一种水蛭素的提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种水蛭素的提取方法。
【背景技术】
[0002] 水蛭素是水蛭体内的一种蛋白质，含65个氨基酸残基和3对二硫键，具有高度特 异的抗凝血酶活性，抑制凝血酶结合底物，故有抗凝血作用。
[0003] 目前在制备水蛭素时，通常是将水蛭冷却后进行捣碎，而活的水蛭在捣碎时困难 很大，因为水蛭身体是软的不易捣碎，而且在加工过程中水蛭不断逃跑，爬得四周都是，十 分恶心；也有的是用开水将水蛭煮一下，使其死后再捣碎，但是在过水时水蛭素分泌物从水 蛭口腔中流失；通常对泥浆状水蛭用电炉或手工煮，这样既不能工业化，又不能恒温加热； 对水蛭液采用离心机离心分离不完全，水蛭素成品收率低，由于现有的水蛭素提取方法存 在上述工艺不合理的缺点，因而水蛭素成品的质量稳定性差，收率通常只有80%左右。
【发明内容】
[0004] 针对现有技术存在的问题，本发明提供一种具有工艺合理、操作方便实用、水蛭素 成品的质量稳定性好和收率提高的水蛭素的提取方法。
[0005] 为实现上述目的，本发明的技术方案如下： 一种水蛭素的提取方法，包括以下步骤： A、 将洗净的水蛭用线、绳或者铁丝穿起，悬挂在阳光下暴晒，得水蛭干燥全体； B、 称取干燥水蛭，粗粉碎后过筛，精密称取水蛭粗粉加入乙醇，料液比为1:1~5,在微波 条件下浸泡，后将混悬液超微粉碎，将得到的水蛭混悬液离心后，取上清液； C、 将上述清液进行浓缩，即得。
[0006] 所述的乙醇的浓度为30% -80%。
[0007] 所述的微波条件所述的微波条件为微波功率随温度自动变频控制，非脉冲微波连 续加热，功率自动变化范围为〇~l〇〇〇W ;温度控制为50-70°C。
[0008] 所述的浸泡时间为l_2h。
[0009] 所述的超微粉碎时间为10_15min。
[0010] 所述的步骤C中冷冻干燥的具体做法为：将步骤B中的上清液冷冻至水的冰点以 下，然后移置干燥器，密闭，迅速抽空，并维持在抽空状态3-5小时。
[0011] 本发明的有益效果为： 1.本发明使用微波可以强化水蛭素的浸出，经微波活化后，水蛭粗粉更加松散，附着现 象全部消失，微波的热效应和非热效应综合效应使得水蛭素的浸出率提高。水蛭粗粉在微 波条件下，反应速度加快，浸出反应时对温度和浸出剂浓度的依赖性降低。因此，通过微波 活化可在较低反应温度及较低浓度的浸出剂下实现其有效浸出，达到节能作用。
[0012] 2.本发明的超微粉碎过程中，水蛭素的溶出具有扩散阻力小、溶出路径短、溶出面 积大的优势外，水蛭粗品颗粒还不断的受到机械力的剪切、挤压，直至达到细胞级粉碎，这 些机械力极大地增加了乙醇溶液的对流，提高了质量传递系数，促使水蛭素迅速地向乙醇 溶液转移。该提取技术在较短的时间内即可完成药物提取，且整个操作过程可控制在低温 条件下进行。
[0013] 3.本发明使用冷冻干燥法对水蛭素进行浓缩，在冰冻状态下直接升华去除水分， 既使蛋白质不易变性，又保持水蛭素的固有成分。
[0014] 4.本发明的水蛭素的提取方法具有工艺合理、操作方便实用、水蛭素成品的质量 稳定性好和收率高的特点。
【具体实施方式】
[0015] 为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合【具体实施方式】对本发明所述的 技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
[0016] 实施例1 本发明的水蛭素的提取方法，包括以下步骤： A、 将洗净的水蛭用线、绳或者铁丝穿起，悬挂在阳光下暴晒，得水蛭干燥全体； B、 称取干燥水蛭，粗粉碎后过筛，精密称取水蛭粗粉加入乙醇，料液比为1:1，在微波条 件下浸泡，后将混悬液超微粉碎，将得到的水蛭混悬液离心后，取上清液； C、 将上述清液进行浓缩，即得。
[0017] 所述的乙醇的浓度为30%。
[0018] 所述的微波条件所述的微波条件为微波功率随温度自动变频控制，非脉冲微波连 续加热，功率自动变化范围为〇~l〇〇〇W ;温度控制为50°C。
[0019] 所述的浸泡时间为lh。
[0020] 所述的超微粉碎时间为lOmin。
[0021] 所述的步骤C中冷冻干燥的具体做法为：将步骤B中的上清液冷冻至水的冰点以 下，然后移置干燥器，密闭，迅速抽空，并维持在抽空状态3小时。
[0022] 实施例2 本发明的水蛭素的提取方法，包括以下步骤： A、 将洗净的水蛭用线、绳或者铁丝穿起，悬挂在阳光下暴晒，得水蛭干燥全体； B、 称取干燥水蛭，粗粉碎后过筛，精密称取水蛭粗粉加入乙醇，料液比为1:3,在微波条 件下浸泡，后将混悬液超微粉碎，将得到的水蛭混悬液离心后，取上清液； C、 将上述清液进行浓缩，即得。
[0023] 所述的乙醇的浓度为50%。
[0024] 所述的微波条件所述的微波条件为微波功率随温度自动变频控制，非脉冲微波连 续加热，功率自动变化范围为〇~l〇〇〇W ;温度控制为60°C。
[0025] 所述的浸泡时间为I. 5h。
[0026] 所述的超微粉碎时间为12min。
[0027] 所述的步骤C中冷冻干燥的具体做法为：将步骤B中的上清液冷冻至水的冰点以 下，然后移置干燥器，密闭，迅速抽空，并维持在抽空状态4小时。
[0028] 实施例3 本发明的水蛭素的提取方法，包括以下步骤： A、 将洗净的水蛭用线、绳或者铁丝穿起，悬挂在阳光下暴晒，得水蛭干燥全体； B、 称取干燥水蛭，粗粉碎后过筛，精密称取水蛭粗粉加入乙醇，料液比为1:5,在微波条 件下浸泡，后将混悬液超微粉碎，将得到的水蛭混悬液离心后，取上清液； C、 将上述清液进行浓缩，即得。
[0029] 所述的乙醇的浓度为80%。
[0030] 所述的微波条件所述的微波条件为微波功率随温度自动变频控制，非脉冲微波连 续加热，功率自动变化范围为〇~l〇〇〇W ;温度控制为70°C。
[0031] 所述的浸泡时间为2h。
[0032] 所述的超微粉碎时间为15min。
[0033] 所述的步骤C中冷冻干燥的具体做法为：将步骤B中的上清液冷冻至水的冰点以 下，然后移置干燥器，密闭，迅速抽空，并维持在抽空状态5小时。
[0034] 实施例4 本发明各实施例不同浓度、温度及提取时间的水蛭提取效果 1材料与方法 1. 1实验材料 I. I. 1仪器SIGMA单道移液器；RE-52A型旋转蒸发器（上海亚荣公司）；Sigma4K15 高温冷冻离心机；自动酸碱滴定仪DL53Mettler Toledo Switzer-land。
[0035] I. I. 2药物与试剂水蛭购于北京松兰中药饮片有限公司，经北京松兰中药饮片公 司主任中药师蔡长德鉴定为水輕科动物蚂蟥干燥全体；纤维蛋白原（Fibrinogen) :SIGMA; 凝血酶（Thrombin) :SIGMA〇
[0036] I. 2实验方法 1. 2. 1水蛭素的测定方法取纤维蛋白原0.25 g，溶于50 ml的Tris-HCl缓冲液 (pH-8)中，得0.5%的纤维蛋白原溶液。稀释凝血酶到5 NIH/ml。取0.2 ml纤维蛋白原溶 液，加入20ul水蛭素提取液，并加入凝血酶至凝固，得水蛭素含量=(凝血酶浓度X凝血酶 用量）/水蛭素提取液体积。
[0037] 1. 2. 2分别按照本发明实施例1-3的方法进行提取，用上述方法检测提取物的 含量，检测结果如表1所示。
[0038] 表1不同浓度乙醇的提取结果
由表1可知，本发明的水蛭素的提取方法，提取收率较高。
【主权项】
1. 一种水蛭素的提取方法，其特征在于，包括以下步骤： A、 将洗净的水蛭用线、绳或者铁丝穿起，悬挂在阳光下暴晒，得水蛭干燥全体； B、 称取干燥水蛭，粗粉碎后过筛，精密称取水蛭粗粉加入乙醇，料液比为1:1~5,在微波 条件下浸泡，后将混悬液超微粉碎，将得到的水蛭混悬液离心后，取上清液； C、 将上述清液进行浓缩，即得。2. 根据权利要求1所述的水蛭素的提取方法，其特征在于：所述的步骤B中乙醇的浓 度为 30% -80%。3. 根据权利要求1所述的水蛭素的提取方法，其特征在于：所述的步骤B中微波条件 为微波功率随温度自动变频控制，非脉冲微波连续加热，功率自动变化范围为〇~l〇〇〇W ;温 度控制为50-70 °C。4. 根据权利要求1所述的水蛭素的提取方法，其特征在于：所述的步骤B中浸泡时间 为 l_2h。5. 根据权利要求1所述的水蛭素的提取方法，其特征在于：所述的步骤B中超微粉碎 时间为l〇_15min。6. 根据权利要求1所述的水蛭素的提取方法，其特征在于，所述的步骤C中冷冻干燥的 具体做法为：将步骤B中的上清液冷冻至水的冰点以下，然后移置干燥器，密闭，迅速抽空， 并维持在抽空状态3-5小时。
【专利摘要】本发明提供一种水蛭素的提取方法，包括以下步骤：A、将洗净的水蛭用线、绳或者铁丝穿起，悬挂在阳光下暴晒，得水蛭干燥全体；B、称取干燥水蛭，粗粉碎后过筛，精密称取水蛭粗粉加入乙醇，料液比为1:1~5，在微波条件下浸泡，后将混悬液超微粉碎，将得到的水蛭混悬液离心后，取上清液；C、将上述清液进行浓缩，即得。本发明的水蛭素的提取方法具有工艺合理、操作方便实用、水蛭素成品的质量稳定性好和收率高的特点。
【IPC分类】C07K1/14, A61P7/02, A61K38/58, C07K14/815
【公开号】CN104945504
【申请号】CN201510343595
【发明人】谢海林
【申请人】广西复鑫益生物科技有限公司平南分公司
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2015年6月19日