复合辣木多肽及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物制品技术领域，具体涉及复合辣木多肽及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 辣木为辣木科辣木属植物，起源于印度西北部的喜马拉雅山南麓。研宄发现，辣木 除了具备丰富的营养外，还用作治疗糖尿病、高血压、皮肤病、免疫力低下、贫血、骨骼疾病、 抗忧郁、关节炎、消化器官肿瘤等疾病。辣木作为一种功能性植物，有着广阔的的开发前景。 辣木全株都可利用，营养物质种类多，辣木含粗蛋白为23. 0 %~43. 5 %，富含VA、VB、V。、Ve 及钙、钾、铁等矿质营养元素，此外还含有人体必需的各种氨基酸和微量元素等，其营养价 值与现代营养学家称为"人类营养的微型宝库"。我国广东的韶关和湛江、云南、海南和贵州 等地现有引种。
[0003] 目前，人们对于辣木的开发利用还处于比较粗放的阶段，主要采用将其种子、叶子 等粉碎后直接添加到食物或保健品中的方式，这种方法的缺点在于对于营养成分的有效利 用不够，且产品内的有效成分也不太明确。因此人们也开始尝试利用酶解等方法将辣木中 的有效成分、特别是蛋白质进行分离，如中国发明专利CN 102669423 A《一种辣木提取物 及其制备方法和辣木饲料添加剂》，其借助特定的蛋白酶、纤维素酶和果胶酶的酶解作用， 将辣木叶本身大块的、分子结构复杂的成分充分地水解成较小、易溶于水、生物利用度高的 小分子活性物质，然后通过水提醇沉方法获得高收率和高质量的辣木提取物。该方法用辣 木叶为起始原料，因酶解温度低、时间短，所得沉淀得到的酶解物分子量仍然较大，主要为 蛋白质，作为动物饲料添加剂使用。而中国发明专利CN 103652930 A《一种辣木钙全营养 素及其制备方法》是采用生物质酶酶解和纳米双重破壁以及全程低温萃取辣木中的有效成 分，然而该方法制备的仍然是100~200毫微米的超微辣木粉末而不是多肽。
[0004] 辣木中含有粗蛋白为23. 0%~43. 5%，比奶粉蛋白含量（21% )还高，不含胆固 醇，这部分蛋白质经酶解后得到的小分子多肽具有较高的生物活性，促进人体的新陈代谢， 抗氧化、保护心脑细胞的抗超氧自由基损伤，防治心脑血管疾病，缓解疲劳。多种植物中的 多肽是生物体内重要的低分子物质，具有许多生理功能，除作为RNA、DNA的前体外，也作为 生物化学过程的调节物质参与体内代谢，在细胞结构、代谢和调节功能方面起着重要作用， 因此多肽的研宄利用已成为生物制品研宄的方向。而传统中药材丹参含有?参酮、原儿茶 醛、原儿茶酸、丹参素、维生素E等:人参为五加科植物人参的干燥根，有人参皂甙、单糖、人 参酸、多钟维牛素 、多种氨基酸等:枸杞为茄科棺物枸杞的成熟果实，含有枸杞多糖，酸浆红 素、隐昔质、东莨菪素、胡萝卜素 、核昔素 、烟酸、维牛素BKB2及C.种子含氨基酸等。目前， 以辣木为原材料进行深加工获得小分子多肽，并结合传统中医制备复方产品的相关研宄尚 未见到记载。
[0005] 因此，有必要在这一方向展开进一步的研宄。
【发明内容】
[0006] 为了弥补现有技术的不足，本发明提供了复合辣木多肽及其制备方法和用途，通 过从辣木原材料中通过酶解法提取出辣木肽，并添加中药制备成复方制剂，进一步在药物、 食品等领域将其应用，使得辣木内的有效成分得到充分的利用。
[0007] 为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
[0008] 复合辣木多肽的制备方法，以辣木为主要原料，在受控蛋白酶作用下，低温酶解制 备为分子量为1~IOKD的小分子多肽，按比例添加丹参、人参、枸杞提取物，混匀后喷雾干 燥，得到复合辣木多肽原料；具体制备过程包括以下步骤：
[0009] (1)取辣木原料，筛选、清洗、50~60°C干燥、粉碎成10目以下颗粒；
[0010] (2)将辣木颗粒加入其重量5~10倍的纯净水或蒸馏水，加热至40~60°C，搅拌 下，调节pH值为5. 5~6. 5,加入蛋白酶，按重量份计辣木与酶的比例为100 :0. 1~1，酶解 4~6小时，分离上清液；
[0011] (3)将上一步所得的剩余残渣加入3~5倍的纯净水或蒸馏水，按照第（2)步方法 对其进行2次酶解，分离上清液；
[0012] (4)合并⑵和（3)两步酶解所得的上清液，70~80°C灭酶30~50分钟，低温真 空浓缩，得到辣木多肽浓缩液；
[0013] (5)按照重量份计以1:0.2:0.5的比例取丹参、人参、枸杞，清洗、浸泡、水煎、过 滤、浓缩至比重为1. 12~1. 20的浓缩液；
[0014] (5)将辣木多肽浓缩液与丹参、人参、枸杞浓缩液按30~60% :40~70%的重量 百分比混合均匀，喷雾干燥，得到固体粉末或颗粒状的复合辣木多肽。
[0015] 其中，所述辣木原料为按照1:5:6:1重量比的辣木根、茎、叶、花。
[0016] 其中，所述蛋白酶为选自枯草杆菌蛋白酶、糜蛋白酶和磷酸二酯酶中的一种或多 种。
[0017] 本发明还包括按照上述复合辣木多肽的制备方法制备所得的复合辣木多肽。
[0018] 上述复合辣木多肽应用于包括片剂、胶囊、颗粒剂、口服液剂型的医药制剂、保健 食品及化妆品中。
[0019] 本发明采用生物工程技术方法将辣木中含有的辣木蛋白在受控蛋白酶作用下，低 温酶解，得到分子量为1~IOKD的小分子多肽，具有生物活性高，用量小，人体容易吸收、安 全、有效、质量可控的特点。本发明所提供的复合辣木多肽经缓解体力疲劳和过氧化物诱发 超氧自由基损伤心肌细胞实验证明：本发明得到的复合辣木多肽对小鼠有较强的缓解体力 疲劳作用、能提高缺氧耐受力。复合辣木多肽可明显延长小鼠负重游泳时间，乳酸值下降， 血清尿素氮降低，肝糖原升高；心肌组织超氧化歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性增强、 丙二醛含量降低。实验证明复合辣木多肽有缓解体力疲劳的作用，对过氧化物诱发超氧自 由基损伤心肌细胞具有保护作用。制得的医药制剂有促进人体的新陈代谢，抗氧化、缓解体 力疲劳的作用，对人体疾病衰老过程中抗氧化能力减弱产生的超氧自由基过多损伤心、脑 组织细胞均有保护作用，能防治心、脑血管系统疾病。
[0020] 本发明的有益效果在于：1)本发明采用酶对辣木进行选择性受控水解，其生产工 艺简单、成本低。2)本发明提供的产品为分子量较小的多肽，便于人体的吸收利用；3)本发 明取材自辣木植株的各个部分，材料获取容易，而非限定于对辣木的种子等特定部分进行 取材。4)本发明得到的复合植物多肽来源于纯植物配方，通过急性毒性实验结果表明，产品 无毒副作用，安全可靠。
【附图说明】
[0021] 附图通过照片说明复合辣木多肽对过氧化物产生的超氧自由基损伤心肌细胞的 保护作用。图1-4为各组培养心肌细胞在倒置显微镜下观察图片；图5-8为各组培养心肌 细胞钙离子荧光探针AM-Fluo-3光染料钙超载图片。
[0022] 图1-正常组心肌细胞照片；
[0023] 图2-过氧化物产生超氧自由基损伤心肌细胞组照片；
[0024] 图3-复合辣木多肽中剂量预保护后，再用过氧化物产生超氧自由基损伤心肌细 胞组照片；
[0025] 图4-复合辣木多肽高剂量预保护后，再用过氧化物产生超氧自由基损伤心肌细 胞组照片。
[0026] 图5.正常组心肌细胞光染料钙超载图片；
[0027] 图6.过氧化物产生超氧自由基损伤心肌细胞组光染料钙超载图片；
[0028] 图7.复合辣木多肽中剂量预保护后产生超氧自由基损伤心肌细胞组光染料钙超 载图片；
[0029] 图8.复合辣木多肽高剂量预保护后产生超氧自由基损伤心肌细胞组光染料钙超 载图片。
【具体实施方式】
[0030] 下面结合具体实施例进一步说明本发明，实施例是为了便于更好地理解本发明及 其应用，而不应该看做对本发明保护范围的限制，本发明的保护范围以权利要求书记载的 内容为准。