专利名称：与细胞凋亡蛋白抑制剂结合的smac蛋白的肽抑制剂的制作方法
一般而言，本发明涉及抑制Smac蛋白与细胞凋亡蛋白抑制剂(inhibitor of apoptosis protein，IAP)结合的新化合物。本发明包括新化合物、新组合物、它们的使用方法和它们的制备方法，其中所述化合物通常在药理学上可用作治疗剂，其作用机制依赖于对Smac/IAP相互作用的抑制，更具体而言，所述化合物可用于治疗包括癌症在内的增殖性疾病。
程序性细胞死亡在调节细胞数量和从正常组织中清除应激或受损细胞方面起关键作用。实际上，大部分细胞类型中所固有的凋亡信号转导机制网络提供了抗人类癌症发展和恶化的主要屏障。由于通常所用的放射治疗和化学治疗大多数依赖于激活杀死癌细胞的凋亡途径，所以能逃避程序性细胞死亡的肿瘤细胞通常对治疗有抵抗力。
凋亡信号转导网络分为由死亡受体-配体相互作用介导的内在网络或由细胞应激和线粒体通透性增加介导的外在网络。两条途径最终均集中于相应的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)。一旦被激活，半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶可切割许多与细胞死亡相关的底物，实现对细胞的破坏。
肿瘤细胞具有许多避免凋亡的策略。一种最近报道的分子机制涉及IAP家族成员的过量表达。IAP通过直接与半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶相互作用并抵消半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶而抑制细胞凋亡。原型IAP、即XIAP具有三个功能域，称为BIR 1、2和3结构域。BIR3直接与半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶9相互作用并抑制其结合和切割其天然底物、即半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3酶原的能力。
已有报道称促凋亡线粒体蛋白Smac(又称为DIABLO)能通过与BIR3表面上的肽结合袋(Smac结合部位)结合而抵消XIAP，从而阻止XIAP与半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶9之间的相互作用。本发明涉及可与Smac结合袋结合从而促进快速分裂的细胞发生凋亡的治疗性分子。所述的治疗性分子可用于治疗包括癌症在内的增殖性疾病。
本发明涉及式(I)化合物 其中R1为H；R2为H、未取代的或被一个或多个选自卤素、-OH、-SH、-OCH3、-SCH3、-CN、-SCN和硝基的取代基取代的C1-C4烷基；R3为H、-CF3、-C2F5、-CH2-Z或者R2和R3与氮一起形成C3-C6脂肪族杂环；Z为H、-OH、F、Cl、-CH3；-CF3、-CH2Cl、-CH2F或-CH2OH；R4为C1-C16直链烷基、C3-C10支链烷基、-(CH2)0-6-C3-C7-环烷基、-(CH2)1-6-Z1、-(CH2)0-6-苯基和-(CH2)0-6-het，其中的烷基、环烷基和苯基取代基为未取代的或取代的；Z1为-N(R9)-C(O)-C1-C10烷基、-N(R9)-C(O)-(CH2)1-6-C3-C7-环烷基、-N(R9)-C(O)-(CH2)0-6-苯基、-N(R9)-C(O)-(CH2)1-6-het、-C(O)-N(R10)(R11)、-C(O)-O-C1-C10烷基、-C(O)-O-(CH2)1-6-C3-C7-环烷基、-C(O)-O-(CH2)0-6-苯基、-C(O)-O-(CH2)1-6-het、-O-C(O)-C1-C10烷基、-O-C(O)-(CH2)1-6-C3-C7-环烷基、-O-C(O)-(CH2)0-6-苯基、-O-C(O)-(CH2)1-6-het，其中的烷基、环烷基和苯基取代基为未取代的或取代的；het为含1、2或3个选自N、O和S的杂原子的5-7元杂环，或包括至少一个含1、2或3个选自N、O和S的杂原子的5-7元杂环的8-12元稠环体系，该杂环或稠环体系是未取代的或在碳原子上被卤素、羟基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、硝基、-O-C(O)-C1-C4烷基或-C(O)-O-C1-C4-烷基取代或在氮上被C1-C4烷基、-O-C(O)-C1-C4烷基或-C(O)-O-C1-C4-烷基取代；R9是H、-CH3、-CF3、-CH2OH或CH2Cl；R10和R11各自独立地为H、C1-C4烷基、C3-C7-环烷基、-(CH2)1-6-C3-C7-环烷基、-(CH2)0-6-苯基，其中的烷基、环烷基和苯基取代基是未取代的或取代的，或者R10和R11与氮一起为het；X为CH或N；R5为H、C1-C10-烷基、C3-C7-环烷基、-(CH2)1-6-C3-C7-环烷基、-C1-C10-烷基-芳基、-(CH2)0-6-C3-C7-环烷基-(CH2)0-6-苯基、-(CH2)0-4CH-((CH2)1-4-苯基)2、-(CH2)0-6-CH(苯基)2、-C(O)-C1-C10烷基、-C(O)-(CH2)1-6-C3-C7-环烷基、-C(O)-(CH2)0-6-苯基、-(CH2)1-6-het、-C(O)-(CH2)1-6-het，或者R5为氨基酸残基，其中的烷基、环烷基、苯基和芳基取代基为未取代的或取代的；R6为H、甲基、乙基、-CF3、-CH2OH或-CH2Cl；或者R5和R6与氮一起为het；R7和R8相对于环1位上的酰基取代基是顺式的并且各自独立地为H、-C1-C10烷基、-OH、-O-C1-C10-烷基、-(CH2)0-6-C3-C7-环烷基、-O-(CH2)0-6-芳基、苯基、-(CH2)1-6-het、-O-(CH2)1-6-het、-N(R12)(R13)、-S-R12、-S(O)-R12、-S(O)2-R12、-S(O)2-NR12R13，其中的烷基、环烷基和芳基取代基为未取代的或取代的；R12和R13独立地为H、C1-C10烷基、-(CH2)0-6-C3-C7-环烷基、-(CH2)0-6-(CH)0-1(芳基)1-2、-C(O)-C1-C10烷基、-C(O)-(CH2)1-6-C3-C7-环烷基、-C(O)-O-(CH2)0-6-芳基、-C(O)-(CH2)0-6-O-芴基、-C(O)-NH-(CH2)0-6-芳基、-C(O)-(CH2)0-6-芳基、-C(O)-(CH2)1-6-het，其中的烷基、环烷基和芳基取代基为未取代的或取代的；或有利于分子跨细胞膜转运的取代基，或者R12和R13与氮一起为het；芳基为未取代的或取代的苯基或萘基；n为0、1或2；
并且其中取代的烷基取代基是被一个或多个选自双键、卤素、OH、-O-C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基和-CF3的取代基取代；取代的环烷基取代基是被一个或多个选自双键、C1-C6烷基、卤素、OH、-O-C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基和-CF3的取代基取代；且取代的苯基或芳基是被一个或多个选自卤素、羟基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、硝基、-CN、-O-C(O)-C1-C4烷基和-C(O)-O-C1-C4-烷基的取代基取代。
未取代的旨在意指氢是唯一的取代基。
卤素为氟、氯、溴或碘，尤其是氟和氯。
除非另外指出，否则烷基取代基包括直链或支链烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和支链戊基、正己基和支链己基等。
环烷基取代基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
在本发明的一个特别重要的实施方案中，R3和R4具有式II所示的立体化学，此处所述的可变取代基和优选定义也适用于具有式II所示的立体化学的化合物。
R2尤其为H、甲基或乙基，特别是H或甲基，该甲基为未取代的或取代的，特别是未取代的甲基。R2作为取代的甲基尤其包括氯甲基、二氯甲基和尤其是三氟甲基。
R3尤其为甲基。
在一个具体实施方案中，R2和R3与氮一起形成脂肪族杂环，包括饱和和不饱和的3至6元非芳族环，例如氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯、哌啶、哌嗪等，尤其是氮丙啶和氮杂环丁烷。
R4尤其为C1-C4烷基或C3-C7环烷基，特别是异丙基或环己基。
当环烷基和苯环之间没有亚甲基时，R5作为-(CH2)0-6-C3-C7-环烷基-(CH2)0-6-苯基包括稠合的环烷基-苯环，如茚满基。
R5作为-(CH2)0-4CH-((CH2)1-4-苯基)2尤其为-CH(CH2-苯基)2。
R6尤其为H。
一个特别重要的实施方案包括其中R5为-C1-C4-烷基-苯基的化合物，尤其是其中R5为-C2H4-苯基且R6为H的那些化合物。
在一个具体实施方案中，n优选为1。
在本发明的一个具体实施方案中，R7和R8之一或两者均为H。如果R7和R8之一不是H，则其尤其为羟基、-N(R12)(R13)，尤其是其中的R12为-C(O)-(CH2)1-6-C3-C7-环烷基，例如其中的(CH2)1-6-C3-C7-环烷基为环己基甲基、-O-(CH2)0-6-芳基，例如其中的(CH2)0-6-芳基为苄基。如果R7和R8中仅有一个不是H，则优选R8是非氢取代基。
在一个优选的实施方案中，R6是H且R5是-C1-C10-烷基-芳基，特别是苯甲基、苯乙基和苯丙基，尤其是苯乙基。
het取代基包括芳族和非芳族杂环以及含有芳族和非芳族杂环的稠环。适宜的het取代基包括未取代的和取代的吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、吗啉代、1，3-二氮杂环庚烷、1，4-二氮杂环庚烷、1，4-氧氮杂环庚烷、1，4-氧硫杂环庚烷、呋喃基、噻吩基、吡咯、吡唑、三唑、噻唑、噁唑、吡啶、嘧啶、异噁唑基、吡嗪、喹啉、异喹啉、吡啶并吡嗪、吡咯并吡啶、呋喃并吡啶、吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并吲哚、苯并噁唑、吡咯并喹啉等。het取代基是未取代的或在碳原子上被卤素，尤其是氟或氯、羟基、C1-C4烷基，如甲基和乙基、C1-C4烷氧基，尤其是甲氧基和乙氧基、硝基、-O-C(O)-C1-C4烷基或-C(O)-O-C1-C4-烷基取代或在氮上被C1-C4烷基，尤其是甲基或乙基、-O-C(O)-C1-C4烷基或-C(O)-O-C1-C4-烷基，如甲酯基或乙酯基取代。
当两个取代基与共同连接的氮一起为het时，应当理解形成的杂环是含氮环，如氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯、哌啶、哌嗪、吗啉、吡咯、吡唑、噻唑、噁唑、吡啶、嘧啶、异噁唑等。
氨基酸残基包括标准氨基酸的残基，所述的氨基酸如丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。氨基酸残基还包括非常见和修饰氨基酸的侧链。非常见和修饰氨基酸是本领域技术人员公知的(参见例如G.B.Fields，Z.Tiam和G Barany；Synthetic Peptides A Users Guide，Universityof Wisconsin Biochemistry Center，第3章，(1992))，包括氨基酸如4-羟基脯氨酸、5-羟基赖氨酸、锁链素、β-丙氨酸、α-、γ-和β-氨基丁酸、高半胱氨酸、高丝氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸、2-或3-氨基己二酸、6-氨基己酸、2-或3-氨基异丁酸、2，3-二氨基丙酸、二苯基丙氨酸、羟基脯氨酸等。如果氨基酸残基的侧链含有可衍生基团，如COOH、-OH或氨基，则该侧链可以被能与可衍生基团反应的取代基衍生化。例如，酸性氨基酸如天冬氨酸和谷氨酸或羟基取代的侧链如丝氨酸或苏氨酸侧链可以被衍生化以形成酯，或者氨基酸侧链可以形成酰胺或烷基氨基衍生物。特别是，该衍生物可以是有利于跨细胞膜转运的取代基。另外，氨基酸残基中的任何羧酸基团、例如α羧酸基团可以如上所述被衍生化以形成酯或酰胺。
有利于分子跨细胞膜转运的取代基是医药化学领域技术人员公知的(参见例如Gangewar S.，Pauletti G.M.，Wang B.，Siahaan T.J.，Stella V.J.，Borchardt R.T.，Drug Discovery Today，第2卷.148-155页(1997)以及Bundgaard H.和Moss J.，Pharmaceutical Research，第7卷，885页(1990))。通常，所述取代基是亲脂性取代基。所述的亲脂性取代基包括饱和的、单不饱和的、多不饱和的C6-C30烷基，包括亚甲基中断的多烯、苯基、被一个或两个C1-C8烷基取代的苯基、C5-C9环烷基、被一个或两个C1-C8烷基取代的C5-C9环烷基、-X1-苯基、在苯环上被一个或两个C1-C8烷基取代的-X1-苯基、X1-C5-C9环烷基或被一个或两个C1-C8烷基取代的X1-C5-C9环烷基；其中X1是饱和的、单不饱和的或多不饱和的和直链或支链C1-C24烷基。
本发明的化合物何时可以以盐形式、尤其是以酸加成盐或碱加成盐形式存在对于本领域技术人员而言是显而易见的。当化合物可以以盐形式存在时，所述的盐形式也包括在本发明的范围内。尽管任何盐形式均可用于化学操作，如纯化步骤，但只有可药用的盐才可用于药学产品。
可药用的盐酌情包括可药用的碱加成盐和酸加成盐，例如金属盐如碱金属和碱土金属盐、铵盐、有机胺加成盐以及氨基酸加成盐和磺酸盐。酸加成盐包括无机酸加成盐如盐酸盐、硫酸盐和磷酸盐，和有机酸加成盐如烷基磺酸盐、芳基磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐和乳酸盐。金属盐的实例有碱金属盐如锂盐、钠盐和钾盐、碱土金属盐如镁盐和钙盐、铝盐和锌盐。铵盐的实例有铵盐和四甲基铵盐。有机胺加成盐的实例有与吗啉和哌啶形成的盐。氨基酸加成盐的实例有与甘氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸和赖氨酸形成的盐。磺酸盐包括甲磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐。
可以如以下方案1中所述制备式(I)化合物
方案1 步骤A该步骤包括使用标准肽偶联剂如DIC/HOBt或HBTU/HOBt将胺与t-Boc-L-脯氨酸或其衍生物偶联。
步骤B该步骤包括用三氟乙酸(TFA)除去t-Boc基团，然后使用标准肽偶联剂与Boc保护的天然或非天然氨基酸偶联。
步骤C该步骤包括用三氟乙酸(TFA)除去t-Boc基团，然后使用标准肽偶联剂与Boc保护的天然或非天然氨基酸偶联。
步骤D该步骤包括用三氟乙酸(TFA)除去t-Boc基团，然后通过高压液相色谱(HPLC)纯化产物。
本发明还包括包含药学有效量的一种或多种上述化合物作为活性成分的药物组合物。本发明的药物组合物适于经肠如口服或直肠和经胃肠外施用于包括人在内的哺乳动物，其单独或与一种或多种可药用载体组合用于治疗增殖性疾病，包括肿瘤，尤其是癌性肿瘤和其它癌症。
本发明的化合物可用于制备包含与适于经肠或经胃肠外应用的赋形剂或载体联合或混合的有效量的化合物的药物组合物。实例包括包含活性成分和(a)稀释剂；(b)润滑剂；(c)粘合剂(片剂)；如果需要，还有(d)崩解剂；和/或(e)吸收剂、着色剂、矫味剂和甜味剂的片剂和明胶胶囊剂。注射用组合物优选为水性等张溶液剂或混悬剂，栓剂可有利地由脂肪乳剂或混悬剂制备。组合物可以被灭菌和/或含有辅剂，如防腐剂、稳定剂、湿润剂或乳化剂、溶液促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。另外，组合物还可以含有其它治疗上有价值的物质。该组合物可分别按照常规的混合、制粒或包衣方法制备，并且优选含有约1至50％的活性成分。
更一般而言，本发明还涉及本发明的化合物在制备药物、特别是在制备治疗增殖性疾病的药物中的用途。
还涉及上下文所述的药物组合物在治疗增殖性疾病中的用途。
适宜的制剂还包括用于胃肠外施用的制剂，如水性和非水性无菌注射溶液剂，其可含有抗氧剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者血液等张的溶质；以及水性和非水性无菌混悬剂，其可包含悬浮剂和增稠剂。制剂可以存在于单位剂量或多剂量容器、例如密封的安瓿和小瓶中，并且可以以仅需在使用前即刻加入无菌液体载体、例如注射用水的冷冻干燥(冻干)状态进行贮存。即配型注射溶液剂和混悬剂可以由上述性质的无菌粉末、颗粒剂和片剂制备。
药物组合物含有药学有效量的本发明的活性剂以及其它可药用的赋形剂、载体、填充剂、稀释剂等。此处所用的术语治疗有效量表示施用于宿主以达到治疗结果、尤其是抗肿瘤效果、例如抑制恶性癌细胞、良性肿瘤细胞或其它增殖性细胞增殖所需的量。
如上文所述，本发明的化合物可用于治疗增殖性疾病。因此，本发明还涉及治疗增殖性疾病的方法，该方法包括向需要所述治疗的哺乳动物、优选人施用治疗有效量的本发明的化合物。
增殖性疾病主要是肿瘤疾病(或癌症)(和/或任何转移)。本发明的化合物特别可用于治疗肿瘤，其是乳腺癌、泌尿生殖系癌、肺癌、胃肠癌、表皮样癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、神经母细胞瘤、头和/或颈癌或膀胱癌，或更广意义上的肾、脑或胃癌；特别是(i)乳腺肿瘤；表皮样肿瘤，如表皮样头和/或颈肿瘤或口腔肿瘤；肺肿瘤，例如小细胞或非小细胞肺肿瘤；胃肠肿瘤，例如结肠直肠肿瘤；或泌尿生殖系肿瘤，例如前列腺肿瘤(尤其是激素难以控制的前列腺肿瘤)；或者(ii)用其它化疗剂治疗难以控制的增殖性疾病；或者(iii)由于多药物抗性导致的用其它化疗剂治疗难以控制的肿瘤。
在本发明的更广意义上，增殖性疾病还可以是过度增殖性病症如白血病、增生、纤维化(尤其是肺纤维化，还有其它类型的纤维化如肾纤维化)、血管生成、银屑病、动脉粥样硬化和血管平滑肌增殖，如狭窄或血管成形术后再狭窄。
无论肿瘤和/或转移的位置如何，当提及肿瘤、肿瘤疾病、癌或癌症时，还备选地或额外地暗含原发器官或组织和/或任何其它位置的转移。
本发明的化合物具有选择性毒性或对快速增殖的细胞比对正常细胞毒性更强，特别是在人癌细胞、例如癌性肿瘤中，该化合物具有显著的抗增殖效果并促进分化，例如细胞周期抑制和凋亡。
本发明的化合物可以单独或与其它抗癌剂组合施用，所述的其它抗癌剂如抑制肿瘤血管生成的化合物，例如蛋白酶抑制剂、表皮生长因子受体激酶抑制剂、血管内皮生长因子受体激酶抑制剂等；细胞毒性药物，如抗代谢剂，如嘌呤和嘧啶类似物抗代谢剂；抗有丝分裂剂如微管稳定药和抗有丝分裂生物碱；铂配位络合物；抗肿瘤抗生素；烷化剂，如氮芥类和亚硝基脲类；内分泌物，如肾上腺皮质类固醇、雄激素、抗雄激素、雌激素、抗雌激素、芳香酶抑制剂、促性腺激素释放激素激动剂和促生长素抑制剂类似物和以酶或受体为靶向的化合物，所述的酶或受体被过量表达和/或以其它方式参与肿瘤细胞中被上调的特定代谢途径，例如ATP和GTP磷酸二酯酶抑制剂、组蛋白脱乙酰基酶抑制剂、蛋白激酶抑制剂，如丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸激酶抑制剂，例如Abelson蛋白酪氨酸激酶和各种生长因子、它们的受体和激酶抑制剂，因此，如表皮生长因子受体激酶抑制剂、血管内皮生长因子受体激酶抑制剂、成纤维细胞生长因子抑制剂、胰岛素样生长因子受体抑制剂和血小板衍生的生长因子受体激酶抑制剂等；甲硫氨酸氨肽酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂和环加氧酶抑制剂，例如环加氧酶-1或-2抑制剂。
本发明还涉及促进快速增殖的细胞凋亡的方法，该方法包括使快速增殖的细胞与促凋亡有效量的、可与XIAP蛋白的Smac结合部位结合的非天然存在的三肽化合物接触。优选地，非天然存在的三肽化合物为本发明的式I或II化合物。
以下实施例旨在举例说明本发明，但不进一步限制本发明。
实施例1L-(N-甲基)Ala-L-Val-(2S，4S)-4-(2-环己基乙酰基氨基)-2-苯乙基氨基甲酰基吡咯烷根据方案2中所给出的步骤制备标题化合物(式1)。
方案2 I.1-tBoc-(2S，4S)-4-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-2-苯乙基-氨基甲酰基吡咯烷，31的制备在250mL圆底烧瓶中装入化合物23(3.0g，6.43mmol)(参见实施例1)、苯乙胺(0.86g，7mmol)和DIEA(30mL)。向该混合物中加入0.45mMHBTU/HOBt在DMF中的溶液(15.5mL，7mmol)并将溶液在室温下搅拌过夜。将反应混合物用EtOAc稀释，用水(2×)、10％柠檬酸(2×)、水、盐水充分洗涤，并用无水MgSO4干燥。将EtOAc溶液真空浓缩并通过快速色谱法纯化产物，得到2.1g标题化合物。保留时间8.48分钟(RP-HPLC，C18，10-90％乙腈/0.1％TFA梯度，10分钟)；MSESI 555.97(M+H)+。
II.tBoc-L-Val-(2S，4S)-4-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-2-苯乙基氨基甲酰基吡咯烷，32的制备在室温下，将95％的三氟乙酸(TFA)在二氯甲烷(15mL)中的溶液加至在50mL圆底烧瓶中的实施例2中制备的化合物(2.1g，3.78mM)中并将溶液搅拌1小时。将溶液真空浓缩，得到深黄色油。RT6.38分钟(RP-HPLC，C18，10-90％乙腈/0.1％TFA梯度，10分钟)；MSESI 465.3(M+H)+。将粗产物首先与DIEA(10mL)然后与tBoc-L-Val(0.8g，3.7mmol)混合并加入DMF(20mL)。在室温下向反应混合物中加入0.45mM HBTU/HOBt在DMF(10mL)中的溶液并将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物在旋转蒸发器上浓缩然后用EtOAc(150mL)稀释，用水(2×150mL)、10％柠檬酸(2×150mL)、水、盐水充分洗涤并用无水MgSO4干燥。将EtOAc溶液真空浓缩，得到2.41g标题化合物。保留时间8.78分钟(RP-HPLC，C18，10-90％乙腈/0.1％TFA梯度，10分钟)；MSESI 784.2(M+DIEA+H)+。
III.tBoc-L-(N-甲基)Ala-L-Val-(2S，4S)-4-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-2-苯乙基氨基甲酰基吡咯烷，33的制备在室温下，将95％的三氟乙酸(TFA)在二氯甲烷(15mL)中的溶液加至在50mL圆底烧瓶中的实施例3中制备的化合物(2.40g)中并将溶液搅拌1小时。将溶液真空浓缩，得到深黄色油。RT6.62分钟(RP-HPLC，C18，10-90％乙腈/0.1％TFA梯度，10分钟)；MSESI 555.3(M+H)+。将粗产物首先与DIEA(10mL)混合然后向其中加入tBoc-L-(N-Me)Ala(0.8g，3.7mmol)和DMF(20mL)。在室温下向反应混合物中加入0.45mM HBTU/HOBt在DMF(10mL)中的溶液并将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物在旋转蒸发器上浓缩然后用EtOAc(150mL)稀释，用水(2×150mL)、10％柠檬酸(2×150mL)、水、盐水充分洗涤并用无水MgSO4干燥。将EtOAc溶液真空浓缩，得到2.93g标题化合物。RT8.80分钟(RP-HPLC，C18，10-90％乙腈/0.1％TFA梯度，10分钟)；MSESI 740.4(M+H)+。
IV.L-(N-甲基)Ala-L-Val-(2S，4S)-4-(2-环己基乙酰基氨基)-2-苯乙基氨基甲酰基吡咯烷，1的合成在50mL圆底烧瓶中，将粗品化合物33(～2.8g)用20mL 25％哌啶/DMF溶液处理30分钟。将混合物在旋转蒸发器上浓缩并向其中加入乙醚。滤出所得固体并浓缩醚层，得到2.10g黄色油，将其通过RP-HPLC(C18，10-90％乙腈/0.1％TFA梯度，30分钟)纯化。合并澄清级分，得到去Fmoc产物(0.97g)。RT5.40分钟(RP-HPLC，C18，10-90％乙腈/0.1％TFA梯度，10分钟)；MSESI 518.3(M+H)+。将去Fmoc化合物(0.445g，0.85mmol)、环己基乙酸(0.125g，0.86mmol)和DIEA(1.0mL)溶解在2mL DMF中。在室温下向反应混合物中加入0.45mM HBTU/HOBt在DMF(3.0mL)中的溶液并将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物在旋转蒸发器上浓缩，然后用EtOAc(50mL)稀释，用水(2×50mL)、10％柠檬酸(2×50mL)、水、盐水充分洗涤并用无水MgSO4干燥。将EtOAc溶液真空浓缩，得到0.53g松散的白色固体。保留时间8.10分钟(RP-HPLC，C18，10-90％乙腈/0.1％TFA梯度，10分钟)；MSESI未观察到(M+H)+。在室温下将白色固体置于在50mL圆底烧瓶中的TFA(100％，10mL)中并将溶液搅拌1小时。将溶液真空浓缩，得到深黄色油(0.42g)。将该粗产物通过RP-HPLC(C18，10-90％乙腈/0.1％TFA梯度，30分钟)纯化。合并澄清级分，得到化合物1，即标题化合物。保留时间5.66分钟(RP-HPLC，C18，10-90％乙腈/0.1％TFA梯度，10分钟)；MSESI 542.4(M+H)+。
实施例1-29通过类似于此处所述的方法使用类似起始原料制备以下化合物
为了测定本发明的化合物与BIR3肽结合袋结合的能力，利用FMAT技术平台上的溶液相分析。将生物素化Smac 7-mer肽(AVPIAQK，赖氨酸∈-氨基被生物素化)固定在链霉抗生物素包被的珠上。用FMAT珠沉淀GST-BIR3融合蛋白并用荧光标记的抗-GST抗体检测。重要的是，非生物素化Smac肽在与GST-BIR3竞争使其脱离FMAT珠方面非常有效(图2)。非生物素化Smac的IC50是400nM。在所述的FMAT分析中表1中所列出的化合物的IC50值为0.045-10μM。
权利要求
1.式(I)化合物 其中R1为H；R2为H、未取代的或被一个或多个选自卤素、-OH、-SH、-OCH3、-SCH3、-CN、-SCN和硝基的取代基取代的C1-C4烷基；R3为H、-CF3、-C2F5、-CH2-Z或者R2和R3与氮一起形成C3-C6脂肪族杂环；Z为H、-OH、F、Cl、-CH3；-CF3、-CH2Cl、-CH2F或-CH2OH；R4为C1-C16直链烷基、C3-C10支链烷基、-(CH2)0-6-C3-C7-环烷基、-(CH2)1-6-Z1、-(CH2)0-6-苯基和-(CH2)0-6-het，其中的烷基、环烷基和苯基取代基为未取代的或取代的；Z1为-N(R9)-C(O)-C1-C10烷基、-N(R9)-C(O)-(CH2)1-6-C3-C7-环烷基、-N(R9)-C(O)-(CH2)0-6-苯基、-N(R9)-C(O)-(CH2)1-6-het、-C(O)-N(R10)(R11)、-C(O)-O-C1-C10烷基、-C(O)-O-(CH2)1-6-C3-C7-环烷基、-C(O)-O-(CH2)0-6-苯基、-C(O)-O-(CH2)1-6-het、-O-C(O)-C1-C10烷基、-O-C(O)-(CH2)1-6-C3-C7-环烷基、-O-C(O)-(CH2)0-6-苯基、-O-C(O)-(CH2)1-6-het，其中的烷基、环烷基和苯基取代基为未取代的或取代的；het为含1、2或3个选自N、O和S的杂原子的5-7元杂环，或包括至少一个含1、2或3个选自N、O和S的杂原子的5-7元杂环的8-12元稠环体系，该杂环或稠环体系是未取代的或在碳原子上被卤素、羟基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、硝基、-O-C(O)-C1-C4烷基或-C(O)-O-C1-C4-烷基取代或在氮上被C1-C4烷基、-O-C(O)-C1-C4烷基或-C(O)-O-C1-C4-烷基取代；R9是H、-CH3、-CF3、-CH2OH或CH2Cl；R10和R11各自独立地为H、C1-C4烷基、C3-C7-环烷基、-(CH2)1-6-C3-C7-环烷基、-(CH2)0-6-苯基，其中的烷基、环烷基和苯基取代基是未取代的或取代的，或者R10和R11与氮一起为het；X为CH或N；R5为H、C1-C10-烷基、C3-C7-环烷基、-(CH2)1-6-C3-C7-环烷基、-C1-C10-烷基-芳基、-(CH2)0-6-C3-C7-环烷基-(CH2)0-6-苯基、-(CH2)0-4CH-((CH2)1-4-苯基)2、-(CH2)0-6-CH(苯基)2、-C(O)-C1-C10烷基、-C(O)-(CH2)1-6-C3-C7-环烷基、-C(O)-(CH2)0-6-苯基、-(CH2)1-6-het、-C(O)-(CH2)1-6-het，或者R5为氨基酸残基，其中的烷基、环烷基、苯基和芳基取代基为未取代的或取代的；R6为H、甲基、乙基、-CF3、-CH2OH或-CH2Cl；或者R5和R6与氮一起为het；R7和R8相对于环1位上的酰基取代基是顺式的并且各自独立地为H、-C1-C10烷基、-OH、-O-C1-C10-烷基、-(CH2)0-6-C3-C7-环烷基、-O-(CH2)0-6-芳基、苯基、-(CH2)1-6-het、-O-(CH2)1-6-het、-N(R12)(R13)、-S-R12、-S(O)-R12、-S(O)2-R12、-S(O)2-NR12R13，其中的烷基、环烷基和芳基取代基为未取代的或取代的；R12和R13独立地为H、C1-C10烷基、-(CH2)0-6-C3-C7-环烷基、-(CH2)0-6-(CH)0-1(芳基)1-2、-C(O)-C1-C10烷基、-C(O)-(CH2)1-6-C3-C7-环烷基、-C(O)-O-(CH2)0-6-旁基、-C(O)-(CH2)0-6-O-芴基、-C(O)-NH-(CH2)0-6-芳基、-C(O)-(CH2)0-6-芳基、-C(O)-(CH2)1-6-het，其中的烷基、环烷基和芳基取代基为未取代的或取代的；或有利于分子跨细胞膜转运的取代基，或者R12和R13与氮一起为het；芳基为未取代的或取代的苯基或萘基；n为0、1或2；并且其中取代的烷基取代基是被一个或多个选自双键、卤素、OH、-O-C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基和-CF3的取代基取代；取代的环烷基取代基是被一个或多个选自双键、C1-C6烷基、卤素、OH、-O-C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基和-CF3的取代基取代；且取代的苯基或芳基是被一个或多个选自卤素、羟基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、硝基、-CN、-O-C(O)-C1-C4烷基和-C(O)-O-C1-Cx-烷基的取代基取代，或其可药用的盐。
2.权利要求1的化合物，其中R2为H或甲基且R3为甲基。
3.权利要求1的化合物，其中n为1。
4.具有式II所示的立体化学的权利要求1的化合物
5.权利要求4的化合物，其中R2为H或甲基且R3为甲基。
6.权利要求4的化合物，其中n为1。
7.包含可药用载体和治疗有效量的权利要求1的式I化合物的药物组合物。
8.包含可药用载体和治疗有效量的权利要求4的式II化合物的药物组合物。
9.用于治疗增殖性疾病的权利要求7的药物组合物。
10.用于治疗增殖性疾病的权利要求8的药物组合物。
11.治疗增殖性疾病的方法，该方法包括向需要所述治疗的哺乳动物施用治疗有效量的权利要求1的式I化合物。
10.治疗增殖性疾病的方法，该方法包括向需要所述治疗的哺乳动物施用治疗有效量的权利要求4的式II化合物。
11.权利要求11的方法，其中的哺乳动物为人。
12.权利要求12的方法，其中的哺乳动物为人。
13.权利要求1的式I化合物在制备治疗增殖性疾病的药物中的用途。
14.权利要求4的式II化合物在制备治疗增殖性疾病的药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及式(I)的XIAP抑制剂化合物其中的取代基如说明书中所述。本发明的化合物可用作治疗包括癌症在内的增殖性病症的治疗剂。
文档编号C07D207/09GK1665784SQ03815657
公开日2005年9月7日 申请日期2003年7月1日 优先权日2002年7月2日
发明者S·K·夏尔马, L·扎维, M·G·巴勒莫, N·钱德拉穆利, K·W·贝尔 申请人:诺瓦提斯公司