沙美特罗在治疗二型糖尿病、胰岛素抵抗药物上的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，具体涉及沙美特罗在治疗胰岛素抵抗，抗二型糖尿病 药物上的应用和治疗二型糖尿病的药物。 技术背景
[0002] 二型糖尿病成为最主要的糖尿病类型，患病人口增长迅速且日趋年轻化，胰岛素 抵抗是二型糖尿病的主要发病原因。市场上主要治疗胰岛素抵抗的胰岛素增敏剂药物主要 是噻唑烷二酮类（TZD)抗糖尿病药，噻唑烷二酮类药物作为可以治疗胰岛素抵抗的抗糖尿 病药物，是由于此类化合物是PPARY受体的激动剂，PPARY激活后可以调节CAP蛋白的表 达，Cbl/CAP连接蛋白又会激活其下游蛋白Crk、TClO等分子，它们最终将促进葡萄糖转运 子将葡萄糖由胞外装运到胞内，以达到降低血糖目的。但由于此类药物会引发心衰、水肿及 肝功能障碍等不良反应，因此研究新型胰岛素增敏剂类抗糖尿病药物是很必要的。
[0003] 现有技术中，沙美特罗（Salmeterol)，具有强大的抑制肺肥大细胞释放过敏反应 介质作用，可抑制吸入抗原诱发的早期和迟发相反应，降低气道高反应性。主要用于哮喘 (包括夜间哮喘和运动性哮喘）、喘息性支气管炎和可逆性气道阻塞。本发明通过大量的实 验研究，发明了沙美特罗在制备治疗或预防糖尿病药物中的应用。
【发明内容】
[0004] 针对现有市场上胰岛素增敏剂类药物较少的不足，本发明为治疗二型糖尿病、胰 岛素抵抗更多的选择，发明沙美特罗在治疗或预防糖尿病的药物中的应用。
[0005] 本发明研究表明，沙美特罗（Salmeterol)，CAS号：89365-50-4,化学名称： 4-(1-羟基-2-(6-(4-苯基丁氧基）己基氨基）乙基）-2-(羟甲基）苯酚，分子式：C25H37NO4, 分子量：415. 57,分子结构：
[0006]
[0007] 3T3-L1细胞建立胰岛素抵抗模型，油红0染色鉴定细胞模型后，沙美特罗作用于 建模成功的胰岛素抵抗的3T3-L1细胞，24h后测定细胞葡萄糖的消耗量，当药物浓度为 I. 5nmol/L时与正常组、阳性最有药物浓度组的葡萄糖消耗量已不存在差异性，且葡萄糖消 耗量最高。因此，可以确定沙美特罗具有提高3T3-L1胰岛素抵抗模型细胞葡萄糖消耗量的 药物作用效果（参见图1)。
[0008]SD雄性大鼠采用高糖高脂饲料饲喂，小剂量STZ(链脲佐菌素）注射诱导的方法构 建二型糖尿病大鼠模型。沙美特罗作用于模型大鼠四周后药物组的血糖值均降到了正常值 范围内（参见附图2)，肝脏和血液中的葡萄糖含量均降到了正常值范围内（附图3)，甘油 三酯和总胆固醇含量已趋于正常值（附图4、5)，游离脂肪酸和胰岛素含量值已于正常组之 间不存在差异性（见表1)，与模型组之间存在差异性，表明沙美特罗具有降低血糖、抗糖尿 病的功效。ELISA法测定PPARy蛋白表达量发现沙美特罗具有提高PPARy蛋白表达量的 功能（见表2)。
[0009] 表1沙美特罗对二型糖尿病模型大鼠游离脂肪酸和胰岛素含量影响
【附图说明】：
[0014] 图1为沙美特罗对胰岛素抵抗3T3-L1细胞模型葡萄糖消耗量影响柱状图；
[0015] 图2为沙美特罗对二型糖尿病模型大鼠血糖影响变化折线图；
[0016]图3为沙美特罗对二型糖尿病模型大鼠肝脏和血液中的葡萄糖含量影响柱状图；
[0017] 图4为沙美特罗对二型糖尿病模型大鼠甘油三酯含量影响柱状图；
[0018] 图5为沙美特罗对二型糖尿病模型大鼠总胆固醇含量影响柱状图。
【具体实施方式】：
[0019] 下面通过具体的实验，证明沙美特罗具有治疗胰岛素抵抗，抗糖尿病的功效。
[0020] 实施例1 :
[0021] U3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型构建：
[0022] (1)将生长状态良好的3T3-L1细胞消化后，以3*104个/mL细胞密度接种到6孔 板中，2mL/孔，基础培养基培养。36h换液一次，换液两次后细胞即可达到90% -100%细胞 密度，继续用基础培养基培养，使细胞处于接触抑制状态。
[0023] (2)汇合（接触抑制）两天后（DAY0)，换细胞诱导培养基一培养两天，根据细胞 培养基的颜色决定是否换液，一般24-36h换一次培养液。
[0024](3)诱导培养基一培养两天后（DAY2)，换诱导培养基二，培养两天根据细胞培养 基颜色决定是否换液，一般24-36h换一次培养液，换液时一定要缓慢、轻柔避免出现细胞 漂浮现象。
[0025](4)诱导培养基二培养两天后（DAY4)，换回基础培养基培养，36_48h换一次培养 液，换液时一定要缓慢、轻柔避免出现细胞漂浮现象，一般培养4-5天左右（DAY8)，即完成 细胞诱导分化。
[0026] 2、胰岛素抵抗3T3-L1细胞模型染色鉴定：
[0027] (1)固定：将诱导完成的3T3-L1细胞6孔板中细胞培养液缓缓吸出，0.OlMPBS缓 慢清洗两遍后加入1%多聚甲醛细胞固定液，固定15min。
[0028] (2)染色：吸出1 %多聚甲醛细胞固定液，0.0 lMPBS缓慢清洗两遍，加入油红0染 色剂2mL染色20min。
[0029] (3)冲洗：吸出染色剂，超纯水冲洗三次，镜检观察细胞状态拍照记录。
[0030] 3、沙美特罗作用于3T3-L1胰岛素抵抗细胞模型：
[0031] (1)将诱导分化建模成功的3T3-L1细胞分为模型组、溶剂对照组、罗格列 酮0. 5nmol/L浓度组、罗格列酮I.Onmol/L浓度组、罗格列酮I. 5nmol/L浓度组、药物 0. 5nmol/L浓度组、药物I.Onmol/L浓度组、药物I. 5nmol/L浓度组、药物2.Onmol/L浓度 组、药物2. 5nmol/L浓度组，与未进行诱导分化的正常组一共分为11组，每组设三个复孔。
[0032] (2)将阳性药物及794ap储存液溶解后，用液体细胞培养基按照上述分组的浓度 稀释至特定浓度，溶剂对照组加入对应体积〇. 5 %DMS0,正常组、模型组则加入对应体积液 体细胞培养基。所有实验组细胞用基础培养基置于二氧化碳细胞培养箱中培养。
[0033] (3)细胞培养12h、24h、36h时分别吸正常组细胞培养基用葡萄糖测定试剂盒进行 葡萄糖含量测定并记录。
[0034] (4)在葡萄糖消耗量最高峰的培养时刻分别吸取不同组细胞培养基进行葡萄糖含 量测定并记录。
[0035] (5)以上实验重复两次，将记录的实验数据用SPSS软件进行数据分析。
[0036]根据图1沙美特罗对胰岛素抵抗3T3-L1细胞模型葡萄糖消耗量影响柱状图，可以 看出：可知沙美特罗最优药物浓度可以很好地促进胰岛素抵抗模的细胞正常分解葡萄糖， 且与阳性药物罗格列酮之间已不存在差异性。
[0037] 实施例2:
[0038] 1、SD大鼠二型糖尿病模型的构建：
[0039] (1) 80只SPF级别的雄性SD大鼠，体重为120±20克，基础大鼠鼠粮试喂养3天 后，随机挑选出7只作为模型对照组，仍旧饲喂基础鼠粮，其它的大鼠开始饲喂高糖高脂鼠 粮，所有大鼠均自由饮用自来水。每天更换饮水，每两天清理粪便，每三天称量一次体重并 记录。
[0040] (2)饲喂两周后，断食不断水，空腹IOh后尾静脉采血针取血，测定大鼠血糖，并记 录结果。此后每周测定一次空腹血糖，仍每三天测定并记录体重。
[0041] (3)饲喂6周后，模型组大鼠断食不断水空腹14h后按照25mg/kg的剂量腹腔注射 链脲佐菌素（STZ)注射液。
[0042] (4)注射STZ三天后，断食不断水空腹IOh后测定大鼠血糖，如此测定两次后若血 糖均高于11.lmmol/L则认定SD大鼠II型糖尿病模型构建成功。
[0043] 2、沙美特罗作用于二型糖尿病SD大鼠模型
[0044] (1)分组：将构建成功的II型糖尿病模型大鼠按照血糖由高到低一条龙的分组方 式分成7组，依次为模型组、阳性组、lmg/kg药物浓度组、3mg/kg药物浓度组、5mg/kg药物浓 度组、7mg/kg药物浓度组、溶剂对照组，与原来正常组一起一共分成8