射用 水中，使其完全分散，充分溶胀，勿使粘结成团，搅拌30分钟左右即可完全溶解。
[0023] 2.分别将硼砂、乙二胺四乙酸钠和对羟基苯甲酸乙酯加入到上述透明质酸钠溶液 中，搅匀溶解，然后定容至l〇〇ml，即得pH7. 1的滴眼液空白基质。
[0024] 3.将重组水蛭素加入到上述滴眼液空白基质中，搅匀溶解，通过0. 22um滤器过 滤除菌，然后分装，即得重组水蛭素滴眼液。
[0025] 实施例3 本发明滴眼液的配方： 重组水輕素 0. 02g 透明质酸钠 〇.Ig 磷酸盐缓冲液 I.Og 氯化钠 0.5g 乙二胺四乙酸二钠 0. 5g 苯扎溴铵 0. 03g 注射用水定容至 100mL 制备工艺： 1.在60-80°C的水浴条件下，快速搅拌并缓缓将0.Ig透明质酸钠加入到70ml注射用 水中，使其完全分散，充分溶胀，勿使粘结成团，搅拌30分钟左右即可完全溶解。
[0026] 2.分别将磷酸、氯化钠、乙二胺四乙酸钠和苯扎溴铵加入到上述透明质酸钠溶液 中，搅匀溶解，然后定容至l〇〇ml，即得pH7.2的滴眼液空白基质。
[0027] 3.将重组水蛭素加入到上述滴眼液空白基质中，搅匀溶解，通过0. 22um滤器过 滤除菌，然后分装，即得重组水蛭素滴眼液。
[0028] 实施例4 本发明滴眼液的配方： 重组水輕素 0. 02g 透明质酸钠 〇.Ig 磷酸 l.〇g 硼砂 0.5g 乙二胺四乙酸二钠 0. 5g 苯扎溴铵 0. 02g 硫柳汞 0.Olg 注射用水定容至 100mL 制备工艺： 1.在60-80°C的水浴条件下，快速搅拌并缓缓将0.Ig透明质酸钠加入到70ml注射用 水中，使其完全分散，充分溶胀，勿使粘结成团，搅拌30分钟左右即可完全溶解。
[0029] 2.分别将磷酸、硼砂、乙二胺四乙酸钠和苯扎溴铵加入到上述透明质酸钠溶液中， 搅匀溶解，然后定容至l〇〇ml，即得pH7. 4的滴眼液空白基质。
[0030] 3.将重组水蛭素加入到上述滴眼液空白基质中，搅匀溶解，通过0. 22um滤器过 滤除菌，然后分装，即得重组水蛭素滴眼液。
[0031] 实施例5 兔眼刺激实验 将实施例1~4中重组水蛭素滴眼液按照新药临床前指导原则方法进行刺激性考察，选 择健康新西兰兔8只，分为4组，左眼每日给本发明实施例1~4重组水蛭素滴眼液5次，右 眼分别给生理盐水做空白对照，在l，24,48,72h进行眼部检查，观察结膜、角膜、虹膜及其 他可见损伤，连续观察7d，根据眼刺激反应分值标准记录眼部反应的分值（结果见表1)。
[0032] 表1各个观察时间各组眼睛最后得分
由表1可知，重组水蛭素滴眼液给药一侧眼睛眼角膜、虹膜和结膜未出现刺激性，与对 照一侧眼睛一样，由此证明重组水蛭素III滴眼液无眼刺激性。
[0033] 实施例6 稳定性实验 重组水蛭素滴眼液测定抗凝活力后，分别置于4°C冰箱及室温，在放置1，2,4周和3,6， 12个月后，其抗凝活力及pH值没有变化，外观形状、澄明度及无菌检查均符合中华人民共 和国药典（二部）附录IIIA对滴眼液的要求。
[0034] 实施例7 药效学实验对D-半乳糖诱导的白内障大鼠的治疗作用 实验药物：实施例1~4中的重组水蛭素滴眼液 实验动物：SD大鼠，雌雄各半，130±20g 实验方法和结果： I.SD大鼠白内障模型建立 取42只SD大鼠随机分成7组，每组均为6只（雌雄各半），分别为正常对照组、模型 对照组、白内停对照组和重组水蛭素滴眼液（2000ATU/ml)组。除正常对照组外，其它组SD 大鼠均腹腔注射〇. 08%的D-半乳糖溶液25mL/kg，相当于20mg/kg，每日分2次给药，上下 午各1次，连续给14d，并饮用10%D-半乳糖溶液，正常对照组按同样方式腹腔注射同体积 的生理盐水。造模成功后，各组分别双眼点滴给药，各组给药容积均为IOOuL/只/次，每日 分3次给药，连续30天。
[0035] 2.重组水蛭素III滴眼液对白内障大鼠的治疗作用 给药30天后，使用复方托吡卡胺滴眼液散瞳，用裂隙灯显微镜定期观察大鼠晶状体的 混浊程度，观察后记录结果。晶状体混浊程度按表3标准分别赋予不同分值，进行组间t检 验。模型组大鼠未经药物治疗，随着时间的延长其晶状体的混浊程度越来越高。重组水蛭 素滴眼液组与模型组晶状体混浊程度相比，有极显著差异（P< 0. 01)，表明重组水蛭素滴 眼液可显著缓解晶状体混浊（见表2)。
[0036] 表2 rHVIII滴眼液对SD大鼠晶状体混浊程度的影响（n= 6)
注A:无浑池；B:轻微浑池；C:中等浑池；D:严重浑池；vs模型组，*p< 0. 05,**p < 0.Olo
[0037] 给药30天后，将大鼠处死取眼球，分离出晶状体。分别检测大鼠晶状体SOD活性、 MDA含量和AR活性。与模型组比较，白内停对照组和重组水蛭素滴眼液组均能极显著升高SOD活性（p< 0.01)以及极显著降低MDA含量（p< 0.01)，并且能显著降低AR活性 (见表3)。
[0038] 表3重组水蛭素III滴眼液对SD大鼠晶状体SOD活性、MDA含量及AR活性的 影响（n= 6)
注：vs模型组，*p< 0? 05,#p< 0? 01。
[0039] 实验结论： 重组水蛭素滴眼液能明显减轻晶状体混浊度，缓解半乳糖性白内障症状的发展，并且 能增大SOD活性，降低MDA含量，降低AR活性，显著改善大鼠半乳糖性白内障严重程度。
【主权项】
1. 一种重组水蛭素滴眼液，其特征在于：以重组水蛭素为有效成分，透明质酸钠为增 稠剂，还含有等渗调节剂、金属络合剂、防腐剂以及药学上可接受的载体；滴眼液中透明质 酸钠、重组水蛭素、等渗调节剂、金属络合物和防腐剂的质量比为10:2:15. 27:50:3。2. 根据权利要求1所述的滴眼液，其特征在于：所述的等渗调节剂选自氯化钠、硼酸 盐缓冲液或者磷酸盐缓冲液中的一种或几种。3. 根据权利要求2所述的滴眼液，其特征在于：所述的缓冲溶液的pH值为4. 0~7. 5。4. 根据权利要求1所述的滴眼液，其特征在于：所述的金属络合剂为乙二胺四乙酸二 钠。5. 根据权利要求1所述的滴眼液，其特征在于：所述的防腐剂为对羟基苯甲酸甲酯、对 羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯扎溴铵或硫柳汞中的一种或几种。6. 根据权利要求1所述的滴眼液，其特征在于：所述的药学上可接受的载体是注射用7. 根据权利要求1所述滴眼液，其特征在于，其制备方法为：将透明质酸钠、等渗调节 剂、金属络合剂和防腐剂溶解于药学上可接受的载体制成滴眼液空白基质，然后将重组水 蛭素溶解于该滴眼液空白基质中，混匀、过滤、除菌分装，制得重组水蛭素滴眼液。
【专利摘要】本发明公开一种重组水蛭素滴眼液，以重组水蛭素为有效成分，透明质酸钠为增稠剂，还含有等渗调节剂、金属络合剂、防腐剂以及药学上可接受的载体；滴眼液中透明质酸钠、重组水蛭素、等渗调节剂、金属络合物和防腐剂的质量比为10:2:15.27:50:3。其制备方法为将透明质酸钠、等渗调节剂、金属络合剂和防腐剂溶解于药学上可接受的载体制成滴眼液空白基质，然后将重组水蛭素溶解于该滴眼液空白基质中，混匀、过滤、除菌分装，制得重组水蛭素滴眼液。本发明的滴眼液一方面可以使重组水蛭素长时间滞留病灶区，又不会对敏感的眼组织产生刺激作用，同时还可以保证重组水蛭素滴眼液的储存稳定性。
【IPC分类】A61K9/08, A61K47/36, A61K47/16, A61K38/58, A61P27/12
【公开号】CN104906037
【申请号】CN201510345194
【发明人】谢海林
【申请人】广西复鑫益生物科技有限公司平南分公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月23日