一种治疗痛风性关节炎的三色堇提取物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药提取物领域，具体涉及一种治疗痛风性关节炎的三色堇提取物及 其制备方法，该提取物可以应用于制备治疗痛风性关节炎的药物。
【背景技术】
[0002] 药材三色堇为堇菜科堇菜属植物三色堇的全草，又名蝴蝶花（《中国药用植物图 鉴》）、游蝶花（《台湾药用植物志》）。
[0003] 原植物三色堇（学名：Viola tricolor L.)是堇菜目、堇菜科、堇菜属的二年或多 年生草本植物。基生叶叶片长卵形或披针形，具长柄，茎生叶叶片卵形、长圆形或长圆披针 形，先端圆或钝，边缘具稀疏的圆齿或钝锯齿。三色堇是欧洲常见的野花物种，也常栽培于 公园中，是冰岛、波兰的国花。花朵通常每花有紫、白、黄三色，故名三色堇。该物种较耐寒， 喜凉爽，开花受光照影响较大。
[0004]三色堇可杀菌、治疗皮肤上青春痘、粉刺、过敏问题，三色堇药浴也有很好的丰胸 作用。在中国医药古籍记载的护肤圣品中，三色堇无疑是最炫目的。三国时期的《名医别 录》中就已把三色堇列为重要护肤药材，隋炀帝为讨后宫佳丽的欢心，曾组织太医研究三色 堇去痘的多种方法，并将其一一写进《隋炀帝后宫诸宫药方》与《香方粉泽》等书之中。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种三色堇提取物，其制备方法和液相分析方法，含有该 提取物的药物制剂及利用该提取物制备治疗痛风性关节炎的药物的用途。
[0006]本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] -种二色堇提取物，该提取物由以下方法制备：
[0008] (a)以重量计，每100份药材包含干燥的三色堇80~90份和干燥的甘草10~20 份，混合粉碎，用75 %乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩 液；(b)将步骤（a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正 丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁 醇萃取物用水溶解，过滤，用大孔树脂富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积除去大 极性成分，再用70%乙醇洗脱12个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩即得。
[0009] 为了能够通过建立HPLC指纹图谱的方法控制不同批次制备的提取物的批间差 异，所述提取物的液相分析方法为：
[0010]色谱柱：Agilent Zorbax Extent_C18柱（4. 6mmX 250mm，5 y m);
[0011] 流动相：A为乙腈，B为0. 5%磷酸溶液；
[0012] 梯度洗脱程序：0? 01 ~5min，A 10%- 15% ;5 ~lOmin，A 15%-48% ;10 ~ 25min，A 48%- 78% ;25 ~30min，A 78%- 10%;
[0013] 流动相流速：1. OmL ? min S检测波长：270nm ;柱温：35°C ;进样量：10 y L。
[0014] 药物制剂，含有治疗有效量的所述提取物和药学上可接受的载体。
[0015] 所述的提取物在制备治疗痛风性关节炎的药物中的应用。
[0016] 所述的药物制剂在制备治疗痛风性关节炎的药物中的应用。
[0017] 本发明提取物用作药物时，可以直接使用，或者以药物制剂的形式使用。
[0018] 所述药物制剂含有治疗有效量的本发明三色堇提取物，其余为药物学上可接受 的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0019] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物制剂以单位体重服用量的形式使用。本发明提取物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0020] 本发明的优点：本发明通过对干燥的三色堇和甘草进行提取、除杂、富集处理，能 得到具有治疗痛风性关节炎的提取物；本发明提供的液相分析方法可以用于建立该提取物 的指纹图谱，用于控制不同批次制备的提取物的批间差异。
【附图说明】
[0021] 图1为三色堇提取物HPLC液相图谱。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0023] 实施例1:三色堇提取物①制备（85份三色堇，15份甘草）
[0024] 药材来源：三色堇和甘草购自安徽亳州中药材市场。
[0025] 主要试剂：食品级乙醇购自上海凌峰化学试剂有限公司；医药级AB-8大孔树脂购 自天津波鸿树脂有限公司；乙腈为HPLC级，购于TEDIA ;85 %磷酸为HPLC级，购于TEDIA; 色谱用纯净水为哇哈哈纯净水。
[0026]制备方法：将8. 5kg干燥三色堇根茎和I. 5kg干燥甘草混合粉碎，用75 %乙醇溶 液热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所得 乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和 的正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物232g;(c)正丁醇萃取物用I. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱体 积1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70% 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70%洗脱液，减压浓缩，即得三色堇提取物约150g。
[0027] 实施例2:三色堇提取物②制备（80份三色堇，20份甘草）
[0028]制备方法：将8. Okg干燥三色堇根茎和2. Okg干燥甘草混合粉碎，用75 %乙醇溶 液热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所得 乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和 的正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物232g;(c)正丁醇萃取物用I. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱体 积I. 5L)富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70% 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70%洗脱液，减压浓缩，即得三色堇提取物约150g。
[0029] 实施例3:三色堇提取物③制备（90份三色堇，10份甘草）
[0030] 制备方法：将9. Okg干燥三色堇根茎和1.0 kg干燥甘草混合粉碎，用75 %乙醇溶 液热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所得 乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和 的正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物232g;(c)正丁醇萃取物用I. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱体 积1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70% 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70%洗脱液，减压浓缩，即得三色堇提取物约150g。
[0031] 实施例4:三色堇提取物④制备（75份三色堇，25份甘草）
[0032] 制备方法：将7. 5kg干燥三色堇根茎和2. 5kg干燥甘草混合粉碎，用75 %乙醇溶 液热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所得 乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和 的正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物232g;(c)正丁醇萃取物用I. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱体 积1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70% 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70%洗脱液，减压浓缩，即得三色堇提取物约150g。
[0033] 实施例5:三色堇提取物⑤制备（95份三色堇，5份甘草）
[0034] 制备方法：将9. 5kg干燥三色堇根茎和0. 5kg干燥甘草混合粉碎，用75 %乙醇溶 液热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所得 乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和 的正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物232g;(c)正丁醇萃取物用I. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱体 积1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70% 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70%洗脱液，减压浓缩，即得三色堇提取物约150g。
[0035] 实施例6 :液相色谱分析
[0036] 供试品溶液配制：取实施例1方法制得的提取物5mg至50mL棕色容量瓶中，加 30mL 10 %乙腈水溶液超声溶解，冷却至室温后，继续加10 %乙腈水溶液定容。分析方法如 下：
[0037] 高效液相色谱仪：Agilent 1260,二元栗；
[0038]色谱柱：Agilent Zorbax Extent_C18 柱（4. 6mmX 250mm，5 y m);
[0039] 流动相：A为乙腈，B为0. 5%磷酸溶液；
[0040]梯度洗脱程序：0?01 ~5min，A 10% - 15% ;5 ~lOmin，A 15% - 48% ;10 ~ 25min，A 48%- 78% ;25 ~30min，A 78%- 10%;
[0041] 流动相流速：1. OmL ? min S检测波长：270nm;柱温：35°C;进样量：10 y L。
[0042]用制备的10批次的三色堇提取物进行分析，进行色谱峰匹配，结果1~10号峰在 10批样品色谱图中均出现。因此标定10个峰为共有色谱峰，据此建立该提取物的HPLC质 量控制图谱，结果见图1。该10批次的三色堇提取物药理活性相似。
[0043] 实施例7 :提取物药理试验
[0044] 一、材料与方法
[0045] I. 1药物：三色堇提取物①~⑤分别按照实施例1~5制得。秋水仙碱片，批号 100206,规格0. 5mg/s，西双版纳版纳药业有限责任公司；取