专利名称：：含有egcg和番茄红素的口服组合物的制作方法含有EGCG和番茄红素的口服组合物本发明涉及一种含有特定比例的(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和番茄红素(lycopene)的口服组合物，其用于防止皮肤由于曰光造成的老化(光老化)。如果使皮肤长期暴露于UV辐射下，那么这会导致表皮以及真皮的损伤，诸如在受影响皮肤区域出现角化过度、角质形成细胞发育不良和真皮弹性组织变性，临床上表现为具有光化或日光化角化症的光老化皮肤。对皮肤光损伤以及光老化的分子机理的研究是目前令人关注的课题。UV辐射活化全部范围的细胞表面生长因子及细胞因子受体(RittieandFisher2002)。这种不依赖配体的受体活化诱导多重下游信号转导途径，所述途径集中刺激转录因子AP-1。被Ap-l上调的基因中有若干基质金属蛋白酶(MMP)家族成员。因此，MMP及其它物质负责阳光UV辐射-诱导的皮肤损伤，影响皮肤紧张性和回弹能力，导致过早老化。MMP降解皮肤细胞外基质中的胶原和弹性蛋白。提高的MMP表达和活性引起增强的胶原蛋白水解，其与降低的胶原表达一起导致皮肤弹性组织变性和皱纹生产(Bemeburg2003)。其症状包括皮革状肌理(leatherytexture)、皱纹、斑状色素沉着、松弛和暗黄(sallowness)。MMP是最重要和充分确定的光老化相关基因之一。因此为了确立膳食成分对光老化的防护能力，主要感兴趣的是研究其对UV-A诱导的MMP阻抑的影响。(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是抑制多种皮肤胶原酶的膳食化合物之一(Leeetal.,2005)。也发现一种维生素原A类胡萝卜素——^-胡萝卜素阻抑UVA-诱导的胶原酶(Wertzeta1.,2004)。另一方面，一种非维生素原A膳食类胡萝卜素——番茄红素被描述为进一步提高UVA-诱导的MMPl(Offordetal.,2002)。该提高只有与维生素E组合才能被阻止。因此，提供防止阳光诱导的皮肤老化(光老化)的活性成分是本发明的一个目的。惊人地发现，通过EGCG与番茄红素的协同组合，特别是通过含比例在100:1到1:1的范围内的EGCG和番茄红素组合的口服组合物，达成了本发明的目的。本领域技术人员不会预见到EGCG与番茄红素的组合在阻抑UVA-诱导的MMP1中会显示优良的协同活性，并进而提供抗衰老/抗皱效应。在实际的阳光/UV-光暴露之前数天到数周给予番茄红素和EGCG的协同组合时，也可防止光老化。在密集的阳光暴露(即日光浴)之前、期间和之后立即使用时，其也具有防护作用。本文使用的术语"EGCG"表示(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯禾B/或其一种或多种衍生物(例如酯化形式、糖苷、硫酸酯)。特别优选的是(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯自身。在本发明的优选的实施方案中，使用的EGCG具有至少80y。，优选地至少85%，更优选地至少90%，进一步更优选地至少92%，最优选地至少94%的纯度。还特别优选的是下述水性绿茶提取物，其以提取物的总量为基础以至少80%(优选至少85%，更优选至少90%，进一步更优选至少92%，最优选至少94%)的含量含有EGCG，例如优选地通过US6,383,392、EP1103550、US10/246112和EP1077211中所述任何方法获得的绿茶提取物。优选地，其它多酚和儿茶素如没食子儿茶素没食子酸酯、儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素、没食子儿茶素和表儿茶素的总量以绿茶提取物的总重为基础按重量计少于或等于5%。更优选地，没食子儿茶素没食子酸酯的含量少于或等于按重量计2.5%，和/或表儿茶素没食子酸酯的含量少于或等于按重量计5%(优选地少于或等于按重量计3%)。根据本发明，较好的是绿茶提取物中儿茶素的量少于或等于按重量计2.5%,优选地少于或等于按重量计O.l%，和/或没食子酸的量少于或等于按重量计0.1%，各含量以绿茶提取物的总重为基础。本文使用的术语"番茄红素"包括所有E-和Z-立体异构体。或者也可使用含有高番茄红素含量的番茄提取物。根据本发明，较好的是EGCG与番茄红素的比例在100:1到1:1的范围内，优选在50:1到3:1的范围内，最优选在25:1到5:1的范围内。根据本发明，以在下文给出的范围内的有效的每日量("每曰剂量")施用活性成分是有利的。每日剂量是(通过单一剂量)一次使用或是在多个剂量中使用是没有关系的。EGCG:体重约70kg的人的每日剂量50到600mg，体重约70kg的人优选的每日剂量150到300mg。番茄红素:体重约70kg的人的每日剂量不应超过40mg，优选地不超过25mg;体重约70kg的人的每日剂量有利地在0.1到40mg之间，更优选地在0.5到25mg之间。如果以用于口服施用的片剂、胶囊、颗粒或粉末形式制备组合物，则可使用赋形剂如乳糖、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、糊精和/或麦芽糖糊精、碳酸钙、磷酸钙和/或磷酸氢钙、高岭土、晶体和/或微晶纤维素和/或硅酸作为运载体；粘合剂如水、乙醇、丙醇、单糖浆、葡萄糖溶液、淀粉和/或经水解的淀粉溶液、明胶溶液、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基淀粉、紫胶、甲基纤维素、乙基纤维素、磷酸钙和/或聚乙烯吡咯垸酮；崩解剂如干淀粉、交联羧甲纤维素、交聚维酮、海藻酸钠、琼脂粉、海带多糖粉、碳酸氢钠、碳酸钙、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、月桂硫酸钠、硬脂酸甘油单酯、淀粉和/或乳糖；崩解预防剂，如硬脂酸、可可脂和/或氢化油；吸收促进剂，如季铵碱和/或月桂硫酸钠；致湿剂如甘油和/或淀粉；吸附剂如淀粉、乳糖、高岭土、膨润土和/或胶体硅；润滑剂如经纯化的滑石、硬脂酸盐、硼酸粉和/或聚乙二醇；口味校正剂如蔗糖、陈皮、柠檬酸和/或琥珀酸；等等。如果以片剂的形式制备组合物，则这些组合物可以被提供为被常用包衣包裹的片剂，例如糖包裹的片剂、明胶包裹的片剂、肠溶衣包裹的片剂、薄膜包裹的片剂、双重包裹的片剂、多层包裹的片剂等等。如下制备胶囊将根据本发明的化合物与上文举例或本领域现有技术中己知的多种5运载体混合，并将混合物装入硬明胶胶囊、软明胶胶囊等等中。可向根据本发明的组合物中添加多维生素和矿物质补剂，例如用于维持充分平衡的营养，或获得一些膳食中缺乏的足量必需营养物。多维生素和矿物质补剂也可以用于疾病预防和营养损失和缺乏的防护，所述营养损失和缺乏由糖尿病人中有时观察到的常见不当膳食模式和生活模式引起。根据本发明的组合物可以是食物或饮料组合物。饮料可以是例如运动饮品、能量饮品或其它软饮，或任何其它合适的饮料制剂。运动饮品是一种饮料，其旨在为运动员再补水以及恢复电解质、糖和其它营养物。运动饮品通常是等张的，这表示它们含有与人体中相同的营养物比例。能量饮品是含有(合法)兴奋剂、维生素(特别是维生素B)和/或矿物质的饮料，其目的是给予使用者能量的爆发。常见的成分包括咖啡因、瓜拉那(来自瓜拉那植物的咖啡因)和/或牛磺酸，多种形式的人参、麦芽糖糊精、肌醇、肉毒碱、肌酸、葡糖醛酸内酯、辅酶Q10和/或白果。一些可含有高水平的糖或葡萄糖，而其它则全部或部分地用糖醇和/或人工甜味剂(如环己烷氨基磺酸钙或阿司巴甜)增甜。许多这类饮料被调味和/或着色。软饮是不含醇的饮品。通常，该术语仅用于冷饮料。热巧克力、茶和咖啡不被认为是软饮。该术语最初仅表示碳酸饮品，并且通常仍然以该方式使用。如果以以下食品项目之一的形式制备组合物，则根据本发明，组合物中EGCG量和番茄红素量选自下表给出的范围时是有利的食品类别典型的每份大小每L饮料或每kg食品中的mgEGCG每L饮料或每kg食品中的mg番茄红素比例(EGCG:番茄红素)饮料(终产物)(例如软饮、果汁、茶、汤)250mL100到600，优选200到4004至l」2010:1到50:1乳制品(例如奶昔、酸乳、冰激凌)150g170到10004到2010:1到50:1甜品(例如巧克力、糖果、薄荷糖、果冻)每天1至U5块，每块5g，即每天5到25g500到10000，优选500到100050到20010:1到100:1其它食品(例如曲奇、什锦谷物棒)25g400到4000，优选400到140040至lj20010:1至lj50:1如果组合物以片剂或胶囊的形式存在，则根据本发明，组合物中EGCG和量和番茄红素量选自下表中给定的范围时是有利的类别典型的每粒片剂/胶囊的mgEGCG每粒片剂/胶囊的mg番茄红素比例(EGCG:番茄红素)片剂每天1-2x50到1501到105:1到100:1胶每天1-2x50到1501到105:1到100:17实施例实施例1对UV-A诱导的基质金属蛋白酶-1表达抑制的协同作用在37°C/5%C02中，于不含谷氨酰胺的EMEM(Earie's最低基础培养基)中培养原代人皮成纤维细胞至100%汇合，所述EMEM培养基补充有抗生素/抗真菌药、2mML-谷氨酰胺和7.5%胎牛血清。辐照前48小时将细胞与EMEM(含抗生素/抗真菌药，L-谷氨酰胺和2%胎牛血清)中期望的物质一起预孵育。24小时后，用(新鲜制备的)含所述物质的新鲜培养基替换培养基。为了辐照，培养基被去除，并在6个使用磷酸盐缓冲的盐水(PBS)洗涤的步骤后被替换为磷酸盐缓冲的盐水(PBS)。然后将平板暴露于30J/cm2UVA1。UVA1输出约为150mW/cm2。辐照后，将细胞微量培养板中经磷酸盐缓冲的盐水与(新鲜制备的)含所述物质的培养基(+7.5%胎牛血清)交换，并将细胞在C02-培养箱中再孵育24小时(MMP-1测定)。去除培养基，用经磷酸盐缓冲的盐水冲洗细胞，并将整个平板冷冻在液氮中。使用RNeasy总RNA试剂盒(Qiagen，Hilden;德国)分离总RNA。通过260/280下的光度计测量来测定RNA浓度。使用用于RT-PCR的Superscriptm第一链合成体系对总RNA的小份试样(75ng)进行cDNA-合成。针对每种化合物分析两个样品。使用SYBRGreenPCRMasterMix(AppliedBiosystems,Darmstadt,德国)在Opticon1(MJResearch,Waltham,MA，USA)上完成PCR反应。为了在实时PCR中比较对照细胞和经处理的细胞的相对表达，使用2^t』^^方法。结果概括于表l中。与未经辐照的细胞(未显示)中检测到的水平相比，UV-A处理诱导了约10倍的MMP-1RNA提高。EGCG和番茄红素分别将该表达降低了13%和65%。相反，合并所述物质时，UV-A诱导的MMP-1表达被完全废止。这表示EGCG和番茄红素对MMP-1调控的协同效应，因为在观察到的抑制和期望的抑制(每个单一化合物数值的总和)之间获得了正值(即22%)。表l:皮肤成纤维细胞中MMP-1的表达<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>实施例2用于长期抗衰老预防的片剂组成<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>制备:向合适的管中添加Redivivo(番茄红素)10%CWS/S-TG、TEAVIGOtmTG、成团块的乳糖、微晶纤维素、二氧化硅和交聚维酮，并通过转鼓混合仪混合20分钟。将硬脂酸镁筛过lmm的筛子，添加到组合物并将组合物再次混合2分钟。用KorschXPl压片机将粉末压成片剂，冲孔尺寸为17x7.87mm的长椭圆形。应当在春天(即提高的阳光暴露前至少两个月)开始每天服用一片，并持续整个季节。实施例3用于加强抗衰老保护的即食饮品<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>制备将所有成分筛过500/mi的筛子。将粉末置于适当的容器中，并在转鼓混合仪上至少混合20分钟。使用35g粉末通过添加水制成一升饮料。即食饮品的每份240ml制成饮品含有50mgEGCG和5mg番茄红素。推荐在密集日晒或日光浴期间和之后每天至多服用3份。实施例4用于连续基础抗衰老保护的薄荷糖(mint)组成<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>制备将TEAVIGOTG、redivivo10%CWS/S-TG、抗坏血酸精细颗粒、山梨醇、香料、甜味剂和PEG6000混合进鼓中，并用转鼓混合仪混合10分钟。将山梨醇和二氧化硅筛过1mm的筛子，并将其在分离的鼓中混合10分钟。合并两种粉末混合物，并再次混合10分钟。筛过1mm筛子后添加硬脂酸镁并混合2分钟。用KorschXPl压片机将粉末压成片剂，冲孔大小为8mm的圆形。推荐每天至多5粒薄荷糖(mint)。TEAVIGO、TEAVIGOTG禾Qredivivo10%CWS/S-TG:DSMNutritionalProducts的商品；Tablettose80:BrenntagN.V.的商品；AerosilTM200:Degussa的商品；PolyplasdoneTMXL10:ISP的商品。权利要求1.包含(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和番茄红素的组合的组合物，其特征是EGCG与番茄红素的比例在100∶1到1∶1的范围内。2.根据权利要求1的组合物，其特征是EGCG与番茄红素的比例在50:1到3:1的范围内。3.根据权利要求1的组合物，其特征是EGCG与番茄红素的比例在25:1到5:1的范围内。4.根据权利要求1到3中任一项的组合物，其特征是所述组合物适合口服消耗。5.根据权利要求4的组合物，其特征是所述组合物是饮料。6.根据权利要求4的组合物，其特征是所述组合物是乳制品。7.根据权利要求4的组合物，其特征是所述组合物是甜品。8.根据权利要求1到7中任一项的组合物用于抑制阳光诱导的胶原酶的用途。9.根据权利要求1到7中任一项的组合物用于降低阳光诱导的胶原和弹性蛋白降解的用途。10.根据权利要求1到7中任一项的组合物用于预防和/或降低阳光诱导的皱纹生成和皮肤老化的用途。全文摘要本发明提供了包含(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和番茄红素的组合的组合物，其特征是EGCG与番茄红素的比例在100∶1到1∶1的范围内。文档编号A61Q19/08GK101568322SQ200780047848公开日2009年10月28日申请日期2007年12月13日优先权日2006年12月20日发明者卡林·威兹,瑞吉纳·古拉尔奇克,约瑟夫·斯楚瓦格尔申请人:帝斯曼知识产权资产管理有限公司