一种水蛭素的提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种水赔素的提取方法，属于水赔素提取技术领域。
【背景技术】
[0002] 水赔素是水赔及其唾液腺中已提取出多种活性成分中活性最显著并且研究得最 多的一种成分，它是由65~66个氨基酸组成的小分子蛋白质(单链多肤）。水赔素对凝血酶有 极强的抑制作用，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂，对人类屯、脑血管疾病 尤其是脑血栓等血栓性疾病有较高的疗效，其防治效果是任何物质(包括目前临床上常规 使用的阿司匹林和肝素)所难W比拟的，运是因为:一方面，天然水赔素的抗栓功能不需要 其它因子的参与，加上其分子量远比肝素要小，渗透性强，容易到达血栓内部，并将其溶解； 另一方面，天然水赔素不会像肝素等抗凝剂那样易引起出血等难W克服的副作用，从而使 天然水赔素成为世界公认的防治屯、脑血管疾病最好的天然药物。现有水赔素的提取分为水 赔活体提取和干水赔粉碎提取，水赔素分布在水赔的口部和分泌的唾液中，干水赔粉碎提 取的提取量低且提取工艺成本较高。现有技术中虽然存在活体提取水赔素的设计，但其提 取方法存在较多缺陷。
[0003] 申请人发现现有的活体提取水赔素的方法存在W下缺陷：首先，现有的活体提取 方法对水赔素的提取量低。水赔的耐饥饿能力较强，一次吸饱血后能够多天甚至数月不进 食，水赔只有在进食的过程会分泌大量分泌液，分泌液中含有高含量的水赔素，而现有的活 体提取技术水赔分泌的分泌液量较少。其次，现有的提取方法对水赔活体造成伤害，无法高 效的反复提取。现有的活体提取方法多采用对喂食后的水赔进行电机刺激促使水赔分泌唾 液，或者水赔吸饱血液后刺激水赔反当。现有的电刺激法活体水赔提取中，当多条水赔提取 时电刺激法的电量不易控制，并且多次电刺激后水赔的活力降低，水赔素的提取量减少。现 有的反当法提取水赔素时，需要先让水赔吸饱血，再通过添加刺激剂促使水赔反当，其所得 反当液中水赔素含量低，血液消耗量大，且操作过程中水赔易死亡。现有技术中水赔一次饱 食提取后需将水赔饥饿40~60天，才能进行下一次提取。再次，现有的提取方法所得粉末状 水赔素中细菌含量高，过高的细菌含量导致其只能用作口服制剂。最后，现有的提取方法所 得粉末状水赔素为黑色、深褐色或红栋色，颜色较重，杂质多且活性成分含量较低。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是:克服现有技术的不足，提供一种水赔素的提取方法， 该水赔素的提取方法对水赔素的提取量大，且能够反复提取，最终所得粉末状水赔素色泽 浅、活性成分含量高。
[0005] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:该水赔素的提取方法，其特征在于， 包括如下步骤： 1) 饥饿处理:将活的水赔进行饥饿处理； 2) 刺激分泌:保持环境溫度23~40°C，在波长200皿~275皿紫外线照射下，向水赔的体 表喷洒诱导剂，紫外线照射时间为30~180秒，关闭紫外线，采用暖白光明灭闪烁的方式照射 水赔3~15分钟，或者采用暖白光和绿光交替明灭闪烁的方式照射水赔3~15分钟，W刺激水 赔分泌分泌液;暖白光色溫为2000~4500K，绿光波长500nm~560皿，暖白光闪烁频率和绿光 的闪烁频率均为0.2~細Z; 3) 灭菌:收集分泌液，采用波长200nm~275nm紫外线照射分泌液进行杀菌； 4) 浓缩:将分泌液采用25~40°C风干，或者采用冷冻干燥，获得固态粉末，即得。
[0006] 所述的水赔为日本医赔、茶色赔或菲牛赔的活体。
[0007] 步骤2)所述的诱导剂为血液和水按体积比1: ^lO稀释后获得，诱导剂的体积与水 赔的质量按比值^51111: 1000 g使用。
[000引所述的血液为鸡血、牛血、猪血、羊血中的至少一种。
[0009] 步骤1)饥饿处理的具体操作为:保持环境溫度23~40°C，将水赔放入维C水溶液中 静置2~12小时，维C水溶液由维生素 C和水按质量比3~5:1000混合而成。
[0010] 步骤2)的具体操作为：保持环境溫度25~28°C，在波长250nm~270nm紫外线照射 下，向水赔的体表喷洒诱导剂，紫外线照射时间为60~120秒，关闭紫外线，采用暖白光明灭 闪烁的方式照射水赔5~10分钟，或者采用暖白光和绿光交替明灭闪烁的方式照射水赔5~10 分钟，W刺激水赔分泌分泌液。
[0011] 步骤2)所述的暖白光色溫为2700~3200K，绿光波长520nm~540皿，暖白光闪烁频率 和绿光的闪烁频率均为^3化。
[0012] 所述的步骤2)和步骤3)之间或者步骤3)和步骤4)之间还设有过滤步骤，过滤步骤 的具体操作为:将分泌液通过滤膜过滤器过滤，过滤孔径为0.4~4微米。
[0013] 步骤2)所述的喷洒具体操作为采用雾化器将诱导剂雾化成微小液滴，将雾化后的 诱导剂喷洒在水赔的体表。
[0014] 因此申请人在步骤1)中对水赔进行饥饿处理，有助于诱导水赔在步骤2)号分泌更 多的唾液，提高水赔素的提取量。将水赔放入维C水溶液中静置2~12小时，维C水溶液可W形 成较好的饥饿环境，并且维生素 C还具有抑菌的作用，减少水赔素中的细菌数量。维C水溶液 由维生素 C和水按质量比3~5:1000混合而成，该浓度为最佳浓度，既能模拟饥饿环境又能够 避免对水赔本身造成伤害。
[0015] 水赔素主要分布在水赔通过口部分泌的分泌液(也称作唾液）中，水赔只有在接收 到刺激时才能够分泌大量唾液。现有技术中只单独采用诱导剂进行进食刺激，而申请人在 研究中发现:性刺激同样能够促进，水赔属于冷血环节动物、雌雄同体，在每年6~10月为水 赔的产卵期，并且水赔（日本医赔、茶色赔或菲牛赔)在每日的黄昏时分为一天中活力最为 旺盛的时间，在水赔产卵期内，每日黄昏时分给予水赔少量进食刺激，分泌液的量能够明显 增多。经申请人进一步研究发现:水赔为了取食、生殖和自身的防御必须不断地通过光、水 波、化学物质及物理刺激来接受周围环境的信息，对每种信息又有相应的感觉结构。水赔通 过化学感受器来感受化学物质，产生进食刺激，而在水赔体表还分布有皮肤感受器，运种感 受器对微弱的水扰动和光刺激都非常敏感。因此申请人在步骤2)中通过保持环境溫度23~ 40°C，W此模拟水赔产卵期的溫度，暖白光明灭闪烁的方式照射水赔3~15分钟，或者采用暖 白光和绿光交替明灭闪烁的方式照射水赔3~15分钟，来给予水赔光刺激。暖白光色溫为 2000~4500K是最接近自然光的光照条件，优选的暖白光色溫为2700~3200K是最接近午后至 黄昏时间的光照条件，W模拟黄昏时的自然光光照条件。
[0016] 暖白光明灭闪烁的方式是指暖白光进行明一灭一明一灭的周期闪烁。暖白光和绿 光交替明灭闪烁的方式指的是采用暖白光明、绿光灭一暖白光灭、绿光明一暖白光明绿光 灭一暖白光灭绿光明的周期闪烁。申请人在研究中发现:当采用暖白光明灭闪烁的方式时， 能够给予水赔足够的光刺激，提高水赔的活力，促使水赔分泌更多的水赔素。对水赔进行光 刺激时，光的闪烁频率不能过短也不能过长，闪烁频率均为0.2~細Z时能达到较好的效果， 优选闪烁频率1~3Hz，即每秒钟闪1~3次。申请人添加绿光是为了模拟水赔在水下的光照环 境，暖白光和绿光交替明灭闪烁的方式的光刺激效果优于暖白光明灭闪烁的方式。优选的， 步骤2)中紫外光光源位于水赔上方0.8~1.5米，紫外光光源位于诱导剂的喷洒口上方，紫外 光光源的功率与水赔的质量之比为0.5~2W: 100~250克。步骤2)中暖白光和绿光的光源位于 水赔上方0.8~1.5米，暖白光和绿光的光源的功率与水赔的质量之比为2~4W: 100~250克。步 骤2)中的暖白光和绿光的光源W灯组的形式安装在水赔上方。优选的，暖白光和绿光的光 源为LH)灯头。
[0017] 申请人在研究中发现:水赔的耐饥饿能力较强，一次吸饱血后能够多天甚至数月 不进食，水赔只有在进食的过程会分泌大量分泌液，分泌液中含有水赔素。现有的反当法提 取水赔素必须先让水赔饱食再反当，作为诱导剂的血液消耗量大，且水赔素与反当物混在 一起，给后续水赔素分离带来较大困难。申请人经过研究，在步骤2)中设计通过向水赔的体 表喷洒诱导剂，喷洒的方式消耗的血液量少，并且能够延长水赔的进食时间