一种植物乳杆菌及其在暖季型牧草青贮中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于牧草饲料加工贮藏领域，特别涉及一种植物乳杆菌及其在暖季型牧草 青贮中的应用。
【背景技术】
[0002] 随着我国畜牧业的发展，对动物饲料的需求越来越高。暖季型牧草，如象草、苏丹 草等，多原产于非洲;产量与营养价值高，且消化率高适口性好，牛、羊、马均喜食，是我国非 常重要的动物饲料来源。
[0003] 暖季型牧草多种植于我国南方，南方夏季多雨，调制干草比较困难。青贮能够解决 在雨季、湿润多雨地区的干草不宜调制的问题，同时能够降低因干草调制造成的叶片脱落、 雨淋、霉变等损失;但是暖季型牧草本身含水量高，糖分含量少，常规青贮很难成功。
[0004] 乳酸菌制剂的使用可增加青贮初期发酵时的乳酸菌数量，对保证青贮饲料尽快进 入乳酸发酵阶段非常有效，从而使pH值迅速下降，蛋白水解作用减弱，青贮饲料中氨态氮含 量减少。在美国、加拿大、瑞士、德国、日本等发达国家，为了用不同作物调制出优质青贮，都 在广泛研究和使用各种细菌制剂。添加乳酸菌菌剂可以明显改善青贮品质，提高乳酸含量。 目前市场上，我国乳酸菌剂较少，现有产品中多为国外进口，在推广过程中存在成本高的缺 陷。
[0005] 随着酶工程技术的不断发展，酶制剂的应用也越来越受到人们的重视。目前，青贮 中使用的酶制剂主要是纤维素酶、淀粉酶和木聚糖酶等。这些酶通过降解粗饲料中的纤维 素、半纤维素和淀粉等多糖，成为单糖，可有效解决青贮中可发酵底物不足、纤维含量过高 的问题，从而达到促进乳酸发酵，提高饲料利用率及动物生产性能的目的。在实际应用中 常是酶与乳酸菌菌剂配合使用，以期发挥添加剂的最大效应。该类添加剂已经在豆科牧草， 玉米秸杆等青贮中利用，但目前仍没有单独适用于暖季型牧草的类似的生物添加剂。
【发明内容】
[0006] 本发明针对现有技术中的不足，提供了一种植物乳杆菌及其在暖季型牧草青贮中 的应用。
[0007] 为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
[0008] -种植物乳杆菌，所述的植物乳杆菌菌株为LP1，分类命名为Lactobacillus plantarum，在中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏号为CGMCC No. 10473。
[0009] 所述植物乳杆菌的16S rDNA基因序列如SEQ ID No.l所示。
[0010] 所述的植物乳杆菌的生物学特性为：菌株在固体培养基上30°C培养48h，生长良 好，可形成边缘整齐的乳白色菌落；菌株革兰氏染色呈阳性，显微镜下的细胞形态为短杆 状、无芽孢;氧化酶阴性，具有较强的生长及产酸性能;在起始pH值为3.5-8.0的培养基上能 生长，在10°C条件下呈现微弱生长，在15°C_40°C条件下生长状况良好，在不大于6.5 %NaCl 的条件下生长状况良好。
[0011] 所述的植物乳杆菌在制备暖季型牧草青贮饲料中的应用。
[0012] -种生物添加剂，所述的生物添加剂包括植物乳杆菌LP1和纤维素酶。
[0013] 所述生物添加剂在制备暖季型牧草青贮饲料中的应用。
[0014] 所述暖季型牧草青贮饲料的制备方法为:将植物乳杆菌LP1与纤维素酶加水活化 15-30min后，喷洒在刈割并切短的暖季型牧草上混合均匀，然后将暖季型牧草压实密封进 行发酵，获得暖季型牧草青贮饲料。
[0015] 所述植物乳杆菌LP1的添加量不低于109CFU/kg暖季型牧草，纤维素酶的添加量 不低于100U/kg暖季型牧草，所述暖季型牧草压实后的密度为500kg/m 3以上。
[0016] 获得的暖季型牧草青贮饲料，其pH小于4，乳酸含量提高，氨态氮含量下降，丁酸含 量低于检测限。
[0017] 所述发酵的条件为:发酵温度为15-25°c，发酵时间为30-60d。
[0018] 本发明的有益效果为:与自然青贮相比，接种植物乳杆菌LP1与纤维素酶制成的生 物添加剂后，暖季型牧草青贮的pH明显降低，达到4.0以下;乳酸含量得到明显提高，同时氨 态氮含量下降，丁酸含量低于检测限，明显提高了暖季型牧草青贮的发酵品质。所述的生物 添加剂不仅效率高，而且对家畜健康无不良影响，对环境无污染，添加过程易于掌握，可广 泛应用于暖季型牧草青贮饲料的制备领域。
[0019] 生物材料保藏说明
[0020] 分类命名:植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum);菌株编号:LP1。
[0021]保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 [0022] 保藏机构简称:CGMCC
[0023]地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号
[0024]保藏日期：2015年1月30日
[0025] 保藏中心登记入册编号：CGMCC No. 10473。
【具体实施方式】
[0026] 下面结合实施例对本发明做进一步说明，以下的实施例便于更好地理解本发明， 但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法;所用的材料、 试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0027] 实施例1:植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)LPl的分离与鉴定
[0028]取河北地区天然野生牧草青贮20g，加入180mL蒸馏水，用震荡器震荡30min，10 一 I ΠΓ6梯度稀释。分别从各梯度稀释液中取lmL至培养皿中，加入10-15mL灭菌后的MRS固体培 养基上，摇匀，待其冷却凝固，静置厌氧培养48h，挑取菌落形态、大小、颜色和光泽度有明显 差别的单菌落，重复划线，直至得到纯菌落。
[0029]对分离筛选得到的菌株进行鉴定，根据菌株的细胞形态、生理生化特征和16S rDNA基因序列进行综合分析，鉴定菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，命名为 LP1，是一株新的植物乳杆菌。
[0030] 菌株LP1的生物学特性为:LP1菌株在MRS固体培养基上培养24h，菌株生长良好，可 形成边缘整齐的乳白色菌落;菌株革兰氏染色呈阳性，显微镜下的细胞形态为短杆状、无芽 孢;氧化酶阴性，具有较强的生长及产酸性能。
[0031] 根据GB4789.35-2010对菌株不同碳源的同化能力进行检测，其对碳源发酵的实验 结果如表1所示；16S rDNA基因序列如SEQ ID N0.1所示。
[0032]表1:LP1菌株的碳源发酵实验结果
[0033]
[0034]
[0035] 注:ATCC 14917τ为植物乳杆菌模式菌株，"+"为阳性；为阴性。
[0036] 实施例2:植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)LPl