抗-c5a抗体和使用所述抗体的方法

专利名称：抗-c5a抗体和使用所述抗体的方法
技术领域：
技术领域是医学、免疫学、分子生物学和蛋白质化学。
背景技术：
补体系统与身体的其它免疫系统联合作用以防范细胞和病毒病原体的侵入。有至少25种补体蛋白质，它们以血浆蛋白质和膜辅助因子的复合物集合存在。血浆蛋白质组成脊椎动物血清球蛋白的约10%。补体组分通过在一系列复杂但精确的酶切割和膜结合事件中互相作用而实现它们的免疫防御功能。所致补体级联导致具有调理素功能、免疫调节性功能和裂解功能的产物的产生。与补体活化有关的生物学活性的简要总结，参见，例如，TheMerck Manual,第 16 版。补体级联经由经典途径、旁路途径或凝集素途径而进行。这些途径共用很多组分，尽管它们的起始步骤不同，它们汇聚且共用负责活化和破坏靶细胞的相同的“末端补体”组分(C5 至 C9) 。经典途径(CP)通常通过对靶细胞上的抗原位点的抗体识别以及结合来启动。旁路途径(AP)可以是非抗体依赖性的，并且可通过病原体表面上的某些分子来启动。另外，凝集素途径通常从结合甘露糖的凝集素(MBL)与高甘露糖底物的结合来启动。这些途径聚集在一点，在此处，补体组分C3被活性蛋白酶切断以生成C3a和C3b。活化补体攻击的其它途径可随后在导致补体功能不同方面的序列事件中起作用。C3a是一种过敏毒素。C3b结合细菌和其它细胞以及某些病毒和免疫复合物，并标记它们以从循环中除去(起该作用的C3b称作调理素)。C3b的调理素功能通常被视作补体系统最重要的抗感染作用。具有阻断C3b功能的遗传损伤的患者易于被多种致病性生物体感染，而后来在补体级联序列中具有损伤的患者，即具有阻断C5功能的损伤的患者，被发现仅更易于仅奈瑟球菌属(Neisseria)感染，因此仅仅在某种程度上更易感。C3b还与每种途径特有的其它组分形成复合物，以形成经典的或替代的C5转化酶，其将C5裂解为C5a和C5b。因此C3被认为是补体反应序列中的中枢蛋白质，因为它对旁路途径和经典途径而言均是必要的。血清蛋白酶因子I (其作用于C3b以产生iC3b)调节会调节C3b的该特性。尽管仍然具有调理素功能，但iC3b不能形成有活性的C5转化酶。C5是一种190 kDaP球蛋白，在正常血清中以大约75 μ g/mL (0.4 μ Μ)的浓度存在。C5是糖基化的，其质量的约1.5-3%归因于碳水化合物。成熟的C5是一种异源二聚体，由与655个氨基酸75 kDa3链通过二硫键连接的999个氨基酸115 kDa α链链组成。C5作为单拷贝基因的单链前体蛋白质产物而合成(Haviland等人(1991) J Iimunol146:362-368)。该基因的转录物的cDNA序列会预测1658个氨基酸的分泌型前-C5前体以及18个氨基酸的前导序列{参见，例如，美国专利号6，355，245)。前-C5前体在氨基酸655和659之后断裂，以产生:作为氨基末端片段的β链(上述序列的氨基酸残基+1至655)，和作为羧基末端片段的α链(上述序列的氨基酸残基660至1658)，其中在两者之间缺失四个氨基酸(上述序列的氨基酸残基656-659)。C5a被替代或经典C5转化酶从C5的α链切割，作为包含α链的前74个氨基酸(即上述序列的氨基酸残基660-733)的氨基末端片段。C5a的11 kDa质量的约20%归因于碳水化合物。转化酶作用的切割位点是在上述序列的氨基酸残基733处或与其直接相邻。结合此切割位点或与其相邻处的化合物具有阻断C5转化酶接近该切割位点的潜力，因此作为补体抑制剂起作用。还可通过除C5转化酶活性之外的方式活化C5。有限的胰蛋白酶消化、参见，例如，Minta 和 Man (1997) J Immunol 1597-1602 和 Wetsel 和 Kolb (1982) J Immunol128:2209-2216)、凝血酶和和酸处理(Yamamoto和Gewurz (1978) J Immunol 120:2008和Damerau 等人(1989) Molec Immunol 26:1133-1142)也可切割 C5，并产生有活性的 C5b。C5的切割会释放出C5a (—种有效的过敏毒素和趋化因子)和C5b (其通过一系列蛋白相互作用导致裂解性的末端补体复合物C5b-9的形成)。通过放大下游炎症因子(诸如水解酶、活性氧、花生四烯酸代谢物和各种细胞因子)的释放，C5a和C5b-9也具有多向性细胞活化性质。C5b与C6、C7和C8结合，以在靶细胞表面上形成C5b_8复合物。在结合几种C9分子后，形成膜攻击复合物(MAC、C5b-9、末端补体复合物一TCC)。当足够数目的MAC插入靶细胞膜中时，它们造成的开口(MAC孔)会介导靶细胞的快速渗透性裂解。更低的非裂解浓度的MAC可产生其它效应。具体地，少量C5b-9复合物膜插入在内皮细胞和血小板中，可导致有害的细胞活化。在一些情况下，活化可先于细胞裂解。如上文所述，C3a和C5a是过敏毒素。这些活化的补体组分可触发肥大细胞脱粒，这会释放出组胺(从嗜碱性粒细胞和肥大细胞)和其它炎症介质，从而导致平滑肌收缩、血管渗透性增加、白细胞活化以及其它炎性现象，包括导致细胞过多的细胞增殖。C5a也起趋化肽的功能，用于吸引促炎症粒细胞至补体活化位点。C5a受体存在于支气管和肺泡上皮细胞和支气管平滑肌细胞的表面上。C5a受体还存在于嗜酸性粒细胞、肥大细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和活化的淋巴细胞上。

发明内容
本公开内容尤其涉及发明人对一系列人源化的单克隆抗体的制备，所述单克隆抗体特异性地结合游离C5a蛋白(即，已经从C5蛋白蛋白水解地切割下的C5a)，但是不结合旁系同源物蛋白片段游离的C4a或游离的C3a [所述抗体在本文中经常称作抗_C5a抗体或抗_C5a新表位抗体]。如本文所述和在工作实施例中例证的，制备的抗_C5a抗体表现出对游离C5a的高亲和 力。例如，本文所述的所有人源化的抗_C5a抗体会以小于1.25纳摩尔的Kd结合游离C5a。许多抗体会以小于300皮摩尔的Kd结合游离C5a (例如，游离的人C5a);几种抗体会以小于100皮摩尔的Kd结合游离C5a。另外，本文所述的人源化的抗_C5a抗体还会抑制C5a介导的信号传递。在下面详细说明了并在工作实施例中例证了本文所述抗体的其它结构和功能性质。使用类风湿性关节炎(RA)的动物模型和具有与人源化抗体副本类似的性质的替代物抗-小鼠C5a抗体，发明人还已经证实了抗_C5a抗体在治疗RA中的效力。还在工作实施例中显示了实验，所述实验证实了人源化的抗_C5a抗体在人C5a诱发的嗜中性粒细胞减少的动物模型中的积极治疗效果。因此，发明人认为，本文所述的抗_C5a抗体或其抗原结合片段在诊断和治疗方法的宿主中是有益的，所述方法与C5a介导的信号传递会促进其发病机制的病症有关。例如，发明人认为，本文所述的人源化的抗_C5a抗体可用于治疗或预防RA和其它补体相关病症，包括、但不限于:非典型溶血性毒症综合征(aHUS)、年龄相关的黄斑变性(AMD)、脓毒症、烧伤(例如，严重烧伤)、抗磷脂综合征(APS)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、炎症相关的疼痛、哮喘、狼疮肾炎、宫内生长迟缓(IUGR)、HELLP综合征(溶血性贫血、肝酶升高和低血小板计数)、肺出血肾炎综合征和慢性阻塞性肺疾病(COPD)。特别适合用人源化的抗_C5a抗体或其抗原结合片段进行治疗的其它病症，是本领域已知的，且列举在本文中。本文所述的人源化的抗_C5a抗体具有许多优点，例如，胜过结合全长或成熟C5并抑制其切割的试剂。象这样的试剂一样，本文所述的抗_C5a抗体(和其抗原结合片段)能够抑制由C5片段C5a介导的C5活化的anaphylatoxic下游效应。也就是说，本文所述的抗_C5a抗体可以抑制C5a介导的炎症应答，已知所述炎症应答在补体相关病症(例如，但不限于、脓毒症、RA和哮喘)的发病机制中起组成作用。但是，由于人血清中的C5浓度是大约 0.37 μ M (Rawal 和 Pangburn (2001) J Immunol 166 (4): 2635-2642)，经常需要使用抗-C5抗体的高浓度和/或频繁施用来有效地抑制C5，并从而抑制人类中的C5a介导的炎症应答。与C5不同，C5a以远远更低的浓度存在于血液中，且经常被限制在局部补体活化的特定区域，例如，哮喘患者的肺、RA患者的关节或AMD患者的眼中的玻璃疣。因而，与例如抗-C5抗体相比，本文所述的抗_C5a抗体可以以远远更低的剂量和/或更低的频率施用(例如，局部地施用给补体活化部位)给人类，并有效地在人类中提供相同的或更大的C5a抑制。与抗-C5抗体的所需剂量相比，施用更低剂量的抗_C5a抗体的能力，也允许其它递送途径，例如，皮下给药、肌 肉内给药、肺内递送和通过使用可生物降解的微球来给药。抗原C5a相对于C5而言更低的浓度，也有利于抗_C5a抗体相对于例如靶向末端补体的治疗性抗体的半衰期而言更长的半衰期，这是由于抗原介导的抗体清除贡献的减少。另外，通过它们的安全性特性，也可以将本文所述的抗_C5a抗体与抑制末端补体的治疗剂(诸如C5抑制剂)区分开。抑制末端补体组分(诸如C5、C5b、C6、C7、C8或C9)的一个显著后果是，宿主免疫系统针对末端补体经常裂解的具荚膜细菌(例如，脑膜炎奈瑟球菌{Neisseria和淋病奈瑟球菌{Neisseria的保护降低。参见，例如，Haeney 等人(1980) Clin Exp Immunol 迎:16-24 和 Brodsky (2009) Blood113(26):6522-6527。由于所述抗_C5a抗体会抑制C5a介导的炎症应答，但是不会阻止裂解那些具荚膜细菌的末端补体复合物的形成，接收本文所述的治疗性抗_C5a抗体的患者不需要保护性疫苗接种，例如，针对脑膜炎奈瑟球菌和淋病奈瑟球菌的疫苗接种。因此，在一个方面，本公开内容表征了一种结合游离C5a的分离的抗体或其抗原结合片段。在有些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合游离的人C5a (hC5a ;例如，包含在SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列或由其组成的人C5a蛋白)。在有些实施方案中，所述抗体可以结合去精氨酸化(desarginated)形式的游离C5a,例如,包含在SEQ ID NO:2中所述的氨基酸序列或由其组成的去精氨酸化形式的人C5a。所述抗体可以结合游离C5a的新表位，所述表位不存在于未切割的C5上，或存在于仅小部分的所有未切割的C5上。尽管本公开内容绝不限于任何具体理论或作用机理，在有些实施方案中，所述抗_C5a抗体或其抗原结合片段结合游离C5a (例如，游离hC5a)，且还可以结合未切割的、加工过的C5 (例如，血浆C5)的亚群，所述亚群构成样品中的全长C5的总群体(例如，血液或血浆样品或包含重组全长C5的样品)的小于10 (例如，小于9.5、9、8.5、8、7.5、7、6.5、
6,5.5、5、4.5、4、3.5、3、2.5、2、1.5、1、0.5,0.4,0.3,0.2 或小于 0.1)%，所述亚群完全地或部分地变性，从而暴露否则会被封闭的C5a新表位(抗_C5a抗体或片段与其结合)。因而，在有些实施方案中，本文所述的抗_C5a抗体或其抗原结合片段可以结合游离C5a，但是不会结合90%或更多的未切割的、天然的C5群体的未切割的C5蛋白。在有些实施方案中，在任意数目的适用于测试C5活性的试验(例如，溶血试验或CH50eq试验(参见下文))中，上述的部分或完全变性的C5亚群是无活性的，或具有降低的活性(例如，小于全功能的全长C5 蛋白的活性的 90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15、10、5%)。适用于测试本文所述的抗_C5a抗体在有些实施方案中可以结合的小亚群的活性的方法，是本领域已知的，并描述在本文中。在有些实施方案中，在体外溶血试验或体外CH50eq试验中，甚至在有与未切割的C5 (例如，未切割的、天然的C5)相比至少等于或大于5 (例如，5.6、6、7、8、9、10、15、20、
25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200)倍过量的所述抗_C5a抗体或其抗原结合片段存在下，本文所述的任一种抗_C5a抗体或其抗原结合片段不会抑制C5活性。在有些实施方案中，在体外溶血试验或体外CH50eq试验中，甚 至在有与未切割的、天然的C5相比约5倍至200倍(例如，约5倍至100倍、约10倍至100倍、约20倍至100倍、或约10倍至150倍)过量的所述抗_C5a抗体或其抗原结合片段存在下，本文所述的任一种抗_C5a抗体或其抗原结合片段不会抑制C5活性。抑制(例如，它与C5活性有关)包括:在例如溶血试验或CH50eq试验中，与在类似条件下和在等摩尔浓度的对照抗体(或其抗原结合片段)的效果相比，未切割的、天然的C5的活性的至少 5(例如，至少 6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55 或 60)% 降低。本文使用的“大幅抑制”表示，抑制给定的活性(例如，C5活性)的至少40 (例如，至少45、
50、55、60、65、70、75、80、85、90或95或更大)％。在有些实施方案中，所述C5得自血浆(例如，从血浆纯化或存在于血浆中，所述血浆是例如人血浆)。在有些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段以小于2 nM的Kd结合C5a蛋白(例如，人C5a蛋白)。在有些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段会以小于I nM的Kd[在本文中也称作“亚纳摩尔亲和力”]结合C5a蛋白。在有些实施方案中，在有摩尔过量的未切割的、天然的C5 (例如，纯化的和/或重组的C5)存在下，所述抗_C5a抗体或其抗原结合片段以亚纳摩尔亲和力[例如，小于或等于 9.9 X 1(Γ10 (例如，小于或等于 9 X 1(Γ10、8 χ 1(Γ10、7 χ 1(Γ10、6 χ 1(Γ10、5 χ 1(Γ10、4 χ10_1C1、3 χ 10_1C1、2.5 χ 10_1C1、2 χ 10_1C1、1 χ 10_1C1、8.0 χ 10_η、7.0 χ 10_η、6.0 χ 10_η、5.0χ 10_η、4.0 χ ΙΟ-11或3.0 χ ΙΟ-11) M的Kd ]结合游离C5a。在有些实施方案中，与未切割的、天然的C5蛋白相比，本文所述的任一种抗_C5a抗体或其抗原结合片段对游离C5a具有大至少 100 (例如，至少 110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、225、250、275、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000 或 10000)
倍的亲和力(例如，通过它的Kd来表示)。因而，在另一个方面，本公开内容表征了一种抗体或其抗原结合片段，它(a)以亚纳摩尔亲和力结合游离C5a (例如，hC5a)，且(b)结合游离C5a的亲和力比它对未切割的、天然的C5蛋白的对应亲和力大至少100 (例如，至少110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、225、250、275、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000或10000)倍。例如，在有些实施方案中，本文所述的抗_C5a抗体或其抗原结合片段可以以100 nM的Kd结合游离hC5a，并以高至少100倍(例如，至少10 nM)的Kd结合未切割的人C5蛋白的至少一个亚群。在另一个方面，本公开内容表征了一种分离的抗体或其抗原结合片段，它结合具有在SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列的游离的人C5a多肽，其中在有与人C5a (hC5a)相比摩尔过量(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、 150、200、300、400或500倍摩尔过量)的未切割的天然的人C5存在下，所述抗体或其抗原结合片段以小于1.25 χ 10_9 M的Kd结合人C5a多肽。在有些实施方案中，在有与游离hC5a相比至少或大于2倍摩尔过量、但是不大于或小于500 (例如，500、450、400、350、300、250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、25、20或15)倍摩尔过量的未切割的、天然的C5存在下，所述抗体或其抗原结合片段以亚纳摩尔亲和力(例如，本文列举的亚纳摩尔Kd中的任一种)结合游离hC5a多肽。在有些实施方案中，在有与游离hC5a相比2倍至20倍摩尔过量的未切割的、天然的C5存在下，所述抗体或其抗原结合片段以亚纳摩尔亲和力(例如，本文列举的亚纳摩尔Kd中的任一种)结合游离hC5a多肽。在有些实施方案中，在有与游离hC5a相比10倍至20倍摩尔过量的未切割的、天然的C5存在下，所述抗体或其抗原结合片段以亚纳摩尔亲和力(例如，本文列举的亚纳摩尔Kd中的任一种)结合游离hC5a多肽。在有些实施方案中，在有与游离hC5a相比5倍至15倍摩尔过量的未切割的、天然的C5存在下，所述抗体或其抗原结合片段以亚纳摩尔亲和力(例如，本文列举的亚纳摩尔Kd中的任一种)结合游离hC5a多肽。在有些实施方案中，在有与游离hC5a相比至少2倍、但是不大于20倍摩尔过量的未切割的、天然的C5存在下，所述抗体或其抗原结合片段以亚纳摩尔亲和力(例如，本文列举的亚纳摩尔Kd中的任一种)结合游离hC5a多肽。这样的测量可以是使用例如标准的亲和力测定技术的体外测量，其中的许多在本文中予以列举和/或描述。在另一个方面，本公开内容表征了一种分离的抗体或其抗原结合片段，它结合具有在SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列的人C5a多肽，其中所述抗体或其抗原结合片段以小于1.25 χ 10_9 M的Kd结合人C5a多肽，且其中与等摩尔量的对照抗体或其抗原结合片段相比，所述抗体或其抗原结合片段不会大幅抑制C5活性，甚至在有与未切割的、天然的C5相比小于或等于10倍摩尔过量的所述抗_C5a抗体或其抗原结合片段存在下。在本文所述的抗_C5a抗体或其抗原结合片段中的任一种的有些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合游离的人C5a，且与得自至少一种非人哺乳动物物种的游离C5a具有交叉反应性。例如，在有些实施方案中，所述抗_C5a抗体(或其抗原结合片段)结合得自人的游离C5a (例如，以亚纳摩尔亲和力)，且也结合得自非人灵长类动物(例如，食蟹猴、恒河猴、猿、狒狒、黑猩猩、猩猩或大猩猩)、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠或兔)、牛、山羊、驴、猪、狗、猫或马的游离C5a。在有些实施方案中，本文所述的抗_C5a抗体或其抗原结合片段以小于或等于9.9 χ 10,(例如，小于或等于9 χ 10,、8 χ 10_1(ι、7 χ10_1C1、6 χ 10_1C1、5 χ 10_1C1、4 x 10_1C1、3 x 10_1C1、2.5 x 10_1C1、2 x 10_1C1、1 x 10_1C1、8.0 χ ΙΟ—11、
7.0 χ 1(Γη、6.0 χ 1(Γη、5.0 χ 1(Γη、4.0 χ I(Γ11 或 3.0 χ I(Tn) M 的 Kd 结合游离 hC5a，且也结合得自食蟹猴(或其它非人灵长类动物物种)的游离C5a，其中对人C5a的亲和力(例如，通过它的Kd来表示)比对食蟹猴(或其它非人灵长类动物物种)C5a的亲和力大不超过 500 (例如，不超过 5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、125、150、200、250、300、350、400、450或475)倍。例如，在有些实施方案中，所述抗_C5a抗体结合游离hC5a的亲和力比所述抗体对非人灵长类动物C5a的对应亲和力大不超过50倍(例如，对游离hC5a的Kd为100 nM，对非人灵长类动物C5a的Kd不超过5 nM)。在有些实施方案中，本文所述的抗_C5a抗体或其抗原结合片段以小于或等于9.9 χ 10,(例如，小于或等于9 χ 10_1(1、8 χ 10_1(1、7 χ 10_1C1、6 χ 10_1C1、5 χ 10_1C1、4 x 10_1C1、3 χ 10_1C1、2.5 χ 10_1C1、2 χ 10_1C1、1 χ 10_1C1、8.0 χ1(Γη、7.0 χ 1(Γη、6.0 χ 1(Γη、5.0 χ 1(Γη、4.0 χ 1(Γη 或 3.0 χ I(Tn) M 的 Kd 结合游离hC5a，且也结合得自啮齿动物(例如，小鼠、大鼠或兔)的C5a，其中对人C5a的亲和力(例如，通过它的Kd来表示)比对啮齿动物C5a的亲和力大不超过1000 (例如，不超过5、10、
20、30、40、50、60、70、80、90、100、125、150、200、250、300、350、400、450、475、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或975)倍。在有些实施方案中，本文所述的任一种抗_C5a抗体或其抗原结合片段以亚纳摩尔亲和力结合人C5a和得自非人哺乳动物(例如，啮齿动物或非人灵长类动物诸如食蟹猴)的C5a。在有些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段以相等亲和力(例如，相等Kd)结合人C5a和非人灵长类动物C5a。例如，本公开内容表征了一种抗体或其抗原结合片段，它以亚纳摩尔亲和力[例如，Kd of 小于或等于 9.9 χ 1(Γ10 (例如，小于或等于 9 χ 1(Γ10、8 χ 1(Γ10、7 χ 1(Γ10、6 χ10_1C1、5 χ 10_1C1、4 χ 10_1C1、3 χ 10_1C1、2.5 χ 10_1C1、2 χ 10_1C1、1 χ 10_1C1、8.0 χ 10_η、7.0 χ1(Γη、6.0 χ 1(Γη、5.0 χ 1(Γη、4.0 χ 1(Γη 或 3.0 χ I(Tn) Μ]结合游离的人 C5a，且与得自食蟹猴(或其它非人灵长类动物)的游离C5a具有交叉反应性，所述抗体或其抗原结合片段以小于 10 χ 10'9 χ 10'8 χ 10'7 χ 10'6 χ 10'5 χ 10'4 χ 10'3 χ 10'2x10'I χ 10'9.9 χ 1(Γ10 (例如，小于 9 χ 1(Γ10、8 χ 1(Γ10、7 χ 1(Γ10、6 χ 1(Γ10、5 χ1(Γ10、4 χ 1(Γ10、3 χ 1(Γ10、2.5 χ 1(Γ10、2 χ 1(Γ10、1 χ 1(Γ10 或 8.0 χ I(Tn) Μ]的 Kd 结合食蟹猴(或其它非人灵长类动物)C5a，其中对人C5a的亲和力比对食蟹猴(或非人灵长类动物)C5a 的亲和力大不超过 500 (例如，不超过5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、125、150、200、250、300、350、400、450 或 475)倍(例如，对人 C5a 的 Kd 为 100 nM，对非人灵长类动物C5a的Kd不超过50 nM)。适用于测定所述抗体或其抗原结合片段对给定抗原的亲和力的方法是本领域已知的，且在本文中予以描述和例证。在有些实施方案中，所述交叉反应性的抗_C5a抗体或其抗原结合片段在功能上抑制它所结合的游离hC5a和非人哺乳动物C5a。例如，抗体在1:1 (抗原结合位点:C5a)的摩尔比抑制了至少70 (例如，至少75、80、85、90或95或更大)％的人C5a依赖性的人嗜中性粒细胞活化，并在1:1 (抗原结合位点:C5a)的摩尔比抑制了至少70 (例如，至少75、80、85、90或95或更大)％的非人哺乳动物C5a依赖性的嗜中性粒细胞活化(所述嗜中性粒细胞得自与所述抗体所结合的非人哺乳动物C5a相同的物种)。在另一个方面，本公开内容表征了一种分离的抗体或其抗原结合片段，它结合具有在SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列的游离hC5a多肽，其中所述抗体或其抗原结合片段以小于1.25 χ 10_9 M的Kd结合人C5a多肽，且其中所述抗体或其抗原结合片段结合hC5a和得自非人哺乳动物物种的C5a。所述非人哺乳动物物种可以是，例如，非人灵长类动物诸如食蟹猴、恒河猴或狒狒。在有些实施方案中，所述非人哺乳动物物种是啮齿动物诸如小鼠、大鼠、兔、豚鼠、沙鼠或仓鼠。在有些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合hC5a的亲和力比得自非人哺乳动物物种的C5a的对应亲和力高不大于100倍。在有些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段在1:1 (抗原结合位点:C5a)的摩尔比抑制了至少50%人C5a依赖性的人嗜中性粒细胞活化。在有些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合得自非人灵长类动物(例如，食蟹猴或恒河猴)的游离C5a，所述游离C5a蛋白的氨基酸序列包含在SEQ ID NO: 179或SEQ ID NO: 180中所述的氨基酸序列或由其组成。如在工作实施例中所述，发明人还已经发现了一种二价抗_C5a抗体BNJ383，其以高亲和力结合游离C5a (在该情况下，人C5a)，且以远远更低的亲和力结合未切割的人C5(hC5)，其中，在组合物(例如，水溶液)中，在生理条件下，在平衡时，且在有与所述抗体的抗原结合位点的摩尔量相比摩尔过量的未切割的人C5存在下，多个抗体中的至少95%各自结合不超过一个hC5分子。多个抗体中的至少95%的第二抗原结合位点保持可用于(例如，主要可用于)结合游离C5a。尽管本公开内容绝不受任何具体理论或作用机理的约束，发明人认为，所述二价抗_C5a抗体以下述方式(例如，在这样的表位处)结合未切割的C5:位阻妨碍或至少大幅抑制所述抗_C5a抗体的第二抗原结合位点与第二个未切割的C5蛋白的结合，尽管所述抗体可以容易地适应与两个hC5a分子的结合。因而，甚至在摩尔过量的未切割的C5中，所述抗体保留以高亲和力结合游离C5a的能力，并由此甚至在该摩尔过量下，保留抑制C5a的促炎症活性的能力。

本领域普通技术人员会容易地且迅速地理解这样的抗_C5a抗体的众多治疗益处。例如，如上面所指出的，人血清中的循环C5的浓度非常高。因而，当引入哺乳动物中时，能够同时结合两个未切割的C5分子的抗_C5a抗体会在摩尔过量的C5中迅速地灭活，且此后不再能够在补体活化的情况下结合游离C5a。并且,与抗-C5抗体一样,在生成C5a的情况下，有效地抑制C5a需要使用高浓度的这类抗_C5a抗体和/或频繁施用。相比而言，本文所述的抗_C5a抗体(甚至在摩尔过量的未切割的C5中，其保留结合游离C5a的能力)因而可以以与例如抗-C5抗体相比远远更低的剂量和/或更低的频率施用给人类，并在人类中有效地提供相同或更大的C5a抑制。因此，在另一个方面，本公开内容表征了一种包含2个抗原结合位点的分离的抗体，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中，在水溶液(其包含(i)多个所述抗体和(ii)与抗原结合位点的摩尔量相比摩尔过量的hC5)中，在平衡时，且在生理条件下，所述多个抗体中的至少95 (例如，至少95.5、96、
96.5、97、97.5或97.7) %结合不超过一个hC5分子，S卩，不超过5%的抗体在平衡时结合2个hC5分子。在另一个方面，本公开内容表征了一种包含2个抗原结合位点的分离的抗体，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中，在平衡时，且在生理条件下，在水溶液(其包含(i)多个所述抗体和(ii)与抗原结合位点(或抗体)的摩尔量相比摩尔过量的hC5)中，所述多个抗体中的至少95%保留至少一个抗原结合位点可用于结合游离hC5a。在另一个方面，本公开内容表征了一种包含2个抗原结合位点的分离的抗体，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中，在平衡时，且在生理条件下，在水溶液(其包含(i)多个所述抗体和(ii)与抗原结合位点(或抗体)的摩尔量相比摩尔过量的hC5)中，所述多个抗体中的不超过5%的每个抗原结合位点结合hC5分子。在本文所述的任一种分离的抗体的有些实施方案中，所述摩尔过量是至少2倍(例如，至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或甚至10倍)摩尔过量。在本文所述的任一种分离的抗体的有些实施方案中，所述生理条件是3.9 mMNaH2PO4,6.1 mM Na2HPO4 和 150 mM NaCl，在 ρΗ7.0。在本文所述的任一种分离的抗体的有些实施方案中，每个抗原结合位点独立地可以以小于1.25 X 10_9 M的Kd结合游离hC5a。在有些实施方案中，每个抗原结合位点独立地可以以亚纳摩尔亲和力(参见上文)结合游离hC5a。在本文所述的任一种分离的抗体的有些实施方案中，所述分离的抗体包含:含有在SEQ ID N0:42中所述的氨基酸序列的轻链多肽，和含有在SEQ ID N0:45中所述的氨基酸序列的重链多肽。在本文所述的任一种分离的抗体的有些实施方案中，所述分离的抗体包含:(i)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 20中所述的氨基酸序列；(ii)轻链⑶R2，其包含在SEQ IDN0:21中所述的氨基酸序列轻链⑶R3，其包含在SEQ ID NO:22中所述的氨基酸序列；(iv)重链⑶R1，其包 含在SEQ ID NO: 28中所述的氨基酸序列；(V)重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:46中所述的氨基酸序列；和(vi)重链CDR3，其包含在SEQ ID NO:47中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，所述分离的抗体可以包含本文所述的轻链CDR集合中的任一个、本文所述的轻链可变区中的任一个(例如，人源化的轻链可变区中的任一个)、本文所述的重链CDR集合中的任一个、本文所述的重链可变区中的任一个(例如,人源化的重链可变区中的任一个)或它们的任何合适的组合。参见，例如，表I或2。在另一个方面，本公开内容表征了一种用于治疗摧患补体相关病症(例如，C5a_相关的补体病症)的人的方法，其中所述方法包括:以足以治疗所述补体相关病症的量，给所述人施用本文所述的任一种分离的抗体。在另一个方面，本公开内容表征了一种用于治疗摧患C5a_相关的补体病症的人的方法，其中所述方法包括:给所述人施用至少0.6 (例如，至少0.7、0.8、0.9或I) mg本文所述的任一种分离的抗体/kg人体重，以由此部分地或完全地结合和隔离纳克水平的游离C5a 持续大于、等于或至少 12 (例如，13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25)天。在另一个方面，本公开内容表征了一种用于治疗摧患C5a_相关的补体病症的人的方法，其中所述方法包括:给所述人施用至少10 mg本文所述的任一种分离的抗体/kg人体重，以由此部分地或完全地结合和隔离纳克水平的游离C5a持续至少24天。
在另一个方面,本公开内容表征了一种用于治疗摧患C5a_相关的补体病症的人的方法，其中所述方法包括:给所述人施用本文所述的任一种分离的抗体(或例如包含本文所述的任一种分离的抗体的药物组合物)，所述抗体的量足以:(a)实现等于或小于未切割的hC5的生理摩尔浓度的摩尔Cmax值，和(b)部分地或完全地结合和隔离病理生理学水平的游离C5a。在本文所述的任意方法的有些实施方案中，以足以实现大幅低于未切割的C5 (例如，hC5)的生理摩尔浓度的摩尔Cmax值的量，将抗体施用给受试者(例如，人)。在本文所述的任意方法的有些实施方案中，所述Cmax值是，例如，不大于80 nM(或大约0.6 mg/kg)。在有些实施方案中，所述Cmax水平是不大于70 (例如，60、50、40、30或20) nM。在有些实施方案中，所述Cmax值是不大于大约100 nM。在有些实施方案中，所述Cmax值是不大于200 nM。在本文所述的任意方法的有些实施方案中，所述Cmax值是,例如，不大于400 nM (或大约3 mg/kg)。在有些实施方案中，所述Cmax值是不大于400 (例如 350、300、250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20 或 10) nM。在另一个方面，本公开内容表征了一种用于治疗摧患C5a_相关的补体病症的人的方法，其中所述方法包括:给所述人施用本文所述的任一种分离的抗体(或例如包含本文所述的任一种分离的抗体的药物组合物)，所述抗体的量足以:(a)实现等于、小于或大幅小于未切割的hC5的生理摩尔浓度的摩尔Cmax值，和(b)部分地或完全地结合和隔离纳克水平的游离C5a持续至少12天(例如,至少24天)。合适的Cmax值如上所述。在本文所述的任意方法的有些实施方案中，所述C5a_相关的补体病症可以是例如选自下述的一种:脓毒症、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、脓毒性休克、抗磷脂综合征、灾难性抗磷脂综合征、弥漫性血管内凝血、狼疮肾炎、肺出血肾炎综合征、烧伤或严重烧伤、哮喘、HELLP综合征(溶血性贫血、肝酶升高和低血小板计数)、炎症诱发的疼痛、C5a介导的嗜中性粒细胞减少、年龄相关的黄斑变性(AMD)、慢性阻塞性肺疾病和类风湿性关节炎。在另一个方面，本公开内容表征了一种包含多个分离的抗体的组合物，所述多个抗体中的每一个包含2个抗原结合位点，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，在有人C5 (hC5)存在下和在生理条件下，在平衡时，所述多个抗体中的不超过5%包含2个同时结合未切割的hC5的抗原结合位点。在本文所述的任一种组合物的有些实施方案中，使用高效液相色谱法(HPLC)，可以评价处于任意特定结合构型的数目的百分比。在有些实施方案中，用于评价抗体的生理条件包括下述条件:在包含3.9 mM NaH2PO4,6.1 mM Na2HPO4和150 mM NaCl的pH7.0水溶液中，与多个抗体一起在4°C温育hC5 (例如，摩尔过量(例如，2倍摩尔过量)的hC5) 84小时。为了本公开内容的目的，在4°C在84小时时得到的溶液被视作处于平衡中。在本文所述的任一种组合物的有些实施方案中，所述多个抗体中的不超过5%包含2个抗原结合位点，所述2个抗原结合位点在生理条件下和在有与抗体相比至少2倍摩尔过量的hC5存在下同时结合未切割的hC5。在本文所述的任一种组合物的有些实施方案中，在包含3.9 mM NaH2PO4、6.1 mMNa2HPO4和150 mM NaCl的pH7.0水溶液中，在4°C与hC5 —起温育多个抗体84小时以后，使用HPLC评价出，所述多个抗体中的不超过5%包含2个同时结合未切割的hC5分子的抗
原结合位点。
在另一个方面，本公开内容表征了一种包含多个分离的抗体的组合物，所述多个抗体中的每一个包含2个抗原结合位点，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人 C5 (hC5)，且其中在包含 3.9 mM NaH2PO4,6.1 mM Na2HPO4 和 150mM NaCl的pH7.0水溶液中，在4°C与hC5 —起温育多个抗体84小时以后，评价出(例如，使用HPLC)所述多个抗体中的不超过5%包含2个同时结合未切割的hC5的抗原结合位点。在另一个方面，本公开内容表征了一种包含多个分离的抗体的组合物，所述多个抗体中的每一个包含第一抗原结合位点和第二抗原结合位点，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中每个抗原结合位点独立地可以以小于1.25 χ 10_9 M的Kd结合游离hC5a多肽，且其中，在有人C5 (hC5)存在下和在生理条件下评价(例如，使用高效液相色谱法(HPLC))，所述多个抗体中的至少95%的2个抗原结合位点以下述构型被未切割的hC5占据:(i)第一抗原结合位点结合未切割的hC5，第二抗原结合位点未结合；或(ii)第一抗原结合位点未结合，且第二抗原结合位点结合未切割的hC5。在另一个方面，本公开内容表征了一种包含多个分离的抗体的组合物，所述多个抗体中的每一个包含2个抗原结合位点，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，在有人C5 (hC5)存在下并在生理条件下评价(例如，使用高效液相色谱法(HPLC))，所述多个抗体中的至少95%包含至少一个能够结合
1 hC5a的抗原结合似点。在本文所述的任一种组合物的有些实施方案中，在有至少2倍摩尔过量的hC5:抗体存在下，评价多个抗体。在本文所述的任一种组合物的有些实施方案中，在有至少2倍摩尔过量的hC5:抗原结合位点存在下，评价多个抗体。在另一个方面，本公开内容表征了一种包含2个抗原结合位点的分离的抗体，其中所述抗体结合游离C5a或未切割的C5，且其中在有摩尔过量(例如，至少或大于2倍、5倍、10倍、15倍或甚至20倍摩尔过量)的未切割的C5存在下，所述抗体的抗原结合位点之一保留可用于结合游离C5a。在有些实施方案中，所述抗原结合位点具有相同的特异性(例如，所述2个抗原结合位点各自的CDR共有相同的氨基酸序列)。在有些实施方案中，游离C5a是人C5a。在有些实施方案中，所述抗体具有在人C5a和得自非人哺乳动物物种的C5a之间的交叉反应性。在有些实施方案中，所述抗体可以以亚纳摩尔亲和力结合游离C5a。在有些实施方案中，所述抗体对C5a的亲和力比它对未切割的C5的对应亲和力大至少100倍。在另一个方面，本公开内容表征了一种包含2个抗原结合位点的分离的抗体，其中每个抗原结合位点独立地结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，在任意的未切割的hC5浓度(例如，与hC5a相比，摩尔过量的未切割的C5)，所述抗体的抗原结合位点中的至少一个保留可用于结合游离hC5a (例如，在人生理条件下，例如，在人血或血清中)。在另一个方面，本公开内容表征了一种包含多个分离的抗体的组合物，其中所述多个抗体各自包含2个抗原结合位点，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，在1:1 (抗体:hC5)的摩尔比，所述多个抗体中的不超过或小于5 (例如， 不超过或小于4.9,4.8,4.TA.6,4.5,4.4,4.3,4.2,4.1,4.0、3.9、3.8、3.7、3.6、3.5、3.4、3.3、3.2、3.1、3.0、2.9、2.8、2.7、2.6、2.5、2.4、2.3、2.2、2.1、
2.0、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5、1.4、1.3、1.2、1.1 或 1)% 包含 2 个同时结合未切割的 hC5 的抗
原结合位点。在有些实施方案中，每个抗原结合位点独立地可以以小于1.25 χ IO-9 M的Kd(或，例如，以亚纳摩尔亲和力)结合游离hC5a。在另一个方面，本公开内容表征了一种包含多个分离的抗体的组合物，其中所述多个抗体各自包含2个抗原结合位点，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，当以I mg/kg或更高的剂量施用给人时，在有生理水平的未切割的hC5存在下，所述多个抗体部分地或完全地结合和隔离纳克水平的游离 C5a 持续大于、等于或至少 12 (例如，13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25)天。在另一个方面，本公开内容表征了一种包含多个分离的抗体的组合物，其中所述多个抗体各自包含2个抗原结合位点，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，当以10 mg/kg或更高的剂量施用给人时，在有生理水平的未切割的hC5存在下，所述多个抗体部分地或完全地结合和隔离纳克水平的游离 C5a 持续大于、等于或至少 12 (例如，13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25)天。在另一个方面，本公开内容表征了一种包含多个分离的抗体的组合物，其中所述多个抗体各自包含2个抗原结合位点，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，当以实现大幅低于未切割的hC5的生理摩尔浓度的摩尔Cmax值的剂量施用时，在有生理水平的未切割的hC5存在下，所述多个抗体部分地或完全地结合和隔离纳克水平的游离C5a持续大于、等于或至少12 (例如，13、14、15、
16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25)天。

在另一个方面，本公开内容表征了一种包含多个分离的抗体的组合物，其中所述多个抗体各自包含2个抗原结合位点，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，当以实现大幅低于未切割的hC5的生理摩尔浓度的摩尔Cmax值的剂量施用时，在有生理水平的未切割的hC5存在下，所述多个抗体部分地或完全地结合和隔离病理生理学水平的游离C5a。在另一个方面，本公开内容表征了一种包含第一抗原结合位点和第二抗原结合位点的分离的抗体，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，当两个抗原结合位点被完全占据时(和，例如，在人生理条件下，例如，在人血或血清中)，下述结合构型是可能的:(i)第一抗原结合位点结合游离hC5a，且第二抗原结合位点结合未切割的hC5 ； (ii)第一抗原结合位点结合游离hC5a,且第二抗原结合位点结合游离hC5a ;或(iii)第一抗原结合位点结合未切割的hC5,且第二抗原结合位点结合涵^尚hC5a。在另一个方面，本公开内容表征了一种包含第一抗原结合位点和第二抗原结合位点的分离的抗体，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中每个抗原结合位点独立地可以以小于1.25 χ 10_9 M的Kd (或，例如，以亚纳摩尔亲和力)结合游离hC5a，且其中，在含有多个抗体的生理溶液中，至少95%的抗体处于下述构型:(i)第一抗原结合位点结合游离hC5a，且第二抗原结合位点结合未切割的hC5 ； (ii)第一抗原结合位点结合游离hC5a,且第二抗原结合位点结合游离hC5a ； (iii)第一抗原结合位点结合未切割的hC5,且第二抗原结合位点结合游离hC5a ； (iv)第一抗原结合位点结合未切割的hC5,且第二抗原结合位点未结合；(V)第一抗原结合位点结合hC5a,且第二抗原结合位点未结合；(vi)第一抗原结合位点未结合，且第二抗原结合位点结合未切割的hC5 ； (vii)第一抗原结合位点未结合,且第二抗原结合位点结合hC5a ;和(viii)第一抗原结合位点未结合，且第二抗原结合位点未结合。在另一个方面，本公开内容表征了一种包含2个抗原结合位点的分离的抗体，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，在与hC5a相比摩尔过量的未切割的hC5中，所述抗体在1:1 (抗原结合位点:hC5a)的摩尔比抑制了至少50% hC5a依赖性的人嗜中性粒细胞活化。在本文所述的任一种抗体的有些实施方案中，所述构型在人生理条件下可能是与完全折叠的、天然的人C5a和C5蛋白形成。在本文所述的任一种抗体的有些实施方案中，所述抗体以小于1.25 χ 10_9 M的Kd (或，例如，以亚纳摩尔亲和力)结合游离hC5a。在另一个方面，本公开内容表征了一种抗体，所述抗体:(a)以亚纳摩尔亲和力结合游离C5a (例如，hC5a)，并且(b)结合游离C5a的亲和力比它对未切割的C5蛋白的对应亲和力大至少 100 (例如，至少 110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、225、250、275、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000或10000)倍。在包含多个抗体的生理组合物中，就至少95%的抗体而言，所述抗体的仅一个抗原结合位点结合未切割的C5蛋白，而第二抗原结合位点保留可用于结合游离C5a(所述hC5a可以具有在SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列)。在另一个方面，本公开内容表征了一种用于治疗摧患C5a_相关的补体病症的人的方法，所述方法包括:给所述人施用包含多个分离的抗体的组合物，其中所述多个抗体各自包含2个抗原结合位点，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中将至少I mg抗体/kg人体重施用给人，且其中所述抗体的施用可有效地部分地或完全地结合和隔离纳克水平的游离C5a持续至少12天。在另一个方面，本公开内容表征了一种用于治疗摧患补体相关病症(例如，C5a-相关的补体病症)的人的方法，所述方法包括:给所述人施用包含多个分离的抗体的组合物，其中所述多个抗体各自包含2个抗原结合位点，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5),其中将至少10 mg抗体/kg人体重施用给人，且其中所述抗体的施用可有效地部分地或完全地结合和隔离纳克水平的游离C5a持续至少24天。在另一个方面，本公开内容表征了一种用于治疗摧患补体相关病症(例如，C5a-相关的补体病症)的人的方法，所述方法包括:给所述人施用包含多个分离的抗体的组合物，其中所述多个抗体各自包含2个抗原结合位点，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中以特定剂量施用所述抗体，所述剂量足以:(a)实现大幅低于未切割的hC5的生理摩尔浓度的摩尔Cmax值，和(b)部分地或完全地结合和隔离 纳克水平的游离C5a持续至少12天。在另一个方面，本公开内容表征了一种用于治疗摧患补体相关病症(例如，C5a-相关的补体病症)的人的方法，所述方法包括:给所述人施用包含多个分离的抗体的组合物，其中所述多个抗体各自包含2个抗原结合位点，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中以特定剂量施用所述抗体，所述剂量足以:(a)实现大幅低于未切割的hC5的生理摩尔浓度的摩尔Cmax值，和(b)部分地或完全地结合和隔离纳克水平的游离C5a持续至少24天。在另一个方面，本公开内容表征了一种用于治疗摧患补体相关病症(例如，C5a-相关的补体病症)的人的方法，所述方法包括:给所述人施用包含多个分离的抗体的组合物，其中所述多个抗体各自包含2个抗原结合位点，其中每个抗原结合位点独立地可以结合游离的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中以特定剂量施用所述抗体，所述剂量足以:(a)实现大幅低于未切割的hC5的生理摩尔浓度的摩尔Cmax值，和(b)部分地或完全地结合和隔离病理生理学水平的游离C5a。应当理解，本文所述的任意组合物(例如，包含多个抗体)或分离的抗体(例如，其在有C5或摩尔过量的C5、游离的Fab臂存在下，能够结合游离C5a)可以:(a)配制成根据本公开内容的药物组合物，(b)包括在(本文所述的)治疗试剂盒中，或(C)包括在本文所述的预充注射器中。如在本文提供的工作实施例中所述，发明人还已经发现了一种抗体BNJ383 (参见下文)，其不仅以高亲和力(亚纳摩尔亲和力)结合游离hC5a，而且在过量的未切割的C5的浓度，还会以剂量依赖性的方式抑制末端补体复合物(TCC)形成。但是，甚至在比6.5倍过量的C5更大的抗_C5a抗体浓度，TCC的抑制是不完全的。尽管本公开内容绝不受任何具体理论或作用机理的限制，所述抗体可以如下抑制TCC形成:结合至少一部分未切割的C5，并阻止它的切割，和/或以其它方式阻止C5与其它TCC组分的成功结合。发明人理解，这样的抗体可用于治疗补体相关病症，例如，其中C5a起重要作用，且含有C5b的TCC可能起不太重要的作用。这样的病症可以包括，例如，脓毒症、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、脓毒性休克、抗磷脂综合征、灾难性抗磷脂综合征、弥漫性血管内凝血、狼疮肾炎、肺出血肾炎综合征、烧伤或严重烧伤、哮喘、HELLP综合征(溶血性贫血、肝酶升高和低血小板计数)、炎症诱发的疼痛、C5a介导的 嗜中性粒细胞减少、年龄相关的黄斑变性(AMD)、慢性阻塞性肺疾病和类风湿性关节炎。发明人还理解，使用这样的抗_C5a抗体来治疗这些病症以及其它病症，可以提供与使用末端补体抑制药物相比甚至更有益的安全性特性。如上面所指出的，抑制末端补体组分(诸如C5、C5b、C6、C7、C8或C9)的一个显著后果是，宿主免疫系统针对末端补体经常裂解的具荚膜细菌(例如，脑膜炎奈瑟球菌和淋病奈瑟球菌)的保护降低。由于在本部分中描述的抗_C5a抗体会抑制C5a介导的炎症应答，但是不会完全抑制裂解那些具荚膜细菌的末端补体复合物的形成，接收本文所述的治疗性抗_C5a抗体的患者不需要保护性疫苗接种，例如，针对脑膜炎奈瑟球菌和淋病奈瑟球菌的疫苗接种。TCC的部分抑制(尽管没有完全废除末端补体的抗微生物应答)可以实际上减少TCC诱发的炎症如组织损伤。据信，与C5a的抑制相组合的TCC部分抑制，会使得所述抗_C5a抗体成为一种甚至更有效的抗炎化合物。因此，在另一个方面，本公开内容表征了一种结合游离C5a的抗体或其抗原结合片段，其中所述游离C5a是具有在SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列的人C5a，其中所述抗体抑制C5a与C5a受体的结合，且其中所述抗体部分地抑制末端补体复合物(TCC)的形成。本文所述的抗_C5a抗体或其抗原结合片段的部分抑制可以是例如补体活性，也就是说，在有所述抗体存在下，是在没有所述抗体或其抗原结合片段存在下的补体活性的最多或不超过80 (例如，75、70、65、60、55、50、45、40、35、30或25) %。在有些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段以亚纳摩尔亲和力结合游离C5a (例如，游离hC5a)。在有些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段对游离C5a的亲和力比所述抗体或抗原结合片段对未切割的C5的对应亲和力大至少100倍。在有些实施方案中，使用CH50eq试验测得，所述抗体或其抗原结合片段在超过 200 (例如，210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、320、340、360、380或400或更高)μ g/mL的浓度抑制了至少50%的TCC形成。在有些实施方案中，使用在工作实施例中所述的Wieslab 经典途径补体试剂盒测得，所述抗体或其抗原结合片段在超过 200 (例如，210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、320、340、360、380 或 400或更高)μ g/mL的浓度抑制了至少50%经典补体途径活化。在另一个方面，本公开内容表征了一种用于治疗摧患补体相关病症(例如，C5a_相关的补体病症或补体相关的炎症性病症)的人的方法。所述方法包括:给所述人施用有效量的抑制C5a与C5a受体结合的抗体或其抗原结合片段，且其中所述抗体部分地抑制末端补体复合物(TCC)的形成。参见上文。所述病症可以是本领域已知的或本文所述的那些中的任一种。在另一个方面，本公开内容表征了一种分离的抗体或其抗原结合片段，它结合具有在SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列的人C5a多肽，但是不结合未切割的、天然的C5的α链，其中所述抗体或其抗原结合片段以小于1.25 χ 10_9 M的Kd结合人C5a多肽。在另一个方面，本公 开内容表征了一种分离的抗体或其抗原结合片段，它结合具有在SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列的人C5a多肽，但是不结合未切割的、天然的C5的α链，其中所述抗体在1:1 (抗原结合位点:C5a)的摩尔比抑制了至少50%人C5a依赖性的人嗜中性粒细胞活化。在有些实施方案中，在实施例5所述的试验(其中使用0.4 nM抗体来抑制2 nM人C5a的嗜中性粒细胞活化活性)中，所述抗体抑制了至少50%人C5a依赖性的人嗜中性粒细胞迁移。在有些实施方案中，所述抗体不包含在表I中描述的示例性的⑶R配对3。在有些实施方案中，所述抗体不是BNJ371。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段结合具有在SEQ IDNO:2中所述的氨基酸序列的人C5a多肽。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽，所述轻链多肽包含:轻链⑶R1，其含有在SEQ ID NO: 20中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:21中所述的氨基酸序列；和轻链⑶R3，其包含在SEQ ID N0:22中所述的
氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽，所述轻链多肽包含:轻链⑶R1，其含有在SEQ ID NO: 20中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:38中所述的氨基酸序列；和轻链⑶R3，其包含在SEQ ID N0:22中所述的
氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含重链多肽，所述重链多肽包含:重链⑶R1，其含有在SEQ ID NO: 28中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:29中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID N0:30中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含重链多肽，所述重链多肽包含:重链⑶R1，其含有在SEQ ID NO: 28中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:67中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID N0:30中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含重链多肽，所述重链多肽包含:重链⑶R1，其含有在SEQ ID NO: 28中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:46中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID N0:47中所述的
氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID N0:37或SEQ ID NO:36中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含重链多肽，所述重链多肽含有在SEQ ID N0:27或SEQ ID NO:33中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽和重链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID NO: 37中所述的氨基酸序列，所述重链多肽含有在SEQID NO:27中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽和重链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID NO: 36中所述的氨基酸序列，所述重链多肽含有在SEQID NO:33中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID NO: 19或SEQ ID NO: 17中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含重链多肽，所述重链多肽含有在SEQ ID N0:27或SEQ ID NO:25中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽和重链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID NO: 19中所述的氨基酸序列，所述重链多肽含有在SEQID NO:27中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽和重链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID NO: 17中所述的氨基酸序列，所述重链多肽含有在SEQID NO:25中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID N0:42或SEQ ID NO:40中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含重链多肽，所述重链多肽含有在SEQ ID N0:27或SEQ ID NO:33中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽和重链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID NO: 42中所述的氨基酸序列，所述重链多肽含有在SEQID NO:27中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽和重链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID NO: 40中所述的氨基酸序列，所述重链多肽含有在SEQID NO:33中所述的氨基酸序列。
在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽和重链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID NO: 17中所述的氨基酸序列，所述重链多肽含有在SEQID NO:33中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含重链多肽，所述重链多肽含有在SEQ ID NO:45, SEQ ID N0:44或SEQ ID N0:49中的任一个中所述的氨
基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽和重链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID NO: 19中所述的氨基酸序列，所述重链多肽含有在SEQID NO:45中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽和重链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID NO: 17中所述的氨基酸序列，所述重链多肽含有在SEQID NO:44中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽和重链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID NO: 17中所述的氨基酸序列，所述重链多肽含有在SEQID NO:49中所述的氨基酸序列。 在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID N0:37或SEQ ID NO:36中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含重链多肽，所述重链多肽含有在SEQ ID N0:45或SEQ ID NO:49中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽和重链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID NO: 37中所述的氨基酸序列，所述重链多肽含有在SEQID NO:45中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽和重链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID NO: 36中所述的氨基酸序列，所述重链多肽含有在SEQID NO:49中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID N0:42或SEQ ID NO:40中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含重链多肽，所述重链多肽含有在SEQ ID N0:45或SEQ ID NO:49中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽和重链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID NO: 42中所述的氨基酸序列，所述重链多肽含有在SEQID NO:45中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链多肽和重链多肽，所述轻链多肽含有在SEQ ID NO: 40中所述的氨基酸序列，所述重链多肽含有在SEQID NO:49中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段以小于7 χ 10, M的Kd结合hC5a。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段以小于5 χ 10, M的Kd结合hC5a。
在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段以小于3 χ 10, M的Kd结合hC5a。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段以小于2.5 χ 10,M的Kd结合hC5a。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段以小于1.5 χ 10,M的Kd结合hC5a。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段以小于1.0 χ 10,M的Kd结合hC5a。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段以小于8.0 χ 10_nM的Kd结合hC5a。在有些实施方案中，抗体在1:1 (抗原结合位点:C5a)的摩尔比抑制了至少70(例如，至少75、80、85、90或95或更大)％的人C5a依赖性的人嗜中性粒细胞活化。在有些实施方案中，所述抗体不包含在表I中描述的示例性的CDR配对3。在有些实施方案中，所述抗体不是BNJ371。在另一个方面，本公开内容表征了一种分离的抗体或其抗原结合片段，它包含在表3或表7中所述的轻链CDR。例如，分离的抗体或其抗原结合片段可以包含轻链多肽，所述轻链多肽含有:(i)轻链CDRl，其包含在SEQ ID NO: 140中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 96中所述的氨基酸序列；和轻链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 142中所述的氨基酸序列；(ii)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 156中所述的氨基酸序列；轻链CDR2，其包含在SEQ ID NO: 157中所述的氨基酸序列；和轻链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 158中所述的氨基酸序列；(iii)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 164中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 165中所述的氨基酸序列；和轻链⑶R3，其包含在SEQ IDNO: 166中所述的氨基酸 序列；(iv)轻链CDRl，其包含在SEQ ID NO: 172中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 173中所述的氨基酸序列；和轻链⑶R3，其包含在SEQID NO: 174中所述的氨基酸序列；(V)轻链CDRl，其包含在SEQ ID NO:84中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:85中所述的氨基酸序列；和轻链⑶R3，其包含在SEQID NO:86中所述的氨基酸序列；(vi)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID N0:92中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:89中所述的氨基酸序列；和轻链⑶R3，其包含在SEQID NO: 93中所述的氨基酸序列；(vii)轻链CDRl，其包含在SEQ ID NO: 88中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:89中所述的氨基酸序列；和轻链⑶R3，其包含在SEQID NO: 90中所述的氨基酸序列；(viii)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID N0:95中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:96中所述的氨基酸序列；和轻链⑶R3，其包含在SEQID NO: 97中所述的氨基酸序列；(ix)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 99中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 100中所述的氨基酸序列；和轻链⑶R3，其包含在SEQID NO: 101中所述的氨基酸序列；(χ)轻链CDRl，其包含在SEQ ID NO:84中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:85中所述的氨基酸序列；和轻链⑶R3，其包含在SEQID NO: 103中所述的氨基酸序列；(xi)轻链CDRl，其包含在SEQ ID NO: 105中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 106中所述的氨基酸序列；和轻链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 107中所述的氨基酸序列；(xii)轻链CDRl，其包含在SEQ ID N0:92中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:89中所述的氨基酸序列；和轻链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 108中所述的氨基酸序列；(xiii)轻链CDRl，其包含在SEQ ID N0:20中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 110中所述的氨基酸序列；和轻链⑶R3，其包含在SEQ ID NOilll中所述的氨基酸序列；或(xiv)轻链CDRl，其包含在SEQ ID N0:20中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:21中所述的氨基酸序列；和轻链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 113中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，所述包含轻链⑶R集合的抗体或其抗原结合片段也包含重链多肽，所述重链多肽含有在表8中所述的重链CDR集合中的任一个。在另一个方面，本公开内容表征了一种分离的抗体或其抗原结合片段，它包含在表3或表8中所述的重链CDR集合。例如，在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含重链多肽，所述重链多肽包含:(i)重链CDRl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链CDR2，其包含在SEQ ID NO: 144中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(ii)重链⑶R1，其包含在SEQ IDNO:28中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:67中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID N0:30中所述的氨基酸序列；(iii)重链⑶R1，其包含在SEQID NO: 160中所述的氨基酸序列；·重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 161中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 162中所述的氨基酸序列；(iv)重链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 168中所述的氨基酸序列；重链CDR2，其包含在SEQ ID NO: 169中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 170中所述的氨基酸序列；(V)重链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 176中所述的氨基酸序列；重链CDR2，其包含在SEQ ID NO: 177中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 178中所述的氨基酸序列；(vi)重链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链CDR2，其包含在SEQ ID NO: 116中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(vii)重链CDR1，其包含在SEQ ID NO: 119中所述的氨基酸序列；重链CDR2，其包含在SEQ ID NO: 120中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 121中所述的氨基酸序列；(viii)重链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ IDNO: 123中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；
(ix)重链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQID NO: 124中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(x)重链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 119中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 126中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 127中所述的氨基酸序列；(xi)重链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 129中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(xii)重链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 131中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 132中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 133中所述的氨基酸序列；(xiii)重链CDRl，其包含在SEQ ID NO:28中所述的氨基酸序列；重链CDR2，其包含在SEQ ID NO:46中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO:47中所述的氨基酸序列；或(xiv)重链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 136中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 137中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ IDNO: 138中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，所述包含重链CDR集合的抗体或其抗原结合片段也包含轻链多肽，所述轻链多肽含有在表7中所述的轻链CDR集合中的任一个。在另一个方面，本公开内容表征了一种分离的抗体或其抗原结合片段，它包含来自表7的轻链CDR集合和在表8中所述的它的同源重链CDR集合。在另一个方面，本公开内容表征了一种分离的抗体或其抗原结合片段，它包含在表3或表9中所述的配对的轻链和重链⑶R集合。例如，在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含:(i)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 140中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:96中所述的氨基酸序列；轻链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 142中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQID NO: 144中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(ii)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 20中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:21中所述的氨基酸序列；和轻链⑶R3，其包含在SEQ ID N0:22中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 28中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQID NO:67中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID NO:30中所述的氨基酸序列轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 156中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 157中所述的氨基酸序列；轻链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 158中所述的氨基酸序列；重链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 160中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQID NO: 161中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 162中所述的氨基酸序列；(iv)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 164中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 165中所述的氨基酸序列；轻链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 166中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 168中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 169中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 170中所述的氨基酸序列；(V)轻链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 172中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 173中所述的氨基酸序列；轻链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 174中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 176中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 177中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 178中所述的氨基酸序列；(vi)轻链⑶R1， 其包含在SEQ ID NO:88中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:89中所述的氨基酸序列；轻链⑶R3，其包含在SEQ ID N0:90中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 119中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 120中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 121中所述的氨基酸序列；(vii)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 105中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 106中所述的氨基酸序列；轻链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 107中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 124中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(viii)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO:84中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:85中所述的氨基酸序列；轻链⑶R3，其包含在SEQ ID NO:86中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 116中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(ix)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO:20中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 110中所述的氨基酸序列；轻链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 111中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 136中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 137中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 138中所述的氨基酸序列；(x)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 20中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 21中所述的氨基酸序列；轻链CDR3，其包含在SEQ ID NO:113中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 28中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:46中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID NO:47中所述的氨基酸序列；(xi)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO:99中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 100中所述的氨基酸序列；轻链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 101中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 119中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 126中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 127中所述的氨基酸序列；(xii)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO:95中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:96中所述的氨基酸序列；轻链⑶R3，其包含在SEQ ID NO:97中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 144中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(xiii)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 140中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:96中所述的氨基酸序列；轻链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 142中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 123中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO:117中所述的氨基酸序列；(xiv)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 105中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 106中所述的氨基酸序列；轻链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 107中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 123中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(XV) 轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO:92中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:89中所述的氨基酸序列；轻链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 108中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 144中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(xvi)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO:92中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:89中所述的氨基酸序列；轻链⑶R3，其包含在SEQ ID NO:93中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 123中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(xvii)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO:92中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:89中所述的氨基酸序列；轻链⑶R3，其包含在SEQ ID NO:93中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 144中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO:117中所述的氨基酸序列；(xviii)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO:84中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:85中所述的氨基酸序列；轻链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 103中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 129中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(xix)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO:95中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:96中所述的氨基酸序列；轻链⑶R3，其包含在SEQ ID N0:97中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 123中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(XX)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO:84中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:85中所述的氨基酸序列；轻链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 103中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 144中所述的氨基酸序列；和重链⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；或(xxi)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO:20中所述的氨基酸序列；轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 21中所述的氨基酸序列；轻链CDR3，其包含在SEQ ID NO:113中所述的氨基酸序列；重链⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 131中所述的氨基酸序列；重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 132中所述的氨基酸序列；和重链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 133中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含在表3中所述的配对的轻链⑶R集合和重链⑶R集合。在有些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含在表2中所述的配对的轻链CDR集合和重链CDR集合。例如，本公开内容表征了一种抗体，所述抗体包含:(i)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 20中所述的氨基酸序列；(ii)轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:21中所述的氨基酸序列；和(iii)轻链CDR3，其包含在SEQ ID N0:22中所述的氨基酸序列；(iv)重链⑶R1，其包含在SEQ ID NO:28中所述的氨基酸序列；(V)重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:46中所述的氨基酸序列；和(vi)重链CDR3，其包含在SEQ ID NO:47中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含在表2中所述的轻链可变区，所述轻链与在表2中所述的任一个重链可变区配对。例如，本公开内容表征了一种抗体(或其抗原结合片段)，它包含:(a)轻链可变区，其氨基酸序列包含在SEQ ID NO: 42中所述的氨基酸序列，和(b)重链可变区，其氨基酸序列包含在SEQ ID N0:45中所述的氨基酸序列。 在有些实施方案中，本文所述的抗体或其抗原结合片段包含:(i)重链可变区框架区1，其包含在SEQ ID N0:68或SEQ ID NO:69中所述的氨基酸序列；(ii)重链可变区框架区2，其包含在SEQ ID N0:70或SEQ ID NO:71中所述的氨基酸序列；和重链可变区框架区3，其包含在SEQ ID NO:72-74中的任一个中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区框架区4，后者包含在SEQ ID N0:75中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，后者包含在SEQ ID NO:76-80中的任一个中所述的氨基酸序列。所述抗体重链可以包含本文所述的任一个重链⑶R集合。在有些实施方案中，所述重链可变区可以与包含在SEQ ID N0:16中所述的氨基酸序列的可变区多肽配对。在有些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合非人C5a蛋白。例如，所述抗体或其抗原结合片段可以结合小鼠C5a和/或去精氨酸化的小鼠C5a蛋白。在有些实施方案中，分离的抗体或其抗原结合片段可以结合小鼠C5a (和/或去精氨酸化的小鼠C5a)，且包含:(i)轻链⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 54中所述的氨基酸序列；(ii)轻链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:55中所述的氨基酸序列；(iii)轻链CDR3，其包含在SEQ ID NO: 56中所述的氨基酸序列；(iv)重链⑶R1，其包含在SEQ ID NO:62中所述的氨基酸序列；(V)重链⑶R2，其包含在SEQ ID NO:63中所述的氨基酸序列；和(vi)重链CDR3，其包含在SEQ ID NO:64中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，所述抗-小鼠C5a抗体可以包含:含有在SEQ IDNO:59中所述的氨基酸序列的轻链多肽；和含有在SEQ ID N0:66中所述的氨基酸序列的重链多肽。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段会抑制C5a和C5a受体之间的相互作用。所述C5a受体可以是，例如，C5aRl或C5L2。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段不会在体外和/或在体内大幅抑制补体介导的红血细胞溶血。在有些实施方案中，分离的抗体(和因此其任意抗原结合片段)是单克隆抗体、人源化的抗体或全人抗体。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段选自:重组抗体、单链抗体、双体、细胞内抗体、嵌合化的或嵌合的抗体、去免疫化的人抗体、Fv片段、Fd片段、Fab片段、Fab’片段和F(ab’)2片段。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段是多特异性的(例如，双特异性的)，因为所述抗体或片段结合至少2种不同的表位。所述2种不同的表位可以是，例如，来自相同蛋白(例如，C5a)的2种不同表位，或所述抗体可以结合来自第一蛋白(例如，C5a)的第一表位和来自第二蛋白的第二表位。在有些实施方案中，本文所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含异源部分。所述异源部分可以是，例如，糖。例如，所述抗体或其抗原结合片段可以被糖基化。所述异源部分可以是，例如，可检测的标记例如，但不限于、荧光标记、发光标记、重金属标记、放射性标记或酶标记。在有些实施方案中，用提高抗体在循环中的稳定化和/或保留的部分，修饰本文所述的分离的抗_C5a抗体或其抗原结合片段。例如，所述修饰可以是聚乙二醇化或羟乙基淀粉化。在另一个实施方案中，所述抗_C5a抗体可以含有改变的恒定区，与它的对应的未改变的恒定区的效应子功能相比，所述改变的恒定区具有降低的(或没有)效应子功能。在有些实施方案中，所述抗_C5a抗体含有改变的恒定区，后者具有未改变的恒定区的效应子功能的约O至约20%。本文描述了这样的降低效应子功能的抗体的示例性实施方案。在另一个方面，本公开内容表征了一种分离的抗体或其抗原结合片段，它会交叉阻断任一种前述抗体的结合。在另一个方面，本公开内容表征了一种药物组合物，其包含一种或多种本文所述的任意分离的抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。在另一个方面，本公开内容表征了:(i)核酸，其编码一种或多种本文所述的任一种抗体或其抗原结合片段；( )包含所述核酸的载体；(iii)包含所述核酸的表达载体；和/或(iv)包含所述载体或所述表达载体的细胞。在另一个方面，本公开内容表征了一种用于生产多肽(诸如本文 所述的任一种抗体或其抗原结合片段)的方法。所述方法包括:在足以允许前述细胞(其包含所述表达载体)表达由所述载体中的核酸编码的所述抗体或抗原结合片段的条件和时间下，培养所述细胞。所述方法还可以包括:从所述细胞或从用于培养所述细胞的培养基，分离出所述抗体或抗原结合片段。在另一个方面，本公开内容表征了一种分离的核酸，其编码本文所述的任一个氨基酸序列或特定多肽，所述特定多肽的氨基酸序列包含本文所述的任一个氨基酸序列或由其组成。所述核酸可以被包括在载体(例如，表达载体)中，和/或可以存在于细胞中。在另一个方面，本公开内容表征了一种治疗试剂盒，其包含:(i) 一种或多种本文所述的分离的抗体或抗原结合片段(例如，一种或多种本文所述的任意人源化的抗体或其抗原结合片段)；和(ii)用于将所述抗体或抗原结合片段递送给受试者的装置。所述装置可以适用于，例如，向所述受试者皮下递送、眼内递送或关节内递送所述抗体或其抗原结合片段。所述装置可以是，例如，注射器、双筒注射器或集成的2个单独的注射器，用于以推拉方式在吸出膝流体(例如，用于分析)的同时施用治疗性抗体或其抗原结合片段。在有些实施方案中，所述装置是用于眼递送，且包含经巩膜的贴剂或接触镜，它们各自包含所述抗体或其抗原结合片段。在有些实施方案中，所述装置适用于肺内递送。例如，所述装置可以是吸入器或喷雾器。在有些实施方案中，所述装置是预充注射器，诸如笔式装置。所述预充注射器可以含有，例如，至少一个药物单位剂型的一种或多种本文提供的抗体或其抗原结合片段。在有些实施方案中，本文所述的治疗试剂盒可以含有至少一种其它活性剂，所述其它活性剂用于治疗受试者的补体相关病症。所述其它活性剂可以是，例如，本文所述的任意其它试剂。在另一个方面，本公开内容表征了一种用于治疗或预防补体相关病症的方法。所述方法包括:以足以治疗折磨人的补体相关病症的量，给有此需要的人施用本文所述的治疗性抗体或其抗原结合片段。所述方法还可以包括:将所述受试者鉴别为具有补体相关病症。所述补体相关病症可以是，例如，补体相关的炎症性病症、非典型溶血性毒症综合征、年龄相关的黄斑变性、类风湿性关节炎、脓毒症或抗磷脂综合征。在有些实施方案中，所述补体相关病症是补体相关肺病。例如，所述补体相关肺病可以是，例如，哮喘或慢性阻塞性肺疾病。本文描述了适合 在本方法中描述的治疗或预防的其它补体相关病症。给药模式可以随要治疗的补体相关病症的类型而变化，且可以是，例如，静脉内给药、肺内给药、眼内给药、皮下给药或关节内给药。在有些实施方案中，以足以在治疗期间维持降低的全身C5a活性水平的量和频率，将所述抗体或其抗原结合片段施用给人。在有些实施方案中，所述方法可以包括:在给药以后，监测所述人的补体相关病症的一种或多种征状的改善。在有些实施方案中，所述方法可以包括:给所述人施用一种或多种其它治疗剂。在另一个方面，本公开内容表征了一种制品，所述制品包含:(i)具有标签的容器，和(ii)组合物，其包含本文所述的抗体或其抗原结合片段。所述标签可以指示，所述组合物用于施用给具有、疑似具有补体相关病症或处于发展该病症的危险中的人。所述制品还可以包括一种或多种其它活性剂。贯穿本公开内容使用的术语“抗体”表示整个或完整的抗体(例如，IgM、IgG、IgA、IgD或IgE)分子，其通过本领域已知的和描述在本文中的多种方法中的任一种来制备。术语“抗体”包括多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合化的或嵌合的抗体、人源化的抗体、去免疫化的人抗体和全人抗体。所述抗体可以在多个物种中的任一个中制备或衍生出，所述物种是例如:哺乳动物诸如人类、非人灵长类动物(例如，猴、狒狒或黑猩猩)、马、牛、猪、绵羊、山羊、狗、猫、兔、豚鼠、沙鼠、仓鼠、大鼠和小鼠。所述抗体可以是纯化的或重组的抗体。本文使用的术语“抗体片段”、“抗原结合片段”或类似术语表示，保留结合抗原(例如，存在于C5a中、但是不存在于未切割的、天然的C5蛋白的α链中的表位)的能力的抗体片段，例如，单链抗体(scFv)、Fd片段、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。scFv是单个多肽链，其包括衍生出所述scFv的抗体的重链和轻链可变区。另外，在抗体片段的定义中包括:双体(Poljak (1994) Structure 2(12):1121-1123: Hudson 等人(1999)J Immunol Methods 23 (1_2): 177-189,它们二者的公开内容通讨引用糖体并入本f )、微体、三体(Schoonooghe等人(2009) BMC Biotechnol 2:70)、结构域抗体(也称作“重链免疫球蛋白”或 camel ids; Holt 等人(2003) Trends Biotechnol 21(11): 484-490)和细胞内抗体(Huston 等人(2001) Hum Antibodies 10 (3~4): 127-142; Wheeler 等人(2003)Mol Ther 8(3):355-366: Stocks (2004) Drug Discov Today 9(22): 960-966，它们各自的公开内容通过引用整体并入本文)，且可以掺入所述组合物中，并用于本文所述的方法中。除非另有定义，在本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。在冲突的情况下，以发明的文件(包括定义)为准。下面描述了优选的方法和材料，尽管与本文所述的那些类似或等效的方法和材料也可以用于实践或测试本发明公开的方法和组合物。在本文中提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献都通过引用整体并入本文。从下面的描述、实施例，和从权利要求书，显而易见本公开内容的其它特征和优点，例如，用于治疗受试者的补体相关病症的方法。



图1的Venn简图描绘了被鼠抗-人C5a抗体的下述选定集合结合的人C5a中的表位的重叠程度:5anl01ME、5anl80ME、5an048ME、5anl79ME 和 5anl78ME。图2的线图描绘了在体外使用嗜中性粒细胞活化试验测得的C5a介导的信号传递的拮抗作用。Y-轴表示随着新鲜分离的人嗜中性粒细胞的髓过氧化物酶释放而变化的生色底物的光密度(OD)测量。X-轴表示与细胞一起温育的抗体的浓度。在插例中标明了测试的人源化的抗体:BNJ367、BNJ369、BNJ371、BNJ378、BNJ381、BNJ383和人源化的抗-C5抗体。图3的线图描绘了几种治疗性抗体对类风湿性关节炎小鼠模型中的关节炎症的作用。Y-轴表示按毫米计的初始发炎的膝关节厚度。X-轴表示疾病发作以后的天数。在插例中标明了测试的治疗性抗体:5anl95ME (小鼠抗-小鼠C5a抗体)和具有与所述抗-C5a抗体相同的Fe区的对照抗体。图4的线图描绘了几种治疗性抗体对类风湿性关节炎小鼠模型中的总体疾病严重性的作用。Y-轴表示关节炎指数。X-轴表示疾病发作以后的天数。在插例中标明了测试的治疗性抗体:5anl95ME (小鼠抗-小鼠C5a抗体)和具有与所述抗_C5a抗体相同的Fe区的对照抗体。图5描绘了一系列人源化的重链可变区序列。按照从最上面至最下面的次序:BNJ345人源化的抗-C5a抗体的重链可变区(SEQ ID NO: 76) ;BNJ346人源化的抗_C5a抗体的重链可变区(SEQ ID NO:77) ;BNJ347人源化的抗_C5a抗体的重链可变区(SEQ IDNO: 78) ;BNJ354人源化的抗-C5a抗体的重链可变区(SEQ ID NO: 79);和BNJ350人源化的抗_C5a抗体的重链可变区(SEQ ID N0:80)。技术人员会明白重链框架区1、2、3和4和重链⑶R 1、2和3之间的略图。由Kabat等人(下文)定义的这样的略图显示在附图中。“HCFR1”表示重链可变区框架区I，“HC FR2”表示重链可变区框架区2，“HC FR3”表示重链可变区框架区3，“HC FR4”表示重链可变区框架区4。“HC⑶R1”表示重链可变区互补性决定区(CDR) 1，“HC CDR2”表示重链可变区CDR2，“HC CDR3”表示重链可变区CDR3。图6的线图描绘了在给小鼠施用hC5a以后，小鼠血液中的循环嗜中性粒细胞的百分比。在Y-轴上，嗜中性粒细胞数表示为”基线”的百分比，所述基线是在时间O时的嗜中性粒细胞数(或100%嗜中性粒细胞)。χ-轴表示,按分钟计的时间。以下述剂量之一,给小鼠组群静脉内地施用对照抗体[抗-炭疽保护性抗原63，IgG2/G4同种型](“对照”;5只小鼠)或抗-人C5a抗体BNJ383:24 mg/kg (5只小鼠)；12 mg/kg (5只小鼠)；6 mg/kg (5只小鼠)；和3 mg/kg (5只小鼠)，然后施用hC5a。参见实施例13。6只小鼠(“假的”)没有施用人C5a。图7的条形图描绘了在给小鼠施用人C5a之前和之后，小鼠血浆中的髓过氧化物酶(MPO)水平。Y-轴表示小鼠血浆中的MPO的浓度(ng/mL)。X-轴表示，按分钟计的时间。以下述剂量之一，给小鼠组群静脉内地施用对照抗体[抗-炭疽保护性抗原63，IgG2/G4同种型](“对照” ；8只小鼠)或抗-人C5a抗体BNJ383:24 mg/kg (5只小鼠)；12 mg/kg (5只小鼠)；6 mg/kg ( 5只小鼠)；和3 mg/kg (5只小鼠)，然后施用hC5a。4只小鼠(“假的”)没有施用人C5a。图8的线图描绘了在有或没有不同浓度的抗_hC5a抗体(BNJ383)存在下小鼠(施用人C5a)血浆中的人C5a水平的变化。Y-轴表示小鼠血浆中的hC5a的浓度(ng/mL)。X-轴表示，按分钟计的时间。以下述剂量之一，给小鼠组群静脉内地施用对照抗体[抗-炭疽保护性抗原63，IgG2/G4同种型](“对照”；6只小鼠)或抗-人C5a抗体BNJ383:24mg/kg (3 只小鼠)；12 mg/kg (3 只小鼠)；6 mg/kg (3 只小鼠)；和 3 mg/kg (3 只小鼠)，然后施用hC5a。4只小鼠(“假的”)没有施用人C5a。图9的线图描绘了在体外与人C5a的结合的竞争。与不同浓度(例如，400、133、
44.4、14.8、4.9、1.6和0.5 nM)的下述物质之一，用I nM生物素化的hC5a温育250 pM的钌-标记的抗-C5a抗体(BNJ383): (a)在磷酸盐缓冲盐水中的人C5a desarg蛋白，(b)人血浆，(c)食蟹猴血浆，(d) Balb/C (小鼠)血浆，或(e) DBA/2J (小鼠)血浆。关于血浆组分(b)、(C)、(d)和(e)，所述浓度表示温育混合物中的C5抗原的近似终浓度。Y-轴表示，随着检测的钌-标记的抗_C5a抗体的量而变化的任意荧光单位。X-轴表示抗原竞争剂的浓度(nM)。图10的线图描绘了几种补体抑制蛋白对补体的旁路途径(AP)的影响。Y-轴表示，AP补体活性相对于基线(BL ;在没有补体抑制剂存在下的活性水平)的百分比。X-轴表示，给定的补体抑制剂的浓度(μ M)。分别评价了抗_hC5a抗体BNJ383以及抗-C5抗体对AP活性的影响。图11的线图描绘了几种补体抑制蛋白对补体的经典途径(CP)的影响。Y-轴表示，CP补体活性相对于基线(BL ;在没有补体抑制剂存在下的活性水平)的百分比。X-轴表示，给定的补体抑制剂的浓度(μ M)。分别评价了抗_hC5a抗体BNJ383以及抗-C5抗体对CP活性的影响。图12A、12B、12C和12D是一系列色谱图，它们描绘了在有或没有hC5蛋白存在下抗_C5a抗体(BNJ383)和抗_hC5抗体的保留时间。就所有图而言，X-轴表示按分钟计的保留时间，Y-轴表示在214 nm波长的吸光度单位。在每个图中，潜入的子图描绘了特征峰的放大图。图12A描绘了在没有hC5蛋白存在下，BNJ383的保留时间。图12B描绘了在没有hC5蛋白存在下，抗-C5抗体的保留时间。图12C描绘了在有hC5 (与BNJ383相比2.1倍摩尔过量的hC5)存在下，BNJ383的保留时间。从右至左，列举的峰代表:(a)未形成复合物的BNJ383或hC5 ； (b) BNJ383,其具有一个与未切割的hC5结合的抗原结合位点；和(c)微量级分，其与未切割的hC5对BNJ383的双占据相一致。图12D描绘了在有等摩尔量的hC5存在下，抗-C5抗体的保留时间。从右至左，列举的峰代表:(a)未形成复合物的抗-C5抗体或hC5 ； (b)抗-C5抗体，其具有一个与未切割的hC5结合的抗原结合位点；和(c)与2个未切割的C5分子结合的抗-C5抗体。图13的线图描绘了，使用ELISA，在有hC5存在下，抗_C5a抗体BNJ383与hC5adesarg的结合。X-轴表示抗体的浓度(ng/mL)。Y-轴表示在450 nm波长的光密度。图14的散布图描绘了随抗_C5a抗体(BNJ383)的血浆浓度而变化的、存在于食蟹猴血浆中的游离C5a/C5a desarg的浓度。Y-轴描绘了在血浆样品中检测到的C5a/C5adesarg 的浓度(pg/mL),所述血衆样品在以 I mg/kg、10 mg/kg、100 mg/kg、250 mg/kg 或400 mg/kg动物体重的剂量 单次静脉内施用BNJ383以后I天至30天范围内的时间点得自食蟹猴。X-轴表示，在每个样品中的BNJ383浓度&g/mL)。图15A的散布图描绘了随着循环中的抗_C5a抗体(BNJ383)的浓度(X-轴)而变化的、经过经典途径开始的血清样品中的溶血性活性相对于基线值的百分比(Y-轴)。图15B的散布图描绘了随着循环中的抗_C5a抗体(BNJ383)的浓度(X-轴)而变化的、通过CH50eq试验测得的、血清样品中经过经典途径开始的末端补体复合物形成相对于基线值的百分比(Y-轴)。图15C的散布图描绘了随着循环中的抗_C5a抗体(BNJ383)的浓度(X-轴)而变化的、通过CCP试验测得的、血清样品中经过经典途径开始的末端补体复合物形成相对于基线值的百分比(Y-轴)。
具体实施例方式本公开内容提供了结合游离C5a (例如，游离的人C5a)的抗体和其抗原结合片段、含有所述抗体或它们的片段的组合物、以及使用前述任一种治疗或预防补体相关病症的方法，所述病症例如、但不限于:aHUS、黄斑变性(例如，AMD)、RA、脓毒症、抗磷脂综合征、烧伤(例如，严重烧伤)、肺出血肾炎综合征、狼疮肾炎或补体相关肺病诸如哮喘或慢性阻塞性肺疾病(C0PD)。本公开内容也提供了这样的抗_C5a抗体(及其片段):它们具有在得自人的游离C5a和得自非人哺乳动物物种(诸如非人灵长类动物(例如，食蟹猴或恒河猴))的游离C5a之间的交叉反应性。尽管无意成为限制性的，在下面详细说明并在工作实施例中例证了示例性的抗体(和抗原结合片段)、组合物(例如，药物组合物和制剂)和使用所述组合物的方法。抗_C5a抗体和其抗原结合片段
本公开内容提供了结合补体组分C5a的抗体。如以上所讨论的，C5的原型(proform)(1676个氨基酸残基的前体蛋白)通过一系列蛋白水解性裂解事件进行加工。前18个肽(编号为-18至-1)构成从前体蛋白切下的信号肽。剩余的1658个氨基酸的蛋白被切成2段，以形成α和β链。第一个切割事件发生在氨基酸残基655和656之间。第二个切割发生在氨基酸残基659和660之间。所述2个切割事件导致3个独特多肽片段的形成:(i)包含氨基酸1-655的片段，它被称作β链；(ii)包含氨基酸660-1658的片段，它被称作α链；和(iii)由氨基酸656-659组成的四肽片段。α链和β链多肽片段经由二硫键彼此连接，并构成成熟的C5蛋白。CP或AP C5转化酶通过在残基733和734之间切割α链而活化成熟的C5，所述切割会导致C5a片段(氨基酸660-733)的释放。成熟的C5的剩余部分是片段C5b，它含有与β链通过二硫键相连的α链的残基734-1658。在体内，C5a会被血清酶 (羧肽酶B)快速地代谢成73个氨基酸的形式，称作“C5adesarg”,它已经丧失了羧基端精氨酸残基。因此,在有些实施方案中，结合游离C5a的抗体也会结合去精氨酸化的C5a。在有些实施方案中，结合游离C5a的抗体不会结合去精氨酸化的 C5a。在有些实施方案中，所述抗_C5a抗体会结合存在于C5a中的新表位，即，在从成熟的C5的α链片段释放出C5a以后暴露出的表位。也就是说，在有些实施方案中，本文所述的抗-C5a抗体结合C5a和/或C5a desarg,但是不结合未切割的、天然的(完全折叠的)C5。如上所述，在有些实施方案中，所述抗_C5a抗体或其抗原结合片段可以结合未切割的、加工过的C5 (例如，血浆C5)的亚群，所述亚群构成样品中的全长C5的总群体(例如，血液或血浆样品或包含重组全长C5的样品)的小于10 (例如，小于9.5、9、8.5、8、7.5、
7,6.5、6、5.5、5、4.5、4、3.5、3、2.5、2、1.5、1、0.5,0.4,0.3,0.2 或小于 0.1)%，所述亚群完全地或部分地变性，从而暴露否则会被封闭的C5a新表位。因而，在有些实施方案中，本文所述的抗_C5a抗体或其抗原结合片段可以结合游离C5a，但是不会结合90%或更多的未切割的、天然的C5群体的C5。在有些实施方案中，在任意数目的适用于测试C5活性的试验(例如，溶血试验或CH50eq试验)中，所述部分或完全变性的亚群是无活性的，或具有降低的活性(例如，小于全功能的全长C5蛋白的活性的90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、
30、25、20、15、10、5%)。适用于测试本文所述的抗_C5a抗体在有些实施方案中可以结合的小亚群的活性的方法，是本领域已知的，并描述在本文中。在有些实施方案中，所述抗_C5a抗体会结合哺乳动物(例如，人)C5a蛋白。例如，所述抗_C5a抗体可以结合具有下述氨基酸序列的人C5a蛋白:
TLQKKIEEIAAKYKHSVVKKCCYDGACVNNDETCEQRAARISLGPRCIKAFTECCVVASQLRANISHKDMQLGR (SEQ ID NO:1).在有些实施方案中，所述抗_C5a抗体可以结合具有下述氨基酸序列的去精氨酸化的人 C5a 蛋白:TLQKKIEEIAAKYKHSVVKKCCYDGACVNNDETCEQRAARISLGPRCIKAFTECCVVASQLRANISHKDMQLG (SEQ ID NO: 2)。本文所述的抗_C5a抗体可以结合全长人C5a和去精氨酸化的人C5a。在有些实施方案中，所述抗体可以结合人C5a的表位，所述表位在具有下述氨基酸序列的蛋白的结构片段内或与其重叠:TLQKKIEEIAAKYK (SEQ ID NO:3) ；HSVVKKCCYDGAC(SEQ ID NO:4) ；VNNDE (SEQ ID NO:5) ；TCEQRAAR (SEQ ID NO:6) ；ISLG (SEQ ID NO:7)；PRCIKAFTECCVVASQLRANIS (SEQ ID NO:8) ；HKDMQLG (SEQ ID NO:9) ;*HKDMQLGR (SEQ IDNO: 10)。参见，例如，Cook等人(2010) Acta Cryst 2並:190-197。在有些实施方案中，所述抗体可以结合C5a的表位，所述表位在包含至少2个配对的半胱氨酸残基的C5a肽片段的氨基酸序列内或与其重叠。例如，抗_C5a抗体可以结合这样的片段，所述片段包含下述氨基酸序列或由其组成:CCYDGACVNNDETC (SEQ ID NO: 11) ；CYDGACVNNDETCEQRAARISLGPRCIKAFTEC (SEQ ID NO:12 ;和CEQRAARISLGPRCIKAFTECC (SEQ ID NO:13)，其中，在每个所述的肽片段内，第一个和最后一个半胱氨酸残基通过二硫键配对。在有些实施方案中，本文所述的抗-C5a抗体可以结合人C5a蛋白的表位,所述表位在下述氨基酸序列内或与其重叠:YDGACVNNDETCEQRAAR (SEQ ID NO: 14)或 CYDGACVNNDETCEQRAA (SEQ ID Ν0:1δ)。在有些实施方案中，抗体可以结合人C5a蛋白或其含有特定氨基酸序列的片段，所述特定氨基酸序列含有在SEQ ID NO: 1-15中的任一个中描述的至少4个(例如，至少4、5、6、7、8、9、10、
11、12、13、14、15、16或17或更多个)连续氨基酸或由其组成。在有些实施方案中，本文所述的抗-C5a抗体会结合三元表位,所述三元表位包含C5a蛋白的2个或更多个(例如,至少
2、3或4个)不连续的肽区域,例如,通过二硫键连接到一起的2个或更多个不连续的C5a肽区域。用于鉴别特定抗体(例如，抗_C5a抗体)所结合的表位的方法也是本领域已知的。例如，可以如下鉴别抗_C5a抗体所结合的在C5a (或去精氨酸化的C5a)内的结合表位:测量所述抗体与补体组分C5a蛋白的几种(例如，3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或30或更多)重叠肽片段(例如，具有在SEQ ID N0:1或SEQ ID NO: 2中所述的氨基酸序列的人C5a蛋白的几种重叠片段)的结合。然后使每种不同的重叠肽结合在固体支持物(例如，多孔试验板的单独孔)上的独特地址 。接着，如下研究所述抗_C5a抗体:在允许所述抗体结合它的表位的时间量和条件下，使它接触在所述试验板中的每种肽。通过洗涤每个孔，除去未结合的抗_C5a抗体。接着，使可检测地标记的第二抗体(其结合在板孔中可能存在的抗_C5a抗体)接触每个孔，并通过洗涤步骤除去未结合的第二抗体。由在孔中的可检测地标记的第二抗体产生的可检测信号的存在或量，指示所述抗_C5a抗体会结合与所述孔连接的特定肽片段。参U列如，Harlow和Lane {同上)，Benny K.C.Lo {同上\和美国专利申请公开号20060153836，其公开内容通过引用整体并入。使用BIAcore色谱技术{参见M如，Pharmacia BIAtechnology Handbook, “Epitope Mapping,，，第 6.3.2 部分(1994 年 5月);和Johne等人(1993) J Immunol Methods 160:20191-8),也可以鉴别出抗体所结合的特定表位。在有些实施方案中，本文所述的抗_C5a抗体含有轻链互补性决定区(CDR)的特定集合和/或重链CDR的特定集合。例如，在有些实施方案中，本文所述的抗_C5a抗体或其抗原结合片段可以包含从特定轻链多肽得到的轻链CDR集合，所述特定轻链多肽包含在SEQ ID NO: 19、37或42中的任一个中所述的氨基酸序列。在有些实施方案中，本文所述的抗_C5a抗体或其抗原结合片段可以包含从特定重链多肽得到的重链⑶R集合，所述特定重链多肽包含在SEQ ID N0:27或45中所述的氨基酸序列。在下面更详细地描述了从前述轻链可变区和重链可变区得到的示例性的轻链和重链CDR集合(参见表I)。根据不同的方法，已经不同地定义了⑶R和框架区的确切边界。在有些实施方案中，在轻链或重链可变结构域内的CDR或框架区的位置可以如Kabat等人[(1991) “Sequences of Proteins of Immunological Interest.，，NIH
发明者R.P.罗瑟, D.L.谢里丹, P.P.坦伯里尼, 张裕春 申请人:阿雷克森制药公司