一种免疫增强作用的钻地风提取物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药提取物领域，具体涉及一种免疫增强作用的钻地风提取物及其制 备方法，该提取物可以应用于制备增强免疫的药物。
【背景技术】
[0002] 钻地风为虎耳草科植物钻地风的根皮。全年可采，挖取根部，剥取根皮，晒干。又 名迫地楓（《药材资料汇编》）、桐叶藤（《浙江天目山药植志》）。
[0003] 钻地风原形态为落叶本质藤本，借气根攀援，高至4米以上。叶对生，叶片卵圆形 至阔卵圆形，长8~15厘米，先端渐尖，基部截形或圆形至心形，全缘或前半部疏生小齿，质 厚，下面叶脉有细毛或近无毛；叶柄长3~8厘米。伞房式聚伞花序顶生；花2型；周边为不 育花，仪具一片大形萼片，狭卵形至椭圆状技针形，长约4~6厘米，宽约3厘米，先端短尖， 乳白色，老时棕色，萼片柄细弱，长2~4厘米；孕性花小，绿色；萼片4~5 ;花瓣4~5 ;雄 蕊10;花柱1。蒴果陀螺状，长6毫米，有10肋。种子多数，线形。花期6~7月。生林下。 分布浙江、安徽、湖南、湖北、四川、广西、广东、贵州、云南等地。主产于广西。
[0004] 钻地风干燥的根皮呈半卷筒状，厚而宽阔，内层有网纹。以皮质松呢、不含木心、色 红棕、味清香微带樟脑气者为佳。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种钻地风提取物，其制备方法和液相分析方法，含有该 提取物的药物制剂及利用该提取物制备增强免疫的药物的用途。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] -种钻地风提取物，该提取物由以下方法制备：(a)以重量计，每100份药材包含 干燥的钻地风75~85份和干燥的甘草15~25份，混合粉碎，用乙醇热回流提取，合并提取 液，浓缩至无醇味；(b)将步骤（a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯 和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（C)正 丁醇萃取物用大孔树脂富集，先用5~15%乙醇冲洗8~12个柱体积除去多糖，再用65~ 75%乙醇洗脱7~9个柱体积，收集65~75%洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。
[0008] 进一步地，步骤（a)中所述用乙醇热回流提取所采用的乙醇浓度为85~95 %。
[0009] 进一步地，步骤（a)中所述用乙醇热回流提取所采用的乙醇浓度为90%。
[0010] 进一步地，步骤（c)中所述大孔树脂为AB-8型大孔树脂。
[0011] 进一步地，步骤（c)为：正丁醇萃取物用AB-8型大孔树脂富集，先用10%乙醇冲 洗10个柱体积除去多糖，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70 %洗脱液，减压浓缩，喷雾 干燥。
[0012] 为了能够通过建立HPLC指纹图谱的方法控制不同批次制备的提取物的批间差 异，所述提取物的液相分析方法为：
[0013] 色谱柱：Agilent TC C18 柱（4. 6mmX 250mm，5 μ m);
[0014] 流动相：A为乙腈，B为0· I %甲酸溶液（三乙胺调节pH值至6· 0);
[0015] 梯度洗脱程序：0 ~5min，A 35%;5 ~10min，A 35%-70%;10 ~15min，A 70% -35% ;15 ~20min，A 35% ;
[0016] 流动相流速：1. OmL · min S检测波长：240nm ;柱温：30°C ;进样量10 μ L。
[0017] 药物制剂，含有治疗有效量的所述提取物和药学上可接受的载体。
[0018] 所述的提取物在制备增强免疫的药物中的应用。
[0019] 所述的药物制剂在制备增强免疫的药物中的应用。
[0020] 本发明提取物用作药物时，可以直接使用，或者以药物制剂的形式使用。
[0021] 所述药物制剂含有治疗有效量的本发明钻地风提取物，其余为药物学上可接受 的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0022] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物制剂以单位体重服用量的形式使用。本发明提取物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0023] 本发明的优点：本发明通过对干燥的钻地风和甘草进行提取、除杂、富集处理，能 得到具有增强免疫的提取物；本发明提供的液相分析方法可以用于建立该提取物的指纹图 谱，用于控制不同批次制备的提取物的批间差异。
【附图说明】
[0024] 图1为钻地风提取物HPLC液相图谱。
【具体实施方式】
[0025] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0026] 实施例1 :钻地风提取物①制备（80份钻地风，20份甘草）
[0027] 药材来源：钻地风和甘草购自安徽亳州中药材市场。
[0028] 主要试剂：食品级乙醇购自上海凌峰化学试剂有限公司；ΑΒ-8型大孔树脂购自天 津波鸿树脂有限公司；乙腈为HPLC级，购于TEDIA ;甲酸为HPLC级，购于TEDIA ;色谱用纯 净水为哇哈哈纯净水。
[0029] 制备方法：将8. Okg干燥钻地风和2. Okg干燥甘草混合粉碎，用90 %乙醇热回流 提取3次，每次提取2小时，每次用95%乙醇25L，合并提取液，浓缩至无醇味（4L);浓缩液 依次用石油醚（4LX3次）、乙酸乙酯（4LX3次）和水饱和的正丁醇（4LX3次）萃取，分 别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；正丁醇萃取物用ΑΒ-8大孔树脂富 集，先用10%乙醇冲洗10个柱体积除去多糖，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗 脱液，减压浓缩，喷雾干燥（约225g)。
[0030] 实施例2 :钻地风提取物②制备（75份钻地风，25份甘草）
[0031] 制备方法：将7. 5kg干燥钻地风和2. 5kg干燥甘草混合粉碎，用90 %乙醇热回流 提取3次，每次提取2小时，每次用95%乙醇25L，合并提取液，浓缩至无醇味（4L);浓缩液 依次用石油醚（4LX3次）、乙酸乙酯（4LX3次）和水饱和的正丁醇（4LX3次）萃取，分 别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；正丁醇萃取物用AB-8大孔树脂富 集，先用10%乙醇冲洗10个柱体积除去多糖，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗 脱液，减压浓缩，喷雾干燥（约225g)。
[0032] 实施例3 :钻地风提取物③制备（85份钻地风，15份甘草）
[0033] 制备方法：将8. 5kg干燥钻地风和I. 5kg干燥甘草混合粉碎，用90 %乙醇热回流 提取3次，每次提取2小时，每次用95%乙醇25L，合并提取液，浓缩至无醇味（4L);浓缩液 依次用石油醚（4LX3次）、乙酸乙酯（4LX3次）和水饱和的正丁醇（4LX3次）萃取，分 别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；正丁醇萃取物用AB-8大孔树脂富 集，先用10%乙醇冲洗10个柱体积除去多糖，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗 脱液，减压浓缩，喷雾干燥（约225g)。
[0034] 实施例4 :钻地风提取物④制备（90份钻地风，10份甘草）
[0035] 制备方法：将9. Okg干燥钻地风和1.0 kg干燥甘草混合粉碎，用90 %乙醇热回流 提取3次，每次提取2小时，每次用95%乙醇25L，合并提取液，浓缩至无醇味（4L);浓缩液 依次用石油醚（4LX3次）、乙酸乙酯（4LX3次）和水饱和的正丁醇（4LX3次）萃取，分 别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；正丁醇萃取物用AB-8大孔树脂富 集，先用10%乙醇冲洗10个柱体积除去多糖，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗 脱液，减压浓缩，喷雾干燥（约225g)。
[0036] 实施例5 :钻地风提取物⑤制备（70份钻地风，30份甘草）
[0037] 制备方法：将7. Okg干燥钻地风和3. Okg干燥甘草混合粉碎，用90 %乙醇热回流 提取3次，每次提取2小时，每次用95%乙醇25L，合并提取液，浓缩至无醇味（4L);浓缩液 依次用石油醚（4LX3次）、乙酸乙酯（4LX3次）和水饱和的正丁醇（4LX3次）萃取，分 别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；正丁醇萃取物用AB-8大孔树脂富 集，先用10%乙醇冲洗10个柱体积除去多糖，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗 脱液，减压浓缩，喷雾干燥（约225g)。
[0038] 实施例6 :液相色谱分析
[0039] 供试品溶液配制：取实施例1方法制得的提取物5mg至50mL棕色容量瓶中，加 30mL 10 %乙腈水溶液超声溶解，冷却至室温后，继续加10 %乙腈水溶液定容。分析方法如 下：
[0040] 高效液相色谱仪：Agilent 1260,二元栗；
[0041] 色谱柱：Agilent TC C18 柱（4. 6mmX 250mm，5 μ m);
[0042] 流动相：A为乙腈，B为0.1 %甲酸溶液（三乙胺调节pH值至6. 0);
[0043] 梯度洗脱程序：0 ~5min，A 35%;5 ~10min，A 35%-70%;10 ~15min，A 70% -35% ;15 ~20min，A 35% ;
[0044] 流动相流速：1. OmL · min S检测波长：240nm ;柱温：30°