天后观察双眼角膜的角膜曲率Kj (j = 1、2~10)及角膜中央厚度（CCT)Hj (j = 1、 2…10) 〇
[0077] 3、结果分析
[0078] 采用SPSS17.0统计学软件对处理前与处理15天后的双眼角膜平均曲率
[0079] (Km = 1/10(K1+K2+…K10)，K'm = 1/10(K' 1+K' 2+...+K' 10))、角膜中央厚度 (CCT) (Hm= 1/10(H1+H2+…H10)，H'm= 1/10(H' 1+H' 2+…H' 10))进行分析，所有数据结 果以均数土标准差表示，实验数据结果见表1和表2。每只兔子的左右眼的角膜平均曲率 及角膜中央厚度改变值分别进行配对t检验，P〈0. 05为差异有统计学意义。
[0080] 实施例2
[0081] I、II型胶原酶溶液的配制
[0082] I. IPBS溶液的配制
[0083]将0? 27g的磷酸二氢钾（KH2P04)、1?42g的磷酸氢二钠（Na2HP(M)、8g的氯化钠 (NaCl)、0. 2g的氯化钾（KCl)用800mL的去离子水充分搅拌溶解，定容到1L，并使用浓盐酸 调pH至7. 4,得到PBS溶液。
[0084] I. 211型胶原酶溶液的配制
[0085] 将24mg右旋糖酐粉末和I. 8g II型胶原酶粉末溶解于100mL的PBS缓冲液中， 轻轻涡旋振荡，使其充分溶解，然后用低蛋白结合的0. 22um的滤膜过滤除菌，分装成小份 量，-20°C保存避光冻存。
[0086] 2、活体圆锥角膜模型的建立
[0087]术前对10只实验兔进行常规裂隙灯、直接眼底线、角膜曲率、中央角膜厚度等检 查，排除眼前节病变，10只新西兰白兔采用右眼为实验眼和左眼为对照眼。将实验兔固定 于试验操作台上，将5%戊巴比妥钠注射液以0. 5ml/Kg行实验兔耳缘静脉缓慢推注将兔麻 醉，盐酸奥卡因滴眼液滴3滴，使角膜表面浸润麻醉；采用手持角膜曲率计和手持角膜超声 测厚仪观测右眼角膜曲率Ki(i = 1、2…10)、左眼角膜曲率K'i(i = 1、2…10)及角膜中央 厚度（CCT)Hi (i = 1、2~10)。采用小圆刀片和角膜刮刀去刮除角膜中心直径8mm的角膜 上皮，采用移液器将步骤1配置的18mg/ml的胶原酶溶液滴入右眼，滴入量为200ul，浸泡右 眼角膜20min，同时左眼角膜使用含有24%右旋糖苷的PBS溶液浸泡20min。随后采用棉 签吸干溶液，PBS溶液冲洗多次洗净残留溶液，在手术眼部涂抹迪可罗眼膏预防感染，在处 理5天后观察双眼角膜的角膜曲率Kj (j = 1、2*" 10)及角膜中央厚度（CCT)Hj (j = 1、2… 10) 〇
[0088] 3、结果分析
[0089] 采用SPSS17. 0统计学软件对处理前与处理5天后的双眼角膜平均曲率
[0090] (Km = 1/10(K1+K2+…K10)，K'm = 1/10(K' 1+K' 2+...+K' 10))、角膜中央厚度 (CCT) (Hm= 1/10(H1+H2+…H10)，H'm= 1/10(H' 1+H' 2+…H' 10))进行分析，所有数据结 果以均数土标准差表示，实验数据结果见表1和表2。每只兔子的左右眼的角膜平均曲率 及角膜中央厚度改变值分别进行配对t检验，P〈0. 05为差异有统计学意义。
[0091] 实施例3
[0092] 1、II型胶原酶溶液的配制
[0093] I. IPBS溶液的配制
[0094]将0?27g的磷酸二氢钾（KH2P04)、1?42g的磷酸氢二钠（Na2HP(M)、8g的氯化钠 (NaCl)、0. 2g的氯化钾（KCl)用800mL的去离子水充分搅拌溶解，定容到1L，并使用浓盐酸 调pH至7. 4,得到PBS溶液。
[0095] I.211型胶原酶溶液的配制
[0096] 将IOmg右旋糖酐粉末和1.0 g II型胶原酶粉末溶解于100mL的PBS缓冲液中， 轻轻涡旋振荡，使其充分溶解，然后用低蛋白结合的0. 22um的滤膜过滤除菌，分装成小份 量，-20°C保存避光冻存。
[0097] 2、活体圆锥角膜模型的建立
[0098] 术前对10只实验兔进行常规裂隙灯、直接眼底线、角膜曲率、中央角膜厚度等检 查，排除眼前节病变，10只新西兰白兔采用右眼为实验眼和左眼为对照眼。将实验兔固定 于试验操作台上，将5%戊巴比妥钠注射液以0. 5ml/Kg行实验兔耳缘静脉缓慢推注将兔麻 醉，盐酸奥卡因滴眼液滴3滴，使角膜表面浸润麻醉；采用手持角膜曲率计和手持角膜超声 测厚仪观测右眼角膜曲率Ki(i = 1、2…10)、左眼角膜曲率K'i(i = 1、2…10)及角膜中央 厚度（CCT)Hi (i = 1、2…10)。采用小圆刀片和角膜刮刀去刮除角膜中心直径8mm的角膜上 皮，采用移液器将步骤1配置的lOmg/ml的胶原酶溶液滴入右眼，滴入量为200ul，浸泡右眼 角膜40min，同时左眼角膜使用含有10%右旋糖苷的PBS溶液浸泡40min。随后采用棉签吸 干溶液，PBS溶液冲洗多次洗净残留溶液，在手术眼部涂抹迪可罗眼膏预防感染，在处理10 天后观察双眼角膜的角膜曲率Kj (j = 1、2…10)及角膜中央厚度（CCT)Hj (j = 1、2…10)。
[0099]3、结果分析
[0100] 采用SPSS17. O统计学软件对处理前与处理10天后的双眼角膜平均曲率 [0101] (Km = 1/10(K1+K2+…K10)，K'm = 1/10(K' 1+K' 2+…+K' 10))、角膜中央厚度 (CCT) (Hm= 1/10(H1+H2+…H10)，H'm= 1/10(H' 1+H' 2+…H' 10))进行分析，所有数据结 果以均数土标准差表示，实验数据结果见表1和表2。每只兔子的左右眼的角膜平均曲率 及角膜中央厚度改变值分别进行配对t检验，P〈0. 05为差异有统计学意义。
[0102] 表1实验前后角膜平均曲率数据统计与分析结果
[0103]
[0104] 根据表1，以上不同实施例中右眼实验前后的角膜平均曲率都明显高于处理前的 角膜平均率，而且P值均小于〇. 01，而左眼对照组实验前后的角膜平均曲率差异不明显，计 算得到的P值无统计学意义，证明经过各个实施例处理方案实验前后的角膜平均曲率均具 有显著性差异，左眼对照组角膜平均曲率在实验前后无差异。
[0105] 表2实验前后角膜平均中央厚度数据统计与分析结果
[0106]
[0107] 根据表2,以上不同实施例中右眼实验前后的角膜中央厚度都明显低于处理前的 角膜平均率，而且P值均小于〇. 01，而左眼对照组实验前后的角膜中央厚度差异不明显，分 析计算得到的P值远大于〇. 05,无统计学意义，证明经过各个实施例处理方案实验前后的 角膜中央厚度均具有显著性差异，左眼对照组角膜中央厚度在实验前后无差异。
[0108] 通过以上不同实施例中不同浓度的II型胶原酶处理并在不同处理时间下检测角 膜曲率数据与角膜中央厚度差值数据（CCT)，进一步分析结果，证明在实验前后活体的兔角 膜的平均曲率显著增加，并且角膜的中央厚度也显著减少，这与临床圆锥角膜的病理状态 所呈现的曲率增加、中央厚度减少是一致的。由此，可得出该模型可作为有效可靠的活体角 膜扩张模型，可用来研究圆锥角膜发病机制和探索安全有效的治疗方法。此外，本装置中所 述的工具和材料来源充足、成本低、涉及到的手术操作构建方法简单，更加有利于临床上的 广泛推广应用。
【主权项】
1. 一种实现兔角膜扩张模型的装置，其特征在于，包括： 去上皮工具，用于除去兔角膜的上皮； 角膜浸泡工具，用于对除去上皮的兔角膜进行浸泡处理，使兔角膜扩张； 涂膏工具，用于将防感染剂涂抹在浸泡处理后的兔角膜上。2. 如权利要求1所述的装置，其特征在于，还包括麻醉工具，用于除去兔角膜的上皮之 前，对兔角膜进行麻醉处理。3. 如权利要求1所述的装置，其特征在于，所述的角膜浸泡工具包括： 作用于角膜上，用于浸泡角膜的II型胶原酶溶液； 用于将所述II型胶原酶溶液施用于角膜上的移液器； 由于清除残留的胶原酶溶液的棉签； 用于冲洗角膜的PBS溶液； 用于将PBS溶液对角膜进行冲洗处理的注射器。4. 如权利要求3所述的装置，其特征在于，所述II型胶原酶的浓度为3-18mg/ml。5. 如权利要求1所述的装置，其特征在于，所述涂膏工具包括： 用于防病原菌侵入浸泡处理后的兔角膜上的防感染处理剂； 用于将所述放感染处理剂涂抹在兔角膜上的无菌棉签。6. 如权利要求5所述的装置，其特征在于，所述防感染处理剂选自迪可罗眼膏、红霉素 眼膏或托百士眼膏中的一种。7. 如权利要求2所述的装置，其特征在于，所述麻醉工具包括： 用于麻醉兔角膜，使其失去感知能力的麻醉剂； 用于将麻醉剂注射入兔角膜的注射器。8. 如权利要求7所述的装置，其特征在于，所述麻醉剂选自盐酸奥布卡因滴眼液、奥布 卡因凝胶或奥布卡因滴眼液中的一种。9. 一种兔角膜扩张模型的构建方法，其特征在于，包括： 使用去上皮工具，除去兔角膜的上皮结构，得到除去上皮的兔角膜； 使用角膜浸泡工具，对除去上皮的兔角膜进行浸泡处理，使角膜上的胶原发生降解，得 到胶原降解的兔角膜； 利用涂膏工具，将防感染剂涂抹在胶原降解的兔角膜上，得到具有抵抗病原菌侵入的 兔角膜； 将所述手术处理角膜的实验兔饲养5-15天，即得到活体兔角膜扩张模型。
【专利摘要】本发明公开了一种实现活体兔角膜扩张模型的装置及其构建方法，涉及医学动物模型技术领域。本发明中构建兔角膜扩张模型的装置包括去上皮工具、角膜浸泡工具以及麻醉工具等。采用该装置，进行手术操作，如去角膜上皮、不同浓度的胶原酶对角膜进行浸泡处理等，从而实现活体兔角膜的成功构建。本装置中所述的工具和材料来源充足、成本低、涉及到的手术操作构建方法简单；所构造的模型与临床圆锥角膜的病理状态一致，可用于圆锥角膜的机理性研究。
【IPC分类】A61K49/00, A61K38/48
【公开号】CN105031668
【申请号】CN201510570341
【发明人】晏晓明, 乔静, 汤韵, 宋文静, 李海丽, 荣蓓, 杨松霖, 吴元
【申请人】北京大学第一医院
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年9月9日