灰灰菜全株植物提取物的新用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及灰灰菜全株植物提取物的新用途，属于药物、天然药物技术领域。
【背景技术】
[0002] 癌症是严重威胁人类健康的重大疾病，已成为当今世界面临的一个重大的公共卫 生问题。肺癌是世界范围内排名首位的肿瘤致死性疾病，肺癌根据病理形态可以分为小细 胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC)和非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer， NSCLC)，其中非小细胞肺癌占所有肺癌的85%左右。非小细胞肺癌大部分在发现时已经为 晚期病例且其5年生存率只有15%-16%。另外目前临床上采用的化疗药物多数疗效有限具 有较大的毒副作用且易被肿瘤耐受，严重影响患者的治疗效果，因此亟待开发有效的药物。 中药是我国传统的天然医药，具备传统化疗药物不具备的特殊优势：种类繁多，来源广泛； 活性化合物具有立体空间结构优势，毒副作用低；作用靶点众多。近年来的一些的研宄证 明，药用植物的提取物在体内和体外都显示出良好的抗癌活性。
[0003] 灰灰菜（Chenopodium album Linn)又名藜，为藜科一年生草本植物，广泛分布于 世界各国，多生于田间路边，全草可入药，亦可作为野菜而食用，灰灰菜有多种药理学功效， 它可以用作抗病毒，抗真菌，抗炎，抗过敏及免疫调节活性。然而对此种植物的抗癌功效研 宄比较少，Menka Khoobchandani等学者研宄发现其灰灰菜采用石油醚、乙醇和甲醇进行 提取，发现其甲醇相提取物对乳腺癌细胞的生长抑制最为明显，但其在抗肺癌活性及其作 用机理没有进行探宄。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供灰灰菜全株植物石油醚提取物的一种新用途，该新用途是灰 灰菜全株植物提取物在制备抗非小细胞肺癌药物中的应用。
[0005] 本发明的另一目的在于提供所述灰灰菜全株植物石油醚相提取物的制备方法，具 体包括以下步骤： (1) 利用95%乙醇对灰灰菜枝叶进行浸泡过夜，然后超声提取(在50~80°C，功率为200W 条件下）至少3次，每次提取0. 5~2h，减压抽滤得到乙醇提液，再多次用相同体积的乙醇浸 泡并重复第一次的提取流程，直到乙醇提取液无色为止，最后合并所有的乙醇提取液； (2) 利用旋转蒸发仪对灰灰菜全株植物的乙醇提取液进行减压蒸馏，得到乙醇提取物 浸膏，然后用蒸馏水对其进行溶解； (3) 用石油醚对灰灰菜全株植物的乙醇提取物的水溶液进行多次萃取，直到萃取相无 色为止，合并多次萃取得到石油醚相萃取物； 本发明的有益效果： (1)本发明首次探索研宄灰灰菜石油醚相提取物在抗非小细胞肺癌上的应用。
[0006] (2)试验证明，本发明的灰灰菜全株植物石油醚相提取物对人非小细胞肺癌A549 细胞的增殖具有一定程度的抑制作用，随着提取物作用浓度的增加及作用时间的延长，对 A549细胞生长的抑制作用呈现出明显的剂量-时间依赖效应，Hoechst染色及流式细胞仪 检测结果表明灰灰菜石油醚相提取物可以引起细胞核染色质聚缩、细胞周期Gl期阻滞及 诱导早期凋亡的细胞比例增加，并且呈现明显的剂量依赖关系；因此本发明对于制备抗非 小细胞肺癌药物具有重要意义。
【附图说明】
[0007] 图1为灰灰菜全株植物石油醚相提取物对A549细胞的生长抑制柱形图； 图2为灰灰菜全株植物石油醚提取物对A549细胞克隆形成剂量曲线图； 图3为灰灰菜全株植物石油醚相取物对A549细胞核染色图； 图4为流式细胞仪检石油醚相提取物对A549细胞周期影响图； 图5为流式细胞仪检测石油醚相提取物对A549细胞早期凋亡作用图。
【具体实施方式】
[0008] 下面结合附图和【具体实施方式】对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围 并不限于所述内容。
[0009] 实施例1 灰灰菜全株植物石油醚相提取物的制备，具体包括以下步骤： (1)对采集得到的全株灰灰菜枝叶进行阴干，得到干燥的灰灰菜全株植184. 25g，与浓 度95%乙醇混合浸泡过夜，然后超声提取3次，超声提取的温度为50°C，功率为200W，每次 提取0. 5 h，然后将超声提取液过滤得到滤液1，再以与初始比例相同的浓度95%乙醇浸泡 滤渣，不断重复上述相同的提取流程，得到滤液2-n，直到浓度95%乙醇提取液无色为止，最 后合并所有的滤液，得到总的浓度95%乙醇提取液。
[0010] (2)利用旋转蒸发仪对灰灰菜总的浓度95%乙醇提取液进行减压蒸馏，得到浓度 95%乙醇提取物浸膏，然后用蒸馏水对其进行溶解。
[0011] (3)用石油醚对灰灰菜全株植物乙醇提取物的水溶液进行多次萃取，直到萃取相 无色为止，合并多次萃取得到的萃取相，利用旋转蒸发仪对上述萃取相进行减压蒸馏，得到 灰灰菜全株植物石油醚提取部分的浸膏。
[0012] 实施例2 (1)对采集得到的全株灰灰菜枝叶进行阴干，得到干燥的灰灰菜全株植物184. 25g，与 浓度95%乙醇混合浸泡过夜，然后超声提取4次，超声提取的温度为60°C，功率为200W，每 次提取I h，然后将超声提取液过滤得到滤液1，再以与初始比例相同的浓度95%乙醇浸泡 滤渣，不断重复上述相同的提取流程，得到滤液2-n，直到浓度95%乙醇提取液无色为止，最 后合并所有的滤液，得到总的浓度95%乙醇提取液。
[0013] (2)利用旋转蒸发仪对灰灰菜总的浓度95%乙醇提取液进行减压蒸馏，得到浓度 95%乙醇提取物浸膏，然后用蒸馏水对其进行溶解。
[0014] (3)用石油醚对灰灰菜全株植物乙醇提取物的水溶液进行多次萃取，直到萃取相 无色为止，合并多次萃取得到的萃取相，利用旋转蒸发仪对上述萃取相进行减压蒸馏，得到 灰灰菜全株植物石油醚提取部分的浸膏。
[0015] 实施例3 (1)对采集得到的全株灰灰菜枝叶进行阴干，得到干燥的灰灰菜全株植物184. 25g，与 浓度95%乙醇混合浸泡过夜，然后超声提取5次，超声提取的温度为80°C，功率为200W，每 次提取2 h，然后将超声提取液过滤得到滤液1，再以与初始比例相同的浓度95%乙醇浸泡 滤渣，不断重复上述相同的提取流程，得到滤液2-n，直到浓度95%乙醇提取液无色为止，最 后合并所有的滤液，得到总的浓度95%乙醇提取液。
[0016] (2)利用旋转蒸发仪对灰灰菜总的浓度95%乙醇提取液进行减压蒸馏，得到浓度 95%乙醇提取物浸膏，然后用蒸馏水对其进行溶解。
[0017] (3)用石油醚对灰灰菜全株植物乙醇提取物的水溶液进行多次萃取，直到萃取相 无色为止，合并多次萃取得到的萃取相，利用旋转蒸发仪对上述萃取相进行减压蒸馏，得到 灰灰菜全株植物石油醚提取部分的浸膏。
[0018] 实施例1~3中得到的灰灰菜全株植物石油醚提取物在抑制癌细胞生长中的应用 将非小细胞肺癌A549培养在含10%胎牛血清、1%青霉素和链霉素的混合液的 RPMI-1640完全培养基中，置于37°C，5%C02的培养箱中，细胞进入对数生长期后，加入 0. 25%的EDTA-胰蛋白酶溶液消化细胞，然后用RPMI-1640完全培养基调整成浓度为5 X IO4 个/ml的细胞悬液；再将其接种于96孔培养板中，每孔10〇μ1，于37°C，5%C02的培养箱中 培养24h使细胞贴壁； (1)将实施例1、2、3中制得的灰灰菜全株植物石油醚提取物溶解于DMSO中，制成浓度 为100mg/ml的筛选母液备用。
[0019] (2)利用DMSO进行倍比稀释，分别得到石油醚提取物终浓度为50(^g /ml，25〇μ8 /ml，125Pg /ml，62.5Pg /ml，31.25Pg /ml，15.63Pg /ml，7.81/ml 的 DMSO 溶液，分别设置试 验组和对照组进行试验： 试验组：将灰灰菜石油醚提取物加入到96孔板的A549细胞培养孔内，每孔加入?μL， 再向每个培养孔中补加100K1RPMI-1640完全培养基。设置不同的提取物作