4g ;
[0021] 将红花籽柏提取物加入水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂HPD300柱 中吸附，水洗至还原糖（MOLISH)反应阴性，再用5倍体积浓度为10%、70%、95%乙醇水溶 液梯度洗脱，收集10%和95%的流出液，浓缩后即可得到4. 92g具有降血糖活性的红花籽 柏有效部位。
[0022] 实施例3
[0023] 取红花籽400g进行清洗，粉碎，按常规方法进行脱脂后，置于圆底烧瓶中，加入10 倍量体积浓度为60%的乙醇水溶液，温度60°C，加热回流提取3次，每次2h，过滤，合并提取 液，减压浓缩至无醇味，得到红花籽柏提取物31. 6g ;
[0024] 将红花籽柏提取物加入水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂HPD500柱 中吸附，水洗至还原糖（MOLISH)反应阴性，再用5倍体积浓度为10%、70%、95%乙醇水溶 液梯度洗脱，收集10%和95%的流出液，浓缩后即可得到4. 62g具有降血糖活性的红花籽 柏有效部位。
[0025] 实施例4
[0026] 取红花籽400g进行清洗，粉碎，按常规方法进行脱脂后，置于圆底烧瓶中，加入15 倍量体积浓度为60%的乙醇水溶液，温度60°C，加热回流提取3次，每次lh，过滤，合并提取 液，减压浓缩至无醇味，得到红花籽柏提取物33. 9g ;
[0027] 将红花籽柏提取物加入水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂HPD600柱 中吸附，水洗至还原糖（MOLISH)反应阴性，再用5倍体积浓度为10%、70%、95%乙醇水溶 液梯度洗脱，收集10%和95%的流出液，浓缩后即可得到4. 78g具有降血糖活性的红花籽 柏有效部位。
[0028] 实施例5
[0029] 取红花籽400g进行清洗、粉碎，按常规方法进行脱脂后，置于圆底烧瓶中，加入20 倍量体积浓度为70%的乙醇水溶液，温度70°C，加热回流提取3次，每次lh，过滤，合并提取 液，减压浓缩至无醇味，得到红花籽柏提取物29. 9g ;
[0030] 将红花籽柏提取物加入水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂AB-8柱中 吸附，水洗至还原糖（MOLISH)反应阴性，再用5倍体积浓度为10%、70%、95%乙醇水溶液 梯度洗脱，收集10%和95%的流出液，浓缩后即可得到4. 27g具有降血糖活性的红花籽柏 有效部位。
[0031] 实施例6
[0032] 取红花籽400g进行清洗、粉碎，按常规方法进行脱脂，置于圆底烧瓶中，加入25倍 量体积浓度为70%的乙醇水溶液，温度80°C，加热回流提取3次，每次时间为2h，过滤，合并 提取液，减压浓缩至无醇味，得到红花籽柏提取物32. Ig ;
[0033] 将红花籽柏提取物加入水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂DlOl柱中 吸附，水洗至还原糖（MOLISH)反应阴性，再用5倍体积浓度为10%、70%、95%乙醇水溶液 梯度洗脱，收集10%和95%的流出液，浓缩后即可得到4. 71g具有降血糖活性的红花籽柏 有效部位。
[0034] 实施例7
[0035] 取红花籽400g进行清洗、粉碎，按常规方法进行脱脂，置于圆底烧瓶中，加入30倍 量体积浓度为70%的乙醇水溶液，温度80°C，加热回流提取3次，每次lh，过滤，合并提取 液，减压浓缩至无醇味，得到红花籽柏提取物33. 2g ;
[0036] 将红花籽柏提取物加入水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂ADS-17柱 中吸附，水洗至还原糖（MOLISH)反应阴性，再用5倍体积浓度为10%、70%、95%乙醇水溶 液梯度洗脱，收集10%和95%的流出液，浓缩后即可得到5. 21g具有降血糖活性的红花籽 柏有效部位。
[0037] 实施例8
[0038] 蛋白质酪氨酸磷酸酶IB(PTP-IB)筛选方法：用对-硝基苯基磷酸二钠（pNPP) 作为底物，根据PTP-IB水解pNPP的磷酸基团而产生颜色反应来测定蛋白质酪氨酸磷 酸酶IB (PTP-IB)的活性；酶反应体系组成如下：缓冲液（50mmol · T1HEPES, pH 7. 3， IOOmmol · T1NaCLO. I % BSA，lmmol · T1DTThngyL,在 96 孔板中加入 PTP-IB 蛋白溶液 luL，测试样品或阳性对照样品IyL(将样品配成浓度梯度）或DMSO lyL，混匀后加入 35mmol · L-1的pNPP 20 μ L，温度25°C避光孵育30min后终止反应，以不含酶溶液的系统为 空白，利用SpectraMax MD5酶标仪（美国Molecular Devices)在405nm测定吸收值；
[0039] α -葡萄糖苷酶筛选方法：〇· Imol · L-1磷酸缓冲液（0· Imol · L -1K2HPO4, 0.1mol · T1KH2HPO4, H2O) 68. 5 μ L，在96孔板中加入α -葡萄糖苷酶溶液1. 5 μ L，测试样品 或阳性对照样品5 μ L，（将样品配成浓度梯度）或DMSO 5 μ L，混匀后室温反应lOmin，再加 入20mmol吨―1底物4-硝基酚-a -D-吡喃葡萄糖苷（?即6)25以1^，温度37°〇直温反应2011^11 后终止反应，以不含酶溶液的系统为空白，利用SpectraMax MD5酶标仪（美国Molecular Devices)在405nm测定吸收值。
[0040] 不同条件下红花籽柏有效部位对PTPlB抑制剂和α -葡萄糖苷酶抑制剂的IC5tl浓 度
[0041]
【主权项】
1. 一种红花籽柏降糖有效部位的制备方法，其特征在于该方法按下列步骤进行： a、 将红花籽清洗，粉粹，按常规方法进行脱脂后，加入5-30倍量体积浓度为50-75%乙 醇水溶液，在温度40-82?的条件下加热回流提取1-3次，每次为1-4小时，过滤，合并滤液， 减压浓缩至无醇味，得到红花籽柏提取物； b、 将得到的红花籽柏提取物用水稀释后加入预先准备好的大孔树脂柱，以水洗至还原 糖反应阴性，再分别以浓度为10%、70%、95%乙醇溶液进行梯度洗脱，收集10%和95%的流出 液，浓缩即可得到具有降血糖活性的红花籽柏有效部位。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b所用的大孔树脂型号为HPD100、 HPD300、HPD500、HPD600、AB-8、DlOl 或 ADS-17。
3. 根据权利要求1所述的方法获得的红花籽柏有效部位对糖尿病药物筛选靶点-蛋 白质酪氨酸磷酸酶IB具有抑制作用。
4. 根据权利要求1所述的方法获得的红花籽柏有效部位对糖尿病药物筛选靶点 α-葡萄糖苷酶具有抑制作用。
5. 根据权利要求1所述的方法获得的红花籽柏有效部位在制备治疗降血糖的保健品 或其他功能性食品中的用途。
【专利摘要】本发明涉及红花籽粕降糖有效部位的制备方法及其用途，通过有机溶剂回流提取，大孔树脂分离纯化从红花籽粕中获得降糖有效部位，并阐明其医学用途，经初步的活性筛选试验证明：本发明所述的方法获得的有效部位具有蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP-1B）和α-葡萄糖苷酶抑制作用，可作为原料或辅助剂用于防治糖尿病的药物或保健品。
【IPC分类】A61K36-286, A23L1-29, A61P3-10
【公开号】CN104706702
【申请号】CN201510077369
【发明人】信学雷, 萨拉麦提·艾迪热斯, 艾级买力汗·艾比布拉, 谢连珍, 阿吉艾克拜尔·艾萨
【申请人】中国科学院新疆理化技术研究所
【公开日】2015年6月17日
【申请日】2015年2月13日