽多肽、茶籽多糖的综合制备，对原料进行了最大化的综合利用，提高了茶籽柏的附加值；
(2)采用超声波-微波双波辅助技术制备茶籽多肽和茶籽多糖，并采用了超滤膜滤化技术纯化，大大提高了茶籽多肽和茶籽多糖的得率及纯度。其中，茶籽皂素的提取率为96.3%，纯度为95.1%，茶籽多肽的提取率为93.6%，纯度为98.6%，茶籽多糖提取率为95.7%，纯度为95.3%。
【具体实施方式】
[0010]实施例一
茶籽饼粉碎过300-400目筛，石油醚脱脂处理后，加入无水乙醇，料液比为l:2(g/mL)，过胶体磨(JM-LB)和40Mpa均质机(SHP4000-25)各2次，于50°C水浴提取2h，提取6次。离心，取上清液选用截留分子量为2000Da的超滤膜进行分离纯化，切向流速为4L/ m2.min,压力为60psi，截留液为纯化的茶籽皂素溶液，浓缩至乙醇快完全消失，加入热水溶解，冻干。所得茶籽皂素得率为92.1%，纯度为90.3%;
将提取茶籽皂素之后的茶籽柏自然晾干，按料液比1:2 (g/mL)加水，用IMoL/L的NaOH溶液调PH至10.0左右，采用超声波-微波双波(XH-300A，北京祥鹄下同)辅助提取技术提取2次，I次提取2h，超声波和微波功率为200w。离心，取上清液，调pH至4.5左右，离心得沉淀和上清液。沉淀再溶于水中，调pH至4.5左右，加胰蛋白酶量为底物的0.6%，酶解2h，沸水浴灭酶。采用截留分子量为3000Da的超滤膜进行分离纯化，切向流速为6L/ m2 -min,压力为60psi，截留液为纯化后的多肽溶液，喷雾干燥得茶多肽，进风温度182°C、出风温度80~100°C，流量视出风温度而定。所得茶籽多肽得率为90.1%，纯度为91.1% ；
将第二次离心的上清液进行喷雾干燥得粗茶籽多糖，进风温度182°C、出风温度80~100°c，流量视出风温度而定。按料液比l:1.5(g/mL)加入无水乙醇，采用截留分子量为50000Da的超滤膜进行分离纯化，切向流速为8L/ m2.min，压力为60psi，截留液为纯化后的茶多糖溶液，静置12h，沉淀冻干既得茶籽多糖。所得茶籽多糖得率为90.0%，纯度为90.1%。
[0011]实施例二
茶籽饼粉碎过300-400目筛，石油醚脱脂处理后，加入无水乙醇，料液比为l:4(g/mL)，过胶体磨(JM-LB)和40Mpa均质机(SHP4000-25)各2次，于50°C水浴提取2h，提取6次。离心，取上清液选用截留分子量为2000Da的超滤膜进行分离纯化，切向流速为4L/ m2.min,压力为60psi，截留液为纯化的茶籽皂素溶液，浓缩至乙醇快完全消失，加入热水溶解，冻干。所得茶籽皂素得率为96.3%，纯度为95.1%;
将提取茶籽皂素之后的茶籽柏自然晾干，按料液比1:2 (g/mL)加水，用IMoL/L的NaOH溶液调PH至10.0左右，采用超声波-微波双波(XH-300A)辅助提取技术提取2次，I次提取2h，超声和微波功率为300w。离心，取上清液，调pH至4.5左右，离心得沉淀和上清液。沉淀再溶于水中，调pH至4.5左右，加胰蛋白酶量为底物的0.6%，酶解2.5h，沸水浴灭酶。采用截留分子量为3000Da的超滤膜进行分离纯化，切向流速为6L/ m2.π?η，压力为60psi，截留液为纯化后的多肽溶液，喷雾干燥得茶籽多肽，进风温度182°C、出风温度80~100°C，流量视出风温度而定。所得茶多肽得率为93.6%，纯度为98.6% ；
将第二次离心的上清液进行喷雾干燥得粗茶多糖，进风温度182°C、出风温度80~100°C，流量视出风温度而定。按料液比l:2(g/mL)加入无水乙醇，采用截留分子量为50000Da的超滤膜进行分离纯化，切向流速为8L/ m2.min，压力为60psi，截留液为纯化后的茶籽多糖溶液，静置12h，沉淀冻干既得茶籽多糖。所得茶多糖得率为95.7%，纯度为95.3%。
[0012]实施例三
茶籽饼粉碎过300-400目筛，石油醚脱脂处理后，加入无水乙醇，料液比为l:6(g/mL)，用胶体磨(JM-LB)和均质机(SHP4000-25)处理，于50°C水浴提取2h，提取6次。离心，取上清液选用截留分子量为2000Da的超滤膜进行分离纯化，切向流速为4L/ m2.π?η，压力为60psi，截留液为纯化的茶籽皂素溶液，浓缩至乙醇快完全消失，加入热水溶解，冻干。所得茶籽皂素得率为89.1%，纯度为90.1% ；
将提取茶皂素之后的茶籽柏自然晾干，按料液比1:2 (g/mL)加水，用IMoL/L的NaOH溶液调PH至10.0左右，采用超声波-微波双波(XH-300A)辅助提取技术提取2次，I次提取2h，超声波和微波功率为400w。离心，取上清液，调pH至4.5左右，离心得沉淀和上清液。沉淀再溶于水中，调PH至4.5左右，加胰蛋白酶量为底物的0.6%，酶解3h，沸水浴灭酶。采用截留分子量为3000Da的超滤膜进行分离纯化，切向流速为，6L/ m2.min，压力为60psi，截留液为纯化后的多肽溶液，喷雾干燥得茶籽多肽，进风温度182°C、出风温度80~100°C，流量视出风温度而定。所得茶籽多肽得率为89.8%，纯度为90%;
将第二次离心的上清液进行喷雾干燥得粗茶多糖，进风温度182°C、出风温度80~100°C，流量视出风温度而定。按料液比1:2.5 (g/mL)加入无水乙醇，采用截留分子量为50000Da的超滤膜进行分离纯化，切向流速为，8L/ m2.min，压力为60psi，截留液为纯化后的茶多糖溶液，静置12h，沉淀冻干既得茶籽多糖。所得茶籽多糖得率为90.4%，纯度为91.3%
【权利要求】
1.一种从茶籽柏中综合提取茶籽皂素、茶籽多肽、茶籽多糖的方法，其特征在于包括如下步骤: (O茶籽柏粉碎至300-400目，用石油醚对其进行脱脂处理； (2)茶籽皂素提取:将(I)中脱脂后的茶籽柏与无水乙醇按质量体积比g/mL1:2-1:6混溶，50°C水浴提取2h，提取6次；离心，取上清液超膜滤化，截留液为纯化的茶籽皂素溶液，浓缩至乙醇快完全消失，加热水溶解，冻干，得茶籽皂素； (3)茶籽多肽提取:将(2)中离心得到的沉淀自然晾干，按料液比g/mL1:2加水；用ImoL/L的NaOH溶液调pH至10.0，采用超声波-微波双波辅助提取2次，I次提取2h，超声波和微波功率为200-400? ;离心，取上清液，调pH至4.5，第二次离心得沉淀和上清液；将沉淀再溶于水中，加胰蛋白酶量为底物的0.6%，酶解2.5h，沸水浴灭酶6-10min ;采用超膜滤化，截留液为纯化后的多肽溶液，喷雾干燥得茶籽多肽； (4)茶籽多糖提取:将(3)中第二次离心得到的上清液进行喷雾干燥得粗茶多糖；按料液比l:4(g/mL)溶于无水乙醇中，超膜滤化，截留液为纯化后的茶籽多糖溶液，沉淀12h，沉淀冻干即为茶籽多糖。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)50°C水浴提取2h之前，先过胶体磨和40Mpa均质机。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)超声波和微波最佳功率为600wo
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)超膜滤化具体为选用截留分子量为2000Da的超滤膜进行分离纯化，切向流速为4L/ m2.min，压力为60psi。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)超膜滤化具体为选用截留分子量为3000Da的超滤膜进行分离纯化，切向流速为6L/ m2.min，压力为60psi。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(4)超膜滤化具体为选用截留分子量为50000Da的超滤膜进行分离纯化，切向流速为，8L/ m2.min，压力为60psi。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)喷雾干燥进风温度182°C、出风温度80~100°C。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(4)喷雾干燥进风温度182°C、出风温度80~100°C。
【文档编号】C07J63/00GK104177508SQ201410383245
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2014年8月6日 优先权日:2014年8月6日
【发明者】涂宗财, 黄涛, 王辉, 李如一, 段邓乐 申请人:南昌大学