聚乙二醇化黑色素纳米颗粒及其制备方法与用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于制药领域，具体涉及聚乙二醇化黑色素纳米颗粒及其制备方法与用 途。
【背景技术】
[0002] 铁过载病，又称血色病，是由于长期反复输血、地中海贫血、骨髓造血活跃、富含铁 食物摄入过多等因素引起的疾病，其可引起组织器官的功能异常、甚至危及生命。铁螯合剂 或去铁剂通过动员贮库使过量的铁从尿液或粪便排泄，可以用来治疗铁过载病。目前，已有 100多种铁螯合剂，临床上最常用的铁螯合剂是去铁胺。去铁胺与Fe 3+螯合比为1:1，给药 方式为皮下或静脉注射，但由于去铁胺的体内半衰期短，需频繁给药才能达到治疗效果，且 副作用多，易导致生长迟缓、内分泌功能障碍和周围神经病变等。
[0003] 黑色素是一种天然的色素，不仅广泛地存在于人和高等动物的皮肤、毛发和眼球 组织中，而且在一些植物和昆虫的皮中也可以大量存在。目前，研究较多的有鱿鱼墨黑色素 和泰和乌鸡黑色素等，其生物相容性好，无毒安全。鱿鱼墨黑色素具有很强的阳离子螯合特 性，主要通过如羧基和去质子化羟基等阴离子起作用，黑色素与金属离子的结合能够起着 保护细胞的功能。
[0004] 但是，自然界获得的黑色素，虽然能够与铁离子等金属离子螯合，但是由于其不易 溶解于水，并不能作为治疗铁过载病的药物。因此，研究新型的螯合作用较强、体内半衰期 较长、毒副作用较小的铁螯合剂具有重要意义。
【发明内容】
[0005] 为此，本发明所要解决的是现有的铁螯合剂的体内半衰期较短、毒副作用较大的 技术问题，从而提出一种聚乙二醇化黑色素纳米颗粒的制备方法，进而提出上述制备方法 制备得到的聚乙二醇化黑色素纳米颗粒及用途。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案来实现的：
[0007] 本发明提供一种聚乙二醇化黑色素纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：
[0008] (1)取黑色素溶于碱的水溶液，搅拌下加入酸调节至pH7. 0,离心，洗涤，冷冻干 燥，得水溶性黑色素纳米颗粒，备用；
[0009] (2)用端部含氨基的聚乙二醇对所述水溶性黑色素纳米颗粒进行表面处理；
[0010] 所述碱选自碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱土金属碳酸 盐、碱金属碳酸氢盐、碱土金属碳酸氢盐、碱金属醋酸盐、碱金属磷酸盐、碱金属醇盐、氨气、 氨水、胺中的至少一种；
[0011] 所述酸选自氢卤酸、硫酸、硝酸、磷酸、乙酸中的至少一种。
[0012] 本发明上述聚乙二醇化黑色素纳米颗粒的制备方法中，所述表面处理的步骤为：
[0013] 取所述水溶性黑色素纳米颗粒的水溶液，加入NH4OH溶液调节至pH9. 0,加入pH = 9的端部含氨基的聚乙二醇的水溶液，离心，洗涤，冷冻干燥，即得。
[0014] 本发明上述聚乙二醇化黑色素纳米颗粒的制备方法中，所述端部含氨基的聚乙二 醇为NH2-PEG2mq-NH2。
[0015] 本发明上述聚乙二醇化黑色素纳米颗粒的制备方法中，所述碱为氢氧化钠，所述 酸为盐酸。
[0016] 本发明还提供一种利用上述制备方法制备得到的聚乙二醇化黑色素纳米颗粒。
[0017] 本发明上述聚乙二醇化黑色素纳米颗粒中，所述聚乙二醇化黑色素纳米颗粒的粒 径为1~l〇〇nm。
[0018] 本发明上述聚乙二醇化黑色素纳米颗粒中，所述聚乙二醇化黑色素纳米颗粒的粒 径为1~l〇nm。
[0019] 本发明上述聚乙二醇化黑色素纳米颗粒中，所述聚乙二醇化黑色素纳米颗粒为球 形。
[0020] 本发明上述聚乙二醇化黑色素纳米颗粒在制备金属螯合剂中的用途。
[0021] 本发明上述聚乙二醇化黑色素纳米颗粒在制备治疗铁过载疾病的药物中的用途。
[0022] 本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：
[0023] 本发明聚乙二醇化黑色素纳米颗粒的制备方法，通过优化选择表面处理步骤所用 的聚乙二醇的具体种类、制备水溶性黑色素纳米颗粒步骤所用的碱和酸、各步骤的具体操 作等，使得所制备的聚乙二醇化黑色素纳米颗粒的粒径为1~l〇nm，在水等溶剂中分散性 良好，可以与Fe3+螯合；ICR小鼠模型实验结果表明，其具有超强的铁排泄效率和良好的安 全性，半衰期长达23h，减少了给药次数，延长了给药间隔，提高了用药的方便性，可以作为 制备治疗铁过载疾病的药物。
【附图说明】
[0024] 为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合 附图，对本发明作进一步详细的说明，其中：
[0025] 图I(a)是本发明实验例中在含有Fe3+的血浆中加入黑色素后的血浆稳定性效果 图；
[0026] 图1(b)是本发明实验例中在含有Fe3+的血浆中加入聚乙二醇化黑色素纳米颗粒 后的血浆稳定性效果图；
[0027] 图2(a)是本发明实验例中正常小鼠的肺部图；
[0028] 图2(b)是本发明实验例中注射聚乙二醇化黑色素纳米颗粒后小鼠的肺部图；
[0029] 图2(c)是本发明实验例中注射黑色素后小鼠的肺部图；
[0030] 图3是本发明实验例中聚乙二醇化黑色素纳米颗粒的平均血药浓度时间曲线图 (n= 6)；
[0031 ] 图4是本发明实验例中各组小鼠的体重变化图；
[0032] 图5是本发明实验例中各组小鼠的尿粪铁含量比率图；
[0033] 图6是本发明实验例中小鼠的组织铁含量比率图；
[0034] 图中，PEGMN表示聚乙二醇化黑色素纳米颗粒，DFO表示去铁胺。
【具体实施方式】
[0035] 实施例I
[0036] 本实施例一种聚乙二醇化黑色素纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：
[0037] (1)取20mg黑色素溶于IOmL的0? lmol/L氢氧化钠的水溶液，搅拌下加入0? Imol/ L盐酸调节至pH7.0,用离心过滤器（MWC0 = 30kDa)离心，洗涤，冷冻干燥，得水溶性黑色素 纳米颗粒，备用；
[0038] (2)用NH2-PEG2qm-NHW所述水溶性黑色素纳米颗粒进行表面处理，即取5mLlmg/ mL所述水溶性黑色素纳米颗粒的水溶液，加入28wt % NH4OH溶液调节至pH9. 0,加入pH = 9的NH2-PEG2qm-NH^水溶液，搅拌12h，用离心过滤器（MffCO = 30kDa)离心，洗涤，冷冻干 燥，即得。
[0039] 实施例2
[0040] 本实施例一种聚乙二醇化黑色素纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：
[0041] (1)取20mg黑色素溶于IOmL的0? lmol/L碳酸钠的水溶液，搅拌下加入0? Imol/ L硫酸调节至pH7.0,用离心过滤器（MWC0 = 30kDa)离心，洗涤，冷冻干燥，得水溶性黑色素 纳米颗粒，备用；
[0042] (2)用NH2-PEG2qm-NHW所述水溶性黑色素纳米颗粒进行表面处理，即取5mLlmg/ mL所述水溶性黑色素纳米颗粒的水溶液，加入28wt % NH4OH溶液调节至pH9. 0,加入pH = 9的NH2-PEG2qm-NH^水溶液，搅拌12h，用离心过滤器（MffCO = 30kDa)离心，洗涤，冷冻干 燥，即得。
[0043] 实施例3
[0044] 本实施例一种聚乙二醇化黑色素纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：
[0045] (1)取20mg黑色素溶于IOmL的0? lmol/L碳酸氢钠的水溶液，搅拌下加入0? Imol/ L乙酸调节至pH7. 0,用离心过滤器（MffCO = 30kDa)离心，洗涤，冷冻干燥，得水溶性黑色素 纳米颗粒，备用；
[0046] (2)用NH2-PEG2qm-NHW所述水溶性黑色素纳米颗粒进行表面处理，即取5mLlmg/ mL所述水溶性黑色素纳米颗粒的水溶液，加入28wt % NH4OH溶液调节至pH9. 0,加入pH = 9的NH2-PEG2qm-NH^水溶液，搅拌12h，用离心过滤器（MffCO = 30kDa)离心，洗涤，冷冻干 燥，即得。
[0047] 实施例4
[0048] 本实施例一种聚乙二醇化黑色素纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：
[0049] (1)取20mg黑色素溶于IOmL的0? lmol/L磷酸钠的水溶液，搅拌下加入0? Imol/ L磷酸调节至pH7.0,用离心过滤器（MWC0 = 30kDa)离心，洗涤，冷冻干燥，得水溶性黑色素 纳米颗粒，备用；
[0050] (2)用NH2-PEG2qm-NHW所述水溶性黑色素纳米颗粒进行表面处理，即取5mLlmg/ mL所述水溶性黑色素纳米颗粒的水溶液，加入28wt % NH4OH溶液调节至pH9. 0,加入pH = 9的NH2-PEG2qm-NH^水溶液，搅拌12h，用离心过滤器（MffCO = 30kDa)离心，洗涤，冷冻干 燥，即得。
[0051] 实验例
[0052] 1、仪器与试剂
[0053] BH5300S型原子吸收光谱仪（北京博晖创新光电技术股份有限公司）；
[0054] Milli-Q Advantage AlO 超纯水系统（美国 Millipore);
[0055] 541册型低温超速离心机（德国Eppendorf);
[0056] 黑色素（Sigma-Aldrich);
[0057]右旋糖酐铁（Sigma-Aldric