口腔生物膜钙化抑制剂及口腔用组合物的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种对口腔生物膜钙化抑制效果优异、可赋予高的牙石形成抑制效果的包含咖啡酰葡萄糖或者樱提取物且该樱提取物含有咖啡酰葡萄糖的口腔生物膜钙化抑制剂以及含有咖啡酰葡萄糖或者樱提取物且该樱提取物含有咖啡酰葡萄糖的口腔用组合物。
【专利说明】
口腔生物膜钙化抑制剂及口腔用组合物
技术领域
[0001] 本发明涉及一种对口腔生物膜钙化抑制效果优异、可赋予高的抑制牙石形成效果 的口腔生物膜钙化抑制剂及口腔用组合物。
【背景技术】
[0002] 牙石认为是牙菌斑(生物膜)通过唾液成分或龈沟液成分的钙化而形成的，牙石在 成为新牙菌斑附着立足处的同时，由牙石的生长导致牙周袋扩大而使牙周病加重。因此，在 牙周病治疗中，去除牙石非常重要，从牙周病预防的观点来看，预防牙石也很重要。另一方 面，在从牙齿去除牙石时，伴随着医生大量的劳动力与患者的痛苦，而且频率地去除牙石， 与健康牙质的研磨密切相关导致对牙质造成很大的损伤。由这些可知，预防牙石的形成在 牙科学上意义重大。
[0003] 近年来，牙石成分是由磷酸钙的结晶（大部分为羟基磷灰石或磷酸氢钙)形成的而 受到关注，从抑制该结晶的成长方面出发，开发了各种水溶性缩合磷酸盐(焦磷酸盐、三聚 磷酸盐、聚磷酸盐等直链的缩合磷酸盐)或锌化合物(柠檬酸锌、氯化锌）的应用技术(专利 文献1:日本专利特开2008-74773号公报、专利文献2:日本专利特开2008-74774号公报）。 现有技术文献 专利文献
[0004] 专利文献1:日本专利特开2008-74773号公报 专利文献2:日本专利特开2008-74774号公报 专利文献3:国际公开第2011/099570号 专利文献4:日本专利特开2013-75880号公报
【发明内容】
发明所要解决的课题
[0005] 然而，以往的技术方法是对唾液中的钙和磷酸的结合抑制（螯合作用），因此在恒 定地丰富存在钙或磷酸的口腔内，只不过是一种对症疗法，期望开发从根本上抑制牙石形 成的技术。
[0006] 本发明鉴于上述情况而完成，本发明的目的在于提供一种对口腔生物膜钙化抑制 效果优异、可赋予高的牙石形成抑制效果的口腔生物膜钙化抑制剂及口腔用组合物。 解决课题的手段
[0007] 本发明人为达到上述目的而进行了深入研究，结果发现咖啡酰葡萄糖的1-0-(Ε)-咖啡酰-β-D-吡喃葡糖苷对口腔生物膜钙化抑制效果优异，可赋予高的牙石形成抑制效果， 此外，含有上述咖啡酰葡萄糖的樱、特别是樱花的提取物也确认到具有相同的效果。进一步 地发现，通过在口腔用组合物中配入该咖啡酰葡萄糖或者含有其的樱提取物，可赋予优异 的生物膜钙化抑制效果，可得到特别高的牙石形成抑制效果。
[0008] 另外，自以往进行了与牙石形成相关的微生物研究，牙石形成被理解为是生物矿 化的一种，作为生物学现象很早之前就是已知的，但是关注于牙石形成过程中的牙菌斑(生 物膜)钙化的评价技术并没有确立。这样的情况下，不同于以往的关注于螯合作用的牙石形 成抑制的评价模型（专利文献1、2)，本发明人新开发出对与牙石形成相关的微生物的代谢 阻碍等也可以评价的体外牙石模型(生物膜钙化模型），使用该体外牙石模型研究了各种成 分。结果发现:苯丙素的糖苷的咖啡酰葡萄糖中，确认到防碍与生物膜钙化相关的口腔细菌 的代谢而使钙化生物膜中的钙浓度明显减少的抑制生物膜钙化的效果，从而具有显著优异 地牙石形成抑制效果，由此可期待超越以往单纯的对症疗法进行预防或者抑制牙石形成， 从而完成了本发明。
[0009] 专利文献3(国际公开第2011/099570号）中提出了樱的花或叶的提取物，即1-0-(E)-咖啡酰-β-D-吡喃葡糖苷作为糖化终产物生成抑制剂、AGE生成抑制剂、AGE的成纤维细 胞的细胞凋亡抑制剂是有效的，专利文献4(日本专利特开2013-75880号公报）中提出了包 含木质素的抗菌剂。但是，咖啡酰葡萄糖产生了如上所述的生物膜钙化抑制效果，并对抑制 牙石形成是有效的是本发明人的新发现。
[0010] 因此，本发明提供下述的口腔生物膜钙化抑制剂及口腔用组合物。 〔1〕一种包含咖啡酰葡萄糖的口腔生物膜钙化抑制剂。 〔2〕一种包含樱提取物且该樱提取物含有咖啡酰葡萄糖的口腔生物膜钙化抑制剂。 〔3〕如〔2〕中所述的口腔生物膜钙化抑制剂，其中，樱提取物含有0.001质量％以上的咖 啡酰葡萄糖。 〔4〕一种口腔用组合物，其特征在于，其含有咖啡酰葡萄糖。 〔5〕如〔4〕中所述的口腔用组合物，其含有樱提取物且该樱提取物含有咖啡酰葡萄糖。 〔6〕如〔5〕中所述的口腔用组合物，其中，樱提取物含有0.001质量％以上的咖啡酰葡萄 糖。 〔7〕如〔4〕、〔5〕或者〔6〕所述的口腔用组合物，其中，咖啡酰葡萄糖的含量为组合物整体 的0.001~0.2质量％。 〔8〕如〔4〕~〔7〕中的任一项所述的口腔用组合物，其中，所述组合物为洁齿剂或者漱口 剂。 〔9〕如〔4〕~〔8〕中的任一项所述的口腔用组合物，其中，所述组合物用于抑制口腔生物 膜钙化。 发明效果
[0011] 根据本发明，可以提供一种对口腔生物膜钙化抑制效果优异、可赋予高的抑制牙 石形成效果的口腔生物膜钙化抑制剂及口腔用组合物。此外，由此可期待超越单纯的对症 疗法进行预防或者抑制牙石形成
【具体实施方式】
[0012] 以下，对本发明做进一步地详述。本发明的口腔生物膜钙化抑制剂，含有咖啡酰葡 萄糖的 1_〇_(Ε)-咖啡酰-β-D-吡喃葡糖苷（l-〇-(E)-caffeoyl-0-D-glucopyranosideM"^S 有效成分。其是如下述化学式所示的化合物。
[0013] 【化1】
[0014] 本发明中，作为咖啡酰葡萄糖可以使用含有咖啡酰葡萄糖的提取物，具体地使用 樱提取物，并将其作为有效成分。 本发明中，樱(桜、Sakura)是蔷薇科樱属的植物中除了梅、桃、杏等之外的总称，一般地 是指属于樱亚属（Subgen.Cerasus)的植物。对樱的种类没有特别限定，可以使用例如山樱 组、江户彼岸组、豆樱组、丁子樱组、深山樱组、中国樱桃组、里樱组的，但并不限定于这些 组。 用于原料的樱的部位，优选叶或花、特别是花。
[0015] 作为提取方法，可以采用公知的方法，可采用溶剂提取、特别适宜采用使用了极性 溶剂的溶剂提取。 在这里，极性溶剂提取时，对极性溶剂没有特别限制。举例如水、甲醇、乙醇、异丙醇、丙 酮、1，3-丁二醇、乙二醇、丙二醇、甘油、乙酸、乙酸乙酯、醚。这些可以只使用一种，也可以混 合两种以上。其中优选使用水，甲醇、乙醇等碳原子数1~3的低级醇，它们混合而成的醇。
[0016] 咖啡酰葡萄糖可以用专利文献3(国际公开第2011/099570号)记载的方法配制。具 体地举例有下述方法。 向充满了提取溶剂的处理槽中投入提取原料，边搅拌边使有效成分洗脱。使有效成分 洗脱至溶剂中之后，滤过除去提取残渣，由此得到樱的提取液。然后，根据常规方法对提取 液实施稀释、浓缩、干燥、提纯等处理，可以得到含有高浓度的咖啡酰葡萄糖的提取物。也可 以分离咖啡酰葡萄糖。
[0017] 另外，本发明中，樱提取物中适宜含有咖啡酰葡萄糖为0.001 %以上、特别是 0.02%以上、尤其是2%以上。上限没有特别限制，可以含有100%分离的咖啡酰葡萄糖。
[0018] 作为这样的樱提取物，可以使用市售品。作为具体的市售品，可以使用Oryza油化 株式会社制的樱的花提取物(商品名"樱的花提取物-P"）。
[0019] 本发明的口腔生物膜钙化抑制剂配入口腔用组合物中时，咖啡酰葡萄糖的含量， 经纯成分换算优选为组合物整体的〇.001% (质量％，以下相同），更优选为0.02%以上。此 外，优选为0.2%以下，从使用感方面出发更优选为0.06%以下。配入量越多则生物膜钙化 抑制效果越优异，为了充分地赋予生物膜钙化抑制效果，优选配入〇. 〇〇 1 %以上。超过〇. 2 % 时则有时影响使用感，因此从使用感方面出发优选0.2%以下。
[0020] 此外，可以相对于咖啡酰葡萄糖组合物的整体，以在上述范围内的含量配入樱提 取物。具体地，樱提取物的配入量，优选组合物整体的0.05%以上，更优选1%以上。此外，优 选10%以下，更优选3%以下。
[0021] 本发明的口腔用组合物，可以配制成牙膏、湿牙粉、液体洁齿剂等洁齿剂，漱口剂、 凝胶剂、软膏剂、口中清凉剂、嗽口用片剂、口腔用糊膏、牙龈按摩膏等各种剂型。这些制剂 除了上述必需成分之外，可以在不损害本发明效果的范围内，根据需要按照其剂型添加其 他的公知成分，此外可以通过通常的方法来配制。特别适宜作为洁齿剂、漱口剂，洁齿剂中 可以配入研磨剂、增稠剂、粘合剂、表面活性剂，以及进一步地根据需要配入香料、甜味剂、 防腐剂、有效成分等。漱口剂中可以配入湿润剂、表面活性剂，以及进一步地根据需要配入 香料、甜味剂、防腐剂、有效成分等。
[0022] 作为研磨剂，举例有沉淀二氧化硅、硅胶、硅酸铝、沸石、硅酸锆、磷酸氢钙二水合 物和无水磷酸氢钙、焦磷酸钙、碳酸钙、氢氧化铝、氧化铝、碳酸镁、磷酸三镁、不溶性偏磷酸 钠、不溶性偏磷酸钾、氧化钛、羟基磷灰石、合成树脂系研磨剂等(配入量:通常为组合物整 体的5~50 % )。另外，漱口剂中通常不配入研磨剂。
[0023] 作为增稠剂(湿润剂），举例有山梨糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、赤藓糖醇、帕 拉金糖、海藻糖等糖醇;甘油、丙二醇、聚乙二醇、1，3_ 丁二醇等多元醇(配入量:通常为组合 物整体的10-50%)。
[0024]作为粘合剂，举例有羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素等纤维素衍生物;海藻酸钠、 海藻酸丙二醇酯等海藻酸衍生物;瓜尔胶、黄原胶、阿拉伯胶等树胶类;卡拉胶、明胶、聚乙 烯醇、聚丙烯酸钠、羧基乙烯基聚合物、聚乙烯吡咯烷酮等合成粘合剂等(配入量:通常为组 合物整体的0.1~5%)。
[0025] 作为表面活性剂，可以配入阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、阳离子表面活 性剂。 作为阴离子表面活性剂，举例有月桂基硫酸钠、肉豆蔻硫酸钠等烷基硫酸盐;N-月桂酰 肌氨酸钠、N-肉豆蔻酰肌氨酸钠等N-酰基肌氨酸盐;十二烷基苯磺酸钠、氢化椰子油脂肪酸 单甘油酯单硫酸钠、月桂醇磺基乙酸酯钠、N-棕榈酰谷氨酸钠等N-酰基谷氨酸盐;N-甲基-N-酰基牛黄酸钠、N-甲基-N-酰基丙氨酸钠、α-烯烃磺酸钠等。 作为非离子表面活性剂，举例有山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、 蔗糖脂肪酸酯等糖醇脂肪酸酯类;甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸 酯、聚乙二醇脂肪酸酯等多元醇脂肪酸酯；聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物、聚 氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯氢化蓖麻油等醚型的表面活性剂；月桂酸二乙醇酰胺等脂肪 酸烷醇酰胺。 作为阳离子表面活性剂举例有烷基铵、烷基苯酰铵盐等。 配入这些表面活性剂时，其配入量优选为组合物整体的5%以下，特别优选为0.001~ 5%〇
[0026] 作为香料成分，举例有通常添加的公知的香料，例如薄荷醇、香芹酮、柠檬烯、正癸 醇、香茅醇、松油醇、桉叶素、芳樟醇、乙基芳樟醇、香兰素、百里酚、薄荷油、留兰香叶油、 冬青油、丁香油、桉树油等香料。 作为甜味剂，举例有糖精钠、甜菊苷、甘草酸二钾、紫苏糖、索马甜等。作为防腐剂，举例 有对羟基苯甲酸酯、苯甲酸或其盐等。
[0027] 作为有效成分，可以配入葡聚糖酶、变聚糖酶、溶菌酶、淀粉酶、蛋白酶、溶解酶、超 氧化物歧化酶(S0D)等酶;单氟磷酸钠、单氟磷酸钾等碱金属单氟磷酸酯;氟化钠、氟化亚锡 等氟化物；西吡氯铵、苄索氯铵、苯扎氯铵、地喹氯铵、盐酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、三氯 生、聚维酮碘、异丙基甲基苯酚、桧木醇等杀菌成分;凝血酸、ε氨基己酸、尿囊素、二氢胆甾、 甘草酸类、甘油磷酸、叶绿素、氯化钠、木糖醇、氯化锌、水溶性无机磷酸化合物;或维生素 Α、 维生素 Β族、维生素 C、维生素 Ε等维生素及其衍生物等的一种或者两种以上。另外，这些有效 成分的配入量可以是不妨碍本发明效果的范围内的有效量。
[0028]本发明的口腔用组合物，使用pH调节剂，优选调节/保持为ρΗ5~9，更优选pH为6~ 8〇 作为pH调节剂，举例有盐酸、磷酸、硼酸等无机酸;乳酸、柠檬酸等有机酸;氢氧化钠、氢 氧化钾;或三乙基胺、三丙基胺、三月桂胺等烷基胺;单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二异丙 醇胺、三丙醇胺、三异丙醇胺、乙基二乙醇胺、氨基丁三醇等烷醇胺;N-甲基哌啶等各种胺 类;磷酸氢钾、磷酸氢钠等磷酸盐;柠檬酸钠、乳酸钠等有机盐类等。pH调节剂的量，可以根 据设定pH来做适当选择。 实施例
[0029] 下面，示出实施例以及比较例、配方例来具体地说明本发明，但本发明并不限定于 下述实施例。另外，本实施例中除非另有说明，％均表示质量％。
[0030] [实施例、比较例] 使用表中所示的药剂(试验组合物），根据下述实验例所示的方法来评价生物膜钙化抑 制效果。结果在表中一并记载。
[0031 ]实施例:生物膜钙化抑制效果的试验 使用从美国典型培养物保藏中心所购的细菌，通过以下的方法进行预培养。粘性放线 菌（厶。1：；[1101117。6 8￥18。08118)厶1'(^43146、具核梭杆菌（卩1180匕&(^61'；[111111111。16&1：11111) ATCC10953、牙銀卟啉单胞菌(Porphyromonas gingival is )ATCC33277，通过含有5mg/L血红 素（西格玛公司制）和lmg/L维生素 K(和光纯药工业株式会社制）的Todd Hewitt肉汤（贝克 顿-迪金森公司制）培养液〔THBHM〕进行培养。极小韦永氏球菌（Vei 1 lone 1 la parvula) ATCC17745在含有1.26%乳酸钠（西格玛公司制）的Todd-Hewitt肉汤（贝克顿-迪金森公司） 培养液〔THBL〕中培养。此外，培养是在37°C下过夜厌氧培养(80vo 1 %氮气、ΙΟνο 1 %二氧化 碳、lOvol%氢气）中。培养后，细菌溶液通过离心分离(8,000gX10分钟)收集细菌。离心分 离的各种细菌在粘蛋白基础培养基〔ΒΜΜΓ 1中再悬浮。
[0032] 将用经过0.45μηι过滤器过滤的人无刺激唾液处理的直径为7mm X厚度3.5mm的轻 基磷灰石(HA)板(旭光学株式会社制）用作制备模型的载体，设置在24孔板(住友电木株式 会社制）的底部。对其将在BMM中配制为1 X 107cfu/mL(cfu:菌落形成单位)的上述四种菌株 进行接种，在37 °C、厌氧条件下（80vo 1 %氮气，lOvol %二氧化碳，lOvol %氢气）下培养两 天，在HA表面上形成四种菌种混合的生物膜。 然后，除去培养液后，添加表中所示的试验组合物并处理3分钟，用PBS(和光纯药工业 株式会社制)洗涤之后，更换为钙化诱导培养基。每24小时进行相同的试样处理，在37 °C、 厌氧条件下(80vol %氮气，lOvol %二氧化碳，lOvol %氢气）下培养5天，使HA表面上形成四 种菌种混合的生物膜钙化。
[0033]得到的钙化生物膜通过超声波处理(200μΑ、10秒)从HA表面上分散并回收。钙化生 物膜中的钙量(pmol)使用日立偏振塞曼原子吸收分光光度计Ζ-5310(日立高新技术株式会 社制)进行测定。
[0034] 根据上述测定结果，通过下式求得相对于对照组(生理食盐水）的试验组合物的生 物膜钙化抑制率。另外，对照组（生理食盐水）中，表中所示的钙化生物膜中的钙量为 204pmol〇 生物膜钙化抑制率（％) ={(对照组的钙化生物膜中的钙量（pmol))-(试验组合物的钙化生物膜中的钙量 (pmol))}/(对照组的钙化生物膜中的钙量(pmol))
[0035] 基于下述基准，评价生物膜钙化抑制效果。 评价基准 ◎:生物膜钙化抑制率80 %以上 〇：生物膜钙化抑制率70 %以上且不足80 % Λ:生物膜钙化抑制率50 %以上且不足70 % X :生物膜钙化抑制率不足50 %
[0036] * 1ΒΜΜ的组成：用1升中的质量表示。 蛋白胨（贝克顿-迪金森公司制） 4g/L 胰蛋白胨（贝克顿-迪金森公司制） 2g/L 酵母抽提物（贝克顿-迪金森公司制） 2g/L 粘蛋白（西格玛公司制） 5g/L 氯化血红素（西格玛公司制） 2.5mg/L 维生素 K (和光纯药工业株式会社制> 0.5mg/L KC1 (和光纯药工业株式会社制) lg/L 半胱氨酸（和光纯药工业株式会社制) 〇.2g/L 蒸馈水 余量 (总量定容至1L，在121°C下高压灭菌20分钟）
[0037] *2钙化诱导培养基的组成：用1升中的质量表示。 氯化钙（和光纯药工业株式会社制） 0.22g/L 氯化钠（和光纯药工业株式会社制） 〇.14g/_L 氯化钾（和光纯药工业株式会社制） 〇.75g/L 磷酸二氢钠二水合物（和光纯药工业株式会社制）0.12g/L 磷酸氢钠十二水合物（和光纯药工业株式会社制）1.22g/L 碳酸氢钠 1.85g/L 硫酸镁七水合物（和光纯药工业株式会社制） 0.04g/L BMM .余量 (总量定容至1L，在121°C下高压灭菌20分钟）
[0038] [表1]
[0039] 根据表1的结果，可知咖啡酰葡萄糖或者樱花的提取物可以发挥生物膜钙化抑制 效果，可赋予优异的牙石形成抑制效果。此外，实施例的组合物在使用感上无问题地适于使 用，其中咖啡酰葡萄糖量在〇. 06%以下时使用感良好。
[0040] 所用原料的详细情况如下所述。 ?咖啡酰葡萄糖（* 3)使用的是根据专利文献3(国际公开第2011/099570号)记载的方 法，通过下述方法而得到的产物。 将樱[八重樱(关山）：Prunus lannesiana Wils · cv. Sekiyama]的花进行溶剂提取而得 到的樱花提取物经柱层析(HP-20柱层析），得到水洗脱组分，甲醇洗脱组分，丙酮洗脱组分。 用正相硅胶柱色谱法、反相0DS柱色谱法和高效液相色谱法，对得到的甲醇洗脱组分反复进 行分离纯化，分离出咖啡酰葡萄糖(1 -〇_(E)-咖啡酰-β-D-吡喃葡糖苷）。 ?樱花提取物（* 4)使用Oryza油化株式会社的樱花提取物-P(咖啡酰葡萄糖含量 2.0%)〇
[0041] 下面示出配方例。所用原料的详细情况如上所述。对这些配方例进行与上述同样 地评价时，具有生物膜钙化抑制效果，牙石形成抑制效果优异。
[0042][配方例1]洁齿剂
[0043][配方例2]洁齿剂
[0044][配方例3]洁齿剂 异丙基甲基苯酚 0 05% 月桂基硫酸纳 1,5 月桂酰肌氨酸钠 0,1 聚ft乙烯（20)山梨糖醇酐单硬脂酸酯 0.6 赤藓糖醇 20.0 咖啡酰葡萄糖0 03
[0045][配方例4]漱口剂
[0046][配方例5]漱口剂 乙醇 .20.0% 聚:氧乙烯（60)氢化蓖麻油 2 0
[0047][配方例6] 口腔用糊膏
【主权项】
1. 一种口腔生物膜钙化抑制剂，其特征在于，其包含咖啡酰葡萄糖。2. -种口腔生物膜钙化抑制剂，其特征在于，其包含樱提取物且该樱提取物含有咖啡 酰葡萄糖。3. 根据权利要求2所述的口腔生物膜钙化抑制剂，其中，樱提取物含有0.001质量％以 上的咖啡酰葡萄糖。4. 一种口腔用组合物，其特征在于，其含有咖啡酰葡萄糖。5. 根据权利要求4所述的口腔用组合物，其含有樱提取物且该樱提取物含有咖啡酰葡 萄糖。6. 根据权利要求5所述的口腔用组合物，其中，樱提取物含有0.001质量％以上的咖啡 酰葡萄糖。7. 根据权利要求4、5或者6所述的口腔用组合物，其中，咖啡酰葡萄糖的含量为组合物 整体的0.001~0.2质量％。8. 根据权利要求4~7中的任一项所述的口腔用组合物，其中，所述组合物为洁齿剂或 者漱口剂。9. 根据权利要求4~8中的任一项所述的口腔用组合物，其中，所述组合物用于抑制口 腔生物膜钙化。
【文档编号】A61Q11/00GK106061461SQ201580009678
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2015年2月18日
【发明人】堤康太, 森嶋清二
【申请人】狮王株式会社