本文所公开的主题的目的是提供生物治疗剂的全身浓度与生物治疗剂在关节内 空间的局部浓度的比率，此比率在将交联的组合物递送到关节内空间后的约1天至约90天 之间是小于1的。在所公开的主题的某些优选实施方式中，生物治疗剂的全身浓度与生物 治疗剂的局部浓度的比率将低于〇. 1。如本文所指，生物治疗剂的"局部浓度"是在其所递 送的体内空间中的生物治疗剂的浓度，而生物治疗剂的"全身浓度"是在其所递送的器官中 的生物治疗剂的平衡血清浓度。
[0097] 生物治疗剂的局部浓度与生物治疗剂的全身浓度的比率将受多种因素影响。依据 所公开的主题的制剂所施用的体内空间，此比率将取决于血管化程度、小静脉或毛细血管 的周围密度、淋巴清除率和/或所述体内空间的流体流通率。其它的因素也会影响此比率， 这包括制剂所递送的受试者的相对尺寸、受试者活动的相对水平以及制剂所递送的空间的 体积。比率还受生物治疗剂的半衰期的影响。
[0098] 出于说明而非限制的目的，用于递送根据所公开的主题的制剂的合适的体内空间 包括玻璃体内空间、关节内空间、腹膜内空间、动脉内空间、骨内（intra-osseal)空间、窦 腔或外分泌管。出于说明而非限制的目的，本文对在递送根据所公开的主题的制剂至关节 内空间后，生物治疗剂的局部浓度与生物治疗剂的全身浓度的比率作出参考。
[0099] 关于将组合物递送至关节内空间的实施方式，通过从所述的交联的组合物中相对 缓慢、受控地洗脱生物治疗剂来使得生物治疗剂的全身浓度与局部浓度的比率小于1。从交 联的组合物中洗脱后，生物治疗剂暂时性地保留在关节内空间中，在此其要么可以结合靶 抗原、受体或配体或与其相互作用，或要么实现所期望的局部治疗效果。在一些优选的实施 方式中，在进入全身循环之前，显著比例的生物治疗剂被消除或失活。可以通过免疫介导的 清除、肾过滤、酶分解或任何其它的方式产生消除。
[0100] 根据本文所公开的主题，在递送制剂至关节内空间后所获得的生物治疗剂的全身 浓度与生物治疗剂的局部浓度的比率是在约1至0之间。在一些优选实施方式中，此比率 小于0.1。在一些优选的实施方式中，此比例是在约0.1至约0.001之间。在其它的优选 实施方式中，此比值是在约0. 2至约0. 002之间。在另外的优选实施方式中，此比值是在约 0. 5至约0. 005之间。如表3、表4A和表4B所示，根据所公开的主题的某些交联的组合物 制剂的关节内递送实现了约〇. 2至约0. 01的比率。重要地，这一比率比施用未配制的生物 治疗剂所得到的比率（在约5至约7之间）低约25至500倍。类似的结果示于表5和表 6中。关于图10,如下述实施例7所述，在监测期间，滑液中的生物治疗剂的浓度比血清中 的生物治疗剂的浓度高约2个数量级。如下述实施例8所讨论，在递送根据所公开的主题 的制剂后，局部浓度与血清浓度的这一比例维持30至90天之间。
[0101 ] 在根据所公开的主题的一些实施方式中，提供了在递送交联的组合物至体内空间 后的约1至约90天的持续时间中，小于1的生物治疗剂的全身浓度与生物治疗剂的局部浓 度的比率。在一些优选的实施方式中，提供了在递送后约1至约7天中，小于1的比率。在 另外的实施方式中，提供了在递送后约1至约14天中，小于1的比率。在根据所公开的主题 的其它优选实施方式中，提供了在递送后约14至约30天中，小于1的比率。在进一步的实 施方式中，提供了在递送后约30至约60天中，小于1的比率。在进一步的实施方式中，提 供了在递送根据所公开的主题的交联的组合物至体内空间后的约60至约90天之间，小于1 的生物治疗剂的全身浓度与生物治疗剂的局部浓度的比率。在另外的优选实施方式中，此 比率小于〇. 1。
[0102] 3.治疗方法
[0103] 归因于上述所期望的受控释放性质以及所获得的小于1的生物治疗剂的全身浓 度与局部浓度的比率，所公开的主题的聚合的（交联的）组合物尤其有利于疾病的治疗。利 用包括递送本文所公开的交联的组合物的方法，恰当地治疗了大量疾病，这包括但不限于 癌症、眼部疾病、炎症、自身免疫性疾病、创伤、骨折、感染性疾病或心血管疾病。方法包括将 生物治疗剂与多个亲水性聚合物链组合以形成组合物，将此组合物与激活缓冲液组合以诱 导亲水性聚合物链的聚合物间聚合，以形成包含可逆沉淀的生物治疗剂的交联的组合物并 向有需要的患者施用交联的组合物，从而治疗疾病。
[0104] 在根据所公开的主题的一些实施方式中，提供了方法以治疗局部化癌症如肿瘤。 此类方法将包括以下步骤：混合制剂并交联此制剂以形成所公开的交联的组合物，并递送 交联的组合物例如至肿瘤、至供给肿瘤的血管或靠近肿瘤的体内空间。在进一步的实施方 式中，生物治疗剂是一种抗血管生成药物，如抗-VEGF抗体。
[0105] 在一些实施方式中，提供了治疗眼部疾病如黄斑变性的方法。此类方法将包括 以下步骤：混合制剂并交联此制剂以形成所公开的交联的组合物，并递送交联的组合物例 如至眼部的玻璃体内空间。在进一步的实施方式中，生物治疗剂将是抗血管生成药物，如 抗-VEGF抗体。在另外的非限制性实施方式中，提供了治疗炎症的方法。此类方法将包括以 下步骤：混合制剂并交联此制剂以形成所公开的交联的组合物，并递送交联的组合物例如 至炎症部位或靠近炎症部位的体内空间。在进一步的实施方式中，生物治疗剂将是抗炎化 合物如抗体，其结合并中和炎性细胞因子。在一些实施方式中，药物是抗TNF抗体、抗IL-13 抗体或抗IL-I抗体。
[0106] 在一些实施方式中，提供了治疗自身免疫疾病如类风湿关节炎的方法。此类方法 将包括以下步骤：混合制剂并交联此制剂以形成所公开的交联的组合物，并递送交联的组 合物例如至受影响的关节的关节内空间。在进一步的实施方式中，生物治疗剂是中和抗炎 细胞因子的抗体，如抗TNF抗体。
[0107] 在一些实施方式中，提供了治疗关节疾病如骨关节炎的方法。此类方法将包括以 下步骤：混合制剂并交联此制剂以形成所公开的交联的组合物，并递送交联的组合物例如 至受影响的关节的关节内空间。在进一步的实施方式中，生物治疗剂是中和抗炎细胞因子 的抗体，如抗TNF抗体，中和在受影响的关节中破坏软骨的蛋白酶的抗体，如抗基质金属蛋 白酶13抗体。
[0108] 在一些实施方式中，提供了治疗创伤的方法。此类方法将包括以下步骤：混合制剂 并交联此制剂以形成所公开的交联的组合物，并递送交联的组合物例如至创伤或靠近创伤 的体内空间。在进一步的实施方式中，生物治疗剂是促进创伤愈合、抑制瘢痕形成或预防感 染的蛋白。
[0109] 在一些实施方式中，提供了治疗骨折的方法。此类方法将包括以下步骤：混合制剂 并交联此制剂以形成所公开的交联的组合物，并递送交联的组合物例如至骨折处或靠近骨 折处的体内空间。在进一步的实施方式中，生物治疗剂是促进骨折愈合的蛋白。
[0110] 在一些实施方式中，提供了治疗感染的方法。此类方法将包括以下步骤：混合制 剂并交联此制剂以形成所公开的交联的组合物，并递送交联的组合物例如至身体的受感染 区。感染可以由病毒病原体、细菌病原体或真菌病原体引起。在进一步的实施方式中，生物 治疗剂是针对病毒、细菌或真菌病原体的抗体。
[0111] 在一些实施方式中，提供了治疗心血管疾病如冠状动脉疾病的方法。此类方法将 包括以下步骤：混合制剂并交联此制剂以形成所公开的交联的组合物，并递送交联的组合 物例如至体内空间。在进一步的实施方式中，生物治疗剂是抗凝血、抗炎或抗血脂的蛋白。
[0112] 在进一步的实施方式中，提供了治疗因手术形成的瘢痕如术后伤口（would)粘连 的方法。手术可以是侵入性的，其包括例如肠切除，或非侵入性的，其包括例如关节韧带修 复。此类方法将包括以下步骤：混合制剂并交联此制剂以形成所公开的交联的组合物，并递 送交联的组合物例如至手术部位。递送可以发生于任何手术创伤闭合之前或之后。在进一 步的实施方式中，生物治疗剂是抗纤维化的蛋白。
[0113] 在进一步的实施方式中，提供了治疗皮肤疾病如银肩病的方法。此类方法将包括 以下步骤：混合制剂并交联此制剂以形成所公开的交联的组合物，并递送交联的组合物例 如至靠近银肩病病变的皮下空间。在进一步的实施方式中，生物治疗剂是抗炎或免疫调节 蛋白。
[0114] 在进一步的实施方式中，提供了治疗子宫内膜异位的方法。此类方法将包括以下 步骤：混合制剂并交联此制剂以形成所公开的交联的组合物，并递送交联的组合物例如至 腹膜内空间。在进一步的实施方式中，生物治疗剂是抗雌激素蛋白。
[0115] IV.试剂盒
[0116] 根据所公开的主题的另一方面，提供了试剂盒，其在各种组合物中单独地包含多 个亲水性聚合物链、生物治疗剂和任选的激活和悬浮缓冲液，以及用于将交联的组合物递 送至体内空间的递送装置。多种递送装置都适用于所公开的主题的制剂和交联的组合物。 出于说明而非限制的目的，可以使用单一内径注射器、双内径注射器或具有混合头的多通 道递送装置。在一些实施方式中，在包括混合头的多通道递送装置的分别的通道中提供制 剂和激活缓冲液。在另外的实施方式中，提供生物治疗剂和多个亲水性聚合物链为用于给 药前的即刻复溶的交联的组合物。
[0117] 在一些实施方式中，试剂盒可以包括含有悬浮缓冲液和多个亲水性聚合物链（如 上所述）的第一溶液，和含有生物治疗剂和激活缓冲液（也如上所述）的第二溶液。在其 它非限制性实施方式中，提供了单独包括含有生物治疗剂和多个亲水性聚合物链的第一溶 液和激活缓冲液的试剂盒。为了方便，可以在双内径注射器或多通道递送装置的各自的通 道中提供这些组分。
[0118] * * * *
[0119] 本文引用了各种出版物，其内容通过引用以其整体并入本文。
[0120] 除了下述所要求保护的【具体实施方式】，所公开的主题还涉及具有下述要求保护的 从属特征和上述公开的任何其它可能组合的其它实施方式。如此，从属权利要求中所示的 和上述所公开的特定特征可以以其它方式在所公开的主题的范围内相互组合，使得所公开 的主题应被视为还具体涉及具有任何其它可能组合的其它实施方式。因此，所公开的主题 的【具体实施方式】的上述描述是出于说明和描述的目的。其不意图穷举或限制所公开的主题 为所公开的那些实施方式。
[0121] 对于本领域技术人员显而易见的是，在所公开的主题的方法和系统中进行各种修 改和变化而不脱离所公开的主题的精神或范围。因此，指的是所公开的主题包括在所附的 权利要求及其等同物的范围之内的修改和变化。
[0122] 5.实施例
[0123] 5.1 实施例 1
[0124] 将按1 :1比例用硫醇基团或丙烯酸酯基团官能化的8-臂PEG和按PEG固体计的 5%、6. 3%、7. 5%、11. 5%或20%重量体积比的阿达木单抗的制剂与如所示的磷酸盐激活 缓冲液（pH 8.0)或碳酸盐激活缓冲液（pH 9. 5)混合以形成交联的组合物。如所示，抗体 负载相对于PEG固体是20%、27%、32 %或50%。体外孵育18天和26天后，对从交联的组 合物释放的生物治疗剂进行尺寸排阻色谱，以确定相对于聚集体和片段的比例的所释放的 单体的比例。高比例的单体（如>90%)指示了生物治疗剂的良好的可逆沉淀和再溶解。 如图IlA和图IlB所示，在制剂聚合后18天和26天时从交联的组合物中释放出高比例的 单体。如图IlA所示，其中使用了用NHS官能化的PEG，产生了高比例的聚集体和片段。
[0125] 用剂量为8mg或0. 8mg的冻干的阿达木单抗抗体在pH 8的磷酸钠缓冲液溶液中 配制按PEG固体重量计5 %和按PEG固体重量计20 %的4-臂PEG-丙烯酸酯和4-臂PEG-硫 醇。将50 μ L的制剂注射到健康大鼠后肢关节内空间中。组A和组C接收从20%的PEG固 体形成的交联的组合物，组B和组D接收由5%的PEG固体配制的交联的组合物，且组E和 组G施用未配制的mAb。组A和组B接收8mg的mAb，而其余组接收0· 8mg的mAb。表7示 出了通过TNF-α结合定量分析所测量的抗体的血清暴露，而图12示出了在递送后多达14 天随时间变化的mAb的浓度。经由交联的组合物的递送显著地降低了阿达木单抗的血清浓 度。图13Α、图13Β和图13C是在注射到大鼠后肢后和从大鼠后肢移除后的交联的组合物的 照片。
[0126] 5. 2 实施例 2
[0127] 将在50 μ 1磷酸盐缓冲盐水中的4. 25mg的未配制的阿达木单抗抗体施用至健康 大鼠后肢的关节内空间中。在给药后24小时间隔地监测阿达木单抗的血清浓度和滑液浓 度。如图