一种灭活的乳酸菌液体制剂及其制备方法
【专利说明】一种灭活的乳酸菌液体制剂及其制备方法 【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种人用或饲用微生态制剂，具体涉及一种灭活的乳酸菌液体制剂及 其制备方法，属于微生态制剂领域。 【【背景技术】】
[0002] 随着人们对食品安全问题和养殖环境问题的重视，养殖过程中滥用抗生素的种种 弊端得到广泛关注。自从欧盟全面禁止抗生素作为饲料添加剂后，相关替代品得到广泛研 宄，微生态制剂就是其中最重要的研宄方向之一。
[0003] 微生态制剂是一种由有益微生物及其代谢产物组成的，具有改善人和动物肠道微 生态平衡，提高人和动物免疫能力，提升人和动物健康状况的产品。目前微生态制剂已经广 泛应用于人和动物肠道保健和辅助治疗领域，其中乳酸菌是目前研宄和应用最多的菌株。 其作用主要包括：（1)竞争性粘附，通过在肠道与特定的位点结合，形成生物保护膜，阻碍 病原菌的定植；（2)抑菌效应，如乳酸菌能产生类似抗生素的物质，杀灭病原菌，而且在发 酵过程中产生酸性物质能降低肠道PH，抑制病原菌生长；（3)免疫活性功能，益生菌能分泌 特定物质或其细胞表面存在特定的抗原物质，能激发人或动物的免疫系统。
[0004] 尽管微生态制剂的效果已经被广泛认可，但是活菌型微生态制剂特别是乳酸菌制 剂在生产转化过程中还存在许多不稳定的因素。首先普通的乳酸菌活菌制剂在保存过程中 容易失活和变质，导致使用效果不稳定，或者需要低温保存不便于流通。其次乳酸菌活菌抗 逆性较差，在饲料加工过程中会大量灭活，并且在饲料流通过程中活菌还会进一步衰减，进 而影响产品使用效果。另外在环境中长期使用同一种活菌制剂，导致噬菌体感染与暴发的 风险增加，进而影响活菌产品的使用效果。
[0005] 已有大量研宄表明，乳酸菌的死菌体也能发挥活菌制剂的部分功能，而且还存在 一定的剂量相关性。因此灭活乳酸菌制剂为微生态制剂的产业化提供另外一个相对稳定的 方向。
[0006] 目前灭活制剂的制备工艺多采用热灭活或冷冻灭活或直接用有一定毒性的化学 物质灭活，然后再通过冷冻干燥的方式制备固体制剂。例如申请号为200810068138.X、发明 名称为"灭活的乳酸菌微生态制剂及其制备方法"的中国专利中公开了一种灭活乳酸菌制 剂的制备方法，其中灭活的方法为热灭活、冷冻灭活和甲醛灭活等，在灭活后采用了冷冻干 燥方法，制备冻干粉，在批量生产时，热灭活和冷冻灭活过程中均会出现菌体裂解和活性成 分降低的情况，而且灭活成本相对较高，而专利中所述的化学灭活方法是采用甲醛等杀菌 剂进行灭活，产品的安全性没有保证，此外乳酸菌灭活后采用浓缩后冷冻干燥的方法经行 制备，成本较高。另外在韩国细胞生物技术公司的专利（申请号为：201180004722. 9)中也 是采用热灭活的处理方式，然后在进行离心浓缩和冷冻干燥处理。日本好侍健康食品株式 会社的专利（申请号为：200910206343. 2)也采用热灭活工艺。
[0007] 综上所述，目前灭活乳酸菌制剂的灭活工艺普遍采用成本较高的灭活方式，而且 固体剂型均是高成本的冻干工艺，此外在干燥过程中乳酸菌挥发性物质损失严重，这大大 降低了该类产品的竞争力。 【
【发明内容】
】
[0008] 针对上述灭活乳酸菌制剂成本高、有效成分能回收率低的问题，本发明的目的是 提供一种稳定高效且成本低的灭活乳酸菌液体制剂。
[0009] 为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
[0010] 一种灭活的乳酸菌液体制剂，包含如下质量配比的组分：具有灭活功能的添加剂 2~4份、乳酸菌发酵液96~98份，其中，乳酸菌细胞含量为IO9~10 1(1个/mL。
[0011] 优选的，所述乳酸菌选自植物乳杆菌、干酪乳杆菌、戊糖片球菌、粪链球菌、嗜酸乳 杆菌中的一种或多种。
[0012] 优选的，所述具有灭活功能的添加剂为酸性添加剂。
[0013] 所述具有灭活功能的添加剂为甜菜碱盐酸盐、氨基葡萄糖盐酸盐、Y-氨基丁酸中 的一种或多种。
[0014] 本发明的另一目的在于提供一种上述灭活乳酸菌液体制剂的制备方法。
[0015] 一种灭活乳酸菌液体制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0016] (1)菌种的制备：配置MRS液体培养基，调节pH为6.2~6. 4，115°C灭菌20分钟， 冷却至37°C，然后将乳酸菌接种至液体MRS培养基中，37°C静置培养16~18小时，即获得 乳酸菌的液体种子；
[0017] (2)乳酸菌发酵液的制备：配置液体MRS培养基，调节pH为6. 2~6.4,115°C灭菌 20分钟，冷却至37°C，按照0. 1 %~0. 2%的体积比接入步骤⑴得到的乳酸菌菌种，37°C， 不通气，50rpm搅拌培养36~48小时，当发酵液pH达到4. 5以下，OD6tltol达到4. 0以上时 发酵结束，即获得乳酸菌发酵液；
[0018] (3)灭活处理：在步骤（2)得到的发酵液中加入酸性灭活添加剂，边搅拌边添加， 添加完毕后，将发酵液PH调节至1. 5-2. 5,持续搅拌5分钟即可；
[0019] (4)灌装：在洁净的条件下将步骤（3)得到的灭活乳酸菌液体灌装至指定容器，密 封即可。
[0020] 优选的，所述步骤（1)中的乳酸菌选自植物乳杆菌、干酪乳杆菌、戊糖片球菌、粪 链球菌、嗜酸乳杆菌中的一种或多种。
[0021] 优选的，所述步骤（2)中的酸性灭活添加剂为甜菜碱盐酸盐、氨基葡萄糖盐酸盐、 y-氨基丁酸中的一种或多种。
[0022] 优选的，所述步骤（2)中的酸性灭活添加剂的质量分数最好为2-4%。
[0023] 本发明的有益效果在于：本发明的灭活乳酸菌液体制剂不仅具有活的乳酸菌制剂 相同的功效，而且还复合其他添加剂的保健和促生长的功能。选用甜菜碱盐酸盐、氨基葡萄 糖盐酸盐、y-氨基丁酸等酸性添加剂作为灭活剂，这种灭活方式的成本显著低于其他灭活 方式，在灭活乳酸菌的细胞回收率、对人体癌细胞的粘附性能、促进动物生长等生理活性方 面显著优于热灭活乳酸菌制剂，且其生产成本显著降低，提高灭活乳酸菌制剂的性价比。 【【具体实施方式】】
[0024]以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限 定。在未作说明的情况下，本发明中所涉及到的方法均为常规方法，所涉及到的原料均为市 售产品。
[0025] 实施例1灭活干酪乳杆菌液体制剂及其制备
[0026] -种灭活的乳酸菌液体制剂，包括98%的干酪乳杆菌发酵液、1 %的氨基葡萄糖盐 酸和1 %甜菜碱盐酸盐，其中，乳酸菌细胞含量为IO9个/mL。
[0027] 其制备方法如下：
[0028] (1)菌种的制备：配置MRS液体培养基，调节pH为6.2,115°C灭菌20分钟，冷却 至37°C，在超净工作台中，用接种环从干酪乳杆菌的斜面上挑取2环菌苔，然后接种至液体 MRS培养基中，37°C静置培养16小时，即获得干酪乳杆菌的液体种子；
[0029] (2)干酪乳杆菌发酵液制备：配置液体MRS培养基，调节pH为6. 2,115°C灭菌20分 钟，冷却至37°C，按照0. 1%的体积比接入步骤（1)得到的干酪乳杆菌菌种，37°C，不通气， 50rpm搅拌培养36小时，当发酵液pH为4. 5, 006_"为4. 0时发酵结束，即获得干酪乳杆菌 发酵液；
[0030] (3)灭活处理：在步骤（2)得到的发酵液中加入质量分数1%的氨基葡萄糖盐酸和 1 %甜菜碱盐酸盐，边搅拌边添加，添加完毕后，将发酵液PH调节至1. 5,持续搅拌5分钟即 可；
[0031] (4)灌装：在洁净的条件下将步骤（3)得到的灭活乳酸菌液体灌装至指定容器，密 封即可。
[0032] 实施例2灭活乳糖片球菌液体制剂及其制备
[0033] -种灭活的乳酸菌液体制剂，包括97 %的戊糖片球菌发酵液、3 %的甜菜碱盐酸 盐，其中，乳酸菌细胞含量为101°个/mL。
[0034] 其制备方法如下：
[0035] (1)菌种的制备：配置MRS液体培养基，调节pH为6.3,115°C灭菌20分钟，冷却 至37°C，在超净工作台中，用接种环从戊糖片球菌的斜面上挑取2环菌苔，然后接种至液体 MRS培养基中，然后37°C静置培养17小时，即获得戊糖片球菌的液体种子；
[0036] (2)戊糖片球菌发酵液制备：配置液体MRS培养基，调节pH为6. 2~6.4,115°C灭 菌20分钟，冷却至37°C，按照0. 15%的体积比接入步骤⑴得到的戊糖片球菌菌种，37°C， 不通气，50rpm搅拌培养42小时，当发酵液pH为4. 4,OD6tltolS4. 1时发酵结束，即获得戊 糖片球菌发酵液；
[0037] (3)灭活处理：在步骤⑵得到的发酵液中加入质量分数3%的甜菜碱盐酸盐，边 搅拌边添加，添加完毕后，将发酵液pH调节至2. 0,持续搅拌5分钟即可；
[0038] (4)灌装：在洁净的条件下将步骤（3)得到的灭活乳酸菌液体灌装至指定容器，密 封即可。
[0039] 实施例3灭活复合