本发明属于生物肥料技术领域，具体涉及一种猪粪发酵生物肥料的制备方法。
背景技术：
生物肥料是指一类含有大量活的微生物的特殊肥料。这类肥料施入土壤中，大量活的微生物在适宜条件下能够积极活动，有的可在作物根的周围大量繁殖，发挥自生固氮或联合固氮作用；有的还可分解磷、钾矿质元素供给作物吸收或分泌生长激素刺激作物生长。由此可见，生物肥料不是直接供给作物需要的营养物质，而是通过大量活的微生物在土壤中的积极活动来提供作物需要的营养物质或产生激素来刺激作物生长，这与其它有机肥和化肥的作用在本质上是不同的。正确、合理的制备方法是发挥生物肥料作用的重要保证，要根据不同作物和当地的土壤条件等具体情况来选用不同的生物肥料。生物肥料常用于拌种、作基肥和追肥等，在使用方式上，生物肥可作叶面喷施，沾根等。现有技术的猪粪发酵生物肥料在制备过程中益生菌存活率较低，在整个发酵过程中，益生菌的占有比例较小，无法成为优势菌群。
技术实现要素：
（1）技术方案
本发明为了克服现有技术的不足之处，提供一种猪粪发酵生物肥料的制备方法，所述猪粪发酵生物肥料包括以下原料：两年利用后的猪舍养猪垫料为发酵底料，蜡状芽孢杆菌菌株，lb液体培养液和去离子水；并且按照以下步骤制备：
1）、一级种子液体发酵：从lb固体平板上将蜡状芽孢杆菌菌株接种到lb液体培养液中，在30℃温度和160r/min转速下培养48h，用血球计数板计数菌液孢子数，当菌液孢子数达到108cfu/g时，把菌液稀释至100倍备用；
2）、二级固体堆肥：将步骤1）的稀释菌液以1：3~8的比例拌匀到的发酵底料中，并设置对照组，在对照组接入与稀释菌液等量的去离子水，同时调节初始含水量40~60%，堆肥堆成上窄下宽体型状，垛堆高度控制在60~100cm，然后垛堆发酵2~32天即得所述猪粪发酵生物肥料，垛堆室内温度控制在25~35℃之间，所述的猪粪发酵生物肥料也可以作为在果蔬种植的应用。
作为优选的技术方案，所述发酵底料利用谷壳、秸秆、锯鏮、椰糠、烟秆和玉米秆植物废弃物为原料，也可以是其中两种或者多种的混合。
作为优选的技术方案，在步骤2）中，将步骤1）的稀释菌液以1：5的比例拌匀到的发酵底料中，并设置对照组，在对照组接入与稀释菌液等量的去离子水，同时调节初始含水量50%，堆肥堆成上窄下宽体型状，垛堆高度控制在80cm，然后垛堆发酵10天即得所述猪粪发酵生物肥料，垛堆室内温度控制在26℃。
（2）有益效果
本发明的有益效果：相比于现有技术，本发明在整个发酵进程中，随着发酵的进行，各项理化指标都有下降的趋势，说明生物肥料中的营养成分被其中的微生物大量消耗，其中接种蜡状芽孢杆菌菌株的生物肥料中速效氮含量下降明显，说明蜡状芽孢杆菌菌株对速效氮源的利用量大，而且接种蜡状芽孢杆菌菌株有利于生物肥料形成大量菌群，能够成为优势菌群，有利于农作物的生长。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明实施例中的技术方案进行进一步清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例一
本实施例提供一种猪粪发酵生物肥料的制备方法，所述猪粪发酵生物肥料包括以下原料：两年利用后的猪舍养猪垫料为发酵底料，蜡状芽孢杆菌菌株，lb液体培养液和去离子水；并且按照以下步骤制备：
1）、一级种子液体发酵：从lb固体平板上将蜡状芽孢杆菌菌株接种到lb液体培养液中，在30℃温度和160r/min转速下培养48h，用血球计数板计数菌液孢子数，当菌液孢子数达到108cfu/g时，把菌液稀释至100倍备用；
2）、二级固体堆肥：将步骤1）的稀释菌液以1：5的比例拌匀到1000kg的发酵底料中，并设置对照组，在对照组接入与稀释菌液等量的去离子水，同时调节初始含水量50%，堆肥堆成上窄下宽体型状，垛堆高度控制在80cm，然后垛堆发酵32天，观察垫料的各项理化指标，垛堆室内温度控制在26℃。
1.1根据实施例一制备猪粪发酵生物肥料进行样品采集和参数测定
在堆肥发酵的第2、4、8、16、32天进行取样，每维按20cm的高度分四点取样。样品立即混合均匀，置于采样袋中，立即带回实验室过2mm筛处理。将过筛的垫米料分成两份：第一份用于理化性质测定，第二份用于可培养微生物类群分析，并在冰箱中保存，并在每次采样后一周内完成微生物类群的数量测定，土壤ph用电极法测定，土壤有有机碳用重铬酸钾法测定，土壤全氮采用凯氏定氮法测定，土壤全磷和有效磷采用铝抗比色法测定，土壤全钾和速效钾用火焰光度法测定，具体测试数据如下表：
表1猪粪发酵生物肥料的主要理化性质
生物肥料理化性质分析显示，接种蜡状芽孢杆菌菌株的生物肥料的ph值、全氮、全磷、全钾、速效磷、有机质和有机碳含量与未接种菌剂的生物肥料均没有明显差异(表1)，但是速效氮的含量差异明显，接种蜡状芽孢杆菌菌株的生物肥料的速效氮含量迅速降低。在生物肥料的营养组成中，氮、磷和钾的含量都较高，但其cn比偏低。在整个发酵进程中，随着发酵的进行，各项理化指标都有下降的趋势，说明生物肥料中的营养成分被其中的微生物大量消耗，其中接种蜡状芽孢杆菌菌株的生物肥料中速效氮含量下降明显，说明蜡状芽孢杆菌菌株对速效氮源的利用量大。
1.2猪粪发酵生物肥料的应用
把生物肥料与菜园土混合均匀，设置生物肥料100倍菜园土、生物肥料200倍菜园土、浇灌青枯菌液及空白对照组，在小区内按10株/m2的规格播入番茄种子，于施药前及药后15、30天分别在各处理定点取样，调查番茄的发病情况以及番茄的生长状况，从而得出猪粪发酵生物肥料的在果蔬种植的应用价值。
结果显示：生物肥料试验处理组在调查的天数内未发生青枯病，浇灌青枯菌液的番茄半数以上发病，而空白对照组轻微发病。同时生物肥料与能明显促进植株的生长，100倍处理30天后株高为空白对照组的1.3倍，叶片数为166倍。试验结果表明，生物肥料既能够防治番茄青枯病，也能起到促进番茄生长的药效作用。
实施例二
本实施例提供一种猪粪发酵生物肥料的制备方法，所述猪粪发酵生物肥料包括以下原料：两年利用后的猪舍养猪垫料为发酵底料，蜡状芽孢杆菌菌株，lb液体培养液和去离子水；并且按照以下步骤制备：
1）、一级种子液体发酵：从lb固体平板上将蜡状芽孢杆菌菌株接种到lb液体培养液中，在30℃温度和160r/min转速下培养48h，用血球计数板计数菌液孢子数，当菌液孢子数达到108cfu/g时，把菌液稀释至100倍备用；
2）、二级固体堆肥：将步骤1）的稀释菌液以1：6的比例拌匀到的发酵底料中，并设置对照组，在对照组接入与稀释菌液等量的去离子水，同时调节初始含水量40%，堆肥堆成上窄下宽体型状，垛堆高度控制在75cm，然后垛堆发酵32天即得所述猪粪发酵生物肥料，垛堆室内温度控制在26℃。
1.1根据实施例二制备猪粪发酵生物肥料进行样品采集和参数测定
在堆肥发酵的第2、4、8、16、32天进行取样，每维按20cm的高度分四点取样。样品立即混合均匀，置于采样袋中，立即带回实验室过2mm筛处理。将过筛的垫米料分成两份：第一份用于理化性质测定，第二份用于可培养微生物类群分析，并在冰箱中保存，并在每次采样后一周内完成微生物类群的数量测定，土壤ph用电极法测定，土壤有有机碳用重铬酸钾法测定，土壤全氮采用凯氏定氮法测定，土壤全磷和有效磷采用铝抗比色法测定，土壤全钾和速效钾用火焰光度法测定，具体测试数据如下表：
表2猪粪发酵生物肥料的主要理化性质
在整个发酵进程中，各项理化指标跟实施例一的数据相近，各项理化指标都有下降的趋势，说明生物肥料中的营养成分被其中的微生物大量消耗，其中接种蜡状芽孢杆菌菌株的生物肥料中速效氮含量下降明显，说明蜡状芽孢杆菌菌株对速效氮源的利用量大。
1.2猪粪发酵生物肥料的应用
把生物肥料与菜园土混合均匀，设置生物肥料50倍菜园土、生物肥料100倍菜园土、浇灌青枯菌液及空白对照组，在小区内按10株/m2的规格播入番茄种子，于施药前及药后15、30天分别在各处理定点取样，调查番茄的发病情况以及番茄的生长状况，从而得出猪粪发酵生物肥料的在果蔬种植的应用价值。
结果显示：生物肥料试验处理组在调查的天数内未发生青枯病，浇灌青枯菌液的番茄半数以上发病，而空白对照组轻微发病。同时生物肥料与能明显促进植株的生长，50倍处理30天后株高为空白对照组的1.29倍，叶片数为158倍。试验结果表明，生物肥料既能够防治番茄青枯病，也能起到促进番茄生长的药效作用。
以上所述实施例仅表达了本发明的优选实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形、改进及替代，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。