一种黄苞大戟提取物及其在制备防治hiv病毒感染药物中的应用
【技术领域】
[0001 ]本发明设及中药活性成分和药物技术领域，更具体地，设及一种黄巷大戟提取物 及其制备方法和在制备防治HIV病毒感染药物中应用。
【背景技术】
[0002] 艾滋病（Acquired Immuno-deficienc^y yn化ome，AIDS，获得性免疫缺损综合征， 简称艾滋病)是当今世界威胁人类健康的不可根治致死性疾病之一。导致艾滋病的病原体 即人类免疫缺损病毒化uman Immunodeficien巧Virus，HIV)，1983年获得分离确证，有两 种亚型HIV-I和HIV-2,若干变异株。HIV繁殖过程已被阐明，不同类型的化合物被相继研究 和应用于抗艾滋病病毒。全世界已对约20000个化合物进行过抗HIV活性的研究，目前已成 功地研制出了一系列抗逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂的艾滋病药物。如逆转录酶抑制剂 (AZT，DDC，DDI，D4T，3TC,Nevirapine ,Delavirdine ,Efavinavir ,Amprenavir)，运些药虽被 批准用于临床，客观上延长了艾滋病患者的生命，但同时又有严重的毒副作用，如骨髓抑制 和健忘W及导致耐药病毒株的出现。患者往往难W忍受运些毒副作用而带来的痛苦，而拒 绝服用。因临床上急需研制出高效低毒的抗艾滋病新药。从中草药中发现天然产抗HIV活性 化合物或先导物是目前国内外研究的重要方面和非常活跃的领域。至今发现100多种天然 化合物具有抗HIV活性，分属于倍半祗、二祗、立祗、酱体、黄酬、香豆素、肤类、生物碱、多糖、 天花粉蛋白等，其中活性较强的如：甘草甜素，金丝桃素，姜黄素，大豆皂巧，喜树碱，栗精 胺，香茹多糖，天花粉蛋白等。目前约有近百个品种正在进行临床前研究和临床试验。
[0003] 中草药黄巷大戟为大戟科大戟属植物黄巷大戟的地上部分，在我国分布广泛，资 源丰富。黄巷大戟化uphorbia S化kimensis Boiss)作为一种鄂西民族植物药材，根入药， 具泻水、清热、解毒之功效，用于肾炎水肿、腹胀、便秘，追疾，风湿，黄痘等疾病的治疗。对它 的成分研究设及二祗、=祗、生物碱、酪类化合物、香豆素、黄酬、酱体、生育酪衍生物、脂肪 酸等，而活性主要见于抑制血管细胞生成和细胞毒性两方面的报道。而现有的技术中未见 carol ignan类型木质素的抗HIV活性的报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种黄巷大戟提取物在制备防治HIV病毒感染的药物中的 应用。
[000引具体地，提供一种carolignan型木质素在制备防治HIV病毒感染的药物中的应用。
[0006]更具体地，作为优选，由于本发明提供的黄巷大戟提取物中有2个新化合物，因此 提供所述的提取物结构式为(1)或(2)，化合物1，2互为对映异构体。
[0007] 第二方面，本发明还提供一种防治艾滋病的药物组合，所述药物组合中包含有效 量的式(1)或式(2) W及与其配伍的其他药学上可接受的载体或辅料。
[0008] 本发明的另一目的提供所述的黄巷大戟提取物的制备方法。
[0009]上述的黄巷大戟提取物的制备方法，将黄巷大戟化.sikkimensis)地上部分，晒 干，粉碎，用95%乙醇室溫浸提=次，每次24小时，合并浓缩液，分别用石油酸、乙酸乙醋和 正下醇萃取，减压浓缩回收溶剂，得到石油酸、乙酸乙醋和正下醇部分，乙酸乙醋部分先过 大孔树脂(DlOl)，W乙醇/水梯度洗脱，得到4个馈分。各馈分再分别过MCI柱，硅胶柱，反相 Cis柱和半制备液相色谱柱，反复分离得到。
[0010] 所述的乙醇/水体系中乙醇和水的体积比为:0:100、10:90、30:70、50: 50、70: 30、 80:20、90:10、100:0。
[0011] 本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：
[0012] 本发明实施例提供了一种黄巷大戟提取物在制备防治HIV病毒感染的药物中的应 用。在MT-4细胞模型中，将一定浓度药物与SOTCIDso/孔的病毒加入培养基中，共同培养S 天，收集上清，用巧光素酶检测体系测定细胞病毒相互作用。巧光素酶与底物反应，产生巧 光，通过检测巧光的强度可W测定巧光素酶的活性，从而反应药物作用病毒感染的强度，实 验结果显示粗提物及化合物组巧光强度均大于空白对照，且与阳性对照齐多夫定相当，进 一步测试其半数有效浓度巧Cso)发现均在IOiiMW内。另外，细胞内毒性实验也证明，黄巷大 戟乙酸乙醋粗提物及化合物1，2也具有较好的安全性。运表明，黄巷大戟乙酸乙醋粗提物及 化合物1，2可用于制备防治HIV病毒感染的药物。
【附图说明】
[0013] 图1.新化合物1的结构及活性
[0014] 图2.新化合物2的结构及活性
【具体实施方式】
[0015] 下面结合附图和具体实施例进一步详细说明本发明。除非特别说明，本发明采用 的试剂、设备和方法为本技术领域常规市购的试剂、设备和常规使用的方法。
[0016] 实施例1
[0017] 从黄巷大戟化.s;Lkkimensis Boiss)中制备化合物1-2的方法：
[0018] 黄巷大戟化.sikkimensis)全株(20kg)，晒干，粉碎，用95%乙醇室溫浸提3次，每 次1天，合并浓缩液，得粗提物（2562g)，分别用石油酸、乙酸乙醋、正下醇萃取，乙酸乙醋层 (334g)直接经大孔树脂(DlOl)，用乙醇 / 水(0:100、10:90、30:70、50:50、70:30、80:20、90: 10、100:0，V/V)梯度洗脱，每SOOmL收集一份，TLC检测合并相同部分，共得到四个馈分A-D。8 部分过C18反相柱，用甲醇/水(30-100%)梯度洗脱得到四个小组分(B1-B4)"B1部分过正相 柱，W二氯甲烧/甲醇（1:0,100:1,15:1)进行洗脱得到六个组分(Bla-Blf )。合并组分BlcU Ble两部分，先利用制备薄层层析（二氯甲烧/乙酸乙醋50:1)富集，然后用半制备液相（乙 腊/水55:45)得到化合物1，最后用半制备手性柱（甲醇/7长，9:1，311117111111)拆分得到化合物 1、2。1，2互为对映异构体。
[0019] 化合物1(新化合物）：
(-)-7' R，8' S-e巧thro-?' -methylcarolignan E( 1):白色粉末；[a]2〇D_16.2(c 0.1， CHCl3);UV(Me0H)入max(log〇231(4.58) ,288(3.87) ,327(4.68)nm;ECD(MeCN)入max( A 0232 (1.03)，211(-3.72)nm;IR Vmax