专利名称：从植物酸橙幼果中提取新橙皮苷的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种二氢黄酮类化合物“新橙皮苷”的制备方法，具体是涉及从芸香科植物酸橙的幼果中提取新橙皮苷的方法。
背景技术：
新橙皮苷属于黄酮类化合物中的二氢黄酮类化合物，其分子式为C28H34O15，分子量为610.57。
结构式为 由于它的结构复杂，全合成较困难，现一般是通过从植物提取柚苷后经化学反应转化制备新橙皮苷。
新橙皮苷是新橙皮苷二氢查尔酮的前体，只要将其氢化还原后，可生成甜味剂新橙皮苷二氢查尔酮，此甜味剂广泛地应用在医药、食品及饮料等领域，是一个很有价值的化合物。
在文献“新橙皮苷结构的波谱分析”《江苏化工》1994，22(3)36-40中报道了从新鲜甜橙皮中可提取制备得新橙皮苷。新鲜甜橙皮难于收集，资源有限，且从新鲜甜橙皮提取新橙皮苷的收率也较低。故有必要开发新的途径提取制备新橙皮苷。
发明内容
本发明的目的是提供一种从植物提取纯天然新橙皮苷的制备方法根据文献报道，在芸香科植物酸橙，其未熟果实中，含有新橙皮苷、柚苷、野漆树苷和忍冬苷等黄酮苷的成分，当果实成熟时新橙皮苷消失。但如何从芸香科植物酸橙中提取及分离精制纯天然新橙皮苷的工艺未见有报道。
充分利用我国南方各省每年生产数百万吨柑桔，从中筛选出含新橙皮苷量较多的酸橙幼果提取制备天然新橙皮苷。
为达到本发明目的所采用的技术方案是采用芸香科植物酸橙的幼果为原料，用“水提酒沉法”或“酒提法”提取得总提取物1，总提取物1用正丁醇萃取得新橙皮苷混合物2，混合物2用乙醇回流提取得新橙皮苷粗品3，新橙皮苷粗品3再用水重结晶得到高纯度的新橙皮苷精品。
所说的原料芸香科植物酸橙(Citrus aurantium L.)的幼果干燥品，经反复多次试验，优选以直径为3～30mm的幼果为佳，直径＞30mm的果其新橙皮苷的含量很低，不具利用价值。
所说的酸橙的幼果为原料是经干燥后粉碎成粗粉投料，通常称生药。由原料酸橙的干粉，提取制备总提取物1的制备方法之一可以用水提酒沉法原料酸橙的干粉，用水作溶剂加热回流提取2～4次，每次1～3小时，所得提取液浓缩成原料酸橙量的2～2.2倍的浸膏，加入95％乙醇，放置24小时，过滤，所得的滤液回收溶剂后所得即为总提取物1；也可以用制备方法之二酒提法用甲醇或乙醇作溶剂提取，提取时可用冷提法，如冷浸或渗漉，也可用热提法；所用的溶剂量不限，一般按常规浸过原料面即可，本发明中“酒提法”优选的制备方法是用原料酸橙的幼果，干燥后粉碎成粗粉投料，用70～95％的甲醇或乙醇溶液，回流提取2～4次，每次1～3小时，合并提取液，回收溶剂至生药量的2～3倍的浸膏为总提取物1。
总提取物1用正丁醇萃取新橙皮苷混合物2时，可以用冷萃取，也可用热萃取，本发明优选条件是将总提取物1在室温下用正丁醇萃取3～6次，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇后的残留物，冷冻析晶，过滤，得新橙皮苷混合物2。
混合物2用乙醇回流提取制备新橙皮苷粗品3的优选工艺是将混合物2溶于3～5倍的80～95％的乙醇溶液中，回流2～4小时后，放冷析晶，过滤所得。
新橙皮苷粗品3用水重结晶得到高纯度的新橙皮苷精品，其重结晶方法是采用有机化合物常用的精制方法进行操作。
用本发明所说的方法制备的新橙皮苷用高效液相色谱法(HPLC)测定含量可达95％以上。mp242℃，产品结构经红外光谱定性分析，(1644.4cm-1处有强的吸收峰，为vc＝o的伸缩振动；3414.7cm-1处有宽而强的吸收峰，是voH的伸缩振动峰，vc-oH及δoH1410～1000cm-1区均有峰出现，1200.7cm-1为酚的vc-oH伸缩振动频率，1366.7cm-1为酚的δoH弯曲振动频率；另外此区域中糖的吸收很明显voH在3414.7有强宽峰；vc-o在1100～1000cm-1出现了比voH强而宽的吸收峰，vc-oH～1137.9cm-1为仲醇，vc-oH～1074.2cm-1为伯醇。环的振动在914.4cm-1，δc-H在881.4cm-1有特征吸收；苯环中vc-H在3125～3030cm-1处的特征吸收峰与voH峰有简并，1576.9、1517.8、1448.2cm-1为芳环vc＝c骨架振动。881.4cm-1中等吸收峰为δ＝c-H，820cm-1强吸收峰为δ′＝c-H；681.3cm-1中等吸收峰为δ环，832.9cm-1中强吸收峰为δ＝c-H；2926.4cm-1附近尖峰，两侧各有一小蜂以肩峰的形式出现，是-CH2的不对称伸缩振动Vas914.4cm-1，及对称伸缩振动Vs2864.0cm-1特征吸收峰，但-CH2-的弯曲振动1448.2cm-1与苯环骨架振动有些简并，所以呈一很小肩峰；2864.0cm-1有尖峰为-CH3的对称伸缩振动VsCH3，1450～1438cm-1区的吸收与苯环骨架振动有简并，为δasCH3及δsCH3，1275.8cm-1强吸收为Vas＝c-o-c骨架振动，1026.4cm-1是由Vs＝c-o-c与糖的vc-o简并而呈的一小肩峰)(见附图1)；质谱定性分析测得其分子量为610(见附图2)。从以上分析结果表明本品与公开文献报道的半合成的新橙皮苷结构一致。
本发明的优点植物酸橙幼果现一般仅用作中药材枳实，本发明能从酸橙幼果中提取出新橙皮苷，制备工艺简单，，生产成本低，适于工业化生产；提取收率可达5％以上，再将本品加氢还原，生成开环化合物新橙皮苷二氢查尔酮，则经济效益相当可观，新橙皮苷二氢查尔酮具有高甜度、无热量、无毒、安全的特点，甜度是蔗糖的1000倍，可作为甜味剂。
图1、本发明制得的新橙皮苷的红外图谱图2、本发明制得的新橙皮苷的质谱图具体实施方式
实施例1称取1公斤生药，加入水8升，煎煮2小时，过滤，药渣按上述方法提取2次，合并3次水提取液，减压浓缩至浓缩液的重量为1公斤，加入95％乙醇使含醇量达75％，搅拌，静止24小时，滤取上清液，上清液减压浓缩至浓缩液的重量为2公斤，然后用水饱和的正丁醇萃取浓缩液5次，每次正丁醇用量为800毫升；合并正丁醇萃取液，过滤，减压蒸馏回收丁醇2000毫升，正丁醇浓缩液冷却析晶2天，滤取结晶，得新橙皮苷混合物198克。
上述新橙皮苷混合物溶于90％乙醇800毫升，常压加热回流2.5小时，冷冻过滤，滤取结晶，结晶再加入90％乙醇800毫升加热回流2小时，冷冻过滤，滤取结晶，得新橙皮苷粗品99.3克。
新橙皮苷粗品99.3克加入水重结晶，滤取结晶，水洗涤，抽干，干燥得新橙皮苷精品50.0克，收率5.02％，含量为97.2％。
实施例2将250公斤生药，水2000升投入提取锅中，，煎煮2小时，然后放出水提取液，生药渣加入2000升水，按上述方法提取2次，3次水提取液减压浓缩至浓缩液的重量约为250公斤，加入95％乙醇使含醇量达70％，充分搅拌，静置24小时，滤取上清液，减压浓缩至浓缩液的重量为500公斤，然后用水饱和的正丁醇萃取浓缩液5次，每次正丁醇用量为240升；合并正丁醇萃取液，过滤，减压蒸馏回收丁醇至丁醇浓缩液约600升后，将正丁醇浓缩液冷却析晶2天，滤取结晶，得新橙皮苷混合物52.0公斤。
上述新橙皮苷混合物溶于90％乙醇200升，常压加热回流2.5小时，冷冻过滤，滤取结晶，结晶再加入90％乙醇200升常压加热回流2小时，冷冻过滤，滤取结晶，新橙皮苷粗品25.8公斤。
新橙皮苷粗品30公斤加入水重结晶，滤取结果，水洗涤，抽干，干燥得新橙皮苷精品13.3公斤，收率5.32％，含量为97.0％。
实施例3收集酸橙，干燥后粉碎成粗粉备用。
称取1公斤生药，加入甲醇8升，加热回流2小时，过滤，药渣按上述方法提取2次，合并3次甲醇提取液，回收甲醇，使浓缩液的重量为2公斤，然后用正丁醇萃取浓缩液5次，每次正丁醇用量为800毫升；合并正丁醇萃取液，过滤，回收正丁醇2000毫升，正丁醇浓缩液过滤，得新橙皮苷混合物202.4克。
上述新橙皮苷混合物溶于90％乙醇800毫升，加热回流2.5小时，冷冻过滤，滤取结晶，得新橙皮苷粗品103.3克。
新橙皮苷粗品103.3克加入10000毫升水，重结晶，滤取结晶，用水洗涤，抽干，干燥，得新橙皮苷精品55克，收率5.5％，含量96.1％(HPCL测定)。
实施例4称取1公斤生药，加入70％乙醇8升，加热回流2小时，过滤，药渣按上述方法提取2次，合并3次乙醇提取液，回收乙醇，使浓缩液的重量为2公斤，然后用正丁醇萃取浓缩液5次，每次正丁醇用量为800毫升；合并正丁醇萃取液，过滤，回收丁醇2000毫升，正丁醇浓缩液再过滤，得新橙皮苷混合物203.2克。
上述新橙皮苷混合物溶于90％乙醇810毫升，加热回流2.5小时，冷冻过滤，滤取结晶，得新橙皮苷粗品105.5克。
新橙皮苷粗品105.5克加入水重结晶，滤取结晶，水洗涤，抽干，干燥得新橙皮苷精品52.2克，收率5.22％，含量为96.8％。
实施例5将300公斤生药，80％乙醇2400升投入提取锅中，加热回流2小时，然后放出乙醇提取液，生药渣中加入2200升80％乙醇，按上述方法提取2次，合并3次乙醇提取液，回收乙醇，使浓缩液的重量为生药量的2倍，然后用正丁醇萃取浓缩液5次，每次正丁醇用量为240升；合并正丁醇萃取液，过滤，回收丁醇600升，正丁醇浓缩液再过滤，得新橙皮苷混合物63.2公斤。
上述新橙皮苷混合物溶于90％乙醇250升，加热回流2.5小时，冷冻过滤，滤取结晶，得新橙皮苷粗品31.3公斤。
新橙皮苷粗品31.3公斤，用水重结晶，滤取结晶，水洗涤，甩干，干燥得新橙皮苷精品17.7公斤，收率5.9％，含量为95.8％。
权利要求
1.一种从植物提取新橙皮苷的制备方法，其特征在于采用芸香科植物酸橙的幼果为原料，用“水提酒沉法”或“酒提法”提取得总提取物(1)，总提取物(1)用正丁醇萃取得新橙皮苷混合物(2)，混合物(2)用乙醇回流分离出新橙皮苷粗品(3)，新橙皮苷粗品(3)再用水重结晶得到高纯度的新橙皮苷精品。
2.根据权利要求1所说的提取新陈皮苷的制备方法，其特征在于所说的原料为芸香科植物酸橙的幼果干燥品，直径为3～30mm。
3.根据权利要求1所说的提取新橙皮苷的制备方法，其特征在于所说的由原料酸橙的干粉，用“水提酒沉法”或“酒提法”提取而得总提取物(1)的制备方法之一是水提酒沉法原料酸橙的干粉，用水作溶剂加热回流提取2～4次，每次1～3小时，所得提取液浓缩成原料酸橙量的2～2.2倍的浸膏，加入95％乙醇，放置24小时，过滤，所得的滤液回收溶剂后所得即为总提取物(1)；方法之二是酒提法原料酸橙的干粉，用70～95％的甲醇或乙醇溶液，回流提取2～4次，每次1～3小时，合并提取液，回收溶剂至原料酸橙量的2～2.5倍的浸膏，所得的浸膏即为总提取物(1)。
4.根据权利要求1所说的提取新橙皮苷的制备方法，其特征在于所说的混合物(2)的制备是将总提取物(1)在室温下用正丁醇萃取3～6次，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇后的残留物，冷冻析晶过滤所得的新橙皮苷混合物(2)。
5.根据权利要求1所说的提取新橙皮苷的制备方法，其特征在于所说新橙皮苷粗品(3)的制备是将混合物(2)溶于3～5倍的80～95％的乙醇溶液中，回流2～4小时后，放冷析晶，过滤所得。
全文摘要
从植物酸橙幼果中提取新橙皮苷的制备方法，涉及一种二氢黄酮类化合物“新橙皮苷”的制备方法，具体是涉及从芸香科植物酸橙的幼果中提取新橙皮苷的方法，它是采用芸香科植物酸橙的幼果为原料，用“水提酒沉法”或“酒提法”提取得总提取物1，总提取物1用正丁醇萃取得新橙皮苷混合物2，混合物2用乙醇回流提取得新橙皮苷粗品3，新橙皮苷粗品3再用水重结晶得到高纯度的新橙皮苷精品。本发明的制备工艺简单,生产成本低，适于工业化生产；提取收率可达5％以上。
文档编号C07H17/07GK1546505SQ200310112480
公开日2004年11月17日 申请日期2003年12月8日 优先权日2003年12月8日
发明者肖乐扩, 林英昌 申请人:广州环叶制药有限公司