专利名称：一种刺五加组合物，含其制剂及其检测方法
技术领域：
本发明涉及医药发明领域，具体涉及一种刺五加组合物，含其制剂及其检测方法。
背景技术：
刺五加(Radix Acanthopanacis Senticosl)为五加科五加属植物的根、根莖及茎，主要分布在中国东北部、俄罗斯远东地区、日本北海道及朝鲜等地。始见于东汉《神农本草经》，别名为五加参、老虎钌自、刺拐棒(东北)。《本草纲目》记载刺五加能“补力益精，明目下气”，能“补五劳七伤，久服轻身耐老”，具有益气健脾，补肾安神之功效。刺五加的主要功效成分为酚苷类及其某些苷元类成分，主要包括刺五加总苷和总黄丽等刺五加总苷具有7种型式，其主要活性成分为刺五加苷B、刺五加苷E :刺五加苷 B又称紫丁香苷(Syringin)，相对含量最多，也是刺五加中的主要药效成分之一，具有抗疲劳、增强免疫力、护肝和释放乙酰胆碱，增加胰岛素分泌，防辐射等作用；刺五加苷E具有缓解压力、抗焦虑、抗应激、抗溃疡和抗疲劳等作用。刺五加总黄酮是刺五加中重要的天然有效活性成分，具有广泛的药理活性，能扩张血管，增加冠状动脉血流量，降低心肌耗氧量，抗心肌缺血，改善心电图，抗异位心律，降低血压，镇静安神。由于刺五加总黄酮的多种生物活性及良好的临床效果，多年来在国内外已成为中药提取及中草药现代化研究的焦点之一。其主要药效成分异嗪皮啶是刺五加苷BI 的苷元，具有明显的抗炎和抗菌作用。现代临床研究表明，刺五加主要用于治疗神经官能症、肾上腺皮质功能低下症、肿瘤患者因放疗化疗引起的白细胞减少、风湿性及类风湿性关节炎、肺心病、低血压和糖尿病等症。刺五加活性成分的提取研究主要是采用水提、甲醇提、乙醇回流提取和超临界CO2 萃取法等，其中超临界CO2萃取的选择性高、操作时间短、有效成分得率高，但其缺点是受处理量的限制，产量低，目前工业开发难度较大，因而目前仍以水提、有机溶剂提取为主，且多数仅以单一成分作为衡量提取工艺参数优劣的指标，难以保证刺五加的全部有效成分得到充分的提取分离和利用。在2010年版中国药典一部中“刺五加浸膏”公开了如下内容，第一是提取方法，分别为水煎煮或醇提，具体为水煎煮方法，刺五加lOOOg，粉碎成粗粉，加水煎煮两次，每次3h， 合并煎液，滤过，滤液浓缩成浸膏50g(水浸膏)；醇提方法:取刺五加lOOOg，粉碎成粗粉，加 75%乙醇，回流提取12h，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩成浸膏40g(醇浸膏)，即得。中国专利申请200710117640.0(简称07年专利)公开了水提醇沉的提取方法，I)采用水提醇沉法制备刺五加药物浸膏；2)将浸膏加水稀释，用石灰乳调节pH至 10. 00-12. 00，搅拌均匀后用硫酸调节pH至4. 5-6. 5，静置，抽取上清液过滤，浓缩，醇沉；3) 冷藏静置除杂得刺五加提取液；或浓缩减压干燥得刺五加提取物。该方法存在煎煮时间短， 有效成分尤其是刺五加苷E成分不能被充分提出，石灰乳调碱前采用二次醇沉方法除杂，在去除杂质的同时有效成分损失也较大的缺点。而中国专利申请201010165556. 8(下简称为2010年专利)在07年专利的基础上，进一步公开了刺五加的提取方法，包括以下步骤将刺五加切成碎片，加水煎煮，合并煎液，减压浓缩，加入乙醇至醇含量为70-75%，静置滤过，回收乙醇后加水稀释至生药重量的 3-6倍，用石灰乳调pH值至10. 0-12. 0，静置4小时以上，再用硫酸将pH值调至5. 0-6. 0，静置过滤，浓缩，加入乙醇至醇含量为80-85%，静置过滤，离心分离杂质，药液回收乙醇后浓缩干燥，即得。该方法同样存在煎煮时间短，有效成分尤其是刺五加苷E成分不能被充分提出的缺点，醇沉次数虽然减少至I次，但有效成分损失仍较大。07年专利说明书实施例5公开的由提取物制备注射液的制备方法为取实施例2 的提取物，加注射用水使溶解，用40 %的NaOH溶液调pH值至5. 5，搅拌均匀后加热，加入
O.2%的活性炭，煮沸吸附15分钟，冷却至50°C以下用40%的NaOH溶液调pH值至5. 7，补加新鲜注射用水至含生药5g/ml。经O. 45 μ m滤膜过滤至澄清，灌装，115°C高压灭菌40分钟。冷冻，缓化后冷藏20天，常温放置3. 5个月。O. 65 μ m滤芯过滤，加注射用水至含生药 5g/ml，调pH值至5. 0，加入活性炭脱色，过滤，调pH值至5. 0，补加注射用水至含生药5g/ ml，分别经O. 45 μ m、0. 22 μ m滤芯精滤，灌封，115°C 30分钟灭菌，即得。该方法第一次高压灭菌易导致溶液pH值下降，使有效成分分解、被破坏掉。而且冷冻步骤使溶液迅速凝固成固体，不利于杂质成分的沉降。冷藏及常温放置的时间较长，不利于大生产。中国专利申请201010165556. 8公开的注射液的制备方法为取提取物加注射用水稀释，100_12(TC热处理，过滤，0-4°C冷藏处理，过滤，调pH值至5. 5，活性炭处理，过滤， 灭菌，冷藏处理，超滤，灌装，灭菌，即得。该方法在加入活性炭进行脱色处理前后各进行了一次冷热处理，目的是除杂，但由于第一次冷热处理后不能将杂质彻底除去就进行活性炭脱色处理，致使I)脱色处理不完全，溶液颜色较深；2)若增加活性炭用量保证溶液颜色符合要求，则部分有效成分会被活性炭吸附除去，含量损失大。现有紫丁香苷的含量检测方法为照高效液相色谱法(2010年版中国药典一部附录VI D)测定。色谱条件与系统试用性实验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以O. I %磷酸溶液为流动相B，按照表I中的规定进行梯度洗脱；检测波长为220nm;柱温30°C。理论板数按照紫丁香苷峰计算应不低于10000 ;异嗪皮啶峰与相邻杂质峰的分离度应不小于1.5。表I:梯度洗脱表
权利要求
1.一种刺五加组合物，其特征在于，每克该组合物中含有总黄酮50-120毫克、紫丁香苷12. 5-30毫克和刺五加苷E 4-15毫克。
2.根据权利要求I所述的刺五加组合物，其特征在于，每克该组合物中含有总黄酮 60-120毫克、紫丁香苷15-30毫克和刺五加苷E 6-15毫克。
3.一种制备权利要求I或2所述的刺五加组合物的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤1)称取刺五加，粉碎，加水浸泡30分钟后煎煮2-3次，每次加入4-8倍量水，煎煮2-3 小时，滤过；2)待滤液温度降到50°C以下时，用20%石灰乳调节pH值至10.0-12.0，搅拌均匀；再用20%硫酸调节pH值至5. 0-6. O，搅拌均匀，静置4小时以上，滤取上清液，浓缩成在80°C 测定相对密度为I. 10-1. 20的浓缩膏；3)待浓缩膏温度降至50°C以下时，边搅拌边加入乙醇使含醇量达83-85%，搅拌均匀，静置12小时以上，滤过，滤液回收乙醇至无醇味并浓缩至在80°C测定相对密度为I.15-1. 20，即得。
4.含权利要求I或2所述的刺五加组合物的制剂，其特征在于，所述制剂由刺五加组合物组成，或由刺五加组合物和药学上可接受的载体或稀释剂组成。
5.根据权利要求4所述的制剂，其特征在于，所述制剂为注射液、冻干粉针剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、糖浆剂或合剂。
6.根据权利要求5所述的制剂，其特征在于，所述制剂为注射液，该注射液中含总黄酮I.8-6. 5mg/ml、紫丁香苷 O. 14-2. 2mg/ml 和刺五加苷 E O. 06-1. Omg/ml。
7.根据权利要求6所述的制剂，其特征在于，所述注射液中含总黄酮I.8-6. 5mg/ml、紫丁香苷 O. 16-2. 2mg/ml 和刺五加苷 E O. 06-1. Omg/ml。
8.根据权利要求7所述的制剂，其特征在于，所述注射液中含总黄酮4.5-5. 5mg/ml、紫丁香苷 O. 35-2. 2mg/ml 和刺五加苷 E O. 17-1. Omg/ml。
9.根据权利要求7所述的制剂，其特征在于，所述注射液中含总黄酮2.7-3. 3mg/ml、紫丁香苷 O. 21-1. 6mg/ml 和刺五加苷 E O. 10-0. 8mg/ml。
10.根据权利要求7所述的制剂，其特征在于，所述注射液中含总黄酮I.8-2. 2mg/ml、 紫丁香苷 O. 14-1. lmg/ml 和刺五加苷 E O. 06-0. 6mg/ml。
11.根据权利要求7所述的制剂，其特征在于，所述注射液中含总黄酮I.8-6. 5mg/ml、 紫丁香苷 O. 20-2. 2mg/ml 和刺五加苷 E O. 06-1. Omg/ml。
12.根据权利要求7所述的制剂，其特征在于，所述注射液中含总黄酮I.8-6. 5mg/ml、 紫丁香苷 O. 22-2. 2mg/ml 和刺五加苷 E O. 10-1. Omg/ml。
13.根据权利要求6-12任一项所述的制剂，其特征在于，所述注射液的包装材料为安瓿、输液瓶、注射剂瓶、输液袋或预灌封注射器。
14.一种制备权利要求6-12任一项所述制剂的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤I)取刺五加组合物，加注射用水调整为每Iml含总黄酮10-20mg，用10%盐酸调节pH 值至4. 0-5. 5，搅拌均匀，经115-120°C高温热处理40分钟，4°C以下冷藏24小时以上，滤过，滤液再经115-120°C高温热处理40分钟，4°C以下冷藏24小时以上；2)取上述溶液，滤过，加入O. 2-0. 3%的活性炭，煮沸20分钟，冷却至60°C以下，滤过， 滤液用20%氢氧化钠溶液调节pH值至5. 5-6. 5，测定总黄酮的含量，加注射用水至全量，滤过，灌封，116°C灭菌40分钟，即得。
15.一种权利要求6-12任一项所述制剂的含量检测方法，包括总黄酮、紫丁香苷和刺五加苷E含量的检测方法，其特征在于，总黄酮含量检测的方法是以芦丁为对照品，照分光光度法在波长510nm处测定吸收度，计算含量。
16.根据权利要求15所述的含量检测方法，其特征在于，紫丁香苷和刺五加苷E含量的检测方法，采用超高效液相色谱法，应用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱，柱温为40°C，流速为每分钟O. 3ml，检测波长为220nm，理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于30000，刺五加苷E峰的分离度应达到I. 5，梯度洗脱程序如下0分钟时，流动相为5%的乙腈和95%的体积比为O. I %的磷酸溶液；3. 2分钟时，流动相为9. 2%的乙腈和90. 8%的体积比为O. 1% 的磷酸溶液；10. O分钟时，流动相为22 %的乙腈和78 %的体积比为O. I %的磷酸溶液；12.O分钟时，流动相为100%的乙腈；15. O分钟时，流动相为5%的乙腈和95%的体积比为O.I %的磷酸溶液。
17.—种权利要求6-12任一项所述的制剂的定性检测方法，还包括指纹图谱的检测方法，其特征在于，该指纹图谱的检测方法采用高效液相色谱法，应用Agilent的Zorbox Eclipse XDB-C18色谱柱，柱温为20°C，流速为每分钟O. 8ml，检测波长为270nm，理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于6000，且与其相邻的色谱峰的分离度应达到1.5以上，梯度洗脱程序如下流动相A为O. 5%的甲酸溶液，流动相B为乙腈和水，其体积比为30 70,0 分钟时为100%的流动相A ；15分钟时为88%的流动相A和12%的流动相B ；21分钟时为 82 %的流动相A和18 %的流动相B ；60分钟时为31 %的流动相A和69 %的流动相B ；65分钟时为100%的流动相B ；70-75分钟时为100%的流动相A。
18.权利要求I或2所述的刺五加组合物或权利要求4-12任一项所述的制剂在制备治疗内分泌系统疾病、心脑血管系统疾病、神经系统疾病或生殖系统疾病的药物中的应用。
19.根据权利要求18所述的应用，其特征在于，所述内分泌系统疾病为更年期综合症或糖尿病，所述心脑血管系统疾病为短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化、脑血栓形成、脑栓塞、 冠心病、心绞痛或高脂血症，所述神经系统疾病为神经衰弱，所述生殖系统疾病为男性不育症。
全文摘要
本发明涉及一种刺五加组合物，含其制剂及其含量检测方法，每克该组合物中含有总黄酮50-120毫克、紫丁香苷12.5-30毫克和刺五加苷E 4-15毫克。本发明提供的组合物及制剂在降血糖、降血脂、男性不育症方面具有疗效，且效果优于现有技术。
文档编号A61P9/10GK102579532SQ20121004975
公开日2012年7月18日 申请日期2012年2月29日 优先权日2011年10月17日
发明者方同华 申请人:哈尔滨珍宝制药有限公司