例如抗原和 /或佐剂）或医药组合物或疫苗的量/剂量。
[0073] 短语"医药学上可接受"是指在投与给人类时生理上可忍受并且通常不产生不良 反应的所述组合物中的分子实体和其它成分。如本文中所使用，术语"医药学上可接受"优 选是指经联邦政府或州政府的管制部口批准，或美国药典或用于哺乳动物并且更具体来说 用于人类的其它公认药典中所列。
[0074] 可使用所属技术领域中熟知的方法，从剂量-反应曲线确定治疗有效剂量。剂 量-反应曲线的实例描述于（不限于）W下实例4中。
[00巧]疫苗组合物中佐剂、抗原和其它组分的剂量应为使得连续或间歇投与的抗原剂量 不会超过根据测试动物的结果和受试者的个别状况所考虑的一定量的量。
[0076] 具体给药方案将取决于W下因素：给药程序、患者或受试动物的状况（诸如年龄、 体重、性别、过敏、进食）、给药周期、组合使用的药物、疾病严重程度。在一定条件下，适当剂 量和给药次数可由从业者根据每个患者的情况和根据标准临床技术确定。
[0077] 含有佐剂的免疫原组合物的毒性和治疗功效可在实验动物中通过标准医药程序 来确定，例如通过测定LDw(致群体50%死亡的剂量）和邸w(群体的50%治疗有效的剂 量）。中毒效应与治疗效应的剂量比是治疗指数并且可由比率LDw/EDs。表示。表现高治疗 指数的组合物是优选的。虽然可使用表现毒性副作用的治疗剂（例如，当治疗严重形式的 癌症或危急生命的感染时），但应谨慎设计使所述免疫原组合物祀向具体部位（例如介导 免疫反应的淋己组织、肿瘤或支持传染体复制的器官）的传递系统，W便将对其它组织和 器官的潜在损害降至最低并借此降低副作用。
[0078] 包含构成疫苗组合物的各组分的试剂盒
[0079] 在某些实施例中，本发明提供一种药包或试剂盒，其包含一个或多个装有免疫原 制剂的一种或多种成分的容器。在优选实施例中，用于制备医药组合物或疫苗组合物的试 剂盒包含至少一种抗原、佐剂（例如卡伯波6或卡伯波*1 +DDA)、油相和水相，所述试剂盒包 含存于不同容器中的各组分和任选地包含指示混合各组分和/或投与组合物的说明书。试 剂盒的每个容器任选地还可包括一种或多种生理学上可接受的载剂和/或赋形剂和/或辅 助物质。运些容器中可配合使用由管制医药或生物产品的制造、使用或销售的政府部口所 规定的形式的通知书，所述通知书反映所述管制制造、使用或销售的部口批准用于人类投 药。
[0080] 必要时，疫苗组合物可用药包或分配装置呈递，所述药包或分配装置可含有一个 或多个含有活性成分（即抗原和/或佐剂）的单位剂型。例如，药包可包含金属或塑料锥， 诸如发泡包装。药包或分配装置可附有投药说明书。还可制备调配于相容医药载剂中的组 合物，将其置于适当容器中，并标明是针对指定病原体和/或病状的疫苗接种。
[0081] 分子生物学定义
[0082] 根据本发明，可使用所属领域技能范围内的常规分子生物学、微生物学和重组DNA 技术。运些技术已众所周知并且在文献中有充分阐述。参见例如萨姆布鲁克（Sambrook)、 弗里奇（化itsch)和曼尼阿蒂斯（Maniatis)，分子克隆：实验室手册（Mole州larCloning: AL油oratoryManual)，第 2 版（1989)，冷泉港实验室出版社（ColdSpring化rbor L油oratoryPress),美国纽约冷泉港（ColdSpring化rbor，NewYork);DNA克隆：实用 方法值NACloning:APracticalApproach)，第I和II卷，（格洛弗值.N.Glover)编， 1985);寡核巧酸合成（OligonucleotideSynthesis)(盖特（M.J.Gait)编，1984);核 酸杂交（NucleicAcidHybridization)[汉姆斯和希金斯化D.Hames&S.J.Higgins) 编，（1985)];转录与翻译（TranscriptionAndTranslation)[汉姆斯和希金斯 度.D.Hames&S.J.Higgins)编，（1984)];动物细胞培养（AnimalCellCulture)[弗雷谢尼 (R.I.Rreshney)编，（1986)];固定化细胞和酶（ImmobilizedCellsAndEnzymes) [I化出 版社（I化Press), (1986)];皮耶己尔化化rbal)，分子克隆实用指南（APracticalGuide ToMolecularCloning) (1984);和奥苏伯尔化M.Ausubel)等人（编），现代分子生物学 实验技术（化rrentProtocolsinMolecularBiology),约翰威立国际出版公司（John Wil巧&Sons，Inc.) (1994)。
[0083] "核酸分子"（或者"核酸"）是指呈单股形式或双股螺旋的核糖核巧（腺巧、鸟巧、 尿巧或胞巧："RNA分子"）或脱氧核糖核巧（脱氧腺巧、脱氧鸟巧、脱氧胸巧或脱氧胞巧： "DNA分子"）的憐酸醋聚合物形式，或其任何憐酸醋类似物，诸如硫代憐酸醋和硫醋。所定义 的术语包括寡核巧酸（具有少于100个核巧酸构成单元）或多核巧酸，W及双股DNA-DNA、 DNA-RNA和RNA-RNA螺旋。例如，此术语包括特别见于直链DNA分子（例如限制性片段）或 环状DNA分子、质粒和染色体中的双股DNA。在论述特定双股DNA分子的结构时，本文中根 据W5'至3'方向沿DNA非转录股（即序列与mRNA同源的股）产生唯一序列的正常约定 来描述序列。"重组DNA分子"是已经历过分子生物学操纵的DNA分子。
[0084] 如本文中所使用，术语"多肤"是指基于氨基酸的聚合物，其可通过核酸编码或合 成制备。多肤可W是蛋白质、蛋白质片段、嵌合蛋白等。通常，术语"蛋白质"是指在细胞中 内源性表达的多肤。通常，编码特定蛋白质或酶的DNA序列经"转录"成mRNA的相应序列。 mRNA序列又经"翻译"成形成蛋白质的氨基酸序列。"氨基酸序列"是两个或两个W上氨基 酸的任何链。术语"肤"通常用于具有少于100个氨基酸构成单元的基于氨基酸的聚合物， 而术语"多肤"用于具有至少100个所述单元的聚合物。然而多肤"在本文中是通用术 语。
[0085] W下实例说明本发明方法和组合物，但不受其限制。就本案而言，对分子生物学和 化学中常见的各种条件和参数的其它适当改变和修改属于本发明的精神和范围内，所述改 变和修改对于所属领域的技术人员显而易见。
[0086] 实例
[0087] 实例 1
[0088] 制备对照油包水型乳剂疫苗制剂
[0089] 将经灭活的反向遗传学册N3禽流感病毒（刘化iu)等人，病毒学（Virology) 314 : 580-590(2003))加入无菌生理盐水中。揽拌混合物形成均匀混合物。将吐温SI80(7. 2mL) 加入混合物中，随后混合形成均匀水性混合物。
[0090] 为形成油包水型乳剂，将水性混合物缓慢加入矿物油/阿拉塞e83V混合物 (720mL)中，W致水性混合物占总体积的40%而油性混合物占总体积的60%。
[00川 实例2
[0092] 制备含有存于水相中的佐剂的油包水型乳剂疫苗
[0093] 基本上如实例1中所述来制备含有存于水相中的佐剂的油包水型乳剂。将经灭活 的册N3禽流感病毒和表2的5种佐剂之一加入无菌生理盐水中，达总体积197mL。揽拌混 合物形成均匀混合物。将化避辩)@ (3.OmL)加入混合物中，随后混合形成均匀水性混合物。
[0094] 为形成油包水型乳剂，将水性混合物缓慢加入矿物油/阿拉塞? 83V混合物 (300mL)中，W致水性混合物占总体积的40%而油性混合物占总体积的60%。由此，用5种 不同佐剂制备5种乳剂疫苗。
[009引表2 :加入油包水型乳剂疫苗制剂中的佐剂
[0096]
[0097]实例 3
[009引火鸡接种剂量测定
[0099] 使火鸡接种如实例1中所述的不含佐剂的128、256或512HAU(血球凝集单 位）/0. 5血疫苗。接种之后3、6和9周，测量接种火鸡血液的HI(血球凝集抑制）效价。用 血球凝集抑制化I)试验（世界卫生组织关于动物流感诊断和监测的手册（World化alth OrganizationMarumionAnimalInfluenzaDiagnosisandSurveill曰nee)，WHO/CDS/ CSR/NCS/2002.5)测试样品。结果示于图2中。尽管每次给药起初得到相当良好的血清学 反应，但之后不久HI效价大幅下降。
[0100]实例 4
[0101] 用含有存于水相中的佐剂的油包水型乳剂疫苗接种火鸡
[0102] 使火鸡接种如实例2中所述的含有存于水相中的佐剂的疫苗。使10只1周龄火 鸡接种0. 5mL疫苗（256HAU/剂量）。作为对照，使10只火鸡接种实例1中所述的制剂并 且10只火鸡不接种。在第一次疫苗接种之后3周，使接种火鸡接受第二次疫苗接种加强剂 0. 5mL疫苗（256HAU/剂量）。在火鸡的4、7和10周龄采集血清样品并且使用与实例4中 所用相同的血球凝集抑制试验进行测试。表3提供如上所述实验方案的表格化说明。
[0103] 表3 :含有存于水相中的佐剂的油包水型乳剂疫苗制剂的功效测试方案
[0104]
[0105] 对照疫苗接种和实验疫苗接种的结果提供于表4和图3中。结果证明了包含卡伯 波或卡伯波+DDA佐剂的疫苗的有效性。
[0106] 表4 :经水相中有或无佐剂的油包水型乳剂疫苗制剂接种的11周龄火鸡的HI效 价
[0107]
[010引 化IGMT=血球凝集抑制几何平均效价）
[0109]实例 5
[0110] 使用含有卡伯波和DDA的油包水型疫苗组合物获得火鸡的