一种富含高活性水蛭素的水蛭全粉的制备方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种富含高活性水蛭素的水蛭全粉的制备方法。
【背景技术】
[0002]水蛭是一味传统中药，历史悠久，中医认为水蛭有破血、逐淤、通经等功效。自从二十世纪五十年代从医用水蛭中分离出具有抗凝作用的物质一水蛭素后，国内外已对其进行了广泛而深入的药理学研宄。水蛭素为最强的凝血酶抑制剂，并可阻止纤维蛋白凝固，对各种血栓病都有效。
[0003]天然水蛭素是从水蛭唾液腺分泌物中提取得到的一种由65或66个氨基酸残基组成的、无糖基化的单链小分子酸性单链多肽。目前己发现天然水蛭素存在十余种变体，相互间只有几个氨基酸残基的差别，具有85%以上的结构同源性。天然水蛭素分子量为7000Da左右。
[0004]水蛭品种繁多，其中菲牛蛭中水蛭素含量最高。基因重组水蛭素虽然有天然水蛭素类似的结构和功能，但是药效要差很多。天然水蛭素仍然是最好的水蛭素药物。水蛭素可以口服，高纯度水蛭素也可以用于静脉注射，但是中药静脉注射常出现过敏反应而产生严重后果，因此口服是最安全的。中国发明专利200410037695.7 “一种水蛭素冻干粉针制剂及其制备方法”认为:水蛭素良好的药效不仅仅因为水蛭素的作用，还有水蛭唾液中其它活性成分的参与作用共同形成的。因此，充分利用水蛭全粉将会充分发挥其功效。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种富含高活性水蛭素的水蛭全粉的制备方法。
[0006]本发明，包括以下步骤:
Cl)以新鲜的菲牛輕为原料，清水冲洗去除杂物，浸入50?10ppm 二氧化氯水溶液消毒3?5min，沥干备用；
(2)将消毒好的菲牛蛭置入匀浆机，加入菲牛蛭重量2?3倍的无菌水进行匀浆；
(3)将匀浆液倒入酶解容器中，按新鲜的牛蛭原料计，加入1.0?1.5wt%的甲壳质酶和0.3?0.6wt%的胶原酶，在pH值为4.0?5.0，温度为35?40°C的条件下水解I?2h，至菲牛蛭躯体溶化，升温到90°C灭酶1min ;
(4)冷却后用2mol/LNaOH溶液调节pH值至7，在-20?-30°C条件下预冷180?240min，然后进行真空冷冻干燥得到一种富含高活性水蛭素的水蛭全粉；
(5)采用锡薄袋进行包装。
[0007]本发明的原理:利用甲壳质酶和胶原酶，在pH值为4.0?5.0，温度为35?40°C条件下进行酶解反应。甲壳质酶能将甲壳素分解为乙酰基葡萄糖胺，胶原酶能分解胶原蛋白，消化细胞间质。两种酶一起作用可以分解水蛭躯体组织，使水蛭素完全释放，从而制备富含高活性水蛭素的水蛭全粉。
[0008]本发明，具有以下有益效果: 1.能够使水蛭体内的水蛭素全部释放，水蛭素包含于唾液腺和水蛭躯体中，且以各种化学键的形式与各组织相结合，通常提取率小于40%。采用双酶法可以使包括唾液腺的整个躯体水解，这样可以所有水蛭素全部变成游离状态，有利于人体对水蛭素的吸收和利用。同时水蛭全粉包含了水蛭各种组织及唾液中的其它活性成分，有助于提高水蛭素的抗凝血活性。
[0009]2.制备过程包括消毒和加温处理，可以保证所得产品符合食品安全要求，可直接服用。
[0010]3.整个制备过程条件温和，无污染排放。
【具体实施方式】
[0011]实施例1、取新鲜的菲牛輕20g，清水冲洗去除杂物，浸入10ppm 二氧化氯水溶液消毒3min，沥干备用；将消毒好的菲牛蛭置入匀浆机，加入40 g无菌水进行匀浆；将匀浆液倒入烧杯中，加入0.22g的甲壳质酶和0.1g的胶原酶，在pH值为5.0，温度为37°C的条件下水解1.0 h，菲牛蛭躯体溶化，升温到90°C灭酶lOmin。冷却后用2mol/L NaOH溶液调节pH值至7，在-30°C条件下预冷240min，然后进行真空冷冻干燥得到一种富含高活性水蛭素的水蛭全粉。采用锡薄袋进行包装。经检测该粉抗凝血活性为580AT-U/g。
[0012]实施例2、取新鲜的菲牛輕20 g，清水冲洗去除杂物，浸入50ppm 二氧化氯水溶液消毒5min，沥干备用；将消毒好的菲牛蛭置入匀浆机，加入60 g无菌水进行匀浆；将匀浆液倒入烧杯中，加入0.25g的甲壳质酶和0.12g的胶原酶，在pH值为4.0，温度为40°C的条件下水解2h，菲牛蛭躯体溶化，升温到90°C灭酶lOmin。冷却后用2mol/L NaOH溶液调节pH值至7，在-30°C条件下预冷180min，然后进行真空冷冻干燥得到一种富含高活性水蛭素的水蛭全粉。采用锡薄袋进行包装。经检测该粉抗凝血活性为560AT-U/g。
[0013]实施例3、取新鲜的菲牛蛭20 g，清水冲洗去除杂物，浸入75ppm 二氧化氯水溶液消毒4min，沥干备用；将消毒好的菲牛蛭置入匀浆机，加入50 g无菌水进行匀浆；将匀浆液倒入烧杯中，加入0.20g的甲壳质酶和0.12g的胶原酶，在pH值为4.0，温度为35°C的条件下水解1.5h，菲牛蛭躯体溶化，升温到90°C灭酶lOmin。冷却后用2mol/L NaOH溶液调节pH值至7，在-30°C条件下预冷240min，然后进行真空冷冻干燥得到一种富含高活性水蛭素的水蛭全粉。采用锡薄袋进行包装。经检测该粉抗凝血活性为552AT-U/g。
[0014]实施例4、取新鲜的菲牛輕209，清水冲洗去除杂物，浸入10ppm 二氧化氯水溶液消毒3min，沥干备用；将消毒好的菲牛蛭置入匀浆机，加入409无菌水进行匀浆；将匀浆液倒入烧杯中，加入0.25g的甲壳质酶和0.1lg的胶原酶，在pH值为4.5，温度为38°C的条件下酶1.8h，菲牛蛭躯体溶化，升温到90°C灭酶lOmin。冷却后用2mol/L NaOH溶液调节pH值至7，在-30°C条件下预冷240min，然后进行真空冷冻干燥得到一种富含高活性水蛭素的水蛭全粉。采用锡薄袋进行包装。经检测该粉抗凝血活性为558AT-U/g。
【主权项】
1.一种富含高活性水蛭素的水蛭全粉的制备方法，包括下列步骤: (1)以新鲜的菲牛輕为原料，清水冲洗去除杂物，浸入50?10ppm二氧化氯水溶液消毒3?5min，沥干备用； (2)将消毒好的菲牛蛭置入匀浆机，加入菲牛蛭重量2-3倍的无菌水进行匀浆； (3)将匀浆液倒入酶解容器中，按新鲜的牛蛭原料计，加入1.0?1.5wt%的甲壳质酶和.0.3?0.6wt%的胶原酶，在pH值为4.0?5.0，温度为35?40°C的条件下水解I?2h，至菲牛蛭躯体溶化，升温到90°C灭酶1min ; (4)冷却后用2mol/LNaOH溶液调节pH值至7，在-20?-30°C条件下预冷180?.240min，然后进行真空冷冻干燥得到一种富含高活性水蛭素的水蛭全粉； (5)采用锡薄袋进行包装。
【专利摘要】本发明公开了一种富含高活性水蛭素的水蛭全粉的制备方法，以新鲜的菲牛蛭为原料，清水冲洗去除杂物，浸入50～100ppm二氧化氯水溶液消毒3～5min，加入菲牛蛭重量2—3倍的无菌水匀浆后，采用甲壳质酶和胶原酶，在pH值为4.0～5.0，温度为35～40℃的条件下水解1～2h，至菲牛蛭躯体溶化，升温到90℃灭酶10min，冷却后调节pH值至7，然后进行真空冷冻干燥得到水蛭全粉。采用双酶法可以使包括唾液腺的整个躯体水解，这样可以所有水蛭素全部变成游离状态，使水蛭体内的水蛭素全部释放，有利于人体对水蛭素的吸收和利用。同时，水蛭全粉包含了水蛭各种组织及唾液中的其它活性成分，有助于提高水蛭素的抗凝血活性。
【IPC分类】A61K9/19, A61K38/58, A61K35/62, A61P7/02
【公开号】CN104906142
【申请号】CN201510314664
【发明人】方练, 方卓榕, 余以刚
【申请人】广东庭颢药业股份有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月10日