佐剂组合物及使用方法
【专利说明】
[0001] 与相关申请的交叉引用
[0002] 本申请对于2009年1月5日提交的美国临时申请No. 61/204, 316要求优先权。
[0003] 政府资助
[0004] 本发明是在国立卫生研究院授予的基金号1R43AI084690-01下由政府资助而进 行的。政府在本发明中拥有一定的权利。
技术领域
[0005] 本公开涉及佐剂组合物及其使用方法。
[0006] 背景
[0007] 疫苗是非常有成本效益的医疗干预。然而，虽然许多疾病已通过疫苗接种而被预 防，许多其它疾病仍有待预防。此外，对于许多已存在针对其的疫苗的疾病，需要改进的疫 苗。产生疫苗的主要病症是疫苗缺乏免疫原性或免疫原性低。疫苗的功效可通过使用佐剂 和递送系统而被增强。特别感兴趣的是增加通过经由粘膜途径的无针方法施用的疫苗的免 疫原性的佐剂。
[0008] 概述
[0009] 本公开提供了能够调节受试者中免疫应答的佐剂组合物。此类佐剂组合物还可用 于通过增强抗原递呈、通过例如天然杀伤细胞的活化和/或直接的B细胞活化而增强先天 免疫应答，来增强抗原的免疫原性。还提供了制备所述佐剂组合物的方法以及使用所述佐 剂组合物的方法。
[0010] 在某些实施方案中，所述组合物包含芥子油；和下列的至少一种：(a)类黄酮，或 类黄酮衍生物，或类黄酮衍生物的盐；和（b)维生素，或者其衍生物或盐，其中所述维生素 选自维生素A、维生素E、维生素D、维生素C。在某些情况下，所述组合物包含芥子油和类黄 酮（例如儿茶素）或类黄酮衍生物或类黄酮衍生物的盐。在某些情况下，所述类黄酮是儿 茶素、或者其衍生物或盐。在某些情况下，所述组合物包含芥子油和维生素，或者其衍生物 或盐。在某些实施方案中，所述组合物包含芥子油、类黄酮，或类黄酮衍生物，或类黄酮衍生 物的盐以以及维生素，或者其衍生物或盐。在某些实施方案中，所述组合物包含芥子油并且 所述维生素可以是维生素E或者其衍生物或盐。在某些实施方案中，所述组合物包含芥子 油和维生素A或者其衍生物或盐。在某些实施方案中，所述组合物包含芥子油和维生素C 或者其衍生物或盐。在某些实施方案中，所述组合物包含芥子油、儿茶素或者其衍生物或盐 以及维生素A或者其衍生物或盐。在某些实施方案中，所述组合物包含芥子油、儿茶素，或 者其衍生物或盐以及维生素E，或者其衍生物或盐。在某些实施方案中，所述组合物包含芥 子油、类黄酮（例如儿茶素）或类黄酮衍生物或类黄酮衍生物的盐，以及异硫氰酸烯丙酯。 在某些实施方案中，所述组合物包含芥子油、维生素（例如维生素A)或者其衍生物或盐，以 及异硫氰酸烯丙酯。在某些实施方案中，所述组合物包含芥子油、类黄酮（例如儿茶素）或 类黄酮衍生物或类黄酮衍生物的盐、维生素（例如维生素A)或者其衍生物或盐、以及异硫 氰酸烯丙酯。在某些方面，所述组合物还包含抗原。在某些实施方案中，所述佐剂组合物包 含异硫氰酸烯丙酯以及类黄酮和维生素的至少一种。
[0011] 可通过许多途径例如鼻内、经肺、舌下、口服、含服（buccal)、阴道内、直肠内、经 目艮、真皮内、经皮肤、经皮（transcuataneous)、皮下、静脉内和肌内向受试者（例如哺乳动 物）施用所述组合物。
[0012] 还提供了制备所述组合物的方法，所述方法包括将芥子油与下列的至少一种混 合：类黄酮，或类黄酮衍生物，或类黄酮衍生物的盐，以及维生素或者其衍生物或盐。
[0013] 本申请还提供了包含药学上可接受的植物油；类黄酮或类黄酮衍生物，或类黄酮 衍生物的盐；以及维生素或维生素衍生物或维生素衍生物盐的组合物，其中所述维生素选 自维生素A、维生素E、维生素D、维生素C。在某些情况下，所述组合物包含植物油和类黄酮 (例如儿茶素）或类黄酮衍生物或类黄酮衍生物的盐。在某些情况下，所述类黄酮为儿茶素 或者其衍生物或盐。某些情况下，所述组合物包含植物油和维生素或者其衍生物或盐。在 某些实施方案中，所述组合物包含植物油、类黄酮或类黄酮衍生物或类黄酮衍生物的盐以 及维生素或者其衍生物或盐。在某些实施方案中，所述组合物包含植物油并且所述维生素 可以是维生素E或者其衍生物或盐。在某些实施方案中，所述组合物包含植物油和维生素 A或其衍生物或盐。在某些实施方案中，所述组合物包含植物油和维生素C或者其衍生物 或盐。在某些实施方案中，所述组合物包含植物油、儿茶素或者其衍生物或盐、以及维生素 A或者其衍生物或盐。在某些实施方案中，所述组合物包含植物油、儿茶素或者其衍生物或 盐、以及维生素E或者其衍生物或盐。在某些实施方案中，所述组合物包含植物油、类黄酮 (例如儿茶素）或类黄酮衍生物或类黄酮衍生物的盐以及异硫氰酸烯丙酯。在某些实施方 案中，所述组合物包含植物油、维生素（例如维生素A)或者其衍生物或盐以及异硫氰酸烯 丙酯。在某些实施方案中，所述组合物包含植物油、类黄酮（例如儿茶素）或类黄酮衍生物 或类黄酮衍生物的盐、维生素（例如维生素A)或者其衍生物或盐和异硫氰酸烯丙酯。在某 些方面，所述组合物还包含抗原。
[0014] 附图简述
[0015] 图1显示在单一肌内（頂）疫苗接种后3周时抗-HA IgGl抗体和抗-流感-HA IgG2a抗体的血清滴度。
[0016] 图2显示在第二次肌内（頂）疫苗接种后1周时抗-流感-HA IgGl抗体和抗-流 感-HA IgG2a抗体的血清滴度。
[0017] 图3显示在第二次肌内（頂）疫苗接种后1周时抗-流感-HA IgA抗体的血清滴 度。
[0018] 图4显示在第二次肌内（IM)疫苗接种后1周时阴道灌洗（vaginal lavage)中 抗-流感-HA IgGl抗体的滴度。
[0019] 图5显示在第二次肌内（頂）疫苗接种后1周时阴道灌洗中抗-流感-HA IgA抗 体的滴度。
[0020] 图6显示在第二次肌内（頂）疫苗接种后1周时用流感-HA离体活化后的TH1、TH2 和Treg应答。
[0021 ] 图7显示在第二次鼻内（IN)疫苗接种后2周时抗-HIVgpl20 IgGl抗体和 抗-HIVgp-120 IgG2a抗体的血清滴度。
[0022] 图8显示在第二次IN疫苗接种后2周时阴道灌洗中抗_HIVgpl20IgGl抗体和 抗-HIVgpl20 IgA抗体的滴度。
[0023] 图9显示在两次IN/SL(鼻内/舌下）和两次頂疫苗接种后1周时抗-HIVgp 120 IgGl、IgG2a和IgA抗体的血清滴度。
[0024] 图10显示在两次IN/SL(鼻内/舌下）和两次頂疫苗接种后1周时阴道灌洗中 抗-HIVgp 120 IgGl和IgA抗体的滴度。
[0025] 在描述本发明和本发明的特定示例性实施方案之前，要理解本发明不限定于所描 述的特定实施方案，这样其当然可以变化。还应理解，本申请中所使用的术语仅是为了描述 特定实施方案的目的，而不意欲是限制性的，因为本发明的范围将仅由所附的权利要求限 定。
[0026] 当提供数值范围时，应理解除非语境中另有明确的指示，否则在所述范围的上限 和下限之间的各个中间值（intervening value)(至下限的单位的十分之一）和在该所述 范围内的任何其它的所述值或中间值均被包括在本发明内。可被独立地包括在所述更小范 围中的这些更小范围的上限和下限也被包括在本发明中，受所述范围内任何被特别排除的 限制所限。当所述范围包括所述界限的一个或两个时，排除这两个所包括的界限的范围也 被包括在本发明中。
[0027] 除非另有定义，否则本申请中所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领 域内的普通技术人员通常理解的意义相同的意义。虽然与本申请中描述的方法和材料相 似或等同的任何方法和材料也可用于本发明的实施或测试，但现在描述了优选的方法和材 料。本申请中提及的所有出版物均通过引用而被并入，以公开和描述与所述出版物被引用 相关联的方法和/或材料。当此类出版物可能展示与本公开所明示或暗示的定义矛盾的术 语定义时，以本公开的定义为准。
[0028] 必须指出，如本申请中和所附权利要求中所使用的，除非语境中清楚地另外指出， 否则单数形式"a"、"an"和"the"包括复数所指物。因此，例如，提及"一种（an)佐剂组合 物"包括多种佐剂组合物，提及"一种（a)维生素"包括1、2或更多种维生素，以及提及"一 种（a)类黄酮"包括1、2或更多种类黄酮等等。术语佐剂和递送系统可互换地使用。
[0029] 本申请中所谈论的出版物仅为了其在本申请的申请日之前的公开而被提供。本申 请中没有任何内容将被解释为承认本发明无权因为是在先发明而局先于此类出版物。此 外，所提供的出版物的日期可能与可能需要独立地确认的实际出版日期不同。
[0030] 示例件实施方案详沐
[0031] 本公开提供能够调节受试者中免疫应答的佐剂组合物。此类佐剂组合物还可被用 于通过增强抗原递呈、通过例如天然杀伤细胞的活化和/或直接的B细胞活化而增强先天 免疫应答，来增强抗原的免疫原性。还提供了制备所述佐剂组合物的方法以及使用所述佐 剂组合物的方法。
[0032] 定义
[0033] 短语"佐剂组合物"是指当向受试者施用时能够诱导受试者中的免疫应答的组合 物。当与抗原组合而被施用时，"佐剂组合物"能够引起抗原特异性免疫应答。
[0034] 对抗原或组合物的"免疫应答"是受试者中对存在于目的抗原或组合物中的分子 的体液和/或细胞免疫应答的发生。"体液免疫应答"是指主要由抗体分子介导的免疫应 答，而"细胞免疫应答"是主要由T淋巴细胞和/或其它白血细胞介导的免疫应答。
[0035]短语"药学上可接受的"是指通常是安全的、并且当受试者是非人时对于兽医用途 而言是可接受的物质。对于人"药学上可接受的"是指通常是安全的、并且对于人的药物用 途而目是可接受的物质。
[0036] 术语"抗原"是指可在适当的条件下被免疫系统所识别（例如，被抗体结合或经加 工以引起由例如T细胞产生的细胞免疫应答）的任何物质。抗原包含一个或多个表位。B 细胞表位包括至少约3至5个氨基酸，例如4个或更多个氨基酸。半抗原或多糖也可作为 B细胞表位。T细胞表位（例如细胞毒性T细胞（CTL)表位）可包括至少约7至9个氨基 酸，例如8个或更多个氨基酸。辅助T细胞表位可包括至少约12至20个氨基酸。术语"抗 原"表示亚单位抗原（即，与抗原天然所结合的完整生物体相分离的抗原）以及被杀死的、 减毒的或灭活的细菌、病毒、真菌、寄生虫或其它微生物、朊病毒、变应原或任何其它引起疾 病的试剂。抗原可以是经修饰的蛋白质，其包括修饰（例如对天然蛋白质序列的缺失、添加 和置换（通常在性质上是保守的））。术语抗原还表示编码蛋白质或肽抗原的核酸（DNA或 RNA) 〇
[0037]如本申请中所使用的，"穿透促进（Penetration enhancement) "或"渗透促进 (permeation enhancement) "是指增加皮肤或粘膜层对抗原的渗透性以增加抗原穿过皮肤 或粘膜层并进入淋巴结或血流的速度。
[0038] "治疗有效量"或"有效量"是指当向哺乳动物或其它受试者施用以预防或治疗疾 病时，足以实现对疾病的所述预防或治疗的化合物的量。"治疗有效量"将取决于化合物，疾 病及其严重度，和待治疗的受试者的年龄、体重等而变化。
[0039] 麗述
[0040]本公开提供能够引起免疫应答的佐剂组合物。此类佐剂组合物也可被用于通过增 强抗原递呈、通过例如天然杀伤细胞的活化和/或直接的B细胞活化而增强先天免疫应答， 来增强抗原的免疫原性。还提供了制备所述佐剂组合物的方法以及使用所述佐剂组合物的 方法。
[0041]佐剂组合物
[0042] 本申请中提供的佐剂组合物包含：药学上可接受的植物油；类黄酮，或类黄酮衍 生物，或类黄酮衍生物的盐；以及维生素或者其衍生物或盐。所述维生素可以是维生素A、 维生素E、维生素D、维生素C。
[0043] 在另一个实施方案中，本申请中所提供的组合物包含：具有或不具有异硫氰酸烯 丙酯的芥子油（芥子精油）；以及下列的至少一种：(a)类黄酮或类黄酮衍生物，或类黄酮 衍生物的盐；和（b)维生素，或者其衍生物或盐。所述维生素可以是维生素A、维生素E、维 生素D、维生素C或者其衍生物或盐。
[0044]在某些实施方案中，所述类黄酮是黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、儿茶素、花色素或异黄 酮，或其衍生物或衍生物的盐。在某些实施方案中，所述佐剂组合物包含芥子油和儿茶素 (例如儿茶素水合物）。
[0045]在某些实施方案中，所述佐剂组合物包含一种或多种维生素（例如维生素A、维生 素E、维生素D、维生素C、其衍生物和盐）以及植物油载体（例如芥子油）。此类佐剂组合 物可任选地包含类黄酮或类黄酮衍生物或类黄酮衍生物的盐。在某些实施方案中，所述佐 剂组合物包含维生素A和油载体（例如芥子油）。在某些实施方案中，所述佐剂组合物包含 维生素E和油载体（例如芥子油）。
[0046] 所述佐剂组合物可任选地包含其它添加剂，例如防腐剂、着色剂、香料 (flavorant)等。所述佐剂组合物可还包含抗原。
[0047] 药学h可接夸的棺物油载体
[0048] 如本申请中所使用的"药学上可接受的植物油载体"是指适合于通过所需的途径 (例如全身性或粘膜途径，包括口服和局部递送途径）向人或非人动物施用的植物油。本公 开包括了可食用的佐剂组合物。
[0049] "植物油"是指可从植物或植物产品中获得的油，并包括可从种子（包括坚果、谷 物）、果实、根、花、茎等获得的油。实例包括玉米油、芥子油、橄榄油、椰子油、红花油、豆油 等。本公开的植物油包括可从非遗传修饰和经遗传修饰的植物获得的油。植物油包括具有 发红剂性质的植物油，即，例如当局部用于皮肤时促进毛细血管的扩张和增加血液循环的 油。植物油可源自植物或植物产品（例如，非遗传修饰或经遗传修饰的植物或植物产品）， 或可被合成产生，例如通过混合在植物油中发现的单个组分，其中所述单个组分可源自植 物或植物产品，或被合成产生。所述提供植物油或单个脂肪酸的来源的植物可以是经遗传 修饰的。
[0050] 在某些实施方案中，所述植物油是芥子油。如本申请中所使用的"芥子油"是指 可从十字花科（Brassicacae)的芥属植物的种子获得的油，其中所述油可在提取过程中不 加热而从芥属植物获得（例如，可通过冷榨提取法获得）。可不加热而从芥属植物的种子 获得的芥子油比使用基于加热的提取法（例如，通过使用蒸气）而可从相同种子获得的油 具有更少量的（例如，不显著的或不可检测的）异硫氰酸烯丙酯。可从其获得在本公开 的组合物中用作载体的芥子油的十字花科的芥属植物包括但不必限定于芫菁（Brassica rapa)(食用绿植）、黑芥（Brassica nigra)(