包含存于水相中的抗原和佐剂的乳剂疫苗组合物及其用图
【专利说明】
[000。 本申请是申请日为2008年6月19日，申请号为200880024112. 3,发明名称为"包 含存于水相中的抗原和佐剂的乳剂疫苗组合物"的申请的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明是关于油包水型疫苗制剂、制备所述制剂的方法和所述制剂用于动物疫苗 接种的用途。
【背景技术】
[0003] 很多传染病控制计划的基础是通过用活的微生物或经灭活的微生物或其产物进 行疫苗接种来诱导特异性免疫。有效的疫苗接种程序容许在动物中形成针对抗原的免疫记 忆状态，从而在日后与抗原接触时在动物中引起快速而强烈的免疫反应。然而，有些抗原仅 具有弱免疫原性。运类抗原可能无力诱导在日后激发时足W为动物提供有效保护的免疫反 应，或者可能需要投与助增免疫原性W提供有效保护的其它药剂。
[0004] 将抗原与叫做佐剂的物质呈混合物形式投与可增强抗原的免疫原性，所述叫做佐 剂的物质通过直接作用于免疫系统或通过修改抗原的药物动力学特征来增强针对抗原的 反应并借此增加后者与免疫系统的相互作用时间。
[0005] 由水和油形成的乳剂（例如，油包水型、水包油型、水包油包水型乳剂）可在疫苗 中用作佐剂。油包水型乳剂一般在动物疫苗（例如家禽疫苗）中用作佐剂。一般来说，为 制备油包水型乳剂，在一种或多种乳化剂存在下将水相抗原缓慢加入矿物油载剂中，从而 产生由油滴组成的微胞，水相抗原存在于所述油滴内。人们认为，油性组分诱导免疫细胞迁 移至注射部位，并且还用于保护抗原并延长免疫细胞处理抗原的时期。最终结果是与仅单 独注射抗原相比，免疫反应增强。
[0006] 由丙締酸系聚合物组成的佐剂有时替代疫苗制剂中的油基乳剂使用。示范性丙締 酸系聚合物是与聚締丙基薦糖交联的丙締酸的水溶性聚合物，其又称卡伯波（Carbopol)。 例如，美国专利第5, 026, 546号提及使用二甲基二（十八烷基）漠化锭值DA)作为疫苗佐 剂和添加卡伯波W改良DDA在水中的溶解度。
[0007] 油基乳剂与丙締酸系聚合物在疫苗制剂中用作佐剂时均具有独特优点。然而，由 于预计丙締酸系聚合物（诸如卡伯波）与油乳剂结合会具有高反应性，因此已不鼓励将油 包水型乳剂与丙締酸系聚合物组合。举例来说，上述U.S. 5, 026, 546提及使用卡伯波，但未 提出在油包水型或水包油型乳剂中使用DDA和/或卡伯波。此外，关于用于某些物种（诸 如家禽）的佐剂，丙締酸系聚合物通常因其已察觉的高反应性而已避免使用。因此，所属技 术领域中存在对新颖佐剂的需要，所述新颖佐剂可提供丙締酸系聚合物与油包水型乳剂的 组合优点，而无丙締酸系聚合物在所接种动物中引起的不利反应性的缺点。
【发明内容】
[0008] 本发明部分上是基于W下意外发现：与不包括丙締酸系聚合物的油基乳剂疫苗组 合物相比，将油基乳剂疫苗组合物与存于水相中的丙締酸系聚合物（诸如卡伯波）一起调 配可使疫苗组合物所引起的免疫反应显著增强。此外，通过将丙締酸系聚合物调配于油包 水型乳剂的水相中，可避免所预计的丙締酸系聚合物在动物中的不利反应性。
[0009] 因此，本发明提供包含油包水型乳剂的疫苗组合物。本发明的油包水型乳剂包含 油性组分和水性组分。水性组分包含至少一种抗原和至少一种选自由丙締酸系聚合物和二 甲基二（十八烷基）漠化锭值DA)组成的群组的佐剂。本发明还包括给动物接种疫苗的方 法，所述方法包含向动物投与本发明疫苗组合物。
[0010] 本发明其它方面包括制备包含油包水型乳剂的疫苗组合物的方法。本发明方法包 含将油性组分与水性组分一起乳化，其中水性组分包含至少一种抗原和至少一种选自由丙 締酸系聚合物和二甲基二（十八烷基）漠化锭值DA)组成的群组的佐剂。
[0011] 本发明的上述特征和诸多其它附带优点通过参考W下详细说明并配合随图可更 好地了解。
【附图说明】
[0012] 图1是显示制备本发明乳剂疫苗组合物的示范性方法的流程图。
[0013] 图2显示火鸡血液的HI(血球凝集抑制）效价，所述火鸡接种了含有灭活册N3禽 流感抗原的油包水型乳剂疫苗制剂。
[0014] 图3显示对照火鸡和接种火鸡血液的HI效价，所述火鸡接种了含有灭活册N3 禽流感抗原和无佐剂、卡佑級;?、卡値波? +DDA、CMC、HPMC或A1 (0H)3(海曲吉尔 (rcHydragcr))的油包水型乳剂疫苗。标记为"放血前"的HI效价水平得自3只未接种疫 苗的火鸡。
【具体实施方式】
[0015] 本发明提供包含乳剂的疫苗组合物。乳剂包含油性组分和水性组分。水性组分包 含至少一种抗原和至少一种佐剂。佐剂可包含丙締酸系聚合物和/或DDA。
[001引乳剂
[0017] 用于疫苗制剂中的不同类型乳剂包括油包水型、水包油型和水包油包水型乳剂。 在本
【发明内容】
中所用的优选类型乳剂是油包水型乳剂。油包水型乳剂可进一步包括一种或 多种油溶性表面活性剂、一种或多种水溶性表面活性剂、其它佐剂、其它水相组分、乳化稳 定剂，或其组合。油包水型乳剂的制备方法在所属技术领域中已知并且在本文中别处描述。
[0018] 疫苗组合物
[0019] 如本文中所使用，"疫苗组合物"是可用于在接受者中诱发保护性免疫的组合物。 因此，在受试者已接种抗原之后，疫苗可阻止、延缓或减轻暴露给相同或相关抗原的受试者 的疾病发展严重程度（相对于未接种疫苗的受试者）。通过疫苗所提供的保护性免疫可W 是体液（抗体介导）免疫或细胞免疫，或两者。例如，疫苗接种可消除或降低病原体或受感 染细胞的负荷，或产生任何其它可测量的感染减轻。疫苗接种还可降低已免疫（已接种疫 苗）受试者的肿瘤负荷。
[0020] 如本文中所使用，术语"保护性免疫"是指当受试者已暴露给抗原从而在受试者中 引起免疫反应（主动/后天或被动/先天，或两者）时针对抗原所获得的免疫力，从而使抗 原失活和/或降低抗原负荷并形成免疫记忆（例如记忆T细胞或B细胞）。
[0021] 通过疫苗接种所提供的保护性免疫可能是部分的或仅在一部分已接种疫苗的受 试者中提供。因此，疫苗可能在一部分免疫群体中诱发保护性免疫，因为有些个体可能无力 建立强免疫反应或保护性免疫反应或（在有些情况下）任何免疫反应。此能力不够可能归 因于个体的遗传背景或归因于免疫缺乏病状（后天或先天性）或免疫抑制（例如，由于W 化学疗法治疗或使用免疫抑制药物，例如为了预防器官排斥反应或抑制自身免疫状况）。向 一部分免疫群体提供保护的疫苗仍然适用并且视为有效。
[002引佐剂
[0023] 如本文中所使用，术语"佐剂"是指当连同抗原投与时，使受试者对运一抗原的免 疫反应增强的化合物。
[0024] 佐剂介导的免疫反应增强可通过所属技术领域中已知的任何方法评估，包括（不 限于）W下一种或多种方法：（i)与对单独抗原免疫作用起反应所产生的抗体数相比，对 佐剂/抗原组合免疫作用起反应所产生的抗体数增加；（ii)识别抗原或佐剂的T细胞数增 加；（iii) 一种或多种I型细胞因子的含量增加；和（iv)活激发之后，体内（invivo)的保 护作用。
[0025] 与经单独抗原激发的受试者相比，当受试者经抗原与佐剂激发时，若抗原特异性 免疫反应性的任何可测量参数（例如抗体效价或T细胞产生）增加至少10%，则认为免疫 反应增强。在本发明的某些实施例中，若抗原特异性免疫反应性的任何可测量参数增加至 少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至 少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至 少100%、至少125%、至少150%、至少175 %、至少200%、至少225%、至少250%、至少 275%、至少300%、至少350%、至少400%、至少450%、至少500%或至少1000%，则免疫 反应增强。
[0026]佐剂优选是丙締酸系聚合物、二甲基二（十八烷基）漠化锭值DA)，或丙締酸系聚 合物与孤A的组合。佐剂优选是水溶性或水分散性佐剂。
[0027] 如本文中所使用的丙締酸系聚合物是含有丙締酸系部分的任何聚合物或共聚物。 示范性丙締酸系聚合物包括例如聚丙締酸、甲基丙締酸、甲基丙締酸醋、丙締酷胺、丙締酸 醋、丙締腊和聚丙締酸的烷基醋。丙締酸系共聚物的实例包括例如聚（丙締酷胺-共-甲 基丙締酸下醋）、丙締酸-甲基丙締酸、丙締酸-丙締酷胺和聚（甲基丙締酸醋）。市售丙 締酸系聚合物的实例包括卡伯波（古德里奇公司度.F.Goo化ichCo.)，美国俄亥俄州克利 夫兰（Cleveland,化io))、卡伯赛（Carboset)(古德里奇公司，美国俄亥俄州克利夫兰）、尼 奥克（Neoc巧1)(安万克公司（Avecia，Inc.)，美国特拉华州威尔明顿（Wilmington,Del.)) 和尤特奇巧u化agit)(罗姆科技公司（RohmTech,Inc.)，美国马萨诸塞州马尔登（Malden， Mass.))。特别适用于本发明乳剂中的丙締酸系聚合物是卡伯波，它是在所属技术领域中通 常还指并且已知是与聚締丙基薦糖交联的丙締酸的水溶性聚合物。
[0028] 可包括在本发明油包水型乳剂的水相中的具体丙締酸系聚合物包括如美国专利 第6, 340, 464号和其中所引用参考文献中所述的烷基-聚丙締酸（"烷基-PAA")聚合物。 示范性烷基-PAA聚合物包括癸基-PAA(CIO-PAA)、辛基-PAA(CS-PAA)、下基-PAA(C4-PAA) 和甲基斗44((：1斗44)。（参见例如美国专利第6,340,464号，表1)。辛基斗44或者可称为 "辛基-烷基-PAA"或"OA-PAA"。
[0029] 在本发明的某些实施例中，水性组分还包含卵憐脂。在本发明的内容中，卵憐脂可W是可用于形成脂质体的任何卵憐脂，