25 (80°C测）；
[0041] 4)用注射用水稀释至含总黄酮约5. 0~20.Omg/ml，搅拌均勾后，过滤，滤液调pH 值6. 0,搅拌均匀，121°C灭菌60分钟，冷藏24小时，调pH值6. 5,经0. 45μm微孔滤膜过滤 澄清后，采用10万级超滤，再将滤液浓缩至相对密度为1. 25 (80°C测），温度105°C下带式干 燥0. 5小时，得刺五加提取物干燥粉。
[0042] 实施例3 :刺五加提取物的制备
[0043] 1)6体积倍量（30L)的550 %乙醇逆流提取5kg刺五加药材，逆流提取流速为 30min/罐，提取温度为50°C，提取时间为1小时，合并提取液，浓缩至相对密度为1. 25 (80°C 测）；
[0044] 2)用8体积倍量的纯化水稀释，搅拌均匀后，过滤，待滤液温度40°C时，用15%的 石灰乳调节pH值至11，搅拌，再用15 %的硫酸调节pH值至6,继续搅拌，静置，滤取上清液 并回收浓缩至相对密度为1. 25 (80°C测）得到浓缩膏；
[0045] 3)加入浓度95%以上乙醇使药液乙醇浓度达到80%，充分搅拌，静置16小时，滤 取上清液，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至相对密度为1. 20 (80°C测），
[0046] 4)用注射用水稀释至含总黄酮约5. 0~20.Omg/ml，搅拌均勾后，过滤，滤液调pH 值5,搅拌均匀，120°C灭菌50分钟，冷藏16小时，调pH值6,经0. 45μm微孔滤膜过滤澄清 后，采用10万级超滤，再将滤液浓缩至相对密度为1. 25 (80°C测），温度80°C下带式干燥1 小时，得刺五加提取物干燥粉。
[0047] 实施例4 :刺五加提取物浸膏的制备
[0048] 1) 7体积倍量（42L)的60 %乙醇逆流提取6kg刺五加药材，逆流提取流速 为32min/罐，提取温度为60°C，提取时间为1. 5小时，合并提取液，浓缩至相对密度为 1. 20(80°C测）；
[0049] 2)用6体积倍量的纯化水稀释，搅拌均匀后，过滤，待滤液温度40°C时，用15%的 石灰乳调节pH值至11，搅拌，再用15 %的硫酸调节pH值至6,继续搅拌，静置，滤取上清液 并回收浓缩至相对密度为1. 25 (80°C测）得到浓缩膏；
[0050] 3)加入浓度96%以上乙醇使药液乙醇浓度达到85%，充分搅拌，静置18小时，滤 取上清液，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至相对密度为1. 25 (80°C测），
[0051] 4)用注射用水稀释至含总黄酮约5. 0~20.Omg/ml，搅拌均勾后，过滤，滤液调pH 值5,搅拌均匀，115°C灭菌55分钟，冷藏14小时，调pH值6,经0. 45μm微孔滤膜过滤澄 清后，采用1万级超滤，再将滤液浓缩至相对密度为1. 20 (80°C测），温度100°C下带式干燥 1. 5小时，得刺五加提取物干燥粉。
[0052] 实施例5 :刺五加提取物有效成分及钾离子含量检测
[0053] 检测例：本发明实施例1~4所述方法制备获得刺五加提取物
[0054] 1)总黄酮测定方法：
[0055] 对照品溶液的制备：精密称取在120°C减压干燥至恒重的芦丁对照品20mg，置 l〇〇ml量瓶中，加60%乙醇适量，置80°C水浴中加热，使溶解，放冷，用60%乙醇稀释至刻 度，摇匀，精密量取25ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每lml含无水芦丁 0·lmg) 〇
[0056] 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. 0ml，分别置10ml量 瓶中，加5%亚硝酸钠溶液0. 3ml，摇匀，放置6分钟，再加10%硝酸铝溶液0. 3ml，摇匀，放 置6分钟，再加氢氧化钠溶液（lmol/L) 4ml，用30%乙醇稀释至刻度，放置10分钟，按照分 光光度法，在510nm波长处测定吸收度，同时作空白，以吸收度为纵坐标，以浓度为横坐标， 绘制标准曲线。
[0057] 测定法：取本发明实施例1~4所得提取物，用30%乙醇制成每lml约含总黄酮 〇. 3mg的溶液，每组2份，作为供试品溶液，精密量取lml，置10ml量瓶中，照标准曲线制备 项下的方法，自"加5%亚硝酸钠溶液0. 3ml"起，依法测定吸收度，计算即得。
[0058] 2)紫丁香苷和刺五加苷E测定方法：
[0059] 照高效液相色谱法（中国药典2010版附录VID)测定。
[0060] 色谱条件与系统适用性试验：在超高效液相色谱（UPLC)上分析；应用ACQUITY UPLCBEHC18 (2. 1X100mm，1. 7μm)色谱柱；以乙腈为流动相A，以0· 1 %磷酸溶液（V/V)为 流动相B，按下表（表1)中的规定进行梯度洗脱；柱温为40°C;流速为每分钟0. 3ml;检测 波长为220nm。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于30000 ;刺五加苷E峰的分离度应达到 1. 5〇
[0061] 表1:梯度洗脱
[0062]
[0063] 对照品溶液制备：取紫丁"苷对照品、五加苷E对照'适量，精密称定，分别 加50%甲醇制成每lml各含紫丁香苷40μg、刺五加苷E20μg的溶液，即得。
[0064] 供试品溶液的制备：取本发明实施例1~4所得提取物，每组2份，精密称定，置 l〇ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
[0065] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μ1，注入液相色谱仪，测定 即得。
[0066] 检测结果：检测物中各成分含量
[0067]
[0068] 上述结果表明本发明提供的方法所制备的刺五加提取物单位量中有效成分的含 量均较高，使产品更适合用于刺五加制剂产业化生产。
[0069] 应当说明的是，虽然本发明以较佳实施例揭露如上，然其并非用以限定本发明，任 何熟习此项技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，所作的任何修改、等同替换和改进 等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种刺五加提取物的制备方法，其特征在于将刺五加药材经40%~70%的乙醇逆 流提取，依次用石灰乳调节溶液pH值为碱性，硫酸调节溶液pH值为酸性，再用浓度大于或 等于93%的乙醇进行醇沉，取滤液高温灭菌后进行超滤、浓缩带式干燥制得刺五加提取物。2. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的乙醇逆流提取流速为25~ 35min/罐，提取温度为30~80°C，提取时间为0. 5~2小时。3. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的乙醇逆流提取流速为30min/罐， 提取温度为50°C，提取时间为1小时。4. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的石灰乳为10%~20%的石灰乳， 碱性为pH值10~12 ;硫酸为10%~20%硫酸，酸性为pH值5. 0~6. 5。5. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的石灰乳为15%的石灰乳，碱性为 pH值11 ;硫酸为15%硫酸，酸性为pH值6。6. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的醇沉使用浓度为95%的乙醇。7. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的高温灭菌处理为115~121°C下 40~60分钟；所述的超滤为1~10万级超滤，超滤膜的单位为截留分子量。8. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的带式干燥的温度为80~105°C， 干燥时间〇. 5~2小时。9. 如权利要求1~8所述的制备方法，其特征在于所述方法步骤如下： a) 3~8体积倍量的40%~70%乙醇逆流提取刺五加药材，逆流提取流速为25~ 35min/罐，提取温度为30~80°C，提取时间为0. 5~2小时，合并提取液，浓缩至80°C下相 对密度为1. 20~1. 25 ; b) 用5~10体积倍量的纯化水稀释，搅拌均匀后，过滤，待滤液温度30°C~50°C时， 用10~20 %的石灰乳调节pH值至10. 0~12. 0,搅拌，再用10~20 %的硫酸调节pH值至 5. 0~6. 5,继续搅拌，静置，滤取上清液并回收浓缩至80 °C下相对密度为1. 15~1. 25得到 浓缩膏； c) 加入浓度93 %以上乙醇使药液乙醇浓度达到75 %~85%，充分搅拌，静置12~24 小时，滤取上清液，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至80°C下相对密度为1. 11~1. 25 ; d) 用注射用水稀释至含总黄酮约5. 0~20.Omg/ml，搅拌均勾后，过滤，滤液调pH值 4. 0~6. 0,搅拌均匀，115~121°C灭菌40~60分钟，冷藏12~24小时，调pH值5. 5~ 6. 5,经微孔滤膜过滤澄清后，采用1~10万级超滤，再将滤液浓缩至80°C下相对密度为 1. 20~1. 25,温度80~105°C下带式干燥0. 5~2小时，制得刺五加提取物干燥粉。10. 如权利要求1~8所述的制备方法，其特征在于所述方法步骤如下： a) 6体积倍量的55 %乙醇逆流提取刺五加药材，逆流提取流速为30min/罐，提取温度 为50°C，提取时间为1小时，合并提取液，浓缩至80°C下相对密度为1. 25 ; b) 用8纯化水稀释，搅拌均匀后，过滤，待滤液温度40°C时，用15%的石灰乳调节pH 值至11，搅拌，再用15 %的硫酸调节pH值至6,继续搅拌，静置，滤取上清液并回收浓缩至 80°C下相对密度为1. 25得到浓缩膏； c) 加入浓度95 %的乙醇使药液乙醇浓度达到80 %，充分搅拌，静置16小时，滤取上清 液，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至80°C下相对密度为1. 11 ; d) 用注射用水稀释至含总黄酮约5. 0~20.Omg/ml，搅拌均勾后，过滤，滤液调pH值 5. 0,搅拌均匀，120°C灭菌50分钟，冷藏16小时，调pH值5,经微孔滤膜过滤澄清后，采用 10万级超滤，再将滤液浓缩至80°C下相对密度为1. 20,温度80°C下带式干燥1小时，制得 刺五加提取物干燥粉。
【专利摘要】本发明涉及一种中药提取物制备方法，具体涉及一种刺五加药材的提取物制备方法。本发明创造为将刺五加药材经40％～70％的乙醇逆流提取、石硫处理、醇沉、灭菌超滤带式干燥等工序制备得刺五加提取物。本发明创造提供的方法，能够显著降低刺五加提取物中的杂质，提高刺五加提取物中有效成分的纯度及刺五加提取物的安全性和稳定性，同时又能缩短提取周期节能高效，特别适合工业化生产。
【IPC分类】A61K36/254
【公开号】CN105395583
【申请号】CN201510834853
【发明人】方同华, 许照芹, 刘玉成, 席桂才
【申请人】哈尔滨珍宝制药有限公司
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年11月25日