一种黄芪超微饮片及其制备方法与质量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药领域，具体涉及一种黄芪超微饮片及其制备方法与质量检测方 法。
【背景技术】
[0002] 中药超微饮片是将单味中药饮片经过科学加工并提取其有效成分制成的中药饮 片新剂型，具有服用方便、计量准确、安全卫生、便于调配等优点。
[0003] 本发明超微饮片是以黄芪饮片为原料，经水提取、浓缩、干燥、超微粉碎等工艺制 备而成的中药超微饮片，在此特定的制备工艺下制备的本发明超微饮片对治疗子宫内膜异 位能够发挥意想不到的突出的治疗优势。
[0004] 子宫内膜异位症是妇科常见疾病之一，育龄妇女中的发病率约百分之十，且发病 率呈上升趋势。由于子宫内膜异位症的多发性、复发性及治疗的难度大，并且有恶变倾向， 为妇科疾病中的疑难杂症之一，目前主要采用手术治疗和激素治疗。子宫内膜异位症引起 的盆腔痛、痛经和不孕严重影响了患者的生活质量和健康，已引起众多医家的重视。中医药 是治疗子宫内膜异位症的主要方法之一，与西药相比具有毒性作用小、可长期服、疗效稳定 等特点。
[0005] 目前关于本发明超微饮片尚无含量测定方法的报道。羽扇烯酮是黄芪中的活性成 分之一，对其进行含量测定，可以保证临床用药的安全、有效。本发明提供了对本发明超微 饮片中羽扇烯酮含量测定的方法。
[0006] 本发明所述黄芪的基原为豆科黄芪属植物蒙古黄芪和膜荚黄芪的根。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种黄芪超微饮片。
[0008] 本发明的另一目的是提供该黄芪超微饮片的制备方法。
[0009] 本发明还提供了该黄芪超微饮片的质量检测方法。
[0010] 本发明还提供了该黄芪超微饮片的制药用途。
[0011] 本发明的目的是由以下方式实现的： 一种黄芪超微饮片是由以下重量份的原料制成的:黄芪饮片10%~20%重量份的水提取 物、黄芪饮片80%~90%重量份的超微粉碎物。
[0012] 该黄芪超微饮片的制备方法如下： (1) 取黄芪饮片10%~20%重量份，加5~15倍量水，煎煮1~4次，每次0.5~2.5小时，合 并水煎液，浓缩成浸膏，得到黄芪饮片的水提取物； (2) 取黄芪饮片80%~90%重量份，进行超微粉碎，得到黄芪饮片的超微粉碎物； (3) 将上述黄芪饮片的水提取物与黄芪饮片的超微粉碎物合并，制粒，干燥，得黄芪超 微饮片。
[0013] 该黄芪超微饮片中的黄芪饮片的水提取物的优选制备方法如下：取黄芪饮片10% ~20%重量份，加8~12倍量水，煎煮2~3次，每次1~2小时，合并水煎液，浓缩成浸膏，得到 黄芪饮片的水提取物。
[0014] 该黄芪超微饮片中的黄芪饮片的水提取物的更为优选的制备方法如下:取黄芪饮 片，加1 〇倍量水，煎煮2次，每次1小时，合并水煎液，浓缩成浸膏，得到黄芪饮片的水提取物。
[0015] 该黄芪超微饮片中的黄芪饮片的超微粉碎物的制备方法如下：取黄芪饮片80%~ 90%重量份，采用粉碎机对黄芪饮片进行超微粉碎，超微粉碎后，黄芪饮片的超微粉碎物的 粒径为10~75μπι。
[0016] 该黄芪超微饮片中的黄芪饮片的超微粉碎物的优选制备方法如下:采用气流粉碎 机对黄芪饮片进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为1000~1200kPa，进料速度为160~ 200r · min-S分级频率为30~40Hz，粉碎时间为40~50min，得到黄芪饮片的超微粉碎物。 [0017]该黄芪超微饮片中的黄芪饮片的超微粉碎物的更为优选的制备方法如下:采用气 流粉碎机对黄芪饮片进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为1 lOOkPa，进料速度为180r · mirT1，分级频率为35Hz，粉碎时间为45min，得到黄芪饮片的超微粉碎物。
[0018] 所述的黄芪超微饮片可以采用高效液相色谱法对该黄芪超微饮片中的羽扇烯酮 进行含量测定，测定方法为： (1) 色谱条件：色谱柱：C18柱；流动相：比例为83 :17的乙腈-0.5%磷酸溶液；流速： 1. OmL/min;检测波长:210nm;柱温:35°C ;进样量:20yL;理论板数按羽扇稀酮计算应不低于 5000； (2) 对照品溶液的制备：取羽扇烯酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lmL含 0.0773mg的溶液，作为对照品储备液;再精密吸取对照品储备液2mL至25mL量瓶中，加甲醇 稀释至刻度，摇匀，即得； (3) 供试品溶液的制备:取本发明超微饮片，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加 入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，取续滤液，即得； (4 )测定:精密量取对照品溶液、供试品溶液各20yL，注入高效液相色谱仪中测定。
[0019] 所述的黄芪超微饮片还可以采用高效液相色谱法对该黄芪超微饮片中的异微凸 剑叶莎醇进行含量测定，测定方法为： (1) 色谱条件:色谱柱为C18柱;流动相：比例为10:90的乙腈-0.1%磷酸;柱温:30°C ;流 速：1.0 ml/min;检测波长:207 nm;进样量:20yL;理论板数按异微凸剑叶莎醇计算应不低 于5000; (2) 对照品溶液的制备:精密称取异微凸剑叶莎醇对照品10.13 mg，置100 ml量瓶中， 用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2 ml，置25 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇 匀，则每1 ml含异微凸剑叶莎醇8.1 yg; (3) 供试品溶液的制备:精密称取黄芪超微饮片约0.2 g至100 ml量瓶中，加甲醇80 ml 超声15min，冷却后用甲醇定容至刻度，摇勾，移取1 ml至10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻 度，摇匀，0.45 μπι滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液； (4 )测定:精密量取对照品溶液、供试品溶液各20yL，注入高效液相色谱仪中测定。
[0020] 所述的黄芪超微饮片可用于制备治疗子宫内膜异位症的药物。
[0021] 所述的黄芪超微饮片还可用于制备治疗膝关节炎的药物。
[0022] 通过如下实验研究验证本发明的技术效果： 实验一:本发明超微饮片治疗子宫内膜异位症的实验研究 1实验材料 1.1动物 健康未交配雌性Wistar大鼠，体重200~250g，购自甘肃中医药大学实验动物中心。
[0023] 1.2药物 1.2.1本发明黄芪超微饮片:处方:黄芪饮片200g的水提取物、黄芪饮片800g的超微粉 碎物。制法：（1)取黄芪饮片200g，加水2000mL，煎煮2次，每次1小时，合并水煎液，浓缩成浸 膏，得到黄芪饮片的水提取物；（2)取黄芪饮片800g，采用气流粉碎机对黄芪饮片进行超微 粉碎，气流粉碎机的气流压力为llOOkPa，进料速度为180r · mirT1，分级频率为35Hz，粉碎时 间为45min，采用激光粒径仪湿法测定粉体的粒径分布，细粉的D 5Q，D9Q分别为29.758μπι， 58.376μπι，得到黄芪饮片的超微粉碎物；（3)将黄芪水提取物与黄芪超微粉碎物混合，得到 本发明黄芪超微饮片。配置成〇. 5g/mL药物混悬液，备用。
[0024] 1.2.2对比黄芪超微饮片A:处方:黄芪饮片200g的水提取物、黄芪饮片800g的超微 粉碎物A。制法：（1)取黄芪饮片200g，加水2000mL，煎煮2次，每次1小时，合并水煎液，浓缩成 浸膏，得到黄芪饮片的水提取物；（2)取黄芪饮片800g，采用气流粉碎机对黄芪饮片进行超 微粉碎，采气流粉碎机的气流压力为1300kPa，进料速度为150r · mirT1，分级频率为50Hz，粉 碎时间为60min，采用激光粒径仪湿法测定粉体的粒径分布，细粉的D5Q，D9〇分别为4.658μηι， 8.951μπι，得到黄芪饮片的超微粉碎物A;(3)将黄芪水提取物与黄芪超微粉碎物Α混合，得到 对比黄苗超微饮片A。配置成0.5g/mL药物混悬液，备用。
[0025] 1.2.3对比黄芪粉碎饮片B:处方:黄芪饮片200g的水提取物、黄芪饮片800g的粉碎 物B。制法：（1)取黄芪饮片200g，加水2000mL，煎煮2次，每次1小时，合并水煎液，浓缩成浸 膏，得到黄芪饮片的水提取物；（2)取黄芪饮片800g，采用常规的齿式中药粉碎机粉碎，过 120目筛，采用激光粒径仪湿法测定粉体的粒径分布，细粉的D 5Q，D9Q分别为95.658μπι， 118.95Ιμπι，得到黄芪饮片的粉碎物Β; (3)将黄芪饮片的水提取物与黄芪饮片的粉碎物Β混 合，得到对比黄芪粉碎饮片Β。配置成0.5g/mL药物混悬液，备用。
[0026] 1.2.4丹那唑胶囊:200 mg/粒，江苏联环药业股份有限公司生产。
[0027] 1.3试剂及仪器 雌二醇(E2)放免药盒、孕酮(P)放免药盒，由天津九鼎医学生物工程有限公司提供。ER、 PR、VEGF、NK细胞免疫组化试剂盒，由武汉博士德生物工程有限公司提供。2008 G/r自动 计数仪。显微镜:OLYMPUS，型号1X70。
[0028] 2实验方法 2.1造模 动物模型建立取成年雌性大鼠阴道涂片检查动情周期。取动情期大鼠参考文献方法 (常暖.大鼠子宫内膜异位症模型的建立及其病理学观察[J].临床与实验病理学杂志， 1998,14(1): 67-69.)，戊巴比妥钠40 mg/kg腹腔注射麻醉，于下腹部正中靠左上方做一长 约1.5 cm切口，挑出左侧子宫角，结扎子宫系膜血管，再结扎需切除的子宫段的两端，切取 一段1.5 cm长的子宫。在无菌的戴克隆氏液中分离子宫内膜，然后切取5 mmX5 mm的内膜 组织片段，将上皮层对着腹壁，缝合于腹壁上。建模后3周，择动情期大鼠，开腹见移植子宫 内膜体积增大，形成内有液体积聚并有血管形成的透明小囊泡，以体积^ 20 mm3，内膜囊泡 可见透明积液为造模成功标准。
[0029] 2.2分组与给药 分组及给药取建模成功60只大鼠，按异位内膜体积大小随机分为6组，即模型组、丹那 唑阳性药物组、本发明黄芪超微饮片组、对比黄芪超微